Dolichandrone Serrulata lille (DSF) ekstrakti toksilisuse hindamine neeru- ja maksatalitlusele

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Dolichandrone serrulata õieekstrakti toksilisuse hindamine elutähtsatele ja reproduktiivorganitele täiskasvanud isasrottidel

C. Chaimontria ja S. Iamsaard

Abstraktne

KuigiDolichandrone serrulata lill(DSF) vesiekstraktil on tõestatud farmakoloogilised omadused, selle süsteemset toksilisust tuleb veel hinnata. Käesoleva uuringu eesmärk oli uurida DSF-i subkroonilise toksilisuse mõju (Dolichandrone serrulata lill)ekstrakti biokeemiliste parameetrite ja histoloogiliste struktuuride kohtamaks, neerud, munandid. ja epididümis pluss deferensid. Täiskasvanud isastele rottidele manustati DSF-i (Dolichandrone serrulata lill) annuses 100 300 ja 600 mg/kg kehamassi kohta suukaudse sondiga 48 järjestikuse päeva jooksul, samal ajal kui kontrollrühmad said destilleeritud vett. Katse lõpus veri.maks, neerudSeerumi biokeemiliste komponentide, sealhulgas ALT, ALP ja kreatiniini tasemete ning histoloogiliste struktuuride muutuste määramiseks koguti proovid, munandite ja munandimanuse pluss deferens. Tulemused ei näidanud olulist erinevust kehakaalus ja toidu- või veetarbimises kontrollrühma ja DSF-i vahel (Dolichandrone serrulata lill)-ravitud rühmad. Leiti, et DSF (Dolichandrone serrulata lill)suurendab oluliselt munandimanuse pluss deferensi kaalu, samas kuineerudjamaksnäitas suure annuse rühmas langust (P väärtus< 0.05).="" histological="" changes="" in="" these="" vital="" and="" reproductive="" tissues="" including="" fibrosis="" were="" not="" observed="" after="" administration="" but="" alt,="" alp,="" and="" creatinine="" levels="" were="" significantly="" altered="" in="" the="" treated="" groups(pwlue="" <="" 0.051.="" these="" altered="" levels.="" however,="" were="" still="" within="" normal="" ranges="" in="" conclusion,="" these="" findings="" demonstrated="" that="" d.serulata="" flower="" extract="" had="" no="" sub-chronic="" toxicity="" on="" vital="" and="" reproductive="" structures="" but="" slightly="" altered="" some="">maksa ja neerude funktsioonid.

Klõpsake Cistanches ja Cistanche neeruhaiguse jaoks

Märksõnad:Dolichandroneserrulata, maks, neerud, munandit, munandimanust.

1. Sissejuhatus

Maitsetaimede kasutamine haiguste raviks on pikaajaline traditsioon. Taimede potentsiaalsed raviomadused sõltuvad nende keemiliste ühendite tüüpidest ja kogustest. On teada, et üksikute ravimtaimede igas osas on erinevad ühendid. Lisaks võib ainete tüüp ja kogus varieeruda sõltuvalt muudest teguritest, nagu ürdiliik, istutuskeskkond ja koristusperiood (Sringeunyuan ja Hongwiset, 1990). Praegu propageerib Tai valitsus ravimtaimede ja ürtide kasutamist, mida peetakse tänapäevase tervishoiu meditsiinilisteks alternatiivideks (Sringeunyuan ja Hongwiset., 1990), arvestades, et taimsed saadused on enamasti mittetoksilised. Lisaks on taimsed ravimeetodid pärit kohalikest teadmistest Tai traditsioonilises meditsiinis. Khae Na võiDolichandrone serrulata(võiD.serrulata lill(DSF)) on iidne ravimtaim, millel on traditsiooniliselt peetud palju farmakoloogilisi omadusi (Sriprasert, 2016). Enamik selle taime osi (õied, kaunad, koor ja juur) on kasulikud ja neid tarbitakse nende arvukate farmakoloogiliste omaduste tõttu (Sriprasert, 2016; Kiratipaiboon et al., 2012). Praegune uuring on näidanud DSF-i kaitsvat toimet (Dolichandrone serrulata lill)diabeetiliste rottide reproduktiivkahjustuste vastu (Yannasithinon et al., 2021). DSF metanoolekstrakti bioloogilised uuringud (Dolichandrone serrulata lill)on näidanud oma paljutõotavat antioksüdantset toimet (Phanthong et al., 2015). Leiti, et DSF (Dolichandrone serrulata lill)ekstraktid sisaldasid kuut ühendit, sealhulgas hallerooni, protokatehhuhapet, rengüolooni, seeskleroindiciini B ja isomaltoosi (Phanthong et al, 2015). Lisaks on eelmises uuringus hinnatud DSF-i fütokeemilisi profiile ja bioloogilist aktiivsust (Dolichandrone serrulata lill)etanooliekstraktid (Sriprasert, 2016). Selle taime etanooliekstraktide fütokeemilised uuringud näitasid sekundaarseid metaboliite, nagu flavonoidid, kumariinid, saponiinid, tanniinid, terpenoidid, steroidid ja südameglükosiid (Sriprasert, 2016). Hiljuti vesiekstrakt DSF (Dolichandrone serrulata lill)on teatatud, et neil on antioksüdantne võime ja monoterpenoidid, nagu rengüoloon ja kleroindiciin B (Chaimontriet al., 2021). Mõned selle D. serrulataga seotud taimed on aga osutunud toksilisteks elutähtsatele ja paljunemisorganitele. Näiteks vähendas ägeda toksilisuse uuringus etanooliga ekstraheeritud P.alliaceumi vesiekstrakt valgeliblede võimet (Granados-Echegoyenet al., 2015). Varem on Aba ja Amadi (2019) teatanud, et A. carambola puuviljaekstrakt võib kahjustada maksa- ja neerukudesid. Lisaks leiti, et päikeseženšenn võib muuta vereseerumi parameetreid, sealhulgas ALT, ALP ja kreatiniini taset, mis näitabmaksa- ja neerufunktsiooni häired(Kim jt 2013). Veelgi enam, Azu et al. (2010) teatasid, et K. Africana puuviljaekstrakti suured annused võivad pärssida spermatogeneesi. Märgiti, et hiljutiste taimsete saaduste pidev tarbimine pikema aja jooksul võib kahjustada elutähtsaid ja reproduktiivorganeid (Kiratipaiboon jt, 2012; Freitas jt, 2013; Joshi jt, 2011; Karnati jt, 2013; Lee jt, 2013). 2012). Kuigi DSF (Dolichandrone serrulata lill)on pikka aega tarbitud, selle vesiekstrakti toksiline mõjumaks, neerud, munandit ja munandimanust tuleb veel hinnata. Selle küsimuse mõistmise suurendamiseks püüdis käesolev uuring uurida DSF-i subkroonilist toksilisust (Dolichandrone serrulata lill)elutähtsate ja reproduktiivorganite ekstraktid, et teha kindlaks võimalus seda ainet pikema aja jooksul ohutult tarbida.

Dolichandrone serrulata lill(DSF)

2. Materjalid ja meetodid

2.1.Loomad

Nelikümmend täiskasvanud isast Sprague-Dawley rotti (120-150g) osteti ettevõttelt Nomura Siam International, Bangkok, Tai. Loomi peeti roostevabast terasest puurides katselistes ruumitingimustes (12-tunnine valguse/pimeduse tsükkel, temperatuur 23±2 kraadi, niiskus 40-60 protsenti, heli<85 decibels,="" and="" light="" intensity="" approximately="" 350-400="" lux)in="" the="" northeast="" laboratory="" animal="" center,="" khon="" kaen="" university,="" thailand.="" this="" experimental="" study="" was="" approved="" by="" the="" animal="" ethics="" committee="" research="" of="" northeast="" laboratory="" animal="" center="" khon="" kaen="" university.="" the="" code="" of="" this="" animal="" ethic="" is="">

2.2. D.serrulata lille kogumine ja valmistamine

Värske Khae Na taimeeksemplarid koguti Tai Khon Kaeni provintsi Mueangi ringkonna Ban Thumi alampiirkonnast ja Assist kinnitas need. Prof dr Pimwadee Pornpongrungrueng, Khon Kaeni ülikooli loodusteaduskonna bioloogia osakond (D.serrulata vautšeriproovid, mida hoitakse KKU herbaariumis koos mitme S.lamsaard02-ga). Ekstraheerimisel kuivatati DSF (Dolichandrone serrulata lill)viilutati enne leotamist väikesteks tükkideks ja keedeti destilleeritud vees temperatuuril 90-95 kraadi 40 minutit. DSF vesilahus (Dolichandrone serrulata lill)ekstrakt lüofiliseeriti lüofilisaatoriga (M-00359-1/57,13-1011-18-2019, Labconco, Becthai Scientific Industry, Tai). Toor-DSF-ekstrakti protsentuaalne saagis oli 40,78 protsenti. See ekstrakt saadi dr. Sitthichai lamsaardilt, nagu on eelnevalt kirjeldatud ekstraheerimise üksikasjades (Chaimontri et al., 2021; Yannasithinon jt, 2021).

2.3. Eksperimentaalne disain

Pärast 7-päevast aklimatiseerumist jagati isasrotid juhuslikult 4 rühma (10 rotti rühma kohta), sealhulgas kontrollrühma DSF. (Dolichandrone serrulata lill)100, DSF (Dolichandrone serrulata lill)300 ja DSF (Dolichandrone serrulata lill)vastavalt 600 rühma. DSF (Dolichandrone serrulata lill) ekstrakti annused arvutati DSF-i maksimaalse tarbimisannuse põhjal (Dolichandrone serrulata lill)inimesel, kelle keskmine kaal on 60 kg. Lühidalt, 600 mg / kg kehamassi annus arvutati 40 lilli päevas inimese kohta. Keskmise (300 mg) ja väikseima (100 mg) annuse proportsionaalsed suhted arvutati 600 mg põhjal. DSF jaoks (Dolichandrone serrulata lill)ravitud rühmades raviti rotte DSF-ga (Dolichandrone serrulata lill)-ekstrakt, mis on lahustatud destilleeritud vees (DW) annustes vastavalt 100, 300 ja 600 mg/kg kehamassi kohta suukaudse sondi kaudu. Kontrollrühma loomadele anti ainult DW. Nende kehakaalu registreeriti iga päev manustamise ajal 48 järjestikuse päeva jooksul.

2.4. Biokeemiline analüüs

Katse lõpus tuimastati kõik rotid enne emakakaela dislokatsiooniga eutanaasiat tiopentaali naatriumiga (60 mg/kg kehamassi kohta ip kaudu). Pärast rindkere seina avamist koguti veri südame punktsiooniga ja tsentrifuugiti kiirusel 12, 000 p/min 10 minutit 4 kraadi juures, kasutades vererakkude eraldamiseks mikrotsentrifuugi (Microfuge 22R Centrifuge, Beckman Coulter TM, USA). seerumist. Vereseerum saadeti kohe Tai Khon Kaeni ülikooli Srinagari haigla arstiteaduskonna immunoloogiaosakonda, et määrata vere uurea lämmastiku (BUN) ja kreatiniini sisaldust.neerudfunktsioonid) ja albumiin, aspartaataminotransferaas (AST), alaniinaminotransferaas (ALT) ja aluseline fosfataas (ALP) (maksafunktsioonide jaoks). Biokeemilised tasemed määrati elektrokemiluminestsents-immunoanalüüsi (Roche Diagnostics) abil koos Cobase ja immuunanalüsaatoriga (Roche Diagnostics, Mannheim, Saksamaa).

2.5. Elutähtsate organite histoloogiline uuring

Pärast verevõtmist,maks, neerudning paljunemisorganid, sealhulgas munandid ja munandimanused, koguti kiiresti ja kaaluti. Kõik koed fikseeriti 10% formaliini fikseeriva lahusega 72 tundi. Seejärel töödeldi neid rutiinsete parafiinilõikude jaoks ja värviti Massoni trikroomvärvidega, et uurida kollageenikiudude arengut. Lühidalt, koelõigud deparafineeriti ksüleeniga ja rehüdreeriti järjestikku langevate alkoholidega. Seejärel kasteti lõigud Bouini lahusesse ja värviti Weigerti raudhematoksüliiniga. Seejärel värviti lõigud Massoni trikroomvärvimiskomplektidega (kataloogi nr HT15, Sigma-Aldrich, Inc, USA). Lõpuks pesti sektsioone 1-protsendilise äädikhappega. Elutähtsate organite ja suguelundite histoloogilisi muutusi vaadeldi ja pildistati DXM1200 digikaameraga varustatud Nikon light ECLIPSE E200 mikroskoobiga.

2.6. Statistiline analüüs

Kõik andmed väljendati keskmisena ± standardhälbe (SD). Nelja rühma erinevuste võrdlemiseks kasutati tavapäraselt hajutatud andmete jaoks Post Hoc mitut võrdlust ja andmete erinevused viidi läbi One Way ANOVA abil, kasutades programmi SPSS statistika 19.0.2software(statistiline pakett for sotsiaalteadused, versioon 19.0.2, SPSS Inc, Armonk, New York, USA, installitud KKUSoftware Centerist, Khon Kaeni ülikoolist) andmete analüüsimiseks. Rühmadevahelise olulise erinevuse uurimiseks kasutati programmi SPSS. p-väärtus<0.05 was="" considered="" a="" significant="">

3. Tulemused

3.1. D.serrulata õieekstrakti mõju kehakaalule ning elutähtsatele ja reproduktiivorganitele

Keskmine keha muutis keha ning kontroll- ja ravirühma loomade munandite kaal ei näidanud olulist erinevust. Seevastu munandimanuse ja vase deferensi kaal DSF-is (Dolichandrone serrulata lill)600 ravitud rühmal oli kontrollrühmaga võrreldes oluliselt suurem arv. Kõigi loomade veetarbimine ja toidutarbimine ei näidanud olulisi erinevusi (tabel 1). Huvitav on see, et suhtelised kaaludneerudja maksaDSF-is (Dolichandrone serrulata lill)300 ja 600 ravitud looma arv vähenes oluliselt võrreldes kontrollrühmaga (P < 0,05).

Tabel 1. Kehakaalu, munandi, munandimanuse pluss deferensi, neerude ja maksa elundite kaalu võrdlused kontrolli ja DSF vahel (Dolichandrone serrulata lill)-ravitud rotid pärast 48-päevast subkroonilise toksilisuse uuringut.

3.2. D.serrulata õieekstrakti mõju biokeemilistele parameetritele

Pärast seerumi analüüse näitasid maksafunktsiooni näitavad biokeemilised parameetrid, et DSF (Dolichandrone serrulata lill)alaniini aminotransferaasi (ALT) ja aluselise fosfataasi (ALP) tase vähenes oluliselt võrreldes kontrollrühmaga (P<0.05, table="" 2).="" by="" contrast,="" creatinine="" levels="" which="">neerufunktsioon, DSF-ist (Dolichandrone serrulata lill)100 ja DSF (Dolichandrone serrulata lill)300 rühma suurenes oluliselt võrreldes kontrollrühmaga (P<0.05, table="" 2).="" interestingly,="" no="" difference="" in="" renal="" function="" was="" indicated="" by="" aspartate="" aminotransferase="" (ast),="" albumin,="" and="" blood="" urea="" nitrogen(bun)levels="" in="" all=""> (Dolichandrone serrulata lill)ravitud rühmi.

Tabel 2. Seerumi biokeemiliste parameetrite tasemete võrdlus kontroll- ja ravitud rottide vahel pärast 48-päevast subkroonilise toksilisuse uuringut

3.3.D.serrulata õieekstrakti mõju kollageenkiudude arengule rottide munandis, sabamanusemanuses, neerudes ja maksas

munandi koeosad, kaudaalne epididümis,neerud, ja maksaMassoni trihhoomiga värvitud uuringud ei näidanud erinevust kollageenkiudude paksuses kontroll- ja ravirühmade vahel, nagu on näidatud joonistel 1-4. Seevastu leiti rohkesti kollageenkiude ja fibroblaste seemneepiteeli all olevas basaalkihis (sinised nooled joonisel 1). Lisaks on kaudaalses munandimanuses peened kollageenikiud koos torukujulise seina ja tubulaarsete tühikutega (mustad tähed joonisel 2 ). Neerudes on kollageenkiud neerutuubulite basaalmembraanis ja Bowmani ruumis (sinised nooled joonisel 3). Veelgi enam, kõigi rühmade maksakoes oli väike kogus kollageenkiudu, mis ümbritses maksaarterit, portaalveeni ja sapijuha sisaldavat portaaltriaadi (sinised nooled joonisel 4).

Joonis 1. Massoni kontrolltrihhoomiga värvitud munandite representatiivne histoloogia: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) ja DSF600 (D). Punased nooled=kollageenkiud; SG=spermatogoonia; RS=ümmargune spermatid.	Joonis 2. Massoni kontrolltrihhoomiga värvitud kaudaalse epididüümi tüüpiline histoloogia: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) ja DSF600 (D). Mustad tähed=kollageenkiud.
Joonis 3. Massoni kontrolltrihhoomiga värvitud neeru tüüpiline histoloogia: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) ja DSF600 (D). Sinised nooled=kollageenkiud; RT=neerutuubulid.	Joonis 4. Maksa tüüpiline histoloogia, mis näitab portaaltriaadi, mis on värvitud Massoni kontrolltrihhoomiga: (A), DSF100 (B), DSF300 (C) ja DSF600 (D). Sinised nooled=kollageenkiud.

4. Arutelu

See uuring näitas, et DSF (Dolichandrone serrulata lill)ekstrakt ei mõjutanudmaks, neerudja reproduktiivorganite struktuurid pärast 48-päevast manustamist. Kuid DSF (Dolichandrone serrulata lill)veidi muudetudmaksa- ja neerufunktsioon, kuid nende seerumitasemed olid endiselt normväärtuste piires. On teatatud, et selle taime sama liigi suured annused (500 mg/kg kehamassi kohta) pärssisid sperma tootmist (Azuet al., 2010); siiski suur annus DSF-i (Dolichandrone serrulata lill)(600 mg/kg kehamassi kohta) ei muutnud reproduktiivorganite kaalu ega histoloogilisi struktuure. See tulemus nõustus eelmise uuringuga, mis näitas pärast DSF-i suurenenud munandimanuse sperma kontsentratsiooni ja kvaliteeti (Dolichandrone serrulata lill)ravi (Chaimontri et al., 2021). Lisaks parandas DSF I tüüpi diabeediga rottide spermatosoidide arvu ja füsioloogiat ning munandite histopatoloogiat (Yannasithinon et al., 2021). Koos meie tulemustega näitavad need uuringud, et DSF-i vesilahus (Dolichandrone serrulata lill)ekstraktil puudub subkrooniline toksilisus meeste reproduktiivsüsteemile. Seda võib seletada DSF-i vesilahusega (Dolichandrone serrulata lill)millel on antioksüdantne toime ja mis sisaldab kogu fenoolisisaldust, sealhulgas terpenoidkomponente (Chaimontri et al., 2021). Tõepoolest, kirjanduses on näidatud, et paljudel D.serrulata osadel, mis on ekstraheeritud etanooli või metanooliga, on antioksüdantne võime ja sellised ained nagu alkaloidid, flavonoidid, glükosiidid, fenoolsed ühendid, saponiinid ja tanniinid (Chatchanayuenyong ja Sujayanont, Khaing 2020; jt, 2018; Kiratipaiboon jt, 2012; Sinaphet jt, 2006; Sittiwet, 2009). Need DSF-i antioksüdantsed võimed (Dolichandrone serrulata lill)võib vähendada kõrget kiiret veresuhkru (FBG) taset ja munandite malondialdehüüdi (MDA) koos suurenenud testosterooni tasemega II tüüpi DM-ga ravitud rottidel (Yannasithinon et al., 2021).

Varasemad uuringud on teatanud paljude ainete, sealhulgas taimeekstraktide toksilisusest diabeetilise munandi kollageenkiudude ladestamisel (Ismail jt 2017), hüpertensiivse munandimanuse (Mazen ja Zidan, 2017), maksa tähtrakkude jaotumise kohta (Nishimura et al, 2012; Towne). et al., 2015) jakrooniline neeruhaiguspatsientidel (Allon et al, 2019). Nagu on näidatud selles hiljutises uuringus, ei näita Massoni trikroomiga värvitud kollageenkiudude intensiivsus munandites, kaudaalses munandimanuses, maksas ja neerukudedes mingit erinevust kontroll- ja DSF-i vahel. (Dolichandrone serrulata lill)ravirühmad. Need tulemused näitasid, et DSF (Dolichandrone serrulata lill)ekstrakt ei kutsunud esile histopatoloogilist fibroosi, akumuleerunud kollageenikiude elutähtsates ja reproduktiivkudedes. Need tulemused näitasid, et DSF-i tarbimine (Dolichandrone serrulata lill)subkroonilise perioodi ekstrakt ei põhjustanud fibroosi suguelundites ega elutähtsates organites. Märgiti, et Bowmani kapsli paksus DSF-i hulgas (Dolichandrone serrulata lill) ravitud rühmades ei ilmnenud kontrollrühmaga võrreldes ilmseid muutusi. Lisaks ei erinenud nende elundite kaal rühmade vahel oluliselt, mis nõustus eelmise uuringuga, milles vaadeldi hiirtel, keda raviti ägeda toksilisuse perioodi jooksul (Katisart ja Konsue, 2019).

Maks ja neermikrostruktuurid ei näidanud pärast DSF-i ilmseid muutusi (Dolichandrone serrulata lill)manustamine mis tahes annuses. Nende funktsioonid olid aga ALT ja ATP taseme languse tõttu veidi muutunud, samas kui kreatiniini tase tõusis oluliselt. Selliseid funktsionaalseid muutusi võib seletada DSF-is leitud saponiini aktiivsusega (Dolichandrone serrulata lill)toorekstrakt, nagu on kirjeldatud eelmises uuringus (Kiratipaiboon et al. 2012). See mehhanism võib olla sarnane päikeseženšenniga ravimisel täheldatuga, mille saponiinisisaldus põhjustas vereseerumi parameetrite muutusi, mis on seotud maksa janeerudfunktsiooninagu ALT, ALP ja kreatiniini tase (Kim et al.2013). Sellised füsioloogilised muutused ei olnud aga piisavad, et tõsiselt kahjustada maksa janeerudstruktuurid. Nagu on näidatud tabelis 2; biokeemilised parameetrid vereseerumis DSF-st (Dolichandrone serrulata lill)ravitud rühmad olid võrreldes kontrollrühmadega muutunud, kuid nende tase oli endiselt normaalsetes vahemikes, sealhulgas ALT[{0}}U/L], ALP 62-230 U/L] ja kreatiniin [0.2-0.5 mg/dl, nagu on varem teatatud loommudelis (Hayakawa et al., 2013; Pereira et al., 2017). Uuringu piiranguna muud toksilised ained DSF-is (Dolichandrone serrulata lill)ja apoptootilisi markereid kudedes tuleb täiendavalt uurida, et teha kindlaks nende ohutus kasutamiseks ja tarbimiseks pikema aja jooksul.

5. Järeldus

See uuring näitas, et DSF-i vesilahus (Dolichandrone serrulata lill)lilleekstrakt ei avaldanud mürgisust elutähtsatele organitele ja meeste suguelunditele, kuid põhjustas mõningate parameetrite kergeid muutusi.maksa janeerudfunktsiooni.

6. Tulevikuväljavaated

Selle artikli järelduste põhjal on DSF-i ohutus (Dolichandrone serrulata lill)Näidati neerude ja maksa mikrostruktuuride pikaajalist tarbimist. Täpsemalt DSF (Dolichandrone serrulata lill)ekstrakt on osutunud mittetoksiliseks munandite ja munandimanuse suhtes. Loodetavasti DSF (Dolichandrone serrulata lill)ekstrakti saab edasi arendada toidulisandina meeste reproduktiivtervise jaoks.

Viited

1. ABA, PE ja AMADI, AU, 2019. Averrhoa karambola mahlaekstrakti võimalike hepatotoksiliste ja nefrotoksiliste potentsiaalide hindamine emastel albiinorottidel. Journal of Basic and Clinical Physiology and Pharmacology, vol.31, no.1.https:// doi.org/10.1515jbcpp-2019-0042.PMid:31536032.

2. ALLON,M.,LITOVSKY,SH,TEYJ,SUNDBERG,CA.,ZHANG,Y,CHEN,Z.,FANG,Y.,CHEUNG,AK.ja SHIU,YT,2019. Veresoonte histoloogia ja kollageenkiudude konfiguratsiooni kõrvalekalded kaugelearenenud patsiendidkrooniline neeruhaigus.The Journal of Vascular Access, vol. 20, nr.1, lk.{2}}.http://dx. doi. org/10.1177/1129729818773305.PMid:29742957.

Märge:ülaltoodud ei ole täielik viidete loend