AM6545 ja AM4113 ravi reno-kaitsev toime metaboolsele sündroomile

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Ⅰ OSA: TGF-i häirimine 1-vahendatud põletik ja fibroos on metaboolse sündroomi rotimudelis CB1 retseptori neutraalsete antagonistide AM6545 ja AM4113 renoprotektiivse toime aluseks

Basma G.Eid, Thikryat Neamatallah, Abeer Hanafy, Hany M.El-Bassossy & jt.

1. Sissejuhatus

Metaboolnesündroom(MetS), on kombinatsioonmetaboolnekõrvalekalded, mis tavaliselt avalduvad insuliiniresistentsuse (IR), kõhupiirkonna rasvumise, düslipideemia ja kõrge vererõhuna [1]. Patsiendid, kellel on MetS(Metaboolnesündroom) on suur risk haigestuda diabeeti, aterosklerootilist kardiovaskulaarset haigust (CVD) ja neerukahjustust [2]. Kõik need haigused kujutavad endast tõsiseid ja sageli surmaga lõppevaid terviseseisundeid, mis on levinud enamikus riikides. MetS-i levimus (Metaboolnesündroom) kasvab kogu maailmas, praegu on mõjutatud üle miljardi inimese [3]. Seda kasvu seostatakse füüsilise passiivsuse, kõrge kalorsusega toidu tarbimise ja suhkrulisanditega jookidega [4,5]. Seos MetS(Metaboolnesündroom) ja krooniline neeruhaigus (CKD) on vastuolulised. Mitmed uuringud on aga teatanud, et fruktoosirikas dieet kutsub esile MetS(Metaboolnesündroom), mis progresseerub seejärel mitmesugusteks nefropaatia ilminguteks, nagu vähenenud glomerulaarfiltratsioon, albuminuuria, urikosuuria, proteinuuria ja muutused neerude morfoloogias [6-8]. Neerukahjustuse võimalikud mehhanismid võivad hõlmata põletikueelsete tsütokiinide vahendajate, vabade radikaalide ja oksüdatiivse stressi süsteemset vabanemist MetS-is.Metaboolnesündroom)[9,10]. Tõepoolest, kroonilise neeruhaiguse esinemissagedus MetS-iga patsientidelMetaboolnesündroom) on 2.{1}} korda kõrgem kui inimestel, kellel puudub MetS(Metaboolnesündroom) komponendid [11].

Tistanche ekstrakti eelised: antibakteriaalne

Terapeutilised sekkumised MetS(Metaboolnesündroom) hõlmavad üliaktiivse endokannabinoidsüsteemi (EC) moduleerimist kannabinoidi CB1 retseptori alatüübi |12 inhibeerimise kaudu. On näidatud, et CB1 retseptori inhibeerimine reguleerib rasvunud rottide söögiisu, toidutarbimist ja lipogeneesi [13-15]. CB1 on A-klassi rodopsiinitaoline G-valguga seotud retseptor (GPCR), mis aktiveerib peamiselt G i/o valke [16]. Üldlevinud CB1 retseptoreid leidub kesknärvisüsteemis (KNS) tohutult, mis võib suurendada neuropsühhiaatriliste häirete esinemissagedust [17]. On kindlaks tehtud, et neerudes eksisteerib täielik endokannabinoidide süsteem ja sellel on oluline roll neerude homöostaasis, samuti diabeetilise nefropaatia ja selliste seisundite nagu krooniline neeruhaigus[18] tekkes. CB1- ja CB2-retseptorid esinevad nefroni erinevad osad, aga ka muud neerurakud nii inimestel kui ka närilistel [19]. Lisaks mängib neerude hemodünaamikas domineerivat rolli neeru endokannabinoidsüsteem [20].

Näiteks rimonabant (SR141716) on CB1 retseptori pöördagonist, mis kiideti kliiniliselt heaks aprillis 2006 raviks.metaboolnetüsistused ja rasvumine Euroopas [21]. Euroopa Ravimiamet püüdles siiski kesknärvisüsteemi tungiva ravimi rimonabandi ärajätmist, kuna seda seostati ärevuse, depressiooni ja suurenenud kalduvusega enesetappudele [17].

Rimonabandi neuropsühhiaatrilistest kõrvalmõjudest, mis olid tingitud selle pöördagonisti profiiliga seotud kesksetest mõjudest, mööda hiilimiseks kasutasime kahte strateegiat tõhusate analoogide väljatöötamiseks, millel puuduvad selle soovimatud kõrvaltoimed. Esimene neist oli CB1 neutraalsete antagonistide avastamine. Need ühendid, erinevalt nende pöördagonistidest, mis toimivad retseptori inaktiivse oleku edendamise kaudu, takistavad endogeenselt esinevatel endokannabinoididel interakteerumast CB1-ga. AM4113 esindab edukat CB1 neutraalset antagonisti, mis jagab rimonabandi soovitavaid toimeid, kuid millel puuduvad selle soovimatud kõrvalmõjud. Meie teine ​​strateegia oli välja töötada CB1 retseptori antagonistid, mis ei suuda läbida hematoentsefaalbarjääri.AM6545esindab edukat perifeerselt toimivat ligandit, säilitades samal ajal CB1 neutraalse antagonisti profiili. Teatati, et mõlemal ravimil säilib terapeutiline toime erinevates loommudelites, millel on vähem kõrvaltoimeid kui rimonabant [22-26].

Käesolevas uuringus püüdsime välja selgitada, kas ravi CB1 retseptori antagonistidegaAM6545jaAM4113parandaks neerufunktsiooni kõrge fruktoosisisaldusega kõrge soolasisaldusega mudelismetaboolnesündroomja uurida täiustatud funktsiooni aluseks olevat mehhanismi. Selline uuring võimaldaks meil kindlaks teha, kas nende ühendite mõnel mõjul on komponent, mis on seotud tsentraalselt toodetud CB1 inaktiveerimisega.

2. Tulemused

2.1. AM6545 ja AM4113 ravi mõju neeru endokannabinoidide toonile

Anandamiidi (AEA) ja 2-arahhidonoüülglütserooli (2-AG) mõõtmine neeruhomogenaatides viidi läbi, et hinnata endokannabinoidide toonust neerus. Nagu on näidatud tabelis 1, kui kontrollrotte (C) töödeldi kummagigaAM6545(C pluss A65) võiAM4113(C pluss A41) ei avaldanud olulist mõju nii AEA kui ka 2-A Gin neerude sisaldusele. Loomad koosmetaboolnesündroom(MetS) näitasid nii AEA kui ka 2-AG kõrgendatud tasemeid võrreldes kontrollidega (C). Pärast ravimetaboolnesündroomrotid kummagigaAM6545(M pluss A65) võiAM4113(M pluss A41), oli loomadel siiski palju kõrgem AEA ja 2-AG tase neerudes võrreldes kontrollidega.

Tabel 1. Anandamiidi ja 2-arahhidonoüülglütserooli sisaldus neerudes.

2.2. AM6545 ja AM4113 ravi mõju neerufunktsioonile MetS (metaboolse sündroomi) rottidel

MetS(Metaboolnesündroom) on kõrge fruktoosisisaldusega kõrge soolasisaldusega toitmine seotud neerufunktsiooni halvenemisega, millele viitab suurenenud albumiini eritumise kiirus (AER) ja proteinuuria võrreldes kontrollidega (p<0.05, figure="" 1a,="" b).="" both="">AM6545jaAM4113oluliselt inhibeeritud (lk<0.05)the elevated="" proteinuria="" and="" albumin="" excretion="" rate="" to="" similar="" levels="" suggesting="" protection="" of="" renal="" function="" in="">Metaboolnesündroom). Kumbki mitteAM6545egaAM4113mõjutas oluliselt AER-i või proteinuuriat, kui seda manustati kontrollloomadele (joonis 1A, B). Arvutati kreatiniini kliirens ja see oli palju madalammetaboolnesündroomrühm (M) võrreldes kontrollidega (joonis ]C). Haldades kumbagiAM6545(M pluss A65) või AM4113 (M pluss A41) kunimetaboolnerottidel ei olnud mingit mõju kreatiniini kliirensile (joonis 1C).

Joonis 1. CB1 retseptori antagonistidAM6545jaAM4113parandada neerude funktsionaalseid parameetreid kõrge fruktoosisisaldusega ja kõrge soolasisaldusega toidetesmetaboolnesündroomrotid.

(A) näitab albumiini eritumise kiirust (AER), (B) näitab proteinuuriat ja (C) näitab kontrollrühmas mõõdetud kreatiniini kliirensit

(C) jametaboolnesündroom(M) rottidel, samuti pärast 4-nädalast intraperitoneaalset süstimistAM6545kontrollis (C pluss A65)jametaboolnerotid (M pluss A65) või AM4113 kontrollis (C pluss A41) võimetaboolnerotid (M pluss A41) annuses 10 mg/kg/päevas.

Tulemused kuvatakse kastigraafikutena ja keskmine on (pluss )(n=8).*p<0.05 relative="" to="" the="" control="" group=""><0.05 relative="" to="" the="">metaboolnesündroomrühm ühesuunalise ANOVA abil, millele järgneb Tukey post hoc test.

2.3. Ravi AM6545 ja AM4113 mõju vererõhule

Vererõhu mõõtmine mitteinvasiivse sabamanseti meetodil näitas, et MetS(Metaboolnesündroom) loomadel (M, M pluss A65, M pluss A41) oli kontroll-loomadega võrreldes oluliselt kõrgem süstoolne ja diastoolne vererõhk. Loomade ravi kasAM6545võiAM4113ei põhjustanud olulisi muutusi süstoolses ja diastoolses vererõhus (tabel 2).

Tabel 2. AM6545 ja AM4113 mõju metaboolse sündroomi (MetS) indutseeritud rottide süstoolsele ja diastoolsele vererõhule (BP).

2.4. AM6545 ja AM4113 ravi mõju neeru histopatoloogiale MetS (metaboolse sündroomi) rottidel

MetS-i H&E värvitud lõikude uurimine (Metaboolnesündroom) rottidel ilmnesid märkimisväärsed histopatoloogilised muutused, eriti neerukoores, kus võrreldes kontrollrühmaga täheldati ebanormaalseid muutusi peamiselt glomerulites ja proksimaalsetes keerdunud tuubulites ning neeru stroomas. Kontrollrottide neerud näitasid normaalset neerukoore struktuuri (joonis 2A, B), mis sisaldas peamiselt Bowmani kapsliga ümbritsetud glomerulaarkapillaaridest koosnevaid neerukesi. Lisaks oli proksimaalsete (PCT) ja distaalsete keerdunud tuubulite (DCT) vahel kapsliruum. Kõrged kuubikujulised rakud, millel oli eosinofiilne tsütoplasma ja tsentraalsed ümarad tuumad, ääristasid proksimaalseid keerdunud tuubuleid. Kõrged mikrovillid täitsid tuubulite valendiku, millel oli harja luminaalne piir. Distaalseid keerdunud tuubuleid oli PCT suhtes vähe. MetS(Metaboolnesündroom) rottidel ilmnesid neerudes erineva astme muutused (joonis 2C-E), kus mõned glomerulid olid hüpertrofeerunud laienenud glomerulaarkapillaaridega, samas kui teised glomerulid olid atroofilised. Lisaks oli enamik PCT-sid laienenud, kaotades pintsli piirid; nende rakkudel oli vakuoleeritud tsütoplasma ja tumedad püknootilised tuumad. Lisaks näitas DCT mõningaid degeneratiivseid muutusi seinte ja vakuoleeritud tsütoplasmaga. Lisaks täheldati neerukoore erinevates piirkondades interstitsiaalseid tühikuid, peritubulaarset hemorraagiat ja mononukleaarset põletikulist rakulist infiltratsiooni. Huvitaval kombel MetS(Metaboolnesündroom) ravitud rotidAM6545(joonis 3A, B) ja AM4113 (joonis 3C, D) näitasid märkimisväärset paranemist neerude histoloogilises profiilis, mis väljendus peaaegu normaalsetes glomerulites ja PCT-s ilma degeneratsiooni ja/või põletikuliste rakkude infiltratsiooni tunnusteta.

Joonis 2. Tüüpilised mikrofotod neerukoore histoloogilisest struktuurist kontroll- jametaboolnesündroomrotid.

Kontrollrühmas (A, B) on normaalsed neeruglomerulid (G) ja tuubulid (PCT, DCT), samas kuimetaboolnesündroomrühmas (CE) mõned glomerulid olid atroofeerunud (G1), teised aga hüpertrofeerunud (G2) laienenud kapillaaridega ().

Suurem osa PCT-st näis olevat degenereerunud laienenud valendiku, harja piiride kadumise ja püknootiliste tuumadega (ringi sees).

Pange tähele interstitsiaalsete laiade ruumide olemasolu (*), vere ekstravasatsiooni (*) ja infiltratsiooni põletikuliste rakkudega (ICI). (H&E—A, C × 200—B, D, E × 400).

Joonis 3. Tüüpilised mikrofotod neerukoore histoloogilisest struktuurist rotirühmadesmetaboolnesündroom-ga töödeldudAM6545(A, B) jaAM4113(C, D) CB1 retseptori antagonistid.

Märkige peaaegu normaalse välimuse taastumist võrreldes kontrollrühmaga glomerulite (G) ja tuubulite (PCT, DCT) osas. (H&E–A, C × 200–B, D × 400)

2.5. AM6545 ja AM4113 ravi mõju UI-happe tasemele MetS-i (metaboolse sündroomi) rottidel

Arvestades kusihappe tähtsust neerupõletiku ja kroonilise neeruhaiguse progresseerumise korral, näitab joonis 4, et MetS(Metaboolnesündroom) loomadel oli kusihappesisaldus kontrollrühmaga võrreldes kümme korda suurem (lk<0.05). however,="" both="" cb1="" antagonists,="">AM6545jaAM4113, oluliselt (lk<0.05) inhibited="" this="" increased="" uric="" acid="" content="" while="" restoring="" it="" to="" near="" normal="" values.="" meanwhile,="" neither="">AM6545egaAM4113mõjutas märkimisväärselt kontroll-loomade kusihappe sisaldust uriinis.

2.6. MõjuAM6545jaAM4113Ravid TGF 1 tasemetel MetS-is (Metaboolnesündroom) Rotid

Uuringus uuriti täiendavalt TGF 1 rolli põletikueelse ja fibroosi peamise vahendajana. Nagu on näidatud joonisel 5, on TGF 1 kontsentratsioon kudedes MetS(Metaboolnesündroom) rottidel oli märgatavalt (lk<0.05) increased="" than="" in="" normal="" animals.="" however,="" the="" four="" weeks="" of="" treatment="" with="">AM6545jaAM4113tulemuseks oli märkimisväärne (lk<0.05)reduction of="" tgfβ1="" concentrations,="" restoring="" it="" to="" normal="" values.="" while="" neither="">AM6545egaAM4113mõjutas oluliselt TGF 1 koe kontsentratsiooni kontrollneerudes. See tulemus viitab sellele, et CB1 retseptoril on kriitiline roll põletiku ja neerufibroosi vahendamisel.

Korrelatsioonikoefitsient arvutati, et hinnata korrelatsiooni albumiini eritumise kiiruse ja TGF 1 neerude taseme vahel (tabel 3). Tugev korrelatsioon esines AER ja TGF 1 vahel kontroll- jametaboolnesündroomloomad. Korrelatsioon esines ka loomadel, keda ravitiAM6545, aga mitte koosAM4113.

Joonis 4. CB1 retseptori antagonistidAM6545jaAM4113blokeeris uriini kusihappesisalduse kümnekordse tõusu kõrge fruktoosisisaldusega kõrge soolasisaldusega indutseeritudmetaboolnesündroomrotid.

Kusihappe kontsentratsiooni mõõdeti kontrollrühma uriinis (C) jametaboolnesündroom(M) rotid kui ka kontroll- jametaboolneravitud rotidAM6545(C pluss A65) ja (M pluss A65) vastavalt võiAM4113(C pluss A41) ja (M pluss A41) vastavalt annuses 10 mg/kg/päevas. Tulemused kuvatakse kastigraafikutena ja keskmine on (pluss )(n=8).*p<0.05relative to="" the="" control="" group="" and=""><0.05 relative="" to="" the="">metaboolnesündroomrühm ühesuunalise ANOVA abil, millele järgneb Tukey post hoc test.

Joonis 5. CB1 retseptori antagonistidAM6545jaAM4113vähendada TGF 1 tootmist fruktoosi poolt indutseeritud korralmetaboolnesündroomrotid.

TGF 1 kontsentratsiooni mõõdeti kontroll(C) jametaboolnesündroom(M) rotid kui ka kontroll- jametaboolneravitud rotidAM6545(C pluss A65) ja (M pluss A65) või vastavalt AM4113 (C pluss A41) ja (M pluss A41) annuses 10 mg/kg/päevas. Tulemused kuvatakse kastdiagrammidena ja keskmine on näidatud (pluss )(n=8).*p<0.05 relative="" to="" the="" control="" group=""><0.05 relative="" to="" the="">metaboolnesündroomrühm ühesuunalise ANOVA abil, millele järgneb Tukey post hoc test.

Tabel 3. AM6545 ja AM113 mõju albumiini eritumise kiiruse (AER) ja transformeeriva kasvufaktor-beeta 1 (TGF1) neerude taseme vahelisele korrelatsioonile.

2.7.MõjuAM6545jaAM4113Neerufibroosi ravi MetS-is (Metaboolnesündroom) Rotid

Joonisel 6 on kujutatud erinevate rühmade neerulõike, mis on värvitud Massoni Trichrome'iga, et hinnata kollageenseid kiude, mis ilmnesid sinaka värvusega. Neerukoores ilmnes MetS-ist võetud neerudes kollageenkiudude märkimisväärne suurenemine.Metaboolnesündroom) rottidel (joonis 6B) võrreldes kontrollrottidega (joonis 6A). Interstitsiumis ja glomerulites esines kollageenikiudude ladestumise ülejääk. Seevastu vähenes kollageensete kiudude ladestumine neerukoores koosAM6545(joonis 6C) ja AM4113 (joonis 6D) töötlusi. Massoni trikroomvärvimise kvantifitseerimine näitas, et protsent on suuremmetaboolnesündroom(M) kui kametaboolnetöödeldud rühmad (M pluss A65, M pluss A41) võrreldes kontrollidega. Kuid ravi MetS(Metaboolnesündroom) loomad koosAM6545jaAM4113põhjustas Massoni värvumise olulise vähenemise võrreldes ravimatametaboolneGrupp.

Joonis 6. Erinevate rühmade neerukoore tüüpilised mikrofotod, mis on värvitud Massoni trikroomiga. Pange tähele kollageenkiudude märkimisväärset suurenemist.

(A) neerudesmetaboolnesündroom(B) glomerulite (G) ja tuubulite (PCT, DCT) ümber võrreldes kontrolliga (A). SeevastuAM6545- ravitudmetaboolnesündroom

(C) ja AM{0}}töödeldudmetaboolnesündroom(D) näitas kollageensete kiudude märgatavat vähenemist. (Massoni trikroom, A, B, C& D×200).

(E) näitab Massoni trikroomvärvimise kvantifitseerimist protsentides. Tulemused kuvatakse kastigraafikutena ja keskmine on näidatud kui( pluss )(n=8).*Erinevad oluliselt p-st "C"<0.05,# significantly="" different="" from"m"="" at="" p=""><>

OSA Ⅱ saamiseks klõpsa SIIA