Cistanche põletiku ja neeruhaiguste raviks: mis on tsüstinopaatia neerukahjustuse põletiku patogeense rolli põhjus?
Mar 13, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com
Galektiini{0}} ja tsüstinosiini vaheline koostoime paljastab põletiku patogeense rolli tsüstinoosiga seotud neerudes
Tatiana Lobry1,2 et al
Põletikosaleb paljude häirete patogeneesis. Selle aluseks olevad mehhanismid on aga sageli teadmata. Siin testime, kastsüstinoos, milles osalev valktsüstinoos, on galektiini kriitiline regulaator-3, mis on b-galaktosidaasi siduva valgu perekonna liige, ajalpõletik. Tsüstinooson lüsosomaalne ladustamishäire ja hoolimata tsüstinoosi kõikjal esinevast avaldumisest,neerudon peamine organ, mida haigus mõjutab.Tsüstinoosleiti, et see suurendab lüsosomaalset lokaliseerumist ja galektiini lagunemist-3. In Ctns–/–hiired, hiire mudeltsüstinoos, galektiin -3 on üleekspresseeritudneerud. Galektiini-3 puudumine tsüstinootilistel hiirtel parandab patoloogilist neerufunktsiooni ja -struktuuri ning vähendab makrofaagide/monotsüütide infiltratsiooni Ctns-i neerudes–/–Gal3–/–hiired võrreldes Ctns-iga–/– hiired. Need andmed viitavad kindlalt sellele, et galektiin{0}} vahendabpõletikseotudneerudhaiguse progresseerumine tsüstinoosi korral. Lisaks leiti, et galektiin -3 interakteerub põletikku soodustava tsütokiiniga MonocyteChemoattractant Protein-1, mis stimuleerib monotsüütide/makrofaagide värbamist ja osutus märkimisväärselt suurenenud Ctns–/– hiirte seerumis. ja ka patsiendidtsüstinoos. Seega rõhutavad meie leiud tsüstinoosi ja galektiini{0}} interaktsiooni uut rolli põletikus ning annavad täiendava mehaanilise selgituseneerudtsüstinoosi haigus. See võib viia uute ravimite sihtmärkide tuvastamiseni, mida edasi lükatatsüstinoosprogresseerumist.
MÄRKSÕNAD:krooniline neeruhaigus; tsüstinoos; galektiin-3;põletik; monotsüütide kemoatraktantne valk-1
cistanche võib ravida kroonilist neeruhaigust ja tsüstinoosi
Põletiku algpõhjus on see, et lämmastikoksiid võib põhjustada põletikuliste rakkude tootmist.Cistancheon väärtuslik Hiina taimne ravim. Selle toimeained võivad pärssida lämmastikoksiidi sekretsiooni ning mängida rolli põletike ja neeruhaiguste ennetamisel ja ravimisel.
Tõlkeavaldus
Vaatamata ravile arenevad patsiendid endiselt lõppstaadiumis neerupuudulikkuseni. Selles uuringus näitasime, et puuduminetsüstinoospõhjustab galektiini-3 (Gal-3) lüsosomaalse lagunemise halvenemist, mis põhjustabpõletikja progresseerumistkrooniline neeruhaigussissetsüstinoos. Need leiud avavad uusi perspektiive potentsiaalsetele terapeutilistele sihtmärkidele, mis võivad neerude degeneratsiooni piirata või edasi lükatatsüstinoos. Sellisena võivad põletikuvastased ravimid ja Gal{1}} inhibiitorid, nagu mittesteroidsed põletikuvastased ravimid või indometatsiin, parandada tsüstinoosi neerupatogeneesi.
Põletikon organismi normaalne äge reaktsioon vigastusele või infektsioonile,1aga kroonilinepõletikon seotud koekahjustusega. Krooniliste haiguste, nagu diabeet, korral aktiveerivad kahjustatud koed immuunsüsteemi, põhjustades pidevat põletikulist reaktsiooni ja lõpuks kudede degeneratsiooni.2 Tsütokiinid on peamised modulaatoridpõletikja on võimelised aktiveerima või lahendamapõletikprotsessi.3 Patsientidelkrooniline neeruhaigus(CKD), tsütokiinide (interleukiin [IL]-6 ja kasvaja nekroosifaktor-a) suurenenud plasmakontsentratsioon japõletikmarkerid (C-reaktiivne valk, IL-6, hüaluronaan ja neopteriin) on seotud lõppstaadiumis neeruhaiguse progresseerumisega.4 Põletikulisi reaktsioone käivitavate spetsiifiliste vahendajate mõistmine hõlbustab degeneratiivsete kahjustuste vältimiseks sobivate ravimite sihtmärkide leidmist. .
Tsüstinooson autosoom-retsessiivne ainevahetushaigus, mis kuulub lüsosomaalsete ladestushäirete perekonda ja mida iseloomustab tsüstiini kuhjumine kõigis elundites.5 Defektne geentsüstinoosCTNS kodeerib lüsosomaalset tsüstiini/prootoni kaastransporterit tsüstinoosi.6,7 Kuigi CTNS-i ekspresseeritakse kõikjal,neerudon esimene elund, mis on kahjustatud inimesteltsüstinoos. Patsientidel esineb tavaliselt esimesel eluaastal Fanconi sündroom, mida iseloomustavad rasked vedeliku- ja elektrolüütide tasakaaluhäired, kehv kasv ja rahhiit.8Seejärel areneb krooniline neeruhaigus, mis areneb lõppstaadiumis neeruhaiguseks ja nõuabneerudsiirdamine. Tsüstiini akumuleerumine kõigis kudedes põhjustab lõpuks mitme elundi talitlushäireid; patsientidel esineb valguskartus ja pimedus, hüpotüreoidism, hüpogonadism, diabeet, müopaatia ja kesknärvisüsteemi halvenemine.9 C57BL/6 taustal on väljalülitatud hiiremudel (Ctns–/–) 10 kordab tsüstinootiliste patsientide neerufenotüüpi,11 samuti tsüstiinikristallide ladestumine sarvkestasse12ja kilpnäärme talitlushäired.13
Käesolevas uuringus paljastame uue rollitsüstinoossissepõletiksuhtlemise kaudu Gal-3. Gal-3 on lektiini ja b-galaktosiidi siduva valgu perekonna liige 21 ja osaleb mitmetes bioloogilistes funktsioonides, sealhulgaspõletik.22Kontekstisneerudhaiguste korral vähendas Gal{0}} inhibeerimine põletikueelse markerite ekspressiooni ja neerufibroosi ning hoiab ära glomerulaarfiltratsiooni kiiruse languse hüperaldosteronismi, hüpertensiooni või rasvumise mudelites.23–26Siin esitame tõendid selle kohta, ettsüstinoos, puuduminetsüstinoosviib Gal{0}} üleekspressiooninineerud, suurendades makrofaagide infiltratsiooni ja kroonilise neeruhaiguse progresseerumist. Lisaks tuvastame monotsüütide kemoatraktandi valgu-1 (MCP-1) potentsiaalse vahendajana, paljastades uued geenisihtmärgid ravimteraapia jaoks. TULEMUSED Gal-3 interakteerub tsüstinoosiga oma süsivesikute tuvastamise domeeni kaudu Spetsiifilise koostoime tuvastamiseks partnerid, kes kasutavad kvantitatiivset massispektromeetriat, Madin-Darby koerneerud(MDCK) rakud transdutseeriti lentiviiruse konstruktsiooniga, et ekspresseerida stabiilselt tsüstinoosi-rohelise FL fluorestsentsvalgu (GFP) sulandvalku. Lisaks varem avaldatud vakuolaarset tüüpi Hþ adenosiintrifosfataasi 9 subühikule,19Gal-3 tuvastati kui üks valkudest, mis interakteeruvadtsüstinoos(Joonis 1a). Seda interaktsiooni kinnitas veel kaasimmunosadestamine, millele järgnes Western blot (joonis 1b ja c). Lisaks näitasime, et Gal-3 jatsüstinoosvahendas Gal-3 süsivesikute tuvastamise domeen (CRD), mis paiknes valgu C-terminaalses sabas. Koostoimet inhibeeris tiodigalaktosiid, tugev galektiini ja süsivesikute koostoimete inhibiitor (joonis 1d). Nagu kõigil galektiinidel, on ka Gal-3-l afiinsus glükosüülitud valkude suhtes,21 seega on tõenäoline, et interaktsioon Gal-3-ga toimub tsüstinoosi glükosüülitud fragmendi kaudu, mis asub valgu intralüsosomaalses N-terminaalses sabas.27
Tsüstinosiin suurendab Gal{0}} lüsosoomi lokaliseerumist ja lagunemist
Gal{0}} võimaliku lüsosomaalse lokaliseerimise kontrollimiseks suhtlemiseltsüstinoos, näitasime, et Gal-3, nagu katepsiin D (sisene lüsosomaalne proteaas), oli seedimise eest kaitstud proteinaas K-ga, samas kui lüsosoomide Triton X- 100-ga permeabiliseerimisel lagundati mõlemad valgud (joonis 2a ja lisa). Joonis S1). Sarnased andmed saadi hiire maksast eraldatud lüsosoomidest, mis kinnitavad Gal-3 lüsosomaalset lokaliseerimist in vivo (joonis 2b ja c). Usaldusväärse tuvastatava antikeha puudumise tõttutsüstinoos, viidi läbi immunovärviminetsüstinoos-GFP-d ekspresseerivad MDCK rakuliinid anti-Gal-3 antikehaga. See kinnitas Gal-3 esinemist lüsosoomide luumenis, samas kui tsüstinoos-GFP ja lamp -2 (lüsosomaalne transmembraanne valk) leiti ainult vesiikulite membraanilt (joonis 2d).
Et uurida, kastsüstinosiinosales Gal{0}} liikluses, analüüsisime mõlema dünaamikattsüstinoosja Gal-3-positiivsed vesiikulid, mis kasutavad kahevärvilist elusrakkude täielikku sisepeegeldus-FL fluorestsentsmikroskoopiat hiire embrüonaalsetes fibroblastides (MEF) metsiktüüpi (WT) ja Ctn-idest–/–hiired, kes ekspresseerivad nii CTNS-DsRed kui ka Gal{1}}-GFP. Meie analüüs kinnitas sedatsüstinoosja Gal -3 läbivad tõelise kolokalisatsiooni Ctns–/– MEF-ides, mida kinnitab nende molekulide sarnane ruumiline jaotus kogu sisemise peegelduse FL fluorestsentsmikroskoopia tsoonis (joonis 2e). WT MEF-ide andmed olid sarnased (andmeid pole näidatud). Pealegi, kui analüüsiti ainult Gal- 3-GFP-ga transfekteeritud MEF-e, leiti tsütoplasmast Gal-3-GFP ja erinevalt CTNS-DsRed-iga kotransfektsioonist ei täheldatud selget vesikulaarset struktuuri. andmeid ei kuvata).
Need andmed kinnitati 293T rakkudes, mille puhul täheldati tugevat GFP signaali tsütoplasmas rakkudes, mis ekspresseerisid ainult Gal-3-GFP-d, samas kui rakkudes, mis ekspresseerisid nii Gal-3-GFP kui katsüstinosiin-DsRed, Gal-3-GFP paiknes peamiselt tsüstinoosi-DsRed-ekspresseerivates lüsosoomides (joonis 3a). Lisaks Gal-3 valgu ekspressiooni kvantifitseerimine rakkudes, mis on transfekteeritud ainult Gal-3-GFP või Gal- 3-GFP ja CTNS-DsRed ning Gal-3-GFP ja DsRed-ga kontrollina näitas CTNS-DsRed-iga kaastransfekteeritud rakkudes oluliselt vähem Gal-3-GFP valke, võrreldes ainult Gal-3-GFP-ga või DsRed-iga kaastransfekteeritud rakkudega (joonis 3b). Kokkuvõttes viitavad need tulemused selleletsüstinosiinsuurendab Gal-3 lüsosomaalset lokaliseerimist ja lagunemist. Näidati, et tsüstinosiin osaleb CMA-s.28 Kuumašoki 70 kDa valk (Hsc70) osaleb CMA-s, aidates kaasa substraatvalkude lahtivoltimisele ja translokatsioonile läbi membraani lüsosomaalsesse luumenisse LAMP2A-st sõltuval viisil.29,30 Kuna Gal{ CMA tegi ettepaneku {8}} lagundada,31 uurisime Gal-3 lokaliseerimist Hsc70 suhtes tsüstinootilistes MEF-ides. Konfokaalne mikroskoopia analüüs kinnitas Gal-3-GFP kolokaliseerumist Hsc70- positiivsete struktuuride juures nii WT-s (andmeid pole näidatud) kui ka Ctn-s–/–rakud (joonis 3c), mis toetavad Gal-3 koostransporti Hsc70-ga ja viitavad sellele, et lüsosomaalne internaliseerimine, kuid mitte Gal{4}} äratundmine chaperooni poolt, on viganetsüstinoos.
Gal-3 on seotud Ctns-i neerupõletikuga–/–hiired
Gal{0}} rolli uurimisekstsüstinoosin vivo genereerisime kahekordse väljalangemisega hiiremudeli, millel mõlemas puudustsüstinosiinja Gal-3 (Ctns–/–Gal{0}}–/–hiired). WT, Ctns–/–ja Gal-3–/–hiiri kasutati kontrollsubjektidena. C57BL/6 Ctns–/–hiirtel ilmnevad neeruanomaaliad umbes 10 kuu vanuselt.11 Seetõttu viidi uuringud läbi 8–9 kuu vanuselt, kuineerudanomaaliaid hakatakse avastama ja 12–15 kuu möödudes, kui neeruanomaaliad on progresseerunud. Kuna leiti, et tsüstiinisisaldus on meeste ja naiste Ctns erinev–/– neerud, analüüsiti neid eraldi. Kui tsüstiinisisaldus suureneb koos vanusega mõlemas genotüübis, ei täheldatud isaste ja emaste neerudes olulist erinevust Ctns–/– Gal-3–/– hiirte ja Ctns vahel.–/– hiired vanuses 8 kuni 9 kuud ja 12 kuni 15 kuud (joonis 4a).
Neerufunktsiooni hinnati seerumis ja uriinis ning olulist erinevust WT ja Ctns vahel ei täheldatud–/–hiired vanuses 8–9 kuud (andmeid pole näidatud), kuid 12–15 kuu vanused Ctns–/–hiirtel oli seerumi kreatiniini ja uurea tase oluliselt kõrgem kui WT hiirtel. Huvitaval kombel Ctns–/–Gal{0}}–/–hiirtel oli paranenud neerufunktsioon võrreldes Ctns-iga–/–hiirtel vanuses 12–15 kuud, madalama seerumi kreatiniinisisaldusega (P < 0.05) ja uureaga (P < 0,05; tabel 1).
8- kuni 9-kuuse ja 12- kuni 15-kuuse hiire histoloogilised uuringudneerudlõigud näitasid tõsiste anomaaliate esinemist Ctn-des–/– neerud, sealhulgas tubulaarne atroofia, tagasitõmbunud glomerulid ja mononukleaarsed infiltraadid. Neerulõikude pimeanalüüs näitas kortikaalse kahjustuse ulatust vahemikus 1 (säilinud koestruktuur) kuni 6. Keskmine skoor Ctns–/–hiirtel oli 2.64 - 0.36 9 kuu vanuselt (n ¼ 7) ja 4,12 0,37 12 kuni 15 kuu vanuselt (n ¼ 16). Ctns-i neerudes–/–Gal{0}}–/–samas vanuses hiirtel olid need anomaaliad oluliselt vähem ulatuslikud: 1.62 - 0.11 9 kuu pärast (n ¼ 21; P < 0.05,="" mann-whitney="" t-="" test)="" ja="" 3.{10}}.22="" 12–15="" kuu="" vanuselt="" (n="" ¼="" 33;="" p="">< 0,05,="" mann-whitney="" t-test)="" (joonis="" 4b="" ja="" täiendav="" joonis="" s2).="" veelgi="" enam,="" igale="" koele="" määrati="" torukujulise="" atroofia="" protsent="" ja="" ctn-ide="">–/–hiired ja Ctns–/–Gal{0}}–/–hiirtel oli 12 kuni 15 kuud vastavalt 66 protsenti ja 42 protsenti (P ¼ 0,01). Lisaks on Ctn-ide vahel silmatorkav erinevus–/–ja Ctns–/– Gal{0}}–/– neerudlõikudes oli väheste mononukleaarsete infiltraatide olemasolu Ctn-des–/–Gal{0}}–/–sektsioonides, samas kui Ctn-des täheldati järjekindlalt raskeid infiltraate–/– neerud(Joonis 4b).
Iseloomustasime mononukleaarseid infiltraate, mida täheldati histoloogilise uuringuga 8- kuni 9-kuu vanustel Ctn-idel–/– neerudmakrofaagide/monotsüütidena kaasimmunovärvimise teel CD68 ja CD45 ning CD68 ja II peamise histo-sobivusklassiga (täiendav joonis S3), kuid mitte CD68 ja CD163 puhul, mis viitab sellele, et nendel makrofaagidel on M1- sarnane põletikueelne profiil.32 ,33 CD{10}} positiivsete rakkude kvantifitseerimine näitas oluliselt vähem makrofaage/monotsüüte WT, Gal{11}}–/–ja Ctns–/–Gal{0}}–/– neerudvõrreldes Ctns-iga–/– neerud(joonis 4c), mis kinnitab histoloogilisi andmeid (joonis 4b).
Kokkuvõttes viitavad need leiud sellele, et Gal{0}} on seotud makrofaagide/monotsüütide värbamisega tsüstinootilistes haigustes.neerudja et selle puudumine leevendab neeruhaigusi inCtns–/–hiired. Seetõttu viitab see sellelepõletikvastutab vähemalt osaliselt Ctns-i neerude halvenemise eest–/– hiired.
Ctns-puudulikkusega neerudel on Gal{1}} üleekspressioon
Western blot analüüsi kasutades avastasime, et Gal{0}} ekspressioon suurenes oluliseltneerud12-kuuse Ctns–/–hiired võrreldes WT hiirtega (joonis 5a ja b). Uurimaks, kas see Gal-3 suurenenud ekspressioon on spetsiifiline Ctns-ile–/– neerud, kvantifitseerisime Gal-3 ekspressiooni transkripti ja valgu tasemelneerudstandardse vahesumma 2-astmelise nefrektoomia operatsiooniga indutseeritud kroonilise neeruhaigusega hiirtelt ja loomadelt, kellele tehti näilik operatsioon. WT ja Ctns–/–hiiri kasutati kontrollsubjektidena. Gal-3 transkriptid suurenesid märkimisväärselt Ctns–/– ja võlts neerudes, kuid suurenesid oluliselt kroonilise neeruhaiguse korralneerudvõrreldes WT hiirtega (joonis 5c). Seevastu valgu tasemel tuvastati Gal-3 ainult Ctns–/–neerud, mis viitab kindlalt sellele, et ainult Ctns–/–neerud ei suutnud Gal{0}} valku lagundada (joonis 5d). Gal-3 immunofluorestsentsvärvimine hiirelneerud8 kuni 9 kuu vanused näitasid ka Gal-3 üleekspressiooni Ctns–/– neerudvõrreldes WT-ganeerud(Joonis 5e). Lisaks ekspresseerisid Gal-3 CD68þ makrofaagid, aga ka neerurakud Ctn-des–/– neerud8–9 kuu vanuselt (täiendav joonis S4). Kokkuvõttes on need andmed kooskõlas Gal-3 vähenenud lagunemisega selle puudumiseltsüstinoosnagu on näidatud in vitro (joonis 3a ja b), mis viib Gal-3 valgu kuhjumiseni Ctns–/– neerud.
Tsüstinosiini puudumine suurendab seerumi MCP{0}} Gal-3 ülesreguleerimise kaudu
Gal-3 reguleeribpõletikerinevate mehhanismide kaudu.34 Seega, et saada mehhanismist täiendavaid teadmisi sissetsüstinoos, uurisime erinevate põletikueelsete või põletikuvastaste tsütokiinide ekspressiooni 12- kuni 15-kuuse WT, Ctns seerumis–/–, Gal-3–/–ja Ctns–/–Gal{0}}–/–hiired. Kuus tsütokiini taset mõõdeti hiire tsütomeetriliste helmeste massiivi, MCP-1, interferoon-g, kasvaja nekroosifaktori ning IL-10, IL-6 ja IL-12p70 abil. Ainult MCP-1 ekspressioon suurenes oluliselt Ctns–/– hiirte seerumis võrreldes WT ja Gal-3–/– hiirtega ning ka Ctnsiga–/–Gal{0}}–/–hiired, kelle MCP{0}} seerumitasemed olid võrreldavad WT hiirtega (joonis 6a). MCP-1 toodavad erinevad rakutüübid, kusjuures MCP-1 peamiseks allikaks on makrofaagid ja monotsüüdid,35 ning see toimib monotsüütide ja makrofaagide kemoatraktandina, reguleerides nende migratsiooni ja infiltratsiooni. Seevastu samas vanuses leiti, et Gal-3 ekspressioon oli sarnane Ctns–/– hiirte (44,33 9,81 ng/ml; n ¼ 5) ja WT hiirte (40) seerumis.{12} },41 ng/ml; n ¼ 7).
Gal{0}} ja MCP-1 vahelist seost uuriti täiendavalt kaasimmunosadestamise teel, kasutades Gal-3–GFP ja MCP-1–DsRed– või Gal-3– GFP ja CTNS-DsRed – (positiivse kontrollina), mis ekspresseerivad 293T rakke. Täheldati Gal-3 ja MCP-1 vahelist koostoimet (joonis 6b), mis viitab MCP-1 otsesele indutseerimisele Gal-3 poolt. Inkubeerimine N-atsetüül-D-laktosamiiniga (LacNAc), mis on Gal-3 CRD inhibiitor, näitas, et erinevalttsüstinosiininteraktsiooni, ei osale CRD Gal-3 ja MCP-1 interaktsioonis (joonis 6c).
Et hinnata, kas see leid on inimeste puhul asjakohane, mõõtsime Gal{0}} ja MCP-1 taset patsientideltsüstinooskes ei saanud immunosupressiivset ravi ega võtnud põletikuvastaseid ravimeid. Kuigi leiti, et Gal-3 tase oli tsüstinoosiga patsientide seerumis tervete doonoritega võrreldes veidi tõusnud, ei olnud erinevus oluline (joonis 6e), mis kinnitab meie tulemusi, mis saadi Ctns-is.–/–hiired. Ainult kahel patsiendil oli kõrge Gal-3 tase (25,34 ja 39,54 ng/ml); neid peeti kõrvalekalleteks ja seega ei kaasatud neid joonisele 6e. Seevastu inimese MCP-1 vastu suunatud ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (joonis 6d) kasutamisel leiti, et seerumi MCP-1 tase on oluliselt suurenenud patsientidel, kelleltsüstinoos(252.1 - 18.4 pg/ml; n ¼ 19; vanusevahemik 1–23 aastat) vaatamata tsüsteamiinravile võrreldes tervete kontrollsubjektidega (166.9 -13.5 pg/ml; n ¼ 1 0; vanusevahemik 8–63 aastat) (P < 0,001).="" mõlemal="" patsiendil="" ei="" ole="" leitud="" seost="" vanuse="" ja="" mcp{14}}="" taseme="">tsüstinoosja terved doonorid (andmeid pole näidatud).
Cistancheonpõletikuvastaneomadused
ARUTELU
Hoolimata asjaolust, et põdevatel patsientidel koguneb tsüstiin kõikidesse kudedessetsüstinoos, on neerud organid, mis on kahjustuste suhtes kõige haavatavamad. Seega usume, et tsüstiini akumuleerumine ei ole ainuüksi neerude degeneratsiooni eest vastutav. Siin kirjeldame uut rollitsüstinosiinaasta määrusespõletikseotud kroonilise neeruhaiguse progresseerumisegatsüstinoos. See uuring võib selgitada, miks patsientidel areneb lõppstaadiumis neerupuudulikkus vaatamata tsüsteamiinravile.
Tsüstinoosi molekulaarsete partnerite uuring näitas otsest koostoimet Gal-3-ga, mida võivad pärssida Gal-3 CRD inhibiitorid. Hiljutised uuringud näitasid, et Gal-3 võib pärast lüsosomaalset kahjustust, näiteks kristallide kogunemist, suhelda lüsosomaalses luumenis paiknevate glükaanidega.36 Meie uuringus käsitles Gal-3 ja Gal{4}} interaktsiooni.tsüstinosiinuuriti tervetel rakkudel, mis ekspresseerivadtsüstinosiinja seetõttu ei kogune tsüsteiini ega tsüstiini kristalle. Lisaks muutis nii Gal-3 kui ka tsüstinosiini üleekspressioon tervetes rakkudes Gal-3 subtsellulaarset lokaliseerimist, mis seejärel lokaliseeriti lüsosoomidesse, võrreldes ainult Gal-3 üleekspressiooniga, mis asus tsütoplasmas. Need tulemused viitavad tugevalt sellele, et interaktsioon Gal-3 ja tsüstinosiini vahel toimub lüsosomaalsetest kahjustustest sõltumatult ja et tsüstinosiin vastutab aktiivselt Gal-3 lüsosomaalse lokaliseerimise eest. Varem on näidatud, et Gal-3 laguneb lüsosoomist sõltuva proteolüüsi teel Abl ja Arg, 2 türosiinkinaasi puudumisel.31
Lisaks näitasime sedatsüstinoosja Gal-3 paiknevad koos dünaamilistes vesikulaarsetes struktuurides ja mobiliseeritakse koos ajaruumiliselt.Tsüstinosiinvarem on seostatud lüsosomaalse LAMP2A, ainsa teadaoleva CMA retseptori kaubitsemismehhanismidega, mis on valesti lokaliseeritud.tsüstinoos.28Varem on Gal-3 lagunemist vahendanud CMA.31Konfokaalne mikroskoopia analüüs kinnitas Gal{0}} kolokaliseerumist Hsc70-positiivsetes struktuurides mõlemas Ctns–/– ja WT-rakud, toetades Gal-3 koostransporti Hsc70-ga lüsosoomis esitlemiseks ja degradatsiooni CMA poolt, kuna Hsc70 aitab substraatvalkude translokatsiooni läbi membraani lüsosoomi luumenisse.29,30Meie tulemuste võimalik tõlgendus on seetsüstinosiinreguleerib Gal{0}} kaubitsemist ja toimetamist CMA-aktiivsetesse lüsosoomidesse lagunemiseks.
See uudne teetsüstinosiin-sõltuvat Gal-3 lüsosomaalset lokaliseerimist ja lagunemist toetatakse in vivo, kuna Ctns-defitsiitsetel hiirtel esineb Gal-3 üleekspressioonneerud. Lisaks oli Gal{0}} suurenenud mRNA Ctns piiratud–/–neerudes, võrreldes teise kroonilise neeruhaiguse mudeliga, tuvastati suur kogus Gal{0}} valku ainult inCtns–/– neerud. Need andmed toetavad tugevalt järeldust, ettsüstinosiinosaleb Gal-3 valgu lagundamisel, mis suudab kontrollida Gal-3 mRNA üleekspressiooni stressitingimustes, nagu krooniline neeruhaigus.
Gal{0}}-l on mitu bioloogilist rolli, sealhulgas roll ägedas ja kroonilisespõletikmeelitades ligi monotsüüte ja makrofaage.37,38In Ctns–/– hiirtel täheldasime raskeid mononukleaarseid infiltraate peamiseltneerudnagu eelnevalt kirjeldatud,11,39mida iseloomustati monotsüütide/makrofaagidena. Seevastu neerud kahekordsest väljalöögist Ctns–/–Gal{0}}–/–hiirtel esines väga vähe monotsüüte/makrofaagide infiltraate, mis viitab tugevalt sellele, et Gal{0}} on seotudpõletikCtns neerudes–/–hiired. Korduva koekahjustuse kontekstis võib Gal{0}} põhjustada ülemineku kroonilisekspõletikja fibroos.34Kooskõlas nende leidudega näitavad meie andmed Gal{0}} osalust kroonilise neeruhaiguse progresseerumisestsüstinoos. Tõepoolest, topeltknockout Ctns–/– Gal{0}}–/–hiired olid paremadneerudfunktsioon ja struktuur võrreldes Ctns-iga–/–hiired. Samamoodi esineb Gal{0}}-puudulikel hiirtel neerufibroosi vähemneerudvõrreldes WT hiirtega pärast ühepoolset kusejuha obstruktsiooni,40 ja Gal-3 knockout hiirtel, kes said isheemia-reperfusioonikahjustuse, oli parem neerufunktsioon võrreldes WT hiirtega, kellel oli isheemia-reperfusioonikahjustus.41
Kuigi leiti seos Gal{0}} tasemete vahel plasmas ja kroonilise neeruhaiguse arengu vahel,42 ei täheldatud Gal{2}} ekspressiooni erinevust hiirte ja inimeste seerumis, keda mõjutab haigus.tsüstinoosja terved kontrollisikud. Mõõtes erinevaid tsütokiinitasemeid seerumis, avastasime Ctn-de MCP-1 olulise suurenemise–/–hiired, samas kui Ctns–/–Gal{0}}–/–hiirte tasemed olid võrreldavad WT hiirte omadega. MCP-1 on tsütokiin, mis võib vabaneda seerumis ja moodustab gradiendi, et meelitada monotsüüte ja makrofaage vigastuskohta.35 MCP-1 suurenemine Ctns-i seerumis.–/–hiired võrreldes Ctns-iga–/–Gal{0}}–/–hiired ei sõltunud tsüstiini akumuleerumisest, sestneerudtsüstiinisisaldus oli mõlemas genotüübis sarnane. Lisaks leiti, et vaatamata tsüsteamiinravile, mis võimaldas tsüstiinil lüsosoomidest väljuda, leiti MCP{0}} oluliselt suurenenud patsientide seerumis.tsüstinoosvõrreldes tervete doonoritega. Need andmed viitavad kindlalt sellele, et puuduminetsüstinosiin, mitte tsüstiini akumuleerumine, vastutab seerumi MCP-1 suurenemise eest. Lisaks näitasime otsest interaktsiooni Gal-3 ja MCP-1 vahel, mida hiljuti soovitasid Gordon-Alonso jt43, kuid mida rohkem ei uuritud. Gal-3-vahendatud MCP-1 aktiveerimise mehhanismi siin ei uuritud. Hüpoteesiks on signaalpeptiidi olemasolu inimese MCP-s-1, mida saab selle sekretsiooni suurendamiseks lõhustada.44 Lisaks võib plasmiin lõhustada MCP-1 C-otsa, mis suurendab selle kemoatraktandi toimet. Lisaks hoidis meie andmetega korrelatsioonis MCP-1 inhibeerimine diabeetilise nefropaatia hiiremudelis ära neerude makrofaagide infiltratsiooni ja parandas neerufunktsiooni.46,47tsüstinoos, meie andmed viitavad kindlalt sellele, et puudubtsüstinosiinpõhjustab Gal-3 suurenemist, mis aktiveerib MCP-1 vere mobilisatsiooni, parandades neerude töödpõletikja progresseerumistkrooniline neeruhaigus.
Need leiud avavad uusi perspektiive potentsiaalsetele terapeutilistele sihtmärkidele, mis võivad neerude degeneratsiooni piirata või edasi lükatatsüstinoos. Tõepoolest on leitud, et mittesteroidsed põletikuvastased ravimid, nagu aspiriin ja indometatsiin, pärsivad Gal-3 ekspressiooni, pärssides selle transkriptsiooni.48 Indometatsiini kasutatakse tegelikult polüuuria ja polüdipsia reguleerimisekstsüstinoos,49 ja hiljutine uuring, milles osales 307 tsüstinoosi põdevat Euroopa patsienti, näitas indometatsiiniga ravitud patsientide neerude paranemist.50 Meie uuringu valguses on indometatsiini või mittesteroidsete põletikuvastaste ravimite kasutaminetsüstinoospatsiente võidakse uuesti kaaluda.
MEETODID
Loomkatsed
C57BL/6 Ctns–/–hiired hankis dr. Antignac (Inserm U1163, Pariis, Prantsusmaa). C57BL/6 galektiin-3 null (Gal-3–/–) hiiri hankisid dr Fu-Tong Liu (California ülikool, Davis) ja dr Jerrold M. Olefsky (California ülikool, San Diego). Aretusstrateegia WT, Ctns genereerimiseks–/–, Gal-3–/–, Ctns–/– ja Gal- 3–/–hiiri kirjeldatakse jaotises Täiendavad meetodid.
Rakuliinid
segadus saadi WT ja Ctns vastsündinu naha biopsiatest–/–hiired. MEF, 293T ja MDCK II tüüpi rakuliine (ATCC, Manassas, VA) kasvatati Dulbecco modifitseeritud Eagle söötmes, mis sisaldas 10 protsenti vasika loote seerumit või veise loote seerumit, 100 ühikut/ml penitsilliini, 0,1 mg/ml streptomütsiini. ja 2 mM L-glutamiini.
Kaasimmunosadestamine ja massispektromeetria analüüs
Valgu-valgu interaktsioonide uurimiseks transdutseeriti MDCK rakud lentiviiruse pRRL.SIN.cPPT.PGK/WPRE vektori karkassi, et stabiilselt ekspresseeridatsüstinosiin-GFP.51Kaasimmunosadestamine viidi läbi nii, nagu on kirjeldatud jaotises Täiendavad meetodid. Kaasimmunosadestatud valgud lahutati naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga (SDS-PAGE) ja analüüsiti massispektromeetriaga, LTQ Orbitrap, nagu juba kirjeldatud.19
Kaasimmunosadestamiseks kasutati 293T-rakke, mis ekspresseerisid Gal-3-GFP ja MCP-1-DsRed või Gal-3-GFP ja CTNS-DsRed, nagu on kirjeldatud täiendavates meetodites. Kaasimmunosadestatud valgud lahutati SDS-PAGE abil ja Gal-3-siduv MCP-1 tuvastati DsRed-vastase antikeha abil (Clontech Laboratories, Mountain View, CA).
Subtsellulaarne fraktsioneerimine
Kaheksa maksa saadi C57BL/6 hiirtelt ja valmistati nii, nagu eelnevalt kirjeldatud.52 Gradiendi tingimused olid põhiliselt samad, mis on kirjeldatud algses publikatsioonis52, välja arvatud see, et metrisamiidi asemel kasutati Nycodenzi.
Gal-3-inhibiitori ja proteinaasi K ravi
Lüsaadid alatestsüstinosiin-GFP MDCK rakke ja 293T, mis ekspresseerivad Gal-3-GFP ja CTNS-DsRed või Gal-3-GFP ja MCP-1-DsRed, inkubeeriti 5 mM tiodigalaktosiidi või 5 mM N-ga või ilma -atsetüül-D-laktosamiin, vastavalt 2 Gal-3 CRD inhibiitorit. Pärast 30-minutilist inkubeerimist temperatuuril 4 - C koos pideva loksutamisega inkubeeriti lüsaate 50 ml anti-GFP mikrohelmestega ja viidi läbi immunosadestamine, nagu eelnevalt mainitud. Sadestunud valgud lahutati SDS-PAGE abil 10% geelil.
Lüsaadid alatestsüstinosiin-GFP MDCK rakke ja hiire maksa lüsosoomiga rikastatud fraktsioone inkubeeriti 2% Triton X-100-ga või ilma selleta 10 minutit temperatuuril 4 - C ja seejärel inkubeeriti 30 minutit 2,5 mg/ml ja 25 mg-ga või ilma. /ml proteinaas K, vastavalt. Pärast ensüümi inaktiveerimist 1 mM fenüülmetüülsulfonüülfluoriidiga 5 minutit temperatuuril 4 - C lahutati valgud SDS-PAGE abil 10% geelil.
Immunofluorestsentsanalüüs
Fikseeritud MDCK rakke inkubeeriti anti-Lamp-2 (OriGeneTechnologies, Rockville, MD) ja anti-Gal-3 antikehaga (CedarlaneLaboratories, Burlington, Ontario, Kanada) 2 tundi toatemperatuuril, millele järgnes Alexa Fluor. 555 sekundaarset antikeha (Invitrogen, Carlsbad, CA) 1 tund toatemperatuuril. Konfokaalsed kujutised tehti Zeiss LSM 700 mikroskoobiga (Carl ZeissMicroscopy, Jena, Saksamaa).
293T-rakud, mis ekspresseerivad ajutiselt ainult Gal-3-GFP-d, Gal-3-GFP-d ja DsRed-i või Gal-3-GFP-d jatsüstinosiin-DsRed kultiveeriti katteklaasil enne slaidile paigaldamist. Rakud pildistati Keyence BZ-X700 instrumendiga (Keyence Corp., Osaka, Jaapan).
Parandatudneerudsektsioone inkubeeriti üleöö temperatuuril 4 - C anti-CD68 (BioLegend, San Diego, CA) või anti-Gal-3 antikehaga (BioLegend), millele järgnes Alexa Fluor 488 sekundaarne antikeha (Invitrogen), 1 tund toatemperatuuril. Pildid saadi Keyence BZ-X700 instrumendi abil. CD68 ekspressiooni kvantifitseerimist kirjeldatakse täiendavates meetodites.
Gal{0}}–GFP-d ekspresseerivad MEF-id värviti Hsc70-vastase antikehaga (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) ja pildistati nagu eelnevalt kirjeldatud.53
Täieliku sisemise peegelduse FL fluorestsentsmikroskoopia
WT ja Ctns–/–Gal{0}}-GFP ja CTNS-DsRed ekspresseeriv MEF külvati 4-kambriga 35- mm boorsilikaatpõhjale (Cellvis, Mountain View, CA). Pärast 2-päevast kultuuri analüüsiti MEF-e täieliku sisemise peegelduse FL fluorestsentsmikroskoopia abil, nagu eelnevalt kirjeldatud54ja täiendavates meetodites. Pilte analüüsiti ImageJ tarkvara abil.
Gal-3 avaldise analüüs
293T-rakud, mis ekspresseerivad Gal-3-GFP, Gal-3-GFP ja DsRed või Gal-3-GFP ja CTNS-DsRed ja eksplanteeritakseneerudlüüsiti radioimmunosadestamise analüüsi puhvris, mis sisaldas proteinaasi inhibiitori kokteili. Valgud eraldati 4–15-protsendilisel geelil ja paljastati anti-Gal-3 (Abcam, Cambridge, UK) või anti-glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaasi (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) antikehade abil. .
Neerudhomogeniseeriti RLT puhvris, mis sisaldas b-merkaptoetanooli, kasutades Precellys 24 (Bertin Instruments, Montigny-le-Bretonneux, Prantsusmaa). RNA eraldati ja Gal-3-spetsiifiline digitaalse polümeraasi ahelreaktsioon viidi läbi, nagu on kirjeldatud jaotises Täiendavad meetodid. Gal-3 transkripti ekspressiooni väljendati suhtena võrreldes endogeense kontrolliga 18S. Vastavalt tootja juhistele kasutati hiirte ja inimese seerumite Gal-3 taseme tuvastamiseks ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (Abcam).
Neerufunktsioon
Seerumi ja uriini fosfaadi, seerumi kreatiniini ja uurea taset hinnati QuantiChrom Phosphate Assay Kit, Quanti Chrom Creatinine Kit ja QuantiChrom Urea Assay Kit (BioassaySystems, Hayward, CA) abil. Valgu taset uriinis mõõdeti Pierce BCA Protein Assay Kit (Rockford, IL) abil.
Histoloogia
Sel ajal, kui hiired tapeti,neerudkoguti, fikseeriti formaliinis ja sisestati parafiini. Dr. Marie Claire Gubler vaatas hematoksüliini ja eosiiniga värvitud lõigud läbi pimendatud viisil, nagu on kirjeldatud täiendavates meetodites.
Tsüstiinisisalduse mõõtmine
Kudede tsüstiini mõõtmine viidi läbi massispektromeetria (LC-ESI-MS/MS) abil, nagu eelnevalt kirjeldatud.39
Tavaline nefrektoomia ja võltsoperatsioon
Hiirte krooniline neeruhaigus kutsuti esile standardse vahesumma 2-staadiumis nefrektoomia operatsiooniga, nagu eelnevalt kirjeldatud.55,56Näidishiirte rühm läbis sama protseduuri, kuid ilma ühtegi lõikamataneerudpabertaskurätik.
Tsütokiinide tase seerumis
Tsütokiini taseme mõõtmiseks hiire seerumis, hiirpõletikkomplekti tsütomeetriline helmeste massiiv (BD Biosciences, San Jose, CA) viidi läbi vastavalt tootja juhistele. MCP-1 kontsentratsioon inimese seerumis määrati ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi abil, mis oli suunatud MCP-1 (Abcam, Cambridge, UK) vastu vastavalt tootja juhistele.
Statistiline analüüs
Väärtused on väljendatud keskmisena – SEM. Tulemuse olulisust hinnati paaritu 2-sabaga t-testiga või paaritu 2-sabaga t-testiga Welchi korrektsiooniga. Kolme või enama tingimuse rühmavõrdlused viidi läbi parameetriliste dispersioonanalüüsidega, millele järgnes Tukey mitme võrdluse test paaride võrdlemiseks. Histoloogilisi skoori võrreldi Mann-Whitney testiga. Analüüsid viidi läbi tarkvara Prism 6 abil (GraphPad, San Diego, CA). P-väärtust alla 0,05 peeti oluliseks.
Uuringu heakskiit
Hiirkatsed viidi läbi vastavalt institutsionaalse loomade kasutamise komitee protokollidele. Inimkoe kasutamise selles uuringus kiitis heaks San Diego California ülikooli HumanResearch Protections programm.
AVALIKUSTAMINE
SC on teadusnõukogu liige ja hoolekogu liigetsüstinoosTeadusfond. SC on ettevõtte GenStem TherapeuticsInc kaasasutaja, aktsionär ja nii teadusnõukogu kui ka direktorite nõukogu liige. California-San Diego ülikool on selle kokkuleppe tingimused üle vaadanud ja heaks kiitnud vastavalt oma huvide konflikti põhimõtetele. Kõik teised autorid ei deklareerinud konkureerivaid huve.
pakkudes Gal-3–/–hiired. Täname Lou Devanneaux'd ja NicholeFlerchingerit tehnilise abi eest ning Elizabeth Souterit käsikirja läbivaatamise eest. Hiire pakkumise eest tunnustame Christopher Alfonsot ettevõttest BDBiosciencepõletiktsütomeetriliste helmeste massiivi ja tema abi eest tulemuste tõlgendamisel. Seda tööd toetasid riiklike terviseinstituutide stipendiumid RO1-DK090058 ja R01-DK110162,TsüstinoosResearch Foundation ja California regeneratiivse meditsiini instituut (CIRM, CLIN{0}}). TL-i toetab Vaincre Les MaladiesLysosomales'i lõpetajate stipendium. AB-d ja JZ-d toetab stipendiumtsüstinoosTeadusfond. UCSD Neuroscience MicroscopyShared Facility rahastas riikliku neuroloogiliste häirete ja insuldi instituudi (NINDS) stipendium P30-NS047101.
VIITED
1. Medžitov R. Päritolu ja füsioloogilised rollidpõletik. Loodus. 2008;454:428–435.
2. Donath MINU. Sihtiminepõletik2. tüüpi diabeedi ravis. Diabeet Obes Metab. 2013; 15 (suppl 3): 193–196.
3. Jaffer U, Wade RG, Gourlay T. Tsütokiinid süsteemse põletikulise vastuse sündroomis: ülevaade. HSR Proc Intensive Care Cardiovasc Anesth. 2010;2:161–175.
4. Pecoits-Filho R, Heimburger O, Barany P jt. Seosed ringlevate põletikumarkerite ja neerufunktsiooni jääkfunktsiooni vahel CRF-ga patsientidel. Olen JNeerDis. 2003;41:1212–1218.
5. Gahl WA, Thoene JG, Schneider JA.Tsüstinoos. N Engl J Med. 2002;347: 111–121.
6. Cherqui S, Kalatzis V, Trugnan G, Antignac C.tsüstinosiinlüsosomaalse membraani jaoks on vaja türosiinipõhist signaali ja uudset sorteerimismotiivi. J Biol Chem. 2001;276:13314–13321.
7. Kalatzis V, Cherqui S, Antignac C, Gasnier B.Tsüstinosiin, valk on puuduliktsüstinoos, on H( )-juhitav lüsosomaalne tsüstiini transporter. EMBO J. 2001;20:5940–5949.
8. Cherqui S, Courtoy PJ. Neerude Fanconi sündroomtsüstinoos: patogeensed arusaamad ja terapeutilised perspektiivid. Nat Rev Nephrol. 2017;13:115–131.
9. Nesterova G, Gahl W. Nefropaatilinetsüstinoos: multisüsteemse haiguse hilised tüsistused. Pediatr Nephrol. 2008;23:863–878.
10. Cherqui S, Sevin C, Hamard G jt. Intralüsosomaalne tsüstiini akumulatsioon hiirtel puudubtsüstinosiin, valk on puuduliktsüstinoos. Mol Cell Biol. 2002;22:7622–7632.
11. Nevo N, Chol M, Bailleux A et al. Neerude fenotüüptsüstinooshiire mudel sõltub geneetilisest taustast. Nephrol Dial siirdamine. 2010;25:1059–1066.
12. Kalatzis V, Serratrice N, Hippert C jt. Silma anomaaliad atsüstinoosloommudel jäljendab haiguse patogeneesi. Pediatr Res. 2007;62:156–162.
13. Juhend Chevronnay HP, Janssens V, Van Der Smissen P jt. Hiiremudel pakub välja kaks mehhanismi kilpnäärme muutuste jaoks infantiilses eastsüstinoos: vähenenud türeoglobuliinide süntees endoplasmaatilise retikulumi stressi/voltimata valgu vastuse ja lüsosomaalse töötlemise halvenemise tõttu. Endokrinoloogia. 2015;156:2349–2362.
14. Brodin-Sartorius A, Tete MJ, Niaudet P jt. Tsüsteamiinravi aeglustab nefropaatia progresseerumisttsüstinooshilistel noorukitel ja täiskasvanutel.NeerInt. 2012;81:179–189.
15. Cherqui S. Tsüsteamiinravi: ravitsüstinoos, mitte ravi.NeerInt. 2012;81:127–129.
16. Gahl WA, Balog JZ, Kleta R. Nefropaatilinetsüstinoostäiskasvanutel: suukaudse tsüsteamiinravi loomulik ajalugu ja mõju. Ann Intern Med. 2007;147:242–250.
17. Cherqui S, Courtoy PJ. Neerude Fanconi sündroomtsüstinoos: patogeensed arusaamad ja terapeutilised perspektiivid. Nat Rev Nephrol. 2017;13:115–131.
18. Napolitano G, Johnson JL, He J jt. Tšaperooni vahendatud autofagia kahjustus põhjustab lüsosomaalse ladustamishaiguse selektiivseid lüsosomaalseid lagunemisdefektetsüstinoos. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
19. Andrzejewska Z, Nevo N, Thomas L jt.Tsüstinosiinon vakuolaarse H-ATPaasi regulaator-kaltsu kompleksi komponent, mis kontrollib imetajate rapamütsiini kompleksi 1 signaaliülekannet. J Am Soc Nephrol. 2016;27: 1678–1688.
20. Rega LR, Polishchuk E, Montefusco S jt. Transkriptsioonifaktori EB aktiveerimine päästab lüsosomaalsed kõrvalekalded tsüstinootilises haigusesneerudrakud.NeerInt. 2016;89:862–873.
21. Dumic J, Dabelic S, Flogel M. Galectin-3: avatud lugu. Biochim Biophys Acta. 2006;1760:616–635.
22. Sciacchitano S, Lavra L, Morgante A jt. Galektiin-3: üks molekul haiguste tähestiku jaoks, alates A kuni Z. Int J Mol Sci. 2018;19(2).
23. Calvier L, Martinez-Martinez E, Miana M jt. Galektiini-3 inhibeerimise mõju aldosteroonist põhjustatud südame- ja neerukahjustustele. JACC südamepuudulikkus. 2015;3:59–67.
24. Frenay AR, Yu L, van der Velde AR, et al. Galektiini{1}} farmakoloogiline inhibeerimine kaitseb hüpertensiivse nefropaatia eest. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F500–F509.
25. Kolatsi-Joannou M, Price KL, Winyard PJ, Long DA. Modifitseeritud tsitrusviljade pektiin vähendab galektiini-3 ekspressiooni ja haiguse tõsidust eksperimentaalsel ägedalneerudvigastus. PloS One. 2011; 6:e18683.
26. Martinez-Martinez E, Ibarrola J, Clavier L jt. Galektiini-3 blokaad vähendab neerufibroosi kahes normotensiivses neerukahjustuse eksperimentaalses mudelis. PloS One. 2016;11:e0166272.
27. Nevo N, Thomas L, Chhuon C jt. Mõjutsüstinoosvalgu stabiilsuse glükosüülimine aminohapete diferentsiaalse dünaamilise stabiilse isotoobi märgistamise teel rakukultuuris (SILAC). Moli rakkude proteoomika. 2017;16:457–468.
28. Napolitano G, Johnson JL, He J jt. Tšaperooni vahendatud autofagia kahjustus põhjustab lüsosomaalse ladustamishaiguse selektiivseid lüsosomaalseid lagunemisdefektetsüstinoos. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
29. Majeski AE, Dice JF. Chaperone-vahendatud autofagia mehhanismid. Int J Biochem Cell Biol. 2004;36:2435–2444.
30. Xie W, Zhang L, Jiao H jt. chaperone-vahendatud autofagia hoiab ära apoptoosi, lagundades BBC3 / PUMA. Autofagia. 2015;11:1623–1635.
31. Li X, Ma Q, Wang J jt. c-Abl ja Arg türosiinkinaasid reguleerivad onkoproteiini Galectin-3 lüsosomaalset lagunemist. Rakkude surma erinevus. 2010;17:1277–1287.
32. Takeuchi H, Tanaka M, Tanaka A jt. M2-polariseeritud makrofaagide ülekaal põievähi korral mõjutab angiogeneesi, kasvaja astet ja invasiivsust. Oncol Lett. 2016;11:3403–3408.
33.Chavez-Galan L, Olleros ML, Vesin D, Garcia I. Palju rohkem kui M1 ja M2 makrofaage, leidub ka CD169( ) ja TCR( ) makrofaage. Front Immunol. 2015; 6:263.
34. Henderson NC, Sethi T. Määruspõletikgalectin-3. Immunologic Rev. 2009; 230:160–171.
35. Deshmane SL, Kremlev S, Amini S, Sawaya BE. Monotsüütide kemoatraktantne valk-1 (MCP-1): ülevaade. J Interferon Cytokine Res. 2009;29:313–326.
36.Skowyra ML, Schlesinger PH, Naismith TV, Hanson PI. ESCRT-masinate käivitatud värbamine soodustab endolüsosomaalset paranemist. Teadus. 2018;360(6384).
37. MacKinnon AC, Farnworth SL, Hodkinson PS jt. Alternatiivse makrofaagide aktiveerimise reguleerimine galektiini poolt-3. J Immunol. 2008; 180: 2650–2658.
38. Sano H, Hsu DK, Yu L jt. Inimese galektiin -3 on uus monotsüütide ja makrofaagide kemoatraktant. J Immunol. 2000;165:2156–2164.
