ali.ma@wecistanche.com

Alzheimeri tõvega kombineeritud osteoporoosi samaaegse eksperimentaalse mudeli loomine rottidel ning ehhinakosiidi ja Cistanche tubulosa akteosiidi kahekordne toime

Yi Chena et al

ABSTRAKTNE

Etnofarmakoloogiline tähtsus: Cistanche tubulosaon hinnaline traditsiooniline Hiina meditsiin, mida on laialdaselt kasutatud osteoporoosi jaAlzheimeri tõbi. Ehhinakosiid ja akteosiid on selle peamised aktiivsed komponendidCistanche tubulosamillel on teadusliku väärtusega farmakoloogiline tegevus. On teatatud, et ehhinakosiid ja akteosiid võivad parandada õppimis- ja mäluvõimet, soodustada osteoblastide vohamist ja diferentseerumist.

Uuringu eesmärk: ehhinakosiid ja akteosiid alatesCistanche tubulosaon näidanud märkimisväärset osteoporoosi- jaAlzheimeri tõbi, samas kui neid toimeid ei ole rotimudelis samaaegselt uuritud. Selle uuringu eesmärk oli luua ja kontrollida osteoporoosi mudelit koosAlzheimeri tõbiinrottidele ning uurida ehhinakosiidi ja akteosiidi topeltmõju sellel samaaegsel mudelil.

Materjalid ja meetodid:Samaaegselt määrati kolm ovariektoomia (OVX), näidisoperatsiooni D-galaktoosi ja AlCl3 (D), munasarjade eemaldamise D-galaktoosi ja AlCl3 (OVX pluss D) mudelrühma. Uimastiravi rühmas olevatel rottidel eemaldati munasarjad. D-galaktoosi intraperitoneaalse süstimise ja AlCl3 intragastraalse manustamise ajal ravimiravi rühmade rottidele manustati rottidele suukaudselt ehhinakosiidi (90 mg/kg/päevas), akteosiidi (90 mg). /kg/d) ja vastavalt positiivsed kontrollravimid östradioolvaleraat (0,6 mg/kg/d), donepesiil HCl (0,8 mg/kg/d). Pärast 8-nädalast ravi ravimitega viidi esmalt läbi 6-päevane Morrise veelabürindi (MWM) test. Seejärel rotid surmati vere, emaka, reieluu, sääreluu ja ajukude kogumiseks. Seerumit kasutati biokeemiliste testide jaoks. Emakaid kasutati histomorfomeetria jaoks. Parempoolset reieluu kasutati vastavalt mikro-CT ja histomorfomeetria jaoks. Biomehaanilises testis kasutati paremat sääreluu. Jääkastile kogutud hipokampust kasutati biokeemilisteks katseteks. Histomorfomeetria jaoks kasutati perfusiooni teel kogutud aju.

Tulemused:Võrreldes Shami rühmaga võib OVX pluss D rühm märkimisväärselt vähendada õppimis- ja mäluvõimet, põhjustades oksüdatiivseid kahjustusi, kahjustades hipokampuse neuroneid ning mõjutades atsetüülkoliini hüdrolüüsi ja sünteesi. Samal ajal suurenes BALP ja TRAP aktiivsus OVX pluss D rühmas oluliselt (P < {0}}.001)="" võrreldes="" võltsrühmaga.="" lisaks,="" võrreldes="" sham-rühmaga,="" vähenes="" keskmine="" luu="" mineraalne="" tihedus="" ilmselgelt="" (p=""><0, 05),="" trabekulaarne="" luumass="" ja="" mikroarhitektuur="" hävisid="" oluliselt="" ka="" ovx="" pluss="" d-rühmas.="" veelgi="" enam,="" maksimaalne="" koormus="" ja="" maksimaalne="" pinge="" vähenesid="" oluliselt="" (p=""><0, 01)="" ning="" energia="" neeldumine="" vähenes="" oluliselt="" võrreldes="" sham-rühmaga.="" pärast="" ehhinakosiidi="" ja="" akteosiidiga="" manustamist="" on="" osteoporoosi="" tüüpilised="" patoloogilised="" tunnused="">Alzheimeri tõbiparanesid.

Järeldused: Osteoporoosi mudel kombineeritunaAlzheimeri tõbirottidel oli teostatav ja edukalt loodud. Ehhinakosiid ja akteosiid avaldasid sellele samaaegsele mudelile ka märkimisväärset mõju ja need võivad olla potentsiaalsed kandidaadidCistanche tubulosakahekordse mõjuga edasiseks uurimiseks.

Märksõnad: Osteoporoos,Alzheimeri tõbi, Kahekordne efekt,ehhinakosiid, akteosiid, Cistanche tubulosa

Cistanche tubulosajaoksAlzheimeri tõbi

Klõpsake Cistanche UK

1. Sissejuhatus

Osteoporoos on degeneratiivne luuhaigus, mida iseloomustab luumassi progresseeruv kadu ja mikroarhitektuuri hävimine, mis võib suurendada nõrkade luumurdude riski (Rachner et al., 2011).Alzheimeri tõbi(AD) on eakate tavaline neurodegeneratiivne haigus, mida iseloomustab pidev vaimne allakäik, kognitiivsed häired ja iseseisva eluvõime kaotus kliiniliselt (Reitz et al., 2011). Amüloidi ladestumisest põhjustatud seniilse naastu moodustumine, tau hüperfosforüülimisest põhjustatud neurofibrillaarsed puntrad ja neuronite degeneratsioon ajus on AD tüüpilised patoloogilised tunnused (Serrano-Pozo et al., 2011). Pealiskaudselt on OP ja AD täiesti sõltumatud haigused, millel on erinevad patoloogiad ja kliinilised tunnused. Kliinilises praktikas täheldatakse aga sageli OP ja AD koos esinemist (Zhang et al., 2001; Lui et al., 2003; Luckhaus et al., 2009). Mõlema haiguse levimus suurenes vanuse kasvades, eriti postmenopausis naistel (Li et al., 2017; Stern, 2012). Üha rohkem tõendeid näitas, et inimestel, kellel on diagnoositud AD, on suurenenud OP risk (Zhou et al., 2014).

On vaja uurida ja selgitada seoseid osteoporoosi jaAlzheimeri tõbiin vitro ja in vivo. Enne invivo uuringute läbiviimist on oluline valida sobivad osteoporoosi loommudelid võiAlzheimeri tõbi. Osteoporoosi mudelit saab luua mitut tüüpi meetoditega, nagu retinoehappe intragastriline manustamine, ovariektoomia operatsioon ja glükokortikoidide intramuskulaarne süstimine (Wei et al., 2007; Komori, 2015). Eelkõige oli rottidel munasarjade eemaldamisega indutseeritud menopausijärgne osteoporoosi mudel klassikaline ja seda on enamikus uuringutes laialdaselt kasutatud (Miao et al., 2012; Liu et al., 2017). Sporaadiline Alzheimeri tõbi on Alzheimeri tõve peamine tüüp. Sporadiku loomamudelidAlzheimeri tõbi võibindutseerida erinevate meetoditega, nagu D-galaktoosi või -amüloidi süstimine, AlCl3 intragastriline manustamine ja nii edasi (Bagheri et al., 2011; Gao jt, 2015; Justin Thenmozhi jt, 2017). Lisaks konjuktsioonimudelAlzheimeri tõbiSamuti on palju uuritud D-galaktoosi pikaajalise intraperitoneaalse süstimise ja munasarjade eemaldamisega põhjustatud ravi (Liu et al., 2010; Zhao et al., 2012). Selleks, et paljastada osteoporoosi jaAlzheimeri tõbi, on vaja luua osteoporoosi mudel kombineeritunaAlzheimeri tõbiuurida ühiseid mehhanisme osteoporoosi jaAlzheimeri tõbi.

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight on parasiitaim, mis on levinud peamiselt Loode-Hiina kõrbetes. Kuivatatud mahlakad varredCistanche tubulosa(CT) kasutatakse kuulsa toonikuravimina Cistanches Herba ja Hiina farmakopöas (2015) selle hiina nimega Roucongrong. Seda on tunnustatud kui "kõrbete ženšenni" ja seda kasutatakse laialdaselt vöö- ja põlvevalude, naiste steriilsuse ja kõhukinnisuse raviks traditsioonilises Hiina meditsiinis (Jiang ja Tu, 2009). CT peamised aktiivsed komponendid(Cistanche tubulosa)PhG-de tüüpilised ühendid on fenüületanoidglükosiidid (PhG), ehhinakosiid (ECH) ja akteosiid (ACT) (Morikawaet al., 2014). Eelkõige valitakse CT kvaliteedikontrolli markeriteks tavaliselt ECH ja ACT(Cistanche tubulosa)nende suure sisalduse ja mitmesuguse farmakoloogilise toime tõttu, nagu neuroprotektsioon, luude kaitse, antioksüdandid, vananemisvastane toime ning õppimis- ja mäluvõime parandamine (Wang et al., 2012; Li et al., 2016). Kuid ECH ja ACT mõju osteoporoosile koosAlzheimeri tõbiei olnud veel koos rotimudelis uuritud. Seega oli selle uuringu eesmärk luua roti osteoporoosi mudel kombineeritunaAlzheimeri tõbining uurida ehhinakosiidi ja akteosiidi mõju sellele samaaegsele mudelile, et saada eksperimentaalseid tõendeid ehhinakosiidi või akteosiidi molekulaarse mehhanismi edasiseks uurimiseks järgmistes uuringutes.

Cistanche tubulosajaoksAlzheimeri tõbi

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Loomad

Kaheksakümmend 8-nädalast emast Wistari rotti (sertifikaadi number: SCXK, 2018–0006), kaaluga 180–200 g, saadi ettevõttest Sino-BritishSIPPR/BK Lab. Animal Ltd (Shanghai, Hiina) ja kasvas üles Hiina Farmaatsiaülikooli farmaatsialoomade katsekeskuses.

2.2. Kemikaalid ja reaktiiv

Kloraalhüdraat, penitsilliini G naatrium, D-galaktoos, alumiiniumkloriidheksahüdraat, östradioolvaleraat, donepesiil HCl osteti ettevõttelt Aladdin Industrial Corporation (Shanghai, Hiina). Ehhinakosiid (HPLC94 protsenti) saadi ettevõttelt Wuhan Yuanchengcreate Technology Co., Ltd. (Wuhan, Hiina). Akteosiid (HPLC 98 protsenti) osteti ettevõttelt Baoji HerbestBio-Tech Co., Ltd. (Baoji, Hiina). Ostetud olid luuspetsiifilise aluselise fosfataasi (BALP), tartraadiresistentse happelise fosfataasi (TRAP), superoksiiddismutaasi (SOD), malonaldehüüdi (MDA), atsetüülkoliinesteraasi (AChE) ja koliinatsetüültransferaasi (ChAT) ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) komplektid ettevõttelt Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, Hiina). Universaalne koefiksaator saadi ettevõttelt WuhanServicebio Technology Co., Ltd. (Wuhan, Hiina).

2.3. Loomade mudelid ja ravi

Kõiki loomkatseid lubas ja kontrollis Hiina Farmaatsiaülikooli loomaeetika komitee. Rotte hoiti 12-tunnise valguse/pimeduse tsükliga kontrollitud temperatuuriga ruumis (22 ± 2 kraadi) ja toideti standardse granuleeritud sööda ja kraaniveega.

Pärast ühenädalast kohanemist saavutati osteoporoosi mudel munasarjade eemaldamise operatsiooniga (French et al., 2008). Pärast operatsiooni lõppu piserdati infektsiooni vältimiseks haavaõmblusele üks kord naatriumpenitsilliin G. Seejärel toideti rotte kolm nädalat normaalselt. Vastavalt viitele (Hua et al., 2007; Alawdi et al., 2017) on mudelAlzheimeri tõbivõib indutseerida D-galaktoosi pikaajalise intraperitoneaalse süstimisega koos ovariektoomiaga või AlCl3 pikaajalise intragastraalse manustamisega. Osteoporoosi mudeli teostatavuse uurimiseks koosAlzheimeri tõbi, kolm ovariektoomia mudelrühma (OVX rühm), võltsoperatsioon intraperitoneaalse süstiga 150 mg/kg/päevas D-galaktoosi ja 30 mg/kg/päevas AlCl3 intragastraalse manustamisega (D rühm), munasarjade eemaldamine intraperitoneaalse süstiga 150 mg/kg Selles uuringus määrati D-galaktoosi päevas ja 30 mg/kg/päevas AlCl3 (OVX pluss D rühm) intragastriline manustamine.

Seetõttu jagati rotid 3 nädala pärast juhuslikult kaheksasse rühma (n {{0}} iga rühm) ja neid raviti 8 nädala jooksul suukaudselt ravimitega: võltsrühm; OVX rühm; D rühm; OVX pluss D rühm; östradiolvaleraadi ravirühm (EV rühm, OVX pluss D pluss 0,6 mg/kg/päevas östradiolvaleraat); donepesiil HCl ravirühm (DPZ rühm, OVX pluss D pluss 0,8 mg/kg/päevas donepesiil HCl); ehhinakosiidiga ravirühm (ECH-grupp, OVX pluss D pluss 90 mg/kg/päevas ehhinakosiid); akteosiidiga ravirühm (ACT rühm, OVX pluss D pluss 90 mg/kg/päevas akteosiid). Vastavalt inimese ja roti ekvivalentdoosi teisendamise põhimõttele ja seotud võrdlusdokumendile (Li et al., 2013; Gao et al., 2014) võeti selle uuringu ravimitega ravirühmade annused vastu.

Iga roti kehakaalu mõõdeti igal nädalal. Pärast kogu 8-nädalast ravi ravimitega viidi esmalt läbi 6-päevane Morris Water Maze (MWM) test. Pärast seda ohverdati materjalide kogumiseks igast rühmast 6 rotti. Rotid anesteseeriti intraperitoneaalse süstiga 30 ml/kg 10% kloraalhüdraati ja veri koguti kõhuaordist. Veri pandi toatemperatuurile hüübima ja tsentrifuugiti kiirusel 3500 p/min 10 minutit. Seerum koguti 1,5 ml tsentrifuugituubi (NEST Biotechnology) ja säilitati –80 kraadi juures kuni biokeemilisteks testideks. Seejärel koguti emakas, reieluu, sääreluud ja ajukude. Emakaid kasutati histomorfomeetria jaoks. Mikro-CT ja histomorfomeetria jaoks kasutati vastavalt parempoolset reieluu. Biomehaanilises testis kasutati paremat sääreluu. Jääkastile kogutud hipokampust kasutati biokeemilisteks testideks. Pärast seda perfundeeriti igast rühmast ülejäänud kolm rotti südamest soolalahuse ja universaalse koefiksaatoriga, et koguda aju histomorfomeetria jaoks.

Cistanche tubulosajaoksAlzheimeri tõbi

2.4. Morrise veelabürindi (MWM) test

Rottidele viidi pärast 8-nädalast sekkumist MWM testis läbi ruumiline võrdlusõpe ja mälutest. MWM-test viidi läbi, järgides varem kirjeldatud meetodeid (Morris, 1984; Gao et al., 2016). Lühidalt, 5 järjestikust päeva nelja katsega päevas treeniti rotte kasutama mitmesuguseid basseini seinal asuvaid visuaalseid näpunäiteid, et leida peidetud veealuse platvormi (läbimõõt 11 cm, kõrgus 29 cm) ringikujulisest basseinist (läbimõõt 130 cm, kõrgus 50 cm). ) täidetud mittetoksilise süsiniktindiga toonitud veega. Bassein oli mõtteliselt jagatud neljaks kvadrandiks ja neli stardikohta asusid kvadrantide ristumiskohtades. Platvorm asus ühe kvadrandi keskel ja asend oli katsete ajal konstantne. Igas katses paigutati rotid juhuslikult valitud kohtadesse, näoga basseini seina poole. Iga katse lõpetati, kui rott jõudis platvormile või 60 sekundi pärast, ja kulunud aeg registreeriti põgenemise aegumisena. Rotid, kes ei jõudnud platvormile, juhatati sellele. Pärast iga varjatud platvormi katset jäi rott platvormile 10 sekundiks. Treeningu tulemustena arvutati nelja katse keskmine latentsusaeg päevas. 6. päeval tehti kõigi rottidega sondikatse, mille käigus nad ujusid 60 sekundit basseinis ilma platvormita. Lõpptulemustena registreeriti platvormi asukoha ületamise ajad ja sihtkvadrandis reisimise aeg. Rotte jälgiti otse basseini kohale lakke paigaldatud kaameraga ning kõik katsed salvestati ja analüüsiti programmi MORRIS MAZE abil, mida tarnib Beijing zhongshidichuang Science and Technology Development Co., Ltd. (Peking, Hiina).

2.5. Biokeemiline test ELISA abil

Vastavalt ELISA komplektide tootja juhistele testiti BioTekSynergy 2 multi- luu-spetsiifilise aluselise fosfataasi (BALP) aktiivsust, tartraadiresistentset happefosfataasi (TRAP), superoksiiddismutaasi (SOD) aktiivsust ja malondialdehüüdi (MDA) sisaldust seerumis. režiimi mikroplaadi lugeja (BioTek, USA). Iga rühma hipokampuse kudesid pesti PBS-iga (0,01 M, pH 7,4), et eemaldada koe pinnale jäänud veri või lisandid. Ühel küljel olevad hipokampuse kuded kaaluti ja seejärel lõigati väikesteks tükkideks. kui võimalik. Hipokampuse kuded homogeniseeriti vastavalt suhtele 1:9 (koe mass: PBS maht). Homogenaati tsentrifuugiti 4 kraadi juures 3000 p/min 15 minutit. Supernatant koguti ja lahjendati, et mõõta valgu kontsentratsiooni BCA meetodil. Seejärel testiti atsetüülkoliinesteraasi (AChE) aktiivsust, koliinatsetüültransferaasi (ChAT) aktiivsust, superoksiidi dismutaasi (SOD) aktiivsust ja malondialdehüüdi (MDA) sisaldust hipokampuse koes ELISA meetoditega.

Cistanche tubulosajaoksAlzheimeri tõbi

2.6. Hipokampuse histomorfomeetria

Ajukoed (n=3/rühm) fikseeriti universaalses koefiksaatoris. Seejärel pesti ajukoe proove, dehüdreeriti gradient-etanooliga, lisati parafiinvahaga ja viilutati 5 μm suurusteks koronaalsektsioonideks. Sektsioonid värviti hematoksüliini ja eosiiniga (HE). Pärast seda pildistati ajukudede koronaalseid lõike ümberpööratud fluorestsentsmikroskoobiga (Nikon, Jaapan). Eriti täheldati CA1, CA2, CA3 ja DG morfoloogilisi muutusi hipokampuses.

2.7. Emaka histomorfomeetria ja morfomeetria

Valitud emakas (n {{0}}/rühm) fikseeriti universaalses koefiksaatoris. Seejärel pesti emakakoe proove, dehüdreeriti gradiendiga etanooliga, sisestati parafiinvahaga ja viilutati 5 μm ristlõikega. Sektsioonid värviti hematoksüliini andeosiiniga (HE). Vaadeldi ja pildistati emaka põikilõike. Juhuslikult valiti viis vaatevälja, seejärel mõõdeti tarkvara Image-Pro Plus 6.0 abil emaka põikilõike läbimõõt ja emaka limaskesta epiteeli paksus. Loendati ka emaka näärmete arv lamina proprias.

2.8. Mikro-CT(Cistanche tubulosa)

Valitud parempoolne reieluu (n=3/rühm) skaneeriti SkyScan 1176 mikroröntgeni abil asendis, kus objekti kaugus allikast oli 121 mm ja kaamera kaugus allikast 171 mm. kompuutertomograafia (Micro-CT) skanner (Bruker, Saksamaa). Võrdluspinnaks valiti distaalse kasvu plaat. 1 mm kaugusel võrdluspinnast valiti huvipakkuvaks mahuks 1, 8 mm paksune piirkond (VOI, 100 kihti). Saadud halltoonides kujutiste pikslite suurus luu rekonstrueerimisest oli 17, 76 μm (65 kV, 385 μA). Trabeekulite valimiseks kortikaalsest luust kasutati poolautomaatset kontuurimismeetodit. Otsese 3D-mõõtmise meetodeid kasutati luumahu (BV/TV), luupinna tiheduse (BS/TV), trabekulaarse eraldumise (Tb. Sp), trabekulaararvu (Tb. N), trabekulaarse paksuse (Tb. Th), struktuurimudeli hindamiseks. indeks (SMI), trabekulaarse mustri faktor (Tb.Pdf) ja keskmine luu mineraalne tihedus (keskmine BMD) sama VOI puhul, kasutades CT-d(Cistanche tubulosa)Analüsaatoriprogramm (Bruker, Saksamaa). VOI 3D visualiseerimine adaptiivse renderdusalgoritmi abil viidi läbi tarkvaraga CTvol (Bruker, Saksamaa).

Cistanche tubulosajaoksAlzheimeri tõbi

2.9. Luu histomorfomeetria

Valitud parempoolne reieluu (n=3/rühm) fikseeriti universaalses koefiksaatoris ja seejärel dekaltsifitseeriti 10% EDTA-2Na lahuses 3 nädala jooksul. Katlakivist eemaldatud proovid pesti, dehüdreeriti gradienttanooliga, sisestati parafiinvahaga ja viilutati 5 μm pikisuunalisteks osadeks. Sektsioonid värviti hematoksüliini ja eosiiniga (HE). Reieluu pikilõiked pildistati. Täheldati iga rühma luukoe struktuure, eriti trabekulaarseid luustruktuure.

2.10. Biomehaaniline test

Juhuslikult valitud parempoolseid sääreluu (n=4/rühm) hinnati kolmepunktilise painutuskatse jaoks universaalse testimismasinaga (SHIMADZU, Jaapan). Nende proovide läbimõõtu mõõdeti verniercaliperiga vahemikus 2,16–2,38 mm (d). Seejärel asetati proov kahele toetavale risttalale, mille kahe siini vaheline kaugus oli 25 mm (L), ja proovi füsioloogiline kumerus oli ülespoole. Koorma laadimisvarras asus proovi keskel ja langes konstantse kiirusega 1,5 mm/min, kuni proov oli purunenud. Jõu (F) ja nihke andmed salvestati automaatselt arvutisse, mis liideti testimismasinaga, ja koormuse-deformatsiooni kõver joonistati samaaegselt. Maksimaalse koormuse (N) ja energia neeldumise (mJ) väärtused registreeriti materjalide testimise tarkvaraga TRAPEZIUM X samal ajal. Maksimaalse pinge (MPa) väärtused arvutati järgmise valemi järgi: pinge (σ)=paindemoment (M)/lõike tegur (Z) =(8 × L × F)/(π × d3).

2.11. Statistiline analüüs

Mudelrühmade tulemusi võrreldi Sham-rühmaga ja ravimiga ravitud rühmade tulemusi võrreldi OVX pluss D-rühmaga. Andmeid analüüsiti ühesuunalise ANOVA abil, millele järgnes Bonferroni mitmekordne võrdlustest, kasutades Graph Pad Prism 5.{3}} tarkvara. Andmed väljendati keskmisena ± SD ja statistiliselt oluliseks loeti P väärtused alla 0,05.

3. Tulemused

3.1. Kehakaal

Rottide iganädalased kehakaalud igas rühmas kogu 8-nädalase ravi jooksul on näidatud joonisel 1. Võrreldes võltsrühmaga, suurenes OVX pluss D rühma rottide kehamass, eriti oluline erinevus esimesel neljal. nädalat (P < 0.05).="" pärast="" ravi="" ev="" ja="" ech-ga="" vähenes="" rottide="" kehamass="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" ilmselgelt="" (p="">< 0,05,="" p=""><>

3.2. Kognitiivse võime hindamine

3.2.1. Õpivõime hindamine omandamisfaasis

Iga rühma rottide tüüpilised ujumisrajad 5. päeval omandamisfaasis on näidatud joonisel 2. Iga rühma põgenemislatentsus 5-päevase omandamisfaasi jooksul on loetletud tabelis 1. Esimesel päeval oli põgenemine latentsus OVX pluss D grupi ja DPZ rühma vahel näitas ACT grupp olulist erinevust (P < 0.05),="" vastavalt.="" alates="" teisest="" päevast="" lühenes="" shami="" rühma="" põgenemislatentsus="" märkimisväärselt="" ja="" keskmine="" latentsus="" oli="" palju="" madalam="" kui="" ovx="" pluss="" d="" rühmal.="" dpz="" rühmas="" vähenes="" latentsusaeg="" oluliselt="" (p="">< 0.05)="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" 3.="" päeval.="" võrreldes="" võltsrühmaga,="" vähenes="" d="" ja="" ovx="" latentsusaeg.="" pluss="" d="" rühmad="" ilmselgelt="" pikenenud="" (p="">< 0.01,="" p="">< 0.001)="" 4.="" päeval.="" lisaks,="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga,="" lühenes="" ev,="" dpz="" ja="" ech,="" act="" rühmade="" latentsus="" märkimisväärselt="" (p=""><0,05, p=""><0,01, p=""><0,001). 5.="" päeval="" oli="" ovx="" pluss="" d="" rühma="" latentsus="" endiselt="" oluliselt="" kõrgem="" kui="" võltsrühmal="" (p=""><0,05) ning="" ev="" ja="" ech="" rühmade="" latentsus="" lühenes="" ilmselgelt="" (p=""><0,05) võrreldes="" ovx="" pluss="" d="">

3.2.2. Mälu võime hindamine sondikatses

Sondikatses osalenud iga rühma rottide tüüpilised ujumisrajad on näidatud joonisel 3. Nagu on näidatud joonisel fig 4, on OVX, D ja OVX sihtkvadrandis ristumise ajad ja ujumisaeg võrreldes võltsrühmaga. pluss D rühmad vähenesid oluliselt (P < 0.05,="" p="">< 0.01).="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" suurenesid="" ilmselgelt="" ev,="" dpz="" ja="" ech,="" act="" rühmade="" ristumisajad="" (p="">< {{10}},05,="" p="">< 0,01)="" ja="" aeg="" sihtkvadrandis="" ev="" ja="" dpz="" rühmades="" suurenes="" samuti="" oluliselt="" (p="">< 0,05,="" p=""><>

3.3. Seerumi biokeemiline analüüs

Nagu on näidatud joonistel 5A ja B, suurenes BALP ja TRAP aktiivsus OVX ja OVX pluss D rühmades võrreldes võltsrühmaga oluliselt (P < 0.001="" ),="" mis="" oli="" tüüpiline="" munasarjaektoomiast="" põhjustatud="" suure="" sagedusega="" osteoporoosi="" tunnus.="" balp="" ja="" trap="" aktiivsus="" ev,="" dpz,="" ech="" ja="" act="" rühmades="" vähenes="" ilmselgelt="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01,="" p=""><>

Munasarjade eemaldamine, D-galaktoosi intraperitoneaalne süstimine ja AlCl3 intragastraalne manustamine võivad põhjustada oksüdatiivseid kahjustusi (Muthusami et al., 2{{10}}05; A. Prakash et al., 2 013). Nagu on näidatud joonisel 5C munasarjade eemaldamine, võib D-galaktoosi intraperitoneaalne süstimine ja AlCl3 intragastraalne manustamine põhjustada oksüdatiivset kahjustust (Muthusami et al., 20{{20}}5; A. Prakash et al., 2013). Nagu on näidatud joonistel 5C ja D, olid OVX, D ja OVX pluss D rühmade SOD aktiivsused oluliselt madalamad kui võltsrühmal (P < 0,05,="" p="">< 0,001)="" ning="" ovx,="" d="" ja="" d="" mda="" sisaldus.="" ovx="" pluss="" d="" rühmade="" arv="" suurenes="" märkimisväärselt="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,001)="" võrreldes="" võltsrühmaga.="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga,="" suurenes="" sod="" aktiivsus="" pärast="" ravi="" ev,="" dpz,="" ech="" ja="" act-ga="" oluliselt="" (p="">< 0,01,="" p="">< 0,001)="" ja="" mda="" sisaldus="" vähenes="" teatud="" määral,="" eriti="" ev="" rühmas.="" (p=""><>

3.4. Hipokampuse biokeemiline analüüs

Nagu on näidatud joonisel 6A, oli OVX pluss D rühma AChE aktiivsus ilmselgelt suurem kui võltsrühmal (P < 0.05),="" mis="" näitas,="" et="" ovx="" pluss="" d="" rühm="" võib="" väheneda="" atsetüülkoliini="" hüdrolüüsi="" kiirenemisega="" ajus.="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" vähenes="" ache="" aktiivsus="" uimastiravi="" rühmades="" teatud="" määral,="" eriti="" ev="" rühmas="" (p="">< 0.01).="" nagu="" on="" näidatud="" joonisel="" 6b,="" vähenesid="" ovx,="" d="" ja="" ovx="" pluss="" d="" rühmade="" vestlustegevused="" ilmselgelt="" võltsrühmaga="" võrreldes="" (p="">< {{10}}.01,="" p="">< 0,001),="" mis="" näitas,="" et="" nende="" õppimis-="" ja="" mäluvõimet="" võib="" mõjutada="" nende="" aeglasem="" atsetüülkoliini="" süntees="" ajus.="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" suurenes="" ev,="" dpz="" ja="" ech,="" act="" rühmade="" chat="" aktiivsus="" oluliselt="" (p="">< 0,05,="" p="">< 0,01,="" p=""><>

Oksüdatiivne kahjustus võib tekkida ka hipokampuses (Dileket al., 2010; Yang et al., 2013). Nagu on näidatud joonistel 6C ja D, vähenesid OVX, D ja OVX pluss D rühmade SOD tegevused võrreldes võltsrühmaga märkimisväärselt (P < 0.01,="" p="">< 0).="" 001)="" ja="" mda="" sisaldus="" ilmselt="" suurenes="" (p="">< 0,01,="" p="">< 0,001).="" pärast="" ravi="" ev,="" dpz,="" ech="" ja="" act-ga="" suurenes="" sod="" aktiivsus="" märkimisväärselt="" (p=""><0,001) ja="" mda="" sisaldus="" vähenes="" oluliselt="" (p=""><0,001) võrreldes="" ovx="" pluss="" d="">

3.5. Hipokampuse histomorfoloogia analüüs

Nagu on näidatud joonisel 7A, olid Shami rühma hipokampuse neuronid ühtlaselt värvunud. Samal ajal olid neuronite morfoloogilised tunnused ilmse tuumaga selged. Nende paigutus oli ka korralik ja kompaktne, suure arvu ja terve struktuuriga. InOVX, D ja OVX pluss D rühmades vähenes neuronite arv hipokampuses märkimisväärselt võrreldes võltsrühmaga. Neuronid paiknesid ebakorrapäraselt ja tühimikud olid laienenud. Eriti D ja OVX pluss D rühmades leiti hipokampusest vähem neuroneid ja nende jaotus oli hajutatud. Neuronite ja nekrootiliste neuronite karüopüknoos ja ebaselged morfoloogilised tunnused esinesid ka D ja OVX pluss D rühmades. Nagu on näidatud joonisel 7B, oli pärast ravimite sekkumist neuronite arv EV, DPZ, ECH ja ACT rühmade hipokampuses oluliselt suurem kui OVX pluss D rühmas. Samal ajal oli neuronite vaheline joondus suhteliselt korrapärane ning karüopüknoosi ja nekroosiga neuronite arv vähenes.

3.6. Emaka märgkaal ning emaka histomorfoloogia ja morfomeetria analüüs

Nagu on näidatud joonisel 8, olid OVX ja OVX pluss D rühmade emaka märgkaal oluliselt madalam kui võltsrühmal (P < 0.05,="" p="">< 0).="" 01).="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" suurenes="" ev="" rühma="" emaka="" märgkaal="" östradiolvaleraadi="" mõjul="" ilmselgelt="" (p=""><0, 01).="" lisaks="" suurenesid="" teatud="" määral="" ka="" dpz-rühma="" ja="" ech-rühma="" emaka="">

Nagu on näidatud joonisel 9A, oli Sham-rühma emakas paksuseinaline lihaseline organ ja emaka limaskesta epiteel oli ühekihiline kolonnepiteel. Lamina propria levis koos emakanäärmete ja veresoontega. Lihaskiht koosnes silelihaste kimpudest ja lihaskiud olid tihedalt paigutatud. OVX ja OVX pluss D rühmades kahanes emakas luminalstenoosiga oluliselt. Endomeetrium ja lihaste kiht olid oluliselt õhemad kui Shami rühmal. Lisaks vähenes emaka näärmete arv ja lihaskiud olid õhukesed. Nagu on näidatud joonisel 9B, paranes emaka histomorfoloogia võrreldes OVX pluss D rühmaga pärast ravi EV, DPZ, ECH ja ACT-ga teatud määral. Eriti EV rühmas oli emakas oluliselt täis, endomeetrium ja lihaskiht ilmselgelt paks. Lisaks suurenes emakanäärmete arv ja lihaskiud laienesid.

Iga rühma emaka morfomeetrilise analüüsi tulemused on näidatud joonisel 10A–C. Võrreldes Shami rühmaga vähenes oluliselt emaka läbimõõt, emaka limaskesta epiteeli paksus ja emaka näärmete arv OVX ja OVX pluss D rühmades (P < 0.01,="" p="">< 0,001).="" pärast="" ravi="" ev-ga="" suurenesid="" emaka="" läbimõõt,="" emaka="" limaskesta="" epiteeli="" paksus="" ja="" emaka="" näärmete="" arv="" ilmselgelt="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" (p="">< 0,001).="" lisaks="" näitasid="" ech="" ja="" act="" ka="" emaka="" läbimõõdu,="" emaka="" limaskesta="" epiteeli="" paksuse="" ja="" emaka="" näärmete="" arvu="" suurenemise="">

3.7. Mikro-CT analüüs

Kahemõõtmelised kujutised reieluu distaalse luu läbilõikest saadi Bruker DataViewer tarkvaraga, mis on näidatud joonisel 11A. Pärast CTvol tarkvaraga teostamist näidati joonisel fig 11B iga rühma distaalse reieluu käsnluu VOI piirkonnas trabekulaarse luu kolmemõõtmelised kujutised. Lisaks on keskmine BMD, BV/TV, SMI, Tb. N, Tb. Sp, Tb.Th, BS/TV ja Tb. Pf, mida analüüsiti CTAn tarkvaraga, on näidatud ka tabelis 2 ja tabelis 3.

Nagu ülaltoodud joonised on näidatud, vähenes trabekulaarne arv ja trabekulaarne pindala OVX pluss D rühmas võrreldes võltsrühmaga ilmselgelt. Samal ajal näitas erinevate trabekulaarsete parameetrite kvantifitseerimine ka seda, et keskmine BMD, BV / TV, Tb. N, Tb.Th, BS/TV vähenes oluliselt OVX pluss D rühmas (P < {0}}.05,="" p="">< 0,01)="" ja="" smi,="" tb.="" sp,="" tb.="" ovx="" pluss="" d="" rühma="" pf="" suurenes="" ilmselgelt="" (p="">< 0,="" 01).="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="" rühmaga="" paranes="" trabekulaarne="" mikroarhitektuur="" pärast="" ev="" ja="" ech-ga="" töötlemist="" teatud="">

3.8. Luu histomorfoloogia analüüs

Iga rühma distaalse reieluu käsnluu trabekulaarsed struktuurid on näidatud joonisel 12. Võltsrühmal oli palju trabekuleid, mis olid paksud ja omavahel võrku ühendatud. Võrreldes Shamgrupiga vähenesid OVX ja OVX pluss D rühmade trabekulid oluliselt ja hõrenesid. Eelkõige hävisid suuresti OVX pluss D grupi trabeekulid ja enamikku neist ei saanud võrguga ühendada. Lisaks olid ka D-rühma trabekulid ilmselgelt hõrenenud. Pärast EV ja ECH-ga töötlemist suurenesid trabekulid märkimisväärselt ning võrreldes OVX pluss D rühmaga olid need paksenenud ja retikuleeritud. EV rühma morfoloogilised tunnused olid lähedased Sham rühma omadele. Samal ajal paranesid mingil määral ka DPZ ja ACT rühmade trabekulaarsed struktuurid.

3.9. Biomehaaniline analüüs

Kolmepunktilise painutuskatse tulemused on toodud tabelis 4. Võrreldes võltsrühmaga vähenesid maksimaalne koormus ja maksimaalne pinge OVX-is oluliselt (P < 0.05,="" p="">< 0,01)="" ja="" ovx="" pluss="" dgroups="" ning="" ka="" energia="" neeldumine="" vähenes="" oluliselt.="" pärast="" ev="" ja="" ech-ga="" töötlemist="" suurenes="" maksimaalne="" koormus,="" maksimaalne="" pinge="" ja="" energia="" neeldumine="" mingil="" määral="" võrreldes="" ovx="" pluss="" d="">

4. Arutelu

Osteoporoosi epidemioloogilisel uurimisel selgus, et naispatsiente oli rohkem kui meespatsiente ning see esines sageli eakatel ja menopausijärgsetel naistel (Chen et al., 2016). Osteoporoos on tõsiselt mõjutanud eakate tervist ja sellest on saanud üks tõsiseid haigusi. sotsiaalsed probleemid kogu maailmas (Deal, 2009; Roy et al., 2011; Bessette jt, 2011). Epidemioloogilised uuringudAlzheimeri tõbion näidanud, et esinemissagedus ja levimusAlzheimeri tõbisuurenes plahvatuslikult vanuse kasvades, eriti esinedes üle 65-aastastel eakatel (Sosa Ortiz et al., 2012). Lisaks oli AD levimus naistel oluliselt kõrgem kui meestel (Mielke et al., 2014). Hiljutised hinnangud näitasid, et peaaegu kahel kolmandikul inimestest diagnoositi ADAlzheimeri tõbiolid naised (Hebert et al., 2013). Tähelepanuväärselt on AD ülemaailmne levik pannud ühiskonnale märkimisväärse koormuse (Reitzand Mayeux, 2014).

Uuringud on näidanud, et menopausijärgse osteoporoosi peamine põhjus oli östrogeeni puudus (Klein-Nulendet al., 2015). See võib oluliselt kiirendada luude ringluse kiirust ja panna luu resorptsiooni kiirust ületama luu moodustumise kiirust, mille tulemuseks on luumassi vähenemine, luu mineraalse tiheduse langus ja luu tugevuse vähenemine (Tella ja Gallagher, 2014). Lisaks on näidatud, et menopausijärgses eas naistel on suurem risk kognitiivsete häirete või dementsuse tekkeks (Rocca et al., 2007). Mõned uuringud on näidanud, et östrogeen mängib üliolulist rolli AD ravis, mis hõlmab hipokampuse funktsiooni säilitamist vananemise ajal (Han et al., 2013), koliinatsetüültransferaasi aktiivsuse suurendamist hipokampuses (Gibbs ja Aggarwal, 1998), amüloid-beeta agregatsiooni vähendamist. (Nilsen et al., 2006).

Osteoporoosi ja osteoporoosi uuringute jaoks oli ülioluline valida sobivad rotimudelidAlzheimeri tõbi. Munasarjade eemaldamisest põhjustatud osteoporoosi mudelit on osteoporoosi uuringutes laialdaselt kasutusele võetud (Zhao et al., 2011; Liu et al., 2018). Kuigi AD patogenees on mitmekesine, on uuringud näidanud, et oksüdatiivne stress ja kokkupuude alumiiniumiga olid AD olulised põhjused (Xiao et al., 2011; Bhattacharjee et al., 2014). D-galaktoos on omamoodi redutseeriv suhkur invivo. Kui see oli organismis normaalsest palju kõrgem, võis see galaktoosi oksüdaasi toimel oksüdeerida aldehüüdideks, mis ei saanud edasi metaboliseeruda ja võivad suures osas akumuleeruda ajju, põhjustades seega neurotsüüdi oksüdatiivset stressi ja apoptoosi (Cui et al., 2006). Alumiinium võib kergesti läbida hematoentsefaalbarjääri ja sellel on ajule ilmne neurotoksilisus (D. Prakash et al., 2013). See võib põhjustada neuronite ekstratsellulaarset A ladestumist ja indutseerida reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmist, mis põhjustab oksüdatiivset stressi ja neuronite kahjustusi (Walton, 2013). Paljud uuringud on näidanud, et D-galaktoosi ravi koos AlCl3-ga loomadel, eriti närilistel, võib oluliselt halvendada nende õppimis- ja mäluvõimet (Chiroma et al., 2018). See võib indutseerida A 1-42 ekspressiooni ja akumuleerumist ajukoores ja hipokampuses (Yang et al., 2014). Lisaks on uuringud näidanud, et munasarjade eemaldamine koos D-galaktoosi pikaajalise intraperitoneaalse süstimisega võib põhjustada Alzheimeri tõvega seotud patofüsioloogilisi muutusi, nagu sünaptiline kadu, astrotsüütide kahjustus, rakusisene A akumuleerumine ja neurofibrillaarsed puntrad, mis võivad toimida kahekordse vormina. AD vigastuste mudel (Su et al., 2010).

Meie uuringus määrati kolm OVX-rühma, D-rühma ja OVX-rühma ja D-rühma mudelrühma, et kinnitada, et munasarjade eemaldamise operatsiooni meetod koos D-galaktoosi intraperitoneaalse süstimise ja AlCl3 intragastraalse manustamisega võib paremini põhjustada osteoporoosi patoloogilisi tunnuseid. jaAlzheimeri tõbisamal ajal.

Osteoporoosi mudeli hindamiseks kasutati mitmeid meetodeidAlzheimeri tõbi. Õppimine ja mälu on mõned aju kõrgetasemelised tegevused.Alzheimeri tõbivõib põhjustada erineva astme kognitiivseid häireid (Albert et al., 2011). Näriliste õppimis- ja mälutest on levinud meetod kognitiivse käitumise ja mehhanismide uurimiseks neuroteaduste valdkonnas (Kwon et al., 2011). Meie uuringus kasutati rottide õppimis- ja mäluvõime hindamiseks Morrise veelabürindi (MWM) testi, mida on laialdaselt kasutatud näriliste neurobioloogias ja neurofarmakoloogias (Gacar et al., 2011). MWM testi tulemused näitasid, et OVX pluss D rühma põgenemisvõime suurenes märkimisväärselt ning OVX pluss D rühma sihtkvadrandis langesid ilmselgelt läbimise ajad ja ujumisaeg võrreldes Sham rühmaga, mis näitas, et rottide kognitiivne võime OVX pluss D rühmas oli tõsiselt kahjustatud. Hipokampus, õppimise ja mälu jaoks kriitiline ajupiirkond, on AD varases staadiumis kahjustuste suhtes eriti haavatav. (Mu ja Gage, 2011). Hipokampuse biokeemiline analüüs näitas, et OVX pluss D rühmas oli AChE aktiivsus ilmselgelt kõrgem ja ChAT aktiivsus palju madalam kui Sham rühmas, mis näitas, et OVX pluss D rühm võib olla kahjustatud atsetüülkoliini vähenemise tõttu ajus. Lisaks võis oksüdatiivne kahjustus mõjutada ka hipokampuse normaalseid funktsioone SOD aktiivsuse vähenemise ja MDA sisalduse suurenemise tõttu OVX pluss D rühmas. Hipokampuse histomorfoloogiline analüüs näitas, et neuronite arv vähenes märkimisväärselt ja neuronid paiknesid OVX pluss D rühmas võrreldes võltsrühmaga, mis näitas, et hipokampuse neuronid olid tõsiselt kahjustatud.

Osteoporoosi teket hinnati meie uuringus seerumi biokeemia, mikro-CT, luu histomorfoloogia ja biomehaanilise testiga. BALP ja TRAP aktiivsus seerumis on luu moodustumise ja luu resorptsiooni tüüpiline indeks (Rufus et al., 2013). Võrreldes Shami rühmaga suurenes BALP ja TRAP aktiivsus OVX ja OVX pluss D rühmades oluliselt, mis olid munasarjade eemaldamisest põhjustatud suure sagedusega osteoporoosi tüüpilised tunnused. Vahepeal tekkisid OVX pluss D rühma rottidel ka oksüdatiivsed kahjustused SOD aktiivsuse vähenemise ja MDA sisalduse suurenemise tõttu, mis kiirendas veelgi osteoporoosi protsessi. Mikro-CT on omamoodi tehnika, millel on mitteinvasiivse pildistamise omadused koos kõrglahutusega histoloogilise tuvastamisega, mis sobib eriti hästi luu pildistamiseks ja luuparameetrite uurimiseks (Ito, 2011). Mikro-CT analüüsi tulemused näitasid, et OVX pluss D rühmas ilmnes BMD vähenemine, suur luumassi kadu ja trabeekulite mikroarhitektuur, võrreldes Sham rühmaga. Luu histomorfoloogia näitas ka, et OVX pluss D rühmas olid trabeekulid oluliselt hävinud. Osteoporoos võib suurendada luumurdude riski ja luu biomehaanilist testi saab kasutada luu tugevuse tuvastamiseks (Mears et al., 2010). Sääreluu kolmepunktiline paindekatse näitas, et OVX pluss D rühma luu tugevus vähenes märkimisväärselt võrreldes Sham rühmaga. Lisaks näitas emaka histomorfoloogia ja morfomeetria analüüs, et emakas kahanes oluliselt, endomeetrium oli ilmselgelt õhem ja emaka näärmete arv vähenes OVX pluss D rühmas võrreldes östrogeeni puudumise tõttu võltsrühmaga.

Cistanche tubulosaon traditsioonilises hiina meditsiinis hästi tuntud toonik, millel on immuunregulatsiooni, antioksüdantide, vananemisvastase, neuroprotektsiooni ja osteoblastide kasvu soodustav toime (Li et al., 2016). Ehhinakosiid ja akteosiid on selle peamised aktiivsed komponendidCistanche tubulosa, ja nende mitmesugused farmakoloogilised toimed väärivad põhjalikku uurimist (Fu et al., 2018).

Meie praeguses katses on ehhinakosiidi või akteosiidi mõju roti osteoporoosi mudelile kombineeritudAlzheimeri tõbi olidedasi uurinud. Sellel ilmnes ilmselge mõju osteoporoosile ja Alzheimeri tõvele, eriti ehhinakosiidile. Tulemused näitasid, et ehhinakosiid võib märkimisväärselt suurendada õppimist ja mäluvõimet ning parandada kognitiivset düsfunktsiooni, soodustades atsetüülkoliini sünteesi ja kaitstes hipokampuse neuroneid. Samal ajal võivad ehhinakosiid ja akteosiid oluliselt vähendada luu resorptsiooni, vähendades BALP-i ja TRAP-i aktiivsust. suurendavad ka luu keskmist mineraaltihedust ja luu tugevust, vältides luumassi kadu ja parandades trabeekulite mikroarhitektuuri. Lisaks näitasid ehhinakosiid ja akteosiid ka emaka seisundi paranemise trendi. On teatatud, et ehhinakosiidil ja akteosiidil on östrogeenitaoline toime (Wang et al., 2014). Meie eelmine uuring näitas ka, et uut tüüpi fütoöstrogeenina võib ehhinakosiid tõhusalt ennetada osteoporoosi ja pärssida luude resorptsiooni pärast munasarjade eemaldamist rottidel (Li et al., 2013). Nende tulemuste kohaselt võib ehhinakoside või akteosiid toimida östrogeeni signaaliülekanderaja või muu östrogeeniga seotud raja kaudu. Järgmistes uuringutes määratakse mitu ehhinakosiidi või akteosiidi annust, et paljastada annuse ja mõju seos, ning täiendavalt uuritakse asjakohaseid signaaliülekandeteid, et selgitada ehhinakosiidi või akteosiidi onosteoporoosi ühiseid mehhanisme kombineeritunaAlzheimeri tõbi.

Cistanche tubulosajaoksAlzheimeri tõbi

5. Järeldus

Osteoporoosi roti mudel kombineeritunaAlzheimeri tõbi oliteostatav ja meie uuringus edukalt sisse viidud. Vahepeal ehhinakosiid ja akteosiid alatesCistanche tubulosaon näidanud õppimis- ja mäluvõime parandamise, luude ainevahetuse reguleerimise, oksüdatiivse kahjustuse vähendamise ja neuronite kaitsmise olulist mõju sellel samaaegsel mudelil. Ehhinakosiid ja akteosiid võivad olla topeltmõjuga potentsiaalsed kandidaadid ja pakkuda eksperimentaalseid tõendeid molekulaarmehhanismide edasiseks uurimiseks järgmistes uuringutes.

Autorite kaastööd

Käsikirja kirjutas Yi Chen. Yi Chen, Ying-Qi Li ja Jia-Yi Fang viisid läbi katsed. Yi Chen analüüsis andmeid. Fei Li ja PingLi kujundasid uuringu ja muutsid käsikirja.

Konkureerivate huvide deklaratsioon

Autorid kinnitavad, et neil ei ole selle käsikirjaga seoses konkureerivaid huve ning sellele tööle ei anta olulist rahalist toetust, mis võiks selle tulemust mõjutada.

Alates: "Osteoporoosi samaaegse eksperimentaalse mudeli loomine koos Alzheimeri tõvega rottidel ning ehhinakosiidi ja Cistanche tubulosa akteosiidi kahekordne toime", Yi Chena et al.

---Journal of Ethnopharmacology 257 (2020) 112834