Sigade klassikalise katku viiruse edasikandumine kooselus elavatel põrsastel, kellel on erinevad immuunstaatused nõrgestatud elusvaktsiini järgselt

Lihtne kokkuvõte:

Sigade klassikaline katk on kodusigadel väga ohtlik patogeen. Modifitseeritud elusvaktsiiniga vaktsineerimine on sigade klassikalise katku ennetamiseks ja tõrjeks ülioluline. Siiski võivad paljud tegurid, näiteks ternespiima kaudu emalt saadud antikehad, mõjutada elusvaktsiini efektiivsust, mis toob kaasa mittetäieliku kaitse kaubanduslikes karjades. Selles uuringus uurisime sigade klassikalise katku viiruse edasikandumist erinevate vaktsineerimisjärgsete immuunstaatustega katsepõrsastel. Sigade klassikalise katku viirusega nakatunud spetsiifilistest patogeenidest vaba põrsas oli viiruse doonor ja esmane sissetungija ning teda elati koos põrsastega, kellel olid emalt saadud antikehad, kes olid või ei olnud vaktsineeritud. Tulemuste kohaselt olid enamus vaktsineeritud emalt saadud antikehadega põrsastest täielikult kaitstud viiruse doonori kontakti ülekandumise eest ja blokeerisid viiruse edasikandumise kolmandale osapoolele (need põrsad, kes puutusid sekundaarselt kokku kooselu kaudu). Rakkude vahendatud immuunsus, mida esindavad spetsiifilised interferooni - -eritavad rakud, toimis viiruse eemaldamise ja taastumise võtmena. Seevastu vaktsineerimata põrsastel, kelle emalt pärinevate antikehade tase oli madal, oli pärast viirusinvasiooni kiirenenud sigade katku viirusnakkus. Kokkuvõtteks võib öelda, et vaktsineerimine tekitab kaubanduslikes karjades endiselt tugeva immuunsuse emalt saadud antikehade interferentsi korral ja võib blokeerida viiruse leviku karjades.

cistanche taime suurendav immuunsüsteem

Abstraktne:

Sigade klassikaline katk (CSF) on süsteemne hemorraagiline haigus, mis mõjutab kodusigasid ja metssigu. Modifitseeritud elusvaktsiin (MLV) kutsub esile kiire ja kindla kaitse CSF-viiruse (CSFV) nakkuse vastu. Emalt pärinevad antikehad (MDA-d) ternespiima kaudu võivad häirida MLV efektiivsust, põhjustades sigade mittetäieliku kaitse CSFV infektsiooni vastu. Selles uuringus uuriti CSFV ülekannet erinevate MLV-järgse immuunstaatusega eksperimentaalsete põrsaste seas. Üheksateist põrsast, kellest 18 oli MDA-ga ja 1 spetsiifilise patogeenivaba põrsas, kes olid nakatunud CSFV-ga ja kes olid CSFV doonoriks, elati koos põrsastega, kellele oli või ei olnud MLV-d manustatud. Viis kuuendikku MDA-ga põrsastest, kellele oli manustatud üks annus MLV-d, olid täielikult kaitstud CSFV doonori kontakti ülekandumise eest ega edastanud CSFV-d põrsastele, kes olid kooselu kaudu sekundaarselt kokku puutunud. Rakkude vahendatud immuunsus, mida esindavad anti-CSFV-spetsiifilised interferooni - -eritavad rakud, oli viiruse kliirensi ja taastumise võtmeks. Pärast kooselu CSFV doonoriga ilmnes madala MDA tasemega vaktsineerimata põrsastel CSFV nakkus ja nad levitasid CSFV-d kontakti kaudu teistele põrsastele; kõrge MDA tasemega inimesed paranesid, kuid tegutsesid asümptomaatilise kandjana. Kokkuvõtteks võib öelda, et MLV indutseerib endiselt tugeva immuunsuse kaubanduslikes karjades MDA häirete all ja blokeerib CSFV ülekande nendes karjades.

Märksõnad:

sigade klassikaline katk; modifitseeritud elusvaktsiin; emalt saadud antikehad; edasikandumine

1. Sissejuhatus

Sigade klassikaline katk (CSF) on piiriülene, väga nakkav, hemorraagiline haigus, mis mõjutab kodusigu ja metssigu ning mille põhjustajaks on sigade klassikalise katku viirus (CSFV) [1,2]. CSF on Maailma Loomatervishoiu Organisatsiooni (WOAH) teatamiskohustuslik haigus ja CSF on endiselt endeemiline haigus Aasias, Lõuna-Ameerikas, Kesk-Ameerikas ja Kariibi mere piirkonnas. Ainult Põhja-Ameerika, Okeaania ja Lääne-Euroopa riigid on CSF-i edukalt likvideerinud [3–6].

CSFV on ümbrisega ühetüveline RNA viirusPestiviirusperekond Flaviviridae, mis hõlmab ka veiste viiruse kõhulahtisuse viirust ja piirihaiguse viirust [1, 2]. Viiruse genoom sisaldab ligikaudu 12,3 kb ja kodeerib 3898 polüproteiini aminohapet, mis hiljem töödeldakse neljaks struktuurseks (C, Erns, E1 ja E2) ja kaheksaks mittestruktuurseks (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, ja NS5B) valke viiruslike ja rakuliste proteaaside poolt [7]. E2 või NS5B järjestuste põhjal klassifitseeritakse CSFV kolmeks genotüübiks, millel on kolm või neli alatüüpi (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. Sõltuvalt CSFV virulentsusest ja sigade teguritest, sealhulgas vanusest, tõust, tervislikust seisundist ja immuunstaatusest, võivad CSFV-ga nakatunud sigadel esineda kas ägedad, alaägedad või kroonilised kliinilised tunnused [9–11]. Kõrge virulentsusega CSFV-ga nakatunud sigadel on äge palavik ja rasked hemorraagilised kahjustused ning nad eritavad oma lühikeste ellujäämispäevade jooksul väljaheite, sülje ja eritisega suure viiruskoormuse. Seevastu mõõduka ja madala virulentsusega CSFV-ga nakatunud sigadel esinevad subakuutsed ja kroonilised kliinilised nähud ja kergemad kahjustused ning nad eritavad suhteliselt pikemate ellujäämispäevade jooksul väljaheite, sülje ja eritisega mõõdukat kuni madalat CSFV-d [12,13]. ]. Põllul võivad peamiselt nakatunud sead mängida olulist rolli CSFV sekundaarsel ülekandmisel teistele sigadele, kellel on CSFV suhtes erinev immuunsus. Mõõduka ja kõrge virulentsusega CSFV ülekanduvus on kõrgem kui madala virulentsusega CSFV [12,13].

Vaktsineerimine on endeemilistes riikides CSF-i ennetamiseks ja tõrjeks ülioluline. Modifitseeritud elusvaktsiin (MLV) on kõrge efektiivsusega, ohutu ja taskukohane vaktsiin, mida kasutatakse kommertskarjades kõige laialdasemalt. MLV võib kiiresti esile kutsuda immuunsuse, et pakkuda osalist kaitset 3 päeva pärast vaktsineerimist ja täielikku kaitset 5 päeva pärast vaktsineerimist [14–16]. Paljud tegurid, sealhulgas vaktsiinikvaliteediga sigade tervislik seisund ja emalt pärinevate antikehade (MDA) tase, võivad aga vähendada MLV efektiivsust, mis viib vaktsineeritud sigade mittetäieliku kaitseni [14–16]. CSF endeemilistes karjades sõltub MLV vaktsineerimise ajastus sigade MDA tasemest; kõrge MDA tase häirib MLV efektiivsust ja madal MDA tase suurendab põrsaste nakatumisohtu [17,18]. Seetõttu peavad MLV vaktsineerimisprogrammid karjades põhinema MDA taseme langusel. Taiwanis regulaarselt rakendatav CSF-vastane vaktsineerimisprogramm hõlmab tiinete emiste vaktsineerimist, et anda vastsündinutele ternespiima kaudu MDA-d, ja seejärel esimese MLV annuse manustamist põrsastele 3–12 nädala vanuses. Taiwani järelevalve kohaselt on põrsaste MDA-de CSFV-vastaste neutraliseerivate antikehade (NA-de) keskmised tiitrid nende esimese MLV-vaktsineerimise ajal kõrgemad kui 1:32 [19], mis võib kahjustada MLV-i efektiivsust ja põhjustada erinevaid immuunseisundid karjades. Selles uuringus kirjeldatakse loomkatset, mille eesmärk oli uurida MLV võimet kaitsta põrsaid erineva MDA tasemega pärast kooselu CSFV-ga nakatunud põrsaga, kes tegutses CSFV doonorina (st esmase sissetungijana).

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Rakud ja viirused

Sigade tsirkoviiruse tüüpi -1-vabu sea neeru-15 (PK-15) rakke kultiveeriti minimaalses olulises söötmes (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA), mis sisaldas 5% veise loote seerumit. (FBS) ja inkubeeriti 37 °C juures 5% CO2-s. PK-15 rakud toetasid CSFV paljunemist, sealhulgas Lapinized Philippines Coronel (LPC) vaktsiinitüvi genotüübiga 1.1 ja TD/96 tüvi genotüübiga 2.1. LPC ja TD/96 tüvede viiruse tiitrid olid vastavalt 107,71 ja 105,87 koekultuuri nakkusliku doosi 50% (TCID50).

2.2. Eksperimentaalne disain

Kokku {{0}}nädalased põrsad, mis koosnevad ühest spetsiifilisest patogeenivabast (SPF) põrsast, kellel ei olnud anti-CSFV NA-sid (rühm 1) ja 18 tervet põrsast (rühmad 2–5) LPC vaktsineeritud katses kasutati CSFV-vaba karja emisi (joonis 1). 18 tervet põrsast jaotati juhuslikult nelja rühma (rühmad 2–5); anti-LPC NA tiitri (log2) keskmised rühmade 2–5 vahel olid vastavalt 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 ja 4,3 ± 1,3 log2 korda ning ei erinenud oluliselt 0 päeva pärast katset (DPE). SPF põrsas (rühm 1) inokuleeriti irooniliselt, kasutades 5 × 105 TCID50 TD/96 tüve 7 DPE juures ja see toimis esmase sissetungija või CSFV doonorina, kui ta elas ruumis 12 koos rühmadega 2 ja 3 (joonis 1). Et testida, kas MDA-d vähendasid MLV efektiivsust, vaktsineeriti rühma 2 (n=6) ühekordse LPC vaktsiini annusega (üle 1 × 104 TCID50/annus) 0 DPE juures. MDA kaitsevõime testimiseks ei vaktsineeritud 3. rühma (2. rühma kontroll; n=3) LPC vaktsiiniga ja seega ilmnes nendel põrsastel MDA lagunemine 7 päeva pärast esmast kokkupuudet esmase sissetungijaga. 1. rühm (esmane sissetungija) elas koos rühmadega 2 ja 3 10 päeva (7 kuni 17 DPE). Seejärel viidi 2. rühm üle ruumi 2, et olla sekundaarsed sissetungijad, elades koos 4. rühmaga (n=6) 17. kuni 36. DPE. 3. rühm viidi üle ruumi 4, et koos elada 5. rühmaga (n=3). Rühmad 4 ja 5 olid seega põrsad, kelle MDA lagunes pärast esimest kokkupuudet sekundaarsete sissetungijatega 17 päeva. Loomatervise Uurimise Instituudi institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee kiitis selle loomkatse heaks (kinnitusnumber A09007).

Joonis 1. Katsekujundus.

Loomi jälgiti iga päev kliiniliste tunnuste suhtes ja iga parameetri väärtus hinnati vahemikus 0 kuni 3, mis tähistas Mittelholzeri meetodil [19] normaalset kuni rasket. Mõõdeti rektaalset temperatuuri ning vere-, sülje- ja väljaheiteproovid koguti kaks korda nädalas kuni 35 DPE-ni. Proove analüüsiti CSFV koormuste ja CSFV-vastaste antikehade suhtes. Lahkamine viidi läbi 1. rühma puhul 18 DPE juures, 2. ja 3. rühma puhul 36. DPE ning 4. ja 5. grupi puhul 39. Keskkonnaproovid (st tampooniproovid tarast, väljaheited põrandal, söödaküna, ja joogipurskkaevu) analüüsiti ka CSFV suhtes.

2.3. CSFV kvantitatiivne pöördtranskriptsioon reaalajas polümeraasi ahelreaktsioon (QRRT-PCR)

Proovide viiruse RNA-d ekstraheeriti QIAamp® Viral RNA Mini Kitiga (QIAGEN, Hilden, Saksamaa) ja need tuvastati kvantitatiivse pöördtranskriptsiooni polümeraasi ahelreaktsiooni (QRRT-PCR) abil [20]. QRRT-PCR-i kasutati erinevate genotüüpide tuvastamiseks ja proovide CSFV koormuste kvantitatiivseks analüüsimiseks.

Tistanche kasulikud omadused meestele - tugevdavad immuunsüsteemi

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. CSFV-vastased NA-d

Põrsaste seerumi kuumutamine temperatuurini 56 ◦C inaktiveeritud komplemendi võimaldas tuvastada anti-LPC ja TD/96 NA-sid. Lühidalt, 2-kordselt lahjendatud seerumiproovid, alates vahekorrast 1:4, segati võrdsetes kogustes 100 TCID50 LPC või TD/96 tüvega. Segusid inkubeeriti 37 ◦C juures 1 tund ja kanti seejärel PK-15 rakkudesse 96-süvendiplaatidel. Pärast 3-päevast inkubeerimist rakud fikseeriti ja värviti, et tuvastada CSFV antigeeni olemasolu kaudse fluorestsentsanalüüsi abil. Antikeha neutraliseeriv tiiter on antikeha lahjendusteguri log2 (lahjenduse pöördväärtus), kui 50% süvenditest on nakatumise eest kaitstud.

2.5. CSFV-spetsiifiline interferoon (IFN)- -Sekreteerivad rakud

Põrsaste CSFV-vastase rakuvahendatud immuunsuse (CMI) hindamiseks viidi läbi perifeerse vere mononukleaarsete rakkude (PBMC) ex vivo CSFV-spetsiifiline IFN-vastuse test. EDTA-ga antikoaguleeritud verest pärinevaid PBMC-sid tsentrifuugiti kiirusel 400 × g, kasutades Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). PBMC-d suspendeeriti RPMI 1640 söötmes (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA), mis sisaldas 10% (maht/maht) kuumusega inaktiveeritud FBS-i, 100 ühikut/ml penitsilliini G-d, 100 ug/ml streptomütsiini ja 0,25 µg/ml. ml amfoteritsiin B. CSFV-spetsiifiliste IFN{16}}sekreteerivate PBMC-de arv tuvastati sea IFN-ühevärvilise ensümaatilise ELISPOT testiga (CTL, Shaker Heights, OH, USA). 96-süvendiplaatidel jaotati PBMC-d kontsentratsiooniga 5 × 106 rakku/ml 100 µl süvendi kohta koos sea IFN-i püüdmise antikehaga näidisrühma (inokuleeritud RPMI 1640 söötmega), TD/96 rühma (nakatatud 0,1 MOI) ja ConA rühm (täiendatud 5 µg/ml koncanavaliin A-ga; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), mis toimib positiivse kontrollina. Iga kord kasutati dupleksstimulatsioone. Pärast 48-tunnist stimulatsiooni süvendid pesti, IFN- -tuvastatud antikeha seoti ja substraat külvati. Igas süvendis olevad laigud sõeluti ja analüüsiti CTL analüsaatoriga.

2.6. Immunohistokeemia

Lümfoidkudesid uuriti immunohistokeemilise testiga, kasutades supertundliku polümeeri HRP IHC tuvastamise süsteemi (BioGenex, Haag, Holland) ja 1C7A1 monoklonaalset antikeha genotüübi 2.1 CSFV tüvede vastu [21]. Pruuni värvuse tekkimine näitab CSFV esinemist.

2.7. Statistika

Statistiliselt oluliste erinevuste määramiseks rühmade vahel kasutati dispersioonanalüüsi ja Duncani mitme vahemiku testi. Andmete analüüs viidi läbi kasutades SAS-i (SAS Institute, Cary, NC, USA). P-väärtus alla 0,05 näitas statistilist olulisust.

3. Tulemused

3.1. Kliinilised tunnused

Kõik põrsad olid enne katset terved (tabel 1). Rühma 1 põrsas oli CSFV doonor (esmane sissetungija) ja talle inokuleeriti TD/96 tüvega. Palaviku ja CSFV-ga seotud kliinilised nähud 1. rühmas tuvastati vastavalt 12 DPE ja 13 DPE korral, kusjuures skoorid suurenesid pidevalt 13–18 DPE juures, mis saavutasid maksimumi 20 punktiga 18 DPE juures. 2. ja 3. rühma põrsaste puhul, kes elasid koos CSFV doonoriga, oli rühm 2, mis koosnes LPC vaktsiiniga vaktsineeritud MDA-ga põrsastest, terved ja neil ei esinenud katse ajal palavikku ega mingeid CSFV-ga seotud kliinilisi tunnuseid. . Kuid 3. rühma põrsatel, kuhu kuulusid MDA-ga põrsad, kes ei olnud LPC-ga vaktsineeritud, ilmnesid palavik 23 DPE (16 päeva pärast esimest kokkupuudet, DP1C) ja palavikuga sigade arv suurenes 23–36 DPE-lt. Palavik oli korrelatsioonis CSFV-ga seotud kliiniliste tunnustega, mis ilmnesid 24 DPE (17 DP1C) juures. Kuigi ühel põrsal (8138) esinesid kerged kliinilised nähud (skoorid alla 5), ​​halvenes kahe teise põrsa kliinilise seisukord 24–36 DPE ja nende hinded jäid vahemikku 12–16. 3. rühma põrsas 8136 suri 29 DPE juures. 4. rühma põrsad, kes olid kontaktis (kooselusid) 2. rühma põrsastega, olid samuti terved ja neil ei olnud katseperioodil palavikku ega CSFV-ga seotud kliinilisi tunnuseid. 5. rühma põrsastel, kes puutusid kokku 3. rühma põrsastega, ilmnesid 27 DPE (10 päeva pärast teist kontakti, DP2C) palavik ja 30 DPE (13 DP2C) CSFV-ga seotud kliinilised nähud. Palavikuliste põrsaste arv ja kliinilised skoorid 5. rühmas suurenesid aja jooksul; skoor 39 DPE juures oli 21 ± 1,4, jäädes vahemikku 19 kuni 22.

Tabel 1. Palavikuliste põrsaste osakaal igas rühmas katseperioodil.

Kliiniliste parameetrite kohaselt ei suutnud ainult MDA-de olemasolu (rühm 3) kaitsta põrsaid primaarse sissetungija (1. rühm) põhjustatud kontaktülekande eest. Ühekordne LPC vaktsiini annus lisaks MDA-dele (2. rühm, st laialdaselt kasutatav praktika) pakkus kaitset primaarse sissetungija poolt indutseeritud kontakti ülekandumise eest (1. rühm; tabel 1). Laialdaselt rakendatud vaktsineerimispraktika oli kasulik ka sekundaarselt sissetunginud põrsastele (st 4. rühmale, kellel olid ainult MDA-d, kuid neil ei olnud palavikku ega kliinilisi tunnuseid). Kliiniliselt võttis olukord 5. rühmas (põrsad, kellel on sekundaarsete sissetungijate poolt indutseeritud kontakti ülekanne) 3. rühma olukorra (primaarse sissetungija poolt indutseeritud kontakti ülekanne).

3.2. CSFV vireemia

Enne katset ei tuvastatud ühegi põrsa veres CSFV TD/96 tüve (joonised 2A ja 3A). Pärast TD/96 inokuleerimist tuvastati 1. rühma põrsas TD/96 vireemia esmakordselt 10 DPE (3 päeva pärast inokuleerimist, POI) ja seda tuvastati pidevalt kuni 17 DPE-ni. CSFV koormused suurenesid 101,2 TCID50/ml 10 DPE juures 106,4 TCID50/ml tasemele 17 DPE. Rühmas 2, mis hõlmas LPC-ga vaktsineeritud põrsaid, kes olid koos elanud primaarse sissetungijaga, tuvastati TD/96 vireemia ainult ühel põrsasel (8134) vanuses 21–35 DPE. CSFV koormus põrsa 8134 veres saavutas maksimumi (104,9 TCID50/ml) 24 DPE juures ja vähenes seejärel 101,7 TCID50/ml 35 DPE juures. 3. rühmas, kuhu kuulusid LPC-vaktsineerimata põrsad, kes olid koos elanud primaarse sissetungijaga, avastati TD/96 vireemia esmakordselt 66,7% (2/3) põrsastest 21 DPE (14 DP1C) juures ja kõik olid positiivsed 24 korral. DPE. Põrsas 8138 oli aga TD/96 vireemia suhtes negatiivne vahemikus 28–35 DPI (joonis 2A). 4. rühmas, mis koosnes põrsastest, kes elasid koos 2. rühmaga ruumis 2, ei tuvastatud TD/96 vireemiat katseperioodil. Kõik 5. rühma põrsad, mis koosnesid 3. rühmaga kokku puutunud põrsastest, olid TD/96 vireemia suhtes positiivsed vahemikus 31–35 DPE. CSFV koormused olid vahemikus 105,1 kuni 106,7 TCID50/ml 35 DPE juures (joonis 3A). Rühmades 2 ja 3 lükkas MDA-de olemasolu esmase vireemia tuvastamise edasi kuni 10 DP1C-ni (st põrsad jäid asümptomaatiliseks kuni 17 DPE-ni; tabel 1) võrreldes 3. päeva POI-ga 1. rühmas ägeda haiguse korral. faas. Täiendav ühekordne LPC vaktsiini annus (2. rühm) vähendas vireemiliste sigade protsenti 83% (joonis 2A). Samamoodi vähendas LPC vaktsiini täiendav ühekordne annus viiruskoormust veres 28–35 DPE-lt (joonis 3A). 2. rühma LPC-vaktsineerimine oli kasulik ka rühma 4 põrsastele, kellega nad hiljem koos elasid (teiseselt sissetunginud), hoolimata sellest, et ühel 2. rühma põrsastest oli TD mööduv vireemia (joonis 2A) ja sülg (joonis 2B) ja väljaheide (joonis 2C). /96. See vireemilise seisundi muutus korreleerus kliiniliste parameetrite põhjal määratud muutusega (jaotis 3.2), kuigi laboratoorne tuvastamine oli tundlikum.

Joonis 2. Iga põrsaste (A) vere, (B) sülje ja (C) väljaheite QRRT-PCR-ga [20] tuvastatud põrsaste arv (protsent), mis on positiivsed TD/96 suhtes rühma katseperioodil. Rühma 1 põrsas nakatati irooniliselt TD/96-ga 7 DPE juures ja see oli CSFV doonor (st esmane sissetungija) rühmade 2 ja 3 jaoks. 2. rühma põrsad, kellele tehti LPC vaktsineerimine 0 DPE juures ja 3. rühma põrsad, ei läbinud LPC-vaktsineerimist koos 1. rühma põrsaga vanuses 7–17 DPE. 4. ja 5. rühma põrsad elasid koos 2. ja 3. rühma põrsastega (st sekundaarsed sissetungijad) vanuses 17–36 DPE.

Joonis 3. Iga rühma põrsaste CSFV-koormus esineb (A) veres, (B) süljes ja (C) väljaheites.

3.3. CSFV eritumine süljes

CSFV TD/96 tüve ei tuvastatud enne katset ühegi põrsa süljes (joonised 2B ja 3B). Rühma 1 põrsa sülg oli esmalt positiivne TD/96 suhtes 14 DPE (7 DP1C), mis jätkus kuni 17 DPE. CSFV koormused suurenesid 105,8 TCID50/ml 14 DPE juures 107,6 TCID50/ml tasemele 17 DPE. Nimelt tuvastati 2. rühma põrsastel, kes olid vaktsineeritud LPC-ga ja elasid koos CSFV doonoriga, TD/96 esmakordselt 66,7% (4/6) süljeproovidest 14 DPE (7 DP1C) juures, mis muutus negatiivseks. pärast seda. Hiljem eraldas veel üks põrsas (1/6, põrsas 8134 TD/96 vireemiaga; joonis 2A) TD/96 süljes 21–24 DPE tasemelt 101,2 ja 102,7 TCID50/ml, mis on madalam kui eelnimetatud põrsaste omad. . 3. rühmas põrsastega, kellel oli ainult MDA-d ja ilma LPC-vaktsineerimiseta, kes elasid koos CSFV doonoriga, tuvastati TD/96 algselt 66,7% (2/3) süljeproovidest 21 DPE juures ja kõik süljeproovid olid positiivsed. 24 DPE. Rühmas 4, mis hõlmas 2. rühma põrsastega koos elanud põrsaid, ei tuvastatud katse ajal süljeproovides TD/96, samas kui 5. rühmas, mis koosnes 3. rühma põrsastega, olid kõik süljeproovid positiivsed. TD/96 24–35 DPE. CSFV koormused suurenesid aja jooksul ja jäid vahemikku 105,9 kuni 107,3 ​​TCID50/ml 35 DPE võrra. Kokku neljal kuuendikul 2. rühma põrsastest (üheannuselise LPC-vaktsineerimisega) oli TD/96-positiivne sülg 14 DPE juures enne vireemiat. CSFV tuvastati varem 2. rühma põrsastel, kes olid puutunud kokku 1. rühma põrsaga selle TD/96 leviku ajal. Ühel põrsasel (Piglet 8134) rühmas 2 ilmnes hiljem 21–24 DPE-st mööduv eraldumine, mis on tõenäolisemalt tüüpiline CSFV replikatsioonile süljenäärmetes pärast vireemiat. Rühma 2 ja 3 võrdluse kohaselt vähendas LPC vaktsineerimine CSFV levikut.

3.4. CSFV eritumine väljaheites

CSFV TD/96 tüve ei tuvastatud enne katset ühegi põrsa väljaheites (joonised 2C ja 3C). 1. rühma põrsa väljaheited olid TD/96 positiivsed kõigepealt 14 DPE (7 DPIC) juures, mis jätkus kuni 17 DPE. CSFV koormused suurenesid 105,1 TCID50/g-lt 14 DPE juures 108,8 TCID50/ml-ni 17 DPE juures. Rühmas 2, mis hõlmas LPC-ga vaktsineeritud põrsaid, kes elasid koos 1. rühma CSFV doonoriga, eraldati ajutiselt ainult põrsas 8134 24 DPE (17 DPIC) juures, samas kui kõik teised 2. rühma põrsad olid negatiivsed. 3. rühmas, kuhu kuulusid ilma LPC-vaktsineerimata põrsad, kes elasid koos CSFV doonoriga, olid kaks kolmandikku põrsastest (kõik peale põrsa 8138) positiivsed vahemikus 21 (14 DP1C) kuni 35 DPE, mille jooksul CSFV koormus tõusis 105,1-lt. TCID50/g 21 DPE juures kuni 107,5 TCID50/ml 31 DPE juures. Mööduva TD/96 vireemiaga põrsa 8138 väljaheiteproovid ei olnud aga TD/96 suhtes positiivsed. Rühmas 4, mis koosnes põrsastest, kes elasid koos 2. rühma põrsastega, olid kõik väljaheiteproovid TD/96 suhtes katseperioodi jooksul negatiivsed. 5. rühmas, kuhu kuulusid 3. rühmaga koos elanud põrsad, kasvas TD/96-positiivsete väljaheiteproovide arv aja jooksul 24–35 DPE-lt ja koormused jäid vahemikku 105,7–107,2 TCID50/g 35 DPE juures. . 5. rühmas tuvastati esmakordselt 24 DPE (7 DP2C), mis oli sarnane 1. rühma omaga (14 DPE) ja üldine profiil oli paralleelne vireemia omaga (joonis 2A), mis viitab sellele, et CSFV replitseerub lokaalselt pärast vireemiat. . Nagu on üksikasjalikult kirjeldatud jaotistes 3.3 ja 3.4, olid väljaheited ja sülg peamised CSFV kontaktülekande kandjad.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

3.5. CSFV koormus lahkamise teel saadud kudedes

Rühma 1 CSFV doonorpõrsa ja 3. ja 5. rühma põrsaste koed, kellega ta koos elas, olid TD/96 positiivsed (tabel 2). TD/96 koormused 1. rühma põrsaste kudedes jäid vahemikku 103,76 kuni 109,37 TCID50/g. 5. rühmas, mis hõlmas 3. rühma põrsastega kokkupuutunud põrsaid, tuvastati TD/96 kõigil põrsastel ja jaotus kõigis kudedes, kusjuures suurem koormus oli hematolümfoidsetes organites (mandlid, lümfisõlmed ja põrn) ja nendes elundites. rikkalikuma verevarustusega (maks, kopsud, süda ja neerud), nagu on näidatud joonisel 2A, C. Suurim TD/96 koormus oli lümfoidkudedes (üle 109,0 TCID50/g). Seevastu 2. ja 4. rühma kooseluliste põrsaste mittehematolümfoidsed koed, välja arvatud 2. rühma põrsas 8134, kellel oli mööduv TD/96 vireemia, olid madala tasemega TD/96 positiivsed ainult veres, mandlites ja kubeme lümfisõlmedes. ja submaxillaarsed lümfisõlmed, kusjuures need tasemed jäävad vahemikku 101,65–103,78 TCID50/g. Rühmas 3, mis hõlmas LPC-vaktsineerimata põrsaid, kes olid kokku puutunud 1. rühma CSFV doonoriga, tuvastati TD/96 kahe põrsa kolmest kõigis kudedes (välja arvatud põrsas 8138). 3. rühma põrsas 8138, kellel oli mööduv TD/96 vireemia, oli TD/96 mandlites, submaksillaarsetes lümfisõlmedes ja bronhide lümfisõlmedes, kuigi viiruskoormus oli keskmisest madalam, jäädes vahemikku 103,08–104,69 TCID50/ml.

Tabel 2. CSFV QRRT-PCR abil põrsaste erinevates kudedes tuvastatud CSFV koormused

3.6. CSFV katsekeskkonnas

Iga katseruumi tara, põrandal olevaid väljaheiteid, söödaküna ja joogipurskkaevu testiti TD/96 suhtes QRRT-PCR abil (tabel 3). TD/96 tuvastati kell 14 ja 17 DPE toa 12 põranda väljaheites, kus 1. rühma CSFV doonor elas koos 2. ja 3. rühma põrsastega. Tara, söödaküna ja joogiveeallika testid olid negatiivsed. Proovid ruumist 2, kus rühmad 2 ja 4 koos elasid, olid kõik negatiivsed vahemikus 21–35 DPE. TD/96 tuvastati esmakordselt väljaheites ruumi 4 (rühmad 3 ja 5) põrandal kell 24 DPE. Seejärel tuvastati TD/96 ruumi 4 taral, söödakünal ja joogipurskkaevul vahemikus 28–35 DPE. Need tulemused näitavad, et väljaheited (mida võib potentsiaalselt esineda igat tüüpi keskkonnaproovides) ja sülg (mis tõenäoliselt esinevad söödaküna ja joogiveeallika proovides) olid kontakti ülekandmise peamised vahendid. 2. rühma põrsaste (joonised 2 ja 3) mööduvat viiruse levikut ei viidud ruumi 2, kus nad elasid koos 4. rühma põrsastega.

Tabel 3. Katseruumide keskkonnaproovide CSFV koormused.

3.7. CSFV-spetsiifiline IFN- -PBMC-de sekreteerimine

CSFV-spetsiifilisi IFN- -sekreteerivaid rakke uuriti põrsaste PBMC-des rühmades 2 kuni 5 vahemikus 7 kuni 35 DPE (joonis 4). Rühma 2 põrsaste puhul oli IFN-i - -sekreteerivate rakkude arv, kuigi sagedusega alla 0,1% PBMC-dest, oluliselt suurem kui rühmade 3, 4 ja 5 puhul. vahemikus 7 kuni 35 DPE. IFN{16}}sekreteerivate rakkude arv 2. rühma põrsas 8134, kellel oli sarnase aja jooksul mööduv TD/96 vireemia (joonis 2A), korreleerus oluliselt väiksema arvuga 56 (21 DPE) ja 62 (28). DPE; rühma keskmine 116 või suurem); need numbrid saavutasid aga grupi keskmise 35 DPE võrra. CSFV-spetsiifiliste IFN- -sekreteerivate rakkude arv rühmades 3, 4 ja 5 ei erinenud oluliselt.

Joonis 4. CSFV-spetsiifilisi IFN- -sekreteerivaid rakke uuriti põrsaste PBMC-des rühmades 2 kuni 5 vahemikus 7 kuni 35 DPE. 2. rühma põrsad, kes olid vaktsineeritud LPC-ga 0 DPE-ga, ja 3. rühma põrsad, kellel ei olnud LPC-vaktsineerimist, elasid koos 1. rühma CSFV doonorpõrsaga vanuses 7 kuni 17 DPE. Rühmade 4 ja 5 põrsad elasid koos rühmade 2 ja 3 põrsastega, vastavalt 17 kuni 35 DPE. Erinevate ülaindeksi tähtedega a ja b väärtused näitavad statistiliselt olulist erinevust (p < 0,05) üksteisest. Sama tähte sisaldavate väärtuste vahel ei ole olulisi erinevusi

3.8. CSFV-vastased NA-d

CSFV-vastased NA-d põrsaste seerumites genereeriti vastusena kas LPC tüvele (joonis 5A) või TD/96 tüvega (joonis 5B). CSFV-vastaseid NA-sid ei tuvastatud 1. rühma CSFV doonoril vahemikus 7 kuni 17 DPE. Rühmade 2–5 põrsaste seerumite tiitrid DPE-s {{10}} olid vahemikus 5 kuni 7 log2 (vahemikus 32- kuni 128-kord). Pärast seda, kui 2. rühma põrsad vaktsineeriti LPC vaktsiiniga ja elasid koos CSFV doonoriga, ei langenud keskmine tiiter vahemikus 0 kuni 28 DPE. LPC-vastaste NA-de suurenemise tõttu põrsas 8134 DPE-lt 31–35 suurenes 2. rühma keskmine tiiter märkimisväärselt. 3. rühma põrsaste puhul, kes ei olnud vaktsineeritud LPC-ga ja elasid koos CSFV doonoriga, vähenes keskmine tiiter järk-järgult vahemikus 0 kuni 28 DPE. Kuna põrsa 8138 tiiter tõusis järk-järgult 21 ja 35 DPE vahel, siis 3. rühma keskmine tiiter tõusis vastupidiselt 31 ja 35 DPE vahel. Rühma 4 ja 5 keskmised tiitrid langesid aja jooksul. Üldiselt oli iga rühma anti-TD/96 NA profiil paralleelne anti-LPC NA profiilide omaga, kuigi anti-TD/96 NA keskmine oli vahemikus 1,3–3,7 log2 (ligikaudu 2–{46}} korda; Joonis 5B), mis oli madalam kui anti-LPC NA keskmine.

Joonis 5. Anti-LPC (A) või TD/96 (B) NA-d iga rühma põrsaste seerumis katseperioodil. Rühma 1 põrsas nakatati irooniliselt TD/96-ga 7 DPE juures ja see oli CSFV doonor (st esmane sissetungija), elades seejärel koos 2. ja 3. rühma põrsastega vahemikus 7 kuni 17 DPE. 2. rühma põrsaid vaktsineeriti LPC-ga 0 DPE-ga ja 3. rühma põrsaid LPC-ga ei vaktsineeritud. Rühmade 4 ja 5 põrsad elasid koos rühmade 2 ja 3 põrsastega, vastavalt 17 kuni 35 DPE.

LPC-ga vaktsineeritud emiste ternespiima kaudu kantud 4. rühma põrsaste antikehade tiitritest tuletatud MDA-de hinnanguline poolväärtusaeg oli 10,7 päeva (joonis 5A). Seda hinnangut toetavad negatiivsed palavikud ja kliinilised nähud (tabel 1), negatiivne vireemia, sülje ja väljaheite viiruskoormus (joonised 2 ja 3) ning koed (tabel 2; vt punkt 3.9) ja keskkonnaproovid (tabel 3). ) rühma 4 põrsastest, mis näitasid, et nad ei olnud katseperioodi jooksul nakatunud TD/96 viirusega.

3.9. Immunohistokeemia CSFV antigeeni signaalide tuvastamine lahkamise koeproovides

CSFV TD/96 signaalid tuvastati 1. rühma CSFV doonori (joonis 6I) lümfoidkoes, ühel 2. rühma põrsal (põrsas 8134, kelle veres oli CSFV koormus kõrgeim 104,9 TCID50). /mL 24 DPE juures ja seejärel vähenes väärtuseni 101,7 TCID50/ml 35 DPE juures), kolmel põrsal rühmas 3 ja kolmel põrsas rühmas 5. Rühma 4 põrsad ei olnud TD/96 suhtes positiivsed (joonis 6J). Tugevad CSFV TD/96 signaalid olid laialdaselt jaotunud põrsaste mandlites, põrnas ja lümfisõlmedes rühmades 1, 3 (välja arvatud põrsas 8138) ja 5. Põrsas 8134 (2. rühm) mööduva TD/96 vireemiaga. , paiknesid hajutatud TD/96-positiivsed signaalid enamasti mandlite parenhümaalsetes piirkondades, kubeme lümfisõlmede medullas ja submaxillaarsetes lümfisõlmedes (joonis 6A–D), mis on kooskõlas viiruskoormuse tulemustega. nende kudede kvantifitseerimine (tabel 2). TD/96-positiivsete rakkude morfoloogia ja jaotus olid tugevalt makrofaagilised. Mööduva TD/96 vireemiaga põrsas 8138 (rühm 3) oli TD/96-positiivsete signaalide arv ja jaotus (joonis 6E–H) sarnane põrsa 8134 omadega.

Joonis 6. CSFV antigeenid lümfoidkudedes märgiti 1C7A1 monoklonaalse antikehaga. Põrsa 8134 (2. rühm) lümfisõlm (A, B) ja mandlid (C, D), millel oli mööduv TD/96 vireemia, annavad pruuni TD/96-positiivse signaali. Põrsa 8138 (3. rühm), millel oli mööduv TD/96 vireemia, lümfisõlm (E, F) ja mandlid (G, H) annavad pruuni TD/96-positiivse signaali. Põrsa 8150 (1. rühm) lümfisõlm (I) annab parakorteksis difuusse pruuni TD/96-positiivse signaali. Põrsa 8146 (4. rühm) lümfisõlm (J) oli TD/96 suhtes negatiivne

Põrsas 8134 (rühm 2) ja põrsas 8138 (rühm 3), mõlemas põrsas madala tasemega vireemiaga (joonised 2A ja 3A; tabel 2), olid CSFV antigeenid endiselt mandlite koe makrofaagides tuvastatavad (joonis 6A–H). , mis näitas taas, et mandlid on ideaalne kude CSFV diagnoosimiseks.

4. Arutelu

Vaktsineerimine on CSF-i endeemilistes piirkondades CSF-i ennetamiseks ja tõrjeks ülioluline. Laialdaselt kasutatav tava on anda vastsündinutele MDA-d vaktsineeritud emiste ternespiima kaudu ja seejärel manustada üks annus MLV-d (nt LPC-d), kui põrsad on 3–6 nädala vanused; seda protseduuri kasutati käesolevas uuringus 2. rühma jaoks (joonis 1). Paljud tegurid, sealhulgas vaktsiini kvaliteet, vaktsineerimisprogrammi protseduurid (nt ajakava, tüübid ja marsruudid) ning sigade MDA tase ja tervislik seisund (sealhulgas individuaalne varieeruvus), võivad mõjutada CSFV vaktsineerimise tõhusust, vähendades kaitset nakkuse eest [14– 16]. Kuigi käesolevas uuringus oli 2. ja 3. rühma põrsastel kõrge MDA tase 1:32–128- korda 7 DPE juures (joonis 5A; st 0 DP1C rühma 1 CSFV doonoriga); Joonisel fig 1) viivitasid MDA-d nakkuse kulgu, nagu näitab vireemia hiline ilmnemine 10 DP1C juures (rühmad 2 ja 3; joonis 2A). See põhjustas põrsaste sümptomiteta (tabel 1), kuigi mõned põrsad eraldasid viirust endiselt sülje ja väljaheitega (joonis 2B, C). Need juhuslikud viiruse levitajad rühmas 2 esindasid individuaalseid erinevusi selles uuringus analüüsitud rühma tervislikus seisundis või immuunvastustes. MDA-d üksi võivad pakkuda ainult osalist kaitset enne viiruse replikatsiooni veres ja kudedes. CSFV-vastane TD/96 NA tase ei muutunud positiivselt pärast LPC vaktsineerimist (joonis 5B), isegi pärast seda, kui põrsad elasid koos 1. rühma primaarse sissetungijaga. See juhtus tõenäoliselt seetõttu, et MDA tase tõepoolest häiris MLV efektiivsust ja sissetungiva CSFV TD/96 immunosupressiivse olemuse tõttu.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

CSFV-vastaste NA-de ja CMI tiitrid, mida esindab CSFV-spetsiifiliste IFN- - sekreteerivate rakkude arv, on tihedalt seotud sigade kaitsega CSFV nakkuse eest [17,22–24]. Põrsas 8134 (2. rühm), mille CSFV-vastased NA tasemed olid madalad ja CSFV-spetsiifilisi IFN{10}}sekreteerivaid rakke oli pärast MLV inokuleerimist (joonised 4 ja 5), ​​ilmnes mööduv CSFV vireemia ja eritumine pärast kokkupuudet CSFV-ga doonor (joonised 2 ja 3). Seevastu teised 2. rühma põrsad, kellel oli pärast MLV inokuleerimist madalad CSFV-vastased NA-d, kuid suhteliselt kõrged CSFV-spetsiifilised IFN{18}}sekretsioonirakud, ei nakatunud CSFV-ga isegi pärast 10-päevast kooselu CSFV doonoriga. . Lisaks, kuigi põrsas 8138 (3. rühm) oli kõrge LPC-vastase NA tiitriga (üle 128- korra) ilma MLV-ga vaktsineerimiseta ja minimaalsete CSFV-spetsiifiliste IFN{25}}sekreteerivate rakkudega, ilmnes sellel ka mööduv CSFV. vireemia pärast kooselu TD/96 doonoriga, kuid oli katseperioodi lõpuks CSFV-vaba. Teistel 3. rühma põrsastel, kellel oli madal anti-LPC NA tase (alla 64- korda) ja ilma MLV-ga vaktsineerimata, ilmnesid tõsised CSFV-ga seotud kliinilised nähud, kahjustused ja suur CSFV koekoormus, mis põhjustas surma. Sarnaste CSFV-vastaste tiitrite ja profiilidega rühmade 2 ja 3 tulemuste võrdlus (joonis 5) näitab, et CMI on viiruse kliirensi ja taastumise võtmetegur. 2. rühma põrsastel oli suurem CMI (joonis 4), mis on kooskõlas tasuta kliiniliste skooridega (tabel 1) ja kõigi testitud parameetritega (joonis 2, joonis 3 ja joonis 6).

Nimelt ei tõusnud rühmas 2 ja teistes rühmades CMI tasemed märkimisväärselt (ja ainult sagedusega, mis on madalam kui 0,1% PBMC-dest) kogu katseperioodi jooksul (joonis 4), hoolimata põrsaste 1. rühma CSFV doonori ja 3. rühma põrsaste pidev kokkupuude viiruse levikuga vanuses 7–17 DPE (joonised 2 ja 3). IFN{10}}sekreteerivate rakkude madalad sagedused peegeldavad tõenäoliselt järgmist: (1) CSFV immunosupressiivne olemus, (2) MDA interferents ja (3) meie läbiviidud testi tehniline piiratus. Seetõttu on karjade immuunsuse parandamiseks hädavajalik määrata sobiv aken, milles MDA tase on häirimise vältimiseks piisavalt madal, kuid siiski piisavalt kõrge, et tagada esmane kaitse ja tugevdada CSFV-vastast CMI-d.

2. rühma põrsaste puhul, keda raviti laialdaselt kasutatava vaktsineerimisprotseduuriga, ilmnes CSFV aeg-ajalt eritumine sülje ja väljaheitega lühikese aja jooksul (joonis 2) madala CSFV koormusega (joonis 3); seega blokeerisid 4. rühma põrsad (ainult MDA-ga) CSFV ülekandumise rühma 4, nagu näitavad ruumist 2 kogutud keskkonnaproovide CSFV-negatiivsed tulemused (tabel 3), palaviku puudumine ja kliinilised nähud (tabel 1). ) ning sülje ja rooja eritumise ja vireemia puudumine (joonised 2 ja 3) kooselu ajal. Siiski võisid 2. rühma asümptomaatilised CSFV kandjad olla valdkonnas tuvastamatuks põhjuseks.

MLV-ga vaktsineeritud SPF-põrsastel saab immuunvastust kiiresti ja püsivalt esile kutsuda. MLV-ga vaktsineeritud põrsaste rakulised ja humoraalsed immuunvastused ilmnevad kõige varem vastavalt 5 ja 12 päeva pärast vaktsineerimist [14–16, 22]. Kui MLV-d kasutatakse kaubanduslikes karjades, vähendavad MDA-d MLV efektiivsust. Käesolevas uuringus suurenes 2. rühma põrsaste CMI, kellel oli märkimisväärne MDA tase, kiiresti 0 DP1C juures (7 DPE; joonis 4; st palju kiiremini kui MDA-deta SPF-sigadel), kuigi ei antikeha ega CMI. profiilid muutusid dramaatiliselt (joonised 4 ja 5). Selline kiire tõus 7 DPE juures (joonis 4) pärast LPC-ga vaktsineerimist viitab sellele, et ternespiim võib lisaks MDA-dele pakkuda ka teisi immunoloogilisi komponente, mis kutsuvad esile anamneesisarnase vastuse.

CSFV-vastaseid NA-sid kasutatakse tavaliselt vaktsiini efektiivsuse hindamiseks ja CSFV-nakkuse uurimiseks karjades. CSFV tüve järgi on CSFV-vastaste NA-de tiiter homoloogsete tüvede (nt genotüübi 1.1 LPC) vastu kõrgem kui heterogeensete tüvede (nt genotüübi 2.1 TD/96) tiiter ja selles uuringus oli log2 1,3 kuni 3,7 (joonis 5A) kõrgem kui TD/96 tüve puhul (joonis 5B) [14]. Sarnast NA tiitri erinevust täheldati ka sigade reproduktiiv- ja respiratoorse sündroomi viiruse (PRRSV) ja SARS-CoV-2 erinevates tüvedes [25,26]. Kuna MDA-d on MLV efektiivsuse jaoks ülioluline interferentsfaktor, on põrsaste MLV-ga nakatamise optimaalne vaktsineerimiskava siis, kui põrsaste MDA-d on LPC-vastasest NA-tiitrist alla 1:{20}} korra. Seetõttu oli käesolevas uuringus optimaalne MLV vaktsineerimise aeg 28 DPE, mis on kooskõlas meie hinnanguga, et MDA-de poolväärtusaeg oli 10,7 päeva (2. rühm; joonis 5A) ja sarnane anti-vastaste ravimite analüüsitulemustega. Rühma 4 ja 5 LPC NA tiitrid. Paradoksaalsel kombel peetakse CSFV-vastase NA tiitri 32-kordset taset (umbes 1:128- korda anti-LPC NA-de kohta) kaitseindeksiks. CSFV infektsioon [17]. Enamikul 4. ja 5. rühmade põrsastest olid alates 7 DPE-st alla 1:{40}}kordsed anti-TD/96 NA tiitrid. Seega on periood, mil MDA tase on piisavalt madal, et mitte segada MLV-ga vaktsineerimist, kuid piisavalt kõrge, et olla kaitsev, kitsas, samas kui CSFV-nakkuse riski aken on lai. MLV vaktsineerimiseks sobivat perioodi saab pikendada ainult siis, kui MLV on toodetud homoloogsetest tüvedest, mis pole enamikus CSFV endeemilistes piirkondades tavaliselt saadaval.

Karja immuunsus korreleerub negatiivselt patogeeni levikuga haiguste ennetamisel ja tõrjel. Suurenenud karja immuunsus võib vähendada nii vastuvõtlikkust nakkustele kui ka patogeeni leviku ulatust karjas [27,28]. Vaktsineerimist kasutatakse tavaliselt otsese ja kiire vahendina karja immuunsuse suurendamiseks. Karja immuunsuse parandamine vaktsiinimmuniseerimise kaudu patogeeni leviku vähendamiseks on osutunud tõhusaks PRRSV, sigade tsirkoviiruse tüüp 2, CSFV, pseudorabiesviiruse ja SARS-CoV -2 [29–36] tõrjeks. CSFV uuringutes vähendas nii MLV kui ka E2 subühiku vaktsiinide manustamine ka CSFV levikut karjades [14–16, 22, 32]. Kuigi käesolevas uuringus ilmnes mõnel MLV-ga vaktsineeritud põrsastel mööduv CSFV vireemia ja levik (rühmad 2 ja 3; joonised 2 ja 3), ei pakkunud MLV-ga inokuleerimine vaktsineeritud sigadele mitte ainult täielikku kaitset, vaid tagas ka selle, et tüvi TD/96 ei edastatud primaarselt sissetungijalt (1. rühm) sekundaarselt sissetunginud rühmale (4. rühm). Seevastu levis TD/96 1. rühma CSFV doonorilt 3. rühma (ilma MLV vaktsineerimiseta) ja 5. rühma, mis näitab, et CSFV vastane MLV vaktsineerimine võib blokeerida CSFV leviku, suurendades seega CSFV likvideerimise tõenäosust, vähendades patogeeni põhiline paljunemisnumber (R0) [28]. Kõrge R0 patogeenidega haiguste likvideerimiseks on vaja ulatuslikumat vaktsiiniga hõlmatust. CSFV R0 on seotud tüve virulentsuse ja CSFV inokulatsiooniannusega. R0 patogeeni tase mõõduka nakatamise ja kõrge nakatamise korral mõõdukalt virulentse tüve korral ning väga virulentse tüve madala nakatamisannuse korral on oluliselt kõrgem kui madala virulentsusega tüve suure inokulatsiooniannuse korral. tüvi [13]. Need tulemused näitavad, et mõõduka või väga virulentsete CSFV tüvedega CSF-i endeemilistes piirkondades on vaja rohkem karja immuunsust.

Monotsüütide-makrofaagide liini rakud on CSFV tropismirakud, mis mängivad rolli CSFV ülekandes [37–39]. Käesolevas uuringus olid paranenud põrsad terved ja sümptomiteta; CSFV võib aga püsivalt nakatada ja peituda lümfoidkudedes (joonis 6), vältides seega immuunkliirensit; see toetab ka lümfoidkudede kasutamist diagnoosimiseks ideaalsete näidistena. Püsivat viirusinfektsiooni on täheldatud ka CSFV, inimese immuunpuudulikkuse viiruse tüüp 1 ja respiratoorse süntsütiaalviirusega [40–42]. CSFV on võimeline muutma tsütokiinide, tsütokiini retseptorite, kemokiinide, interferoonide ja maksutaoliste retseptorite ekspressiooni makrofaagides, mis peegeldab selle immunosupressiivset olemust ning antikehade (joonis 5) ja CMI (joonis 4) profiilide peaaegu mitteaktiivsust. katsesigadel, hoolimata nende pidevast kokkupuutest CSFV-ga, mis eritub esmaste (1. rühm) ja sekundaarsete (3. rühm) sissetungijate sülje ja väljaheitega. Sigade immunoregulatsioon pärast CSFV-nakkust hõlmas põletikueelsete (IL-1, IL-6, IL-8 ja MCF) ja viirusevastaste tegurite (IFN- ja ) suurenemist [43]. CSFV arenenud mehhanismid ja püsiv nakatumine jäävad siiski ebaselgeks.

Tistanche kasulikud omadused meestele - tugevdavad immuunsüsteemi

5. Kokkuvõtted

MDA-d, millele järgneb MLV vaktsineerimine, võivad esile kutsuda piisava immuunsuse, eriti CMI, võimaldades viirusest vabaneda ja taastuda. Kuigi mõnel MLV-ga vaktsineeritud põrsastel oli mööduv madal vireemia ja viiruse levik süljes ja väljaheites, võib CSFV ülekandumise kolmandale osapoolele (4. rühm) blokeerida MLV-ga vaktsineerimisega, vähendades seega CSFV R0. ja CSF likvideerimise võimaluse suurendamine.

Viited

1. WAUH. Peatükk 15.2: Nakatumine sigade klassikalise katku viirusega. maismaaloomade tervishoiu seadustikus; WOAH: Pariis, Prantsusmaa, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, HR; Bohórquez, JA; Postel, A.; Sakoda, Y.; Becher, P.; Ruggli, N. Sigade klassikalise katku viirus: minevik, olevik ja tulevik. Virus Res. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (World Animal Health Information System). Sigade klassikaline katk: ametlik haigusstaatus. Internetis saadaval: www.woah. org/en/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (juurdepääs 1. septembril 2022).

4. Sawai, K.; Nishi, T.; Fukai, K.; Kato, T.; Hayama, Y.; Yamamoto, T. Jaapani sigade katku viiruse puhangu fülogeneetiline ja fülodünaamiline analüüs (2018–2020). Transbound. Tekkima. Dis. 2022, 69, 1529–1538. [CrossRef] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, K.; Storino, GY Sigade klassikalise katku likvideerimise saavutused ja väljakutsed Brasiilias. Viirused 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, X.; Liu, M.; Wu, X.; Ma, W.; Zhao, X. Hiinast pärit sigade katku viiruse isolaatide fülogeneetiline analüüs. Arch. Virol. 2021, 166, 2255–2261. [CrossRef] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Rice, CM Flaviviridae: viirused ja nende replikatsioon. In Fields Virology, 5. väljaanne; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, toim. Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, USA, 2007; lk 1101–1152.

8. Paton, DJ; McGoldrick, A.; Greiser-Wilke, I.; Parchariyanon, S.; Laul, JY; Liou, PP; Stadejek, T.; Lowings, JP; Bjorklund, H.; Belak, S. Sigade katku viiruse geneetiline tüpiseerimine. Vet. Microbiol. 2000, 73, 137–157. [CrossRef] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, K.; Greiser-Wilke, I.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Tõuga seotud tegurite mõju sigade klassikalise katku viirusnakkuse kulgemisele. Vet. Rec. 1997, 140, 506–507. [CrossRef]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. Sigade klassikalise katku hiljutiste ja endiste viiruse isolaatide virulentsus, mida hinnatakse nende kliiniliste ja patoloogiliste tunnuste alusel. J. Vet. Med. Ser. B 2003, 50, 214–220. [CrossRef]

11. Moennig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. Sigade klassikalise katku kliinilised tunnused ja epidemioloogia: ülevaade uutest teadmistest. Vet. J. 2003, 165, 11–20. [CrossRef]

12. Durand, B.; Davila, S.; Cariolet, R.; Mesplède, A.; Le Potier, MF Sigade klassikalise katku viiruse aedikusisese ja -vahelise ülekandumise vireemia- ja kliinilistel põhinevate hinnangute võrdlus kolmest ülekandekatsest. Vet. Microbiol. 2009, 135, 196–204. [CrossRef]

13. Weesendorp, E.; Backer, J.; Stegeman, A.; Loeffen, W. Sigade katku viiruse tüve ja inokulatsioonidoosi mõju sulgusisesele levikule. Vet. Res. 2009, 40, 59. [CrossRef]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY Sigade klassikalise katku tõrje väljakutsed: modifitseeritud elu ja E2 subühiku vaktsiinid. Virus Res. 2014, 179, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. Endeemilistes piirkondades sigade klassikalise katku vastase vaktsineerimise edukaks vaktsineerimiseks kriitilised tegurid. Vet. Microbiol. 2007, 119, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Sigade klassikalise katku vaktsineerimine: laborist põllule. Vet. Microbiol. 2003, 96, 367–384. [CrossRef]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. Vaktsiinist põhjustatud neutraliseerivate antikehade tiitrite kaitseväärtus sigade katku korral. Vet. Microbiol. 1988, 16, 123–128. [CrossRef]

18. Vandeputte, J.; Liiga, HL; Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA Sigade klassikalise katku vastaste kolostraalantikehade adsorptsioon, emade antikehade püsivus ja mõju vaktsineerimisele vastsündinutel. Olen. J. Vet. Res. 2001, 62, 1805–1811. [CrossRef] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Antikehade jõudluse ja viiruse RNA olemasolu uurimine enne ja pärast sigade klassikalise katku vaktsiinitüve vaktsineerimist Taiwani seafarmides. Taiwani vet. J. 2010, 36, 45–54.

20. Mittelholzer1, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA Sigade klassikalise katku viiruse replikatsioonikineetika analüüs võimaldab eristada väga virulentseid tüvesid avirulentsetest tüvedest. Vet. Microbiol. 2000, 74, 293–308. [CrossRef]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Pöördtranskriptsiooni multipleksse reaalajas PCR väljatöötamine sigade klassikalise katku viiruse tuvastamiseks ja genotüpiseerimiseks. J. Virol. Methods 2009, 160, 111–118. [CrossRef]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, A.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, N.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Sigade klassikalise katku viiruse ja piirihaiguse viiruse glükoproteiini E2 ühise konformatsioonilise epitoobi tuvastamine. Viirused 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, HE; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, OA; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Drew, TW; Crooke, H. Sigade nakatumine sigade klassikalise katku viirustega pärast C-tüvega vaktsineerimist näitab märkimisväärselt kiiret kaitset ja teadmisi varajasest immuunsusest. PLoS ONE 2012, 7, e29310. [CrossRef]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, O.; Rocca, SAL; Lamp, B.; Rumenapf, T.; Everett, H.; Crooke, H. Vaktsiinist põhjustatud laiaulatuslikult ristreaktiivsete IFN-i sekreteerivate T-rakkude vastuste iseloomustus, mis korreleeruvad kiire kaitsega sigade katku viiruse vastu. Vaktsiin 2012, 30, 2742–2748. [CrossRef] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, M.; Damrongwatanapokin, S. Viirusspetsiifilise gamma-interferooni tootmise ja sigade klassikalise katku viirusinfektsiooni vastase kaitse korrelatsioon. Vet. Immunol. Immunopatool. 2001, 83, 177–189. [CrossRef] [PubMed]

26. Planas, D.; Veyer, D.; Baidaliuk, A.; Staropoli, I.; Guivel-Benhassine, F.; Rajah, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, N.; Puech, J.; et al. SARS-CoV-2 variandi delta vähenenud tundlikkus antikehade neutraliseerimise suhtes. Loodus 2021, 596, 276–280. [CrossRef]

27. Zhang, C.; Hu, J. Sigade reproduktiiv- ja respiratoorse sündroomi viiruse vaktsiinid: universaalse vaktsiini praegune staatus ja strateegiad. Transbound. Tekkima. Dis. 2014, 61, 109–120.

28. Andre, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemens, J.; Datta, SK; John, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, H.; Ruff, TA; et al. Vaktsineerimine vähendab oluliselt haigusi, puuet, surma ja ebavõrdsust kogu maailmas. Bull. Maailma terviseorgan. 2008, 86, 140–146. [CrossRef] [PubMed]

29. Rose, N.; Andraud, M. Vaktsiinide kasutamine patogeenide leviku tõkestamiseks seapopulatsioonides. Sigade tervisejuht. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, M.; Grasland, B.; Durand, B.; Cariolet, R.; Jestin, A.; Madec, F.; Rose, N. Sigade tsirkoviiruse tüüp 2 (PCV-2) kvantifitseerimine sigadel aedikus ja nende vahel. Vet. Res. 2008, 39, 43. [CrossRef]

31. Rose, N.; Andraud, M.; Bigault, L.; Jestin, A.; Grasland, B. Kaubanduslik PCV2-põhine vaktsiin vähendab oluliselt PCV2b ülekannet katsetingimustes. Vaktsiin 2016, 34, 3738–3745. [CrossRef]

32. Rose, N.; Renson, P.; Andraud, M.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. Porcine reproduktiiv- ja respiratoorse sündroomi viiruse (PRRSv) modifitseeritud elusvaktsiin vähendab viiruse levikut katsetingimustes. Vaktsiin 2015, 33, 2493–2499. [CrossRef]

33. Bouma, A.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Sigade klassikalise katku viiruse vastase E2 subühikuvaktsiini poolt esile kutsutud karjaimmuunsuse tekke määramine. Vaktsiin 2000, 18, 1374–1381. [CrossRef]

34. De Smit, AJ; Bouma, A.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Kimäärsed (marker) C-tüve viirused kutsuvad esile kliinilise kaitse virulentse sigade klassikalise katku viiruse (CSFV) vastu ja vähendavad CSFV ülekandumist vaktsineeritud sigade vahel. Vaktsiin 2001, 19, 1467–1476. [CrossRef] [PubMed]

35. Van Nes, A.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM Hästi immuniseeritud emise karjades ei esinenud suuri pseudorabiesviiruse puhanguid. Vaktsiin 1996, 14, 1042–1044. [CrossRef] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, arvuti; Nowacki, AS; Terpeluk, P.; Gordon, SM Koronaviirushaiguse 2019 (COVID-19) vaktsineerimise vajadus inimestel, kes on juba põdenud COVID-i-19. Clin. Nakata. Dis. 2022, 75, e662–e671. [CrossRef] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, E.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Morfoloogilised ja immunohistokeemilised muutused sigade klassikalise katkuga nakatunud sigade põrna makrofaagides. J. Comp. Pathol. 2001, 125, 98–109. [CrossRef]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, E.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC Sigade klassikalise katku viirusega nakatatud sigade soolestiku histopatoloogiline, immunohistokeemiline ja ultrastruktuurne uuring. Vet. Pathol. 2003, 40, 254–262. [CrossRef]

39. Sah, V.; Kumar, A.; Dhar, P.; Upmanyu, V.; Tiwari, AK; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, A.; Badasara, SK; Pandey, A.; et al. Kogu genoomi hõlmava geeniekspressiooni allkiri sigade katku viirusega nakatunud makrofaagides ja põlisrahvaste ristandsigade PBMC-des. Gene 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Perez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, O.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Krooniliste ja püsivate sigade klassikalise katku nakkuste uurimine välitingimustes ja nende mõju vaktsiini efektiivsusele. BMC Vet. Res. 2019, 15, 247. [CrossRef]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. Respiratoorse süntsütiaalviiruse püsivus makrofaagides muudab rakulise geeniekspressiooni profiili. Viirused 2012, 4, 3270–3280. [CrossRef]

42. Kruize, Z.; Kootstra, NA Makrofaagide roll HIV{1}} püsivuses ja patogeneesis. Esiosa. Microbiol. 2019, 10, 2828. [CrossRef]

43. Borca, MV; Gudmundsdottir, I.; Fernandez-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR Rakulise geeniekspressiooni mustrid sigade makrofaagides, mis on nakatunud väga virulentse sigade klassikalise katku viiruse tüvega Brescia. Virus Res. 2008, 138, 89–96. [CrossRef]