Tüvi-/eellasrakkude päritolu täiskasvanud neerudes

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

OSA Ⅱ: tüvirakud/eellasrakud neerus: omadused, kodustamine, koordineerimine ja hooldus

Jiewu Huang, Yaozhong Kong, Chao Xie ja Lili Zhou

OSAKS KLIKI SIIA Ⅰ

• Neerust pärinevad tüvirakud/eellasrakud

Paljud uuringud on näidanudneerud- tuletatudtüvi-/eellasrakudtäiskasvanulneerud, millest enamik ekspresseerib MSC markereid, nagu CD44 janeerudembrüonaalsete tüvirakkude (ESC) markerid, nagu CD24 ja Pax-2, kuid mitte liinispetsiifilised markerid [5, 9, 22, 24, 57, 58], võivad ise uueneda ja diferentseeruda mesodermaalseteks liinideks, sealhulgas adipogeenseteks. , osteogeensed ja kondrogeensed liinid. Selles on erinevusitüvi-/eellasrakuderinevates valdkondadesneerud(joonis 1).

• Neeru tüvirakud/eellasrakud glomerulites

Residenttüvi/eellasmesenhümaalsete fenotüüpidega rakke on leitud hiire ja inimese täiskasvanud glomerulites [59, 60]. Need rakud võivad teatud kultuuritingimustes diferentseeruda mesodermaalseteks liinideks, endoteelirakkudeks, podotsüütideks ja mesangiaalseteks rakkudeks. Teistest erinevneerud-tuletatud tüved/eellasrakud, nad ei ekspresseeri CD133. Need rakud ei näita mitte ainult MSC fenotüüpi, vaid ekspresseerivad ka ESC markereid CD24 ja Pax -2 [5, 9, 57], mis on BMSC-des negatiivsed. On leitud, et CD24tCD133 pluss -MSC-sarnased rakud Bowmani kapslis kuuluvad neerurakkudesse.tüvi-/eellasrakud[21, 22], kuid glomerulites olevad CD133 pluss rakud ei ekspresseeri CD24 ja MSC markereid ega suuda end ise uueneda [59]. Nende CD24tCD133-MSC-sarnaste rakkude päritolu kindlakstegemiseks eraldasid Bruno jt need naissoost retsipiendile siirdatud meesdoonori eksplanteeritud neeru glomerulitest ja leidsid, et kahekordne X-kromosoom ei sisalda 48-valitud MSC-laadsed rakud. Seetõttu uskusid nad, et need rakud olidneerud-residentsed MSC-d, mitte BMSC-d, mis paiknevadneerud. Teine artikkel näitab, et kuigi elanikneerudGlomerulitest pärinevad MSC-d võivad diferentseeruda mesodermaalseteks liinideks, need erinevad BMSC-dest. Võrreldes BMSC-dega, residentneerudMSC-del on pärast osteogeenseteks liinideks diferentseerumist pigem mineraliseeritud sõlmed, mitte kogu monokihi mineraliseerumine. Lisaks adipogeenne diferentseerumineneerud-residentsed MSC-d näivad olevat vähem tõhusad [60] ja tuvastasid kaudselt, et need tüvirakud ei ole pärit luuüdist.

• Neeru tüvirakud/eellasrakud Bowmani kapslis

Paljud uuringud on kinnitanud CD24tCD133t rakkude olemasolu Bowmani kapslis, eriti Bowmani kapsli uriinipooluses. Võrreldes kõigi teiste parenhüümirakkudeganeerud, on neil suurem resistentsus kahjulike ainete suhtes [20, 21, 61-63]. Nende allikat saame eristada neerude tõttutüvi-/eellasrakudBowmani kapslis ekspress CD106, kuidtüvi-/eellasrakudtuubulites mitte. Lisaks on CD133tCD24tCD106t rakkudel kõrgem proliferatsiooni kiirus kui CD106 negatiivse ekspressiooniga rakkudel. Need CD133*CD24tCD106t ekspressiooniga rakud eelistavad diferentseeruda podotsüütide liini fenotüüpide suhtes. tubulaarne li ja see kontrast, Autor .] CD133*CD24tCD106- eelistavad peamiselt tubulaarset liini diferentseerumist [21]. CD133*CD24'CD106* rakud paiknevad peamiselt Bowmani kapsli uriinipooluses, samas kui CD133*CD24'CD106-rakud ekspresseeritakse enamasti proksimaalsetes tuubulites, seega on nad üksteise lähedal. CD133tCD24tCD106-rakkude eneseuuendus- ja diferentseerumisvõime on väiksem kui CD106* rakkudel. Siiski ekspresseerivad nad mõlemad vimentiini, tsütokeratiini 7 ja tsütokeratiini 19, mis toob esile nende kahe raku sarnasuse [64]. CD133'CD24 pluss CD106- rakud võivad pärineda CD133tCD24'CD106* rakkudest ja see kujutab endast pühendunumat sammu täieliku diferentseerumise suunas tubulaarseks liiniks [21].

cistanche herbasaab ravidaneerudhaigusparandadaneerufunktsioon

Neerudtüvi/eellas rakudBowmani kapslis on eritüüpi parietaalsed epiteelirakud, millel on suur iseenesliku uuenemise ja mitmeliinilise diferentseerumise potentsiaal ning ekspresseerimine.neerudESC ja MSC marker CD44, kuid mitte liinispetsiifilised markerid [20, 22, 65]. Need rakud ekspresseerivad ka tüviraku-spetsiifilisi transkriptsioonifaktoreid Oct-4 ja Bmi-1[22].Oct-4 ekspresseeritakse tavaliselt ESC-des, et säilitada nende ebaküpset olekut ja see on vajalik sugurakkude pluripotentsus [66]. Bmi{11}} on täiskasvanu eneseuuendusvõime säilitamisel kriitiline tegurtüvi-/eellasrakud. Kmi{0}} kukkumine neerudestüvi-/eellasrakudpõhjustaks nende apoptoosi ja nende eneseuuendusvõime vähenemist [67]. Märkimisväärne on see, et eneseuuendus- ja eristumisvõime on asukohta arvestades erinevad. Nendel rakkudel, mis on Bowmani kapsli uriinipoolusele lähemal, on rohkem diferentseerumis- ja proliferatsioonivõimeid kui vaskulaarsele poolusele lähemal [20]. Kuna neerudetüvi-/eellasrakudBowmani kapselekspressisneerudESC markerid, seega peetakse neid ka jääkaineteksneerudtüvi-/eellasrakudpigem BMSC-de asemel.

Joonis 1. Neerus paiknevad mitmed tüvirakud/eellasrakud, mis asuvad neerus in situ või pärinevad vereringest, eriti luuüdist.Lisaks on nendes erinevusineerud- tuletatudtüvi-/eellasrakudarvestades nende asukohta.Tüvi-/eellasrakudglomerulites on CD24 pluss CD133-MSC-sarnased rakud. CD133 pluss CD24*CD106 plus -tüvi-/eellasrakudasuvad peamiselt Bowmani kapsli kuseteede pooluses. Kuseteede poolusele lähemal asuvatel rakkudel on rohkem tegevust kui veresoonte poolusele lähemal asuvatel rakkudel. CD133 CD24 pluss CD1067 rakud on tuubulites, eriti proksimaalsetes tuubulites, vähema mitokondrite ja vähema tsütoplasmaga ning ilma harjapiirita kui teised torukujulised epiteelirakud. Lisaks paiknevad tuubulites ka CD90 pluss Pax-2tCD133--MSC-sarnased rakud, Pax-2 pluss tuubulitaolised rakud ja Pax-8 pluss rakud. Eelkõige võivad Sox9Lgr4CD133 pluss Pax{13}} rakud, mis paiknevad peamiselt epiteeli polaarsuse ja harjaäärega proksimaalsetes tuubulites, eristuda proksimaalseteks tuubuliteks, Henle ahelaks ja distaalseteks tuubuliteks, kuid mitte kogumiskanaliteks. Nefroni S3 segmendis on rühm Pax-2*tüvi-/eellasrakud, millel on täiuslikud paranemisvõimalused, kuigi neil on ebaküps torukujuline epiteelitaoline fenotüüp. Neerupapill on ka nišš neeru tüvi-/eelasrakkude koduks suunamiseks. Need CD24 CD133 pluss spindlikujulised rakud asuvad peamiselt papilla välimises osas, mis on tuubulite vahetus läheduses. Lisaks on seal ka peritsüüdid ja CD133 pluss -neerud-resideerivad MSC-d, mis asuvad veresoone lähedal interstitsiumis

• Neeru tüvirakud/eellasrakud tuubulites ja interstiitium ajukoores

Seal ontüvi-/eellasrakudtuubulites, eriti proksimaalsetes tuubulites [5, 11, 21, 24, 64, 68]. Enamik neist on võimelised diferentseeruma tubulaarseteks epiteelirakkudeks ja isegi mesodermaalseteks liinideks, nagu adipogeensed, osteogeensed ja kondrogeensed liinid. Kuid sellel on endiselt erinevusi. Uuring näitab, et need rakud ekspresseerivad neerude ESC-markereid, nagu Pax-2, ja neil on spindlikujuline morfoloogia. Nendel rakkudel on CD90 ja CD44 positiivne ekspressioon, kuid need on CD{10}}negatiivsed [5]. Teised uuringud näitavad sedatüvi-/eellasrakudtuubulites on Pax{0}}, samuti mõned MSC-marker-positiivsed, kuigi nende ja teiste torukujuliste rakkude vahel pole morfoloogilist erinevust [11]. Uuring näitab ka, et nad ekspresseerivad CD44 ja neerude MSC markereidtüvi-/eellarakkmarker Pax-8. Neil on tugev iseenesliku uuenemise ja tuubulite epiteelirakkudeks diferentseerumise võime. Huvitaval kombel võib neid indutseerida ka in vitro diferentseeruma mesodermaalseteks liinideks [24].

Enamik uuringuid on näidanud, et on olemas CD24'CD133*-tüvi-/eellasrakudtuubulites, mis võivad regenereerida tubulaarseid rakke ja pärast seda parandada neerufunktsioonineerudvigastus [21,63,64,69]. Neil on võime ise uueneda ja diferentseeruda torukujulisteks rakkudeks [21]. Kuigi need on Pax-2 ja CD44-negatiivsed, võivad nad ekspresseerida vimentiini, tsütokeratiini 7 ja tsütokeratiini 19, millest ükski ei ekspresseeru diferentseerunud proksimaalsetes epiteelirakkudes [63, 64]. Veelgi enam, võrreldes tubulaarsete epiteelirakkudega on neil vähem mitokondreid ja vähem tsütoplasmat ning neil pole pintsli piire. Mõned teadlased arvavad, et on ka võimalus, et see fenotüüp on pintsli piiri kaotamise tagajärg, kuna need rakud on dediferentseerunud mesenhümaalsema fenotüübi suunas. Selle tulemusena võib neid rakke tavaliselt ekslikult pidada neerurakkudekstüvi-/eellasrakudtuubulites [63,69].

On leitud, et Sox9* rakud on täiskasvanudneerud, millel on suur vohamise ja mesodermaalse liini diferentseerumisvõime [70]. Needtüvi-/eellasrakudpaiknevad peamiselt proksimaalsetes tuubulites ning neil on epiteeli polaarsus ja harjapiir [68]. Need rakud ekspresseerivad CD133 ja Lgr4, eellasrakkude markereid, kuid neil on negatiivne Pax-2 või tavaliste MSC markerite ekspressioon. Need võivad erineda proksimaalseteks tuubuliteks, Henle ahelaks ja distaalseteks tuubuliteks, kuid mitte kogumiskanaliteks. Sox9t rakud leitakse varases staadiumisneerudarenevad ja kaovad kiiresti pärast sündi. Neil on suur vohamisvõime ja nad on peamised tuubulite paranemise soodustajad pärastneerudvigastus. Kuna enamik epiteelirakke, välja arvatud kogumiskanalites ja glomerulites olevad, on Sox9t rakkude järeltulijad.neerud, on uuringutes erinevad argumendid Sox9 pluss rakkude arvu suurenemise kohta pärastneerudvigastus. Nad arvavad, et kuigi enamik Sox9t rakkude järeltulijaid ei ekspresseeri enam normaalselt Sox9 geenineerud, aktiveeritakse see pärastneerudvigastus. Teadlased arvavad, et Sox9 de novo aktiveerimine, mitte Sox9t elanike arvu laienemine, aitab kaasa rohkem taastumisele.neerud[68, 70, 71].

Pax-2t-rakud on leitud nefroni S3 segmendist, mida iseloomustab tubulaarsete epiteelirakkude ebaküps fenotüüp ning eellas- ja mesenhümaalsete rakkude markerite ekspressioon. Nendel rakkudel on iseenesliku uuenemise, diferentseerumise ja kudede parandamise võime. Nad võivad taastada kolmemõõtmelisi nefronilaadseid struktuure, sealhulgas glomeruleid, proksimaalseid tuubuleid, Henle ahelat, distaalseid tuubuleid ja kogumiskanaleid, kuid mitte veresoonkonda. Samuti võivad nad migreeruda vigastatud piirkondadesse ja diferentseeruda in vivo küpseteks tubulaarseteks epiteelirakkudeks [3, 72, 73].

CD133* rakud MSC-ga janeerudESC markerid paiknevad täiskasvanul interstitsiumisneerudajukoor. Need rakud võivad diferentseeruda epiteeli- või endoteelirakkudeks ja kasvada torukujulisteks struktuurideks või funktsionaalseteks veresoonteks, kuid neil on piiratud eneseuuendusvõime [10]. Kuna nad ei ekspresseeri hematopoeetilisi markereid CD34 ja CD45, võivad need ollaneerudpäritolu. Siiski on tehtud ka ettepanek, et need rakud võivad pärineda luuüdist pärinevast populatsioonist, mis on olnud koduksneerudkaua aega tagasi. Seetõttu on nad kaotanud oma hematopoeetilise päritolu markerid.

cistanche tubulosajaoksneerud

• Neeru tüvirakud/eellasrakud medulla papillas ja interstitsiumis

Neerupapill on täiskasvanud neerude nišštüvi-/eellasrakud[15,18,74-76]. Need CD24*CD133* spindlikujulised rakud ekspresseerivad koos MSC-markereid, nagu tüviraku antigeen-1 (Sca-1) ​​ja epiteelivalke, neil on kõrge telomeraasi aktiivsus ning nad võivad diferentseeruda mesodermaalseteks liinideks ja endoteelirakud [15,18]. Need rakud asuvad peamiselt papilla välimises osas, tuubulite vahetus läheduses ja mõned külgnevad torukujulise basaalpinnaga. Neid rakke võib vähemal määral leida ka ajukoores ja medullas [15]. Pärast neerukahjustust nad vohavad ja rändavad vigastatud piirkondadesse tuubulite parandamiseks, kuigi nende generatiivne võime on piiratud.

Lee et al. leidis ka, et seal on mõned spindlikujulised rakudneerudESC markerid medulla interstitsiumis. Need rakud võivad in vitro diferentseeruda endoteeli-, osteoblasti- ja tubulaarseteks epiteeliliinideks. Lisaks on nad võimelised diferentseeruma endoteelirakkudeks ja tubulaarseteks rakkudeks ning säilitama neerufunktsiooni pärast isheemilist neerukahjustust [19].

• Ülejäänud embrüonaalsed neeru tüvirakud/eellasrakud

Neerude eellasrakud inimese embrüodesneerudexpress CD24 ja CD133 ning neil on iseenesliku uuenemise ja mitme liini eristumisvõime. Nagu enamik neerusidtüvi-/eellasrakud, need rakud ekspresseerivad MSC-d janeerudESC markerid, kuid mitte hematopoeetilised markerid, nagu CD45. Nad ehitavad inimese ürgse nefroni varajases staadiumis, kuid kaovad nefroni arengu käigus järk-järgult, samal ajal kui jäänukneerudESC-d, mis paiknevad peamiselt Bowmani kapsli uriinipooluses, tähistavad<2% of="" whole="" cells="" in="" the="" adult="">neerud[23]. Need rakud võivad aga erineda mitut tüüpineerud-residentrakkudesse ja isegi mesodermaalsetesse liinidesse. Pärast AKI-d võib neerude eellasrakkude manustamine tõhustada kudede paranemist ja indutseerida neerufunktsiooni ja struktuuri taastumist. Kuna enamik neerutüvi-/eellasrakudneil on embrüo omaga sarnane fenotüüpneerudtüvi-/eellasrakud, neeru-CD24tCD133tüvi-/eellasrakudtäiskasvanulneerudvõivad kõik pärineda neerude ESC-dest [23].

• Neerude tüvi-/eellasrakud ja neerudes elavad MSC-d

Residendist MSC-d on isoleeritud ka täiskasvanutestneerud. Nende omadused on sarnased ESC-de omadega. Need rakud on võimelised diferentseeruma paljudeks liinideks, sealhulgas mesodermaalseteks liinideks, endoteelirakkudeks ja erütropoetiini tootvateks fibroblastideks. Pärastneerudvigastused, rändavad nad sisseneerudja soodustavad neerufunktsiooni taastumist [77-79]. Mõned teadlased usuvad, et MSC-sarnased neerudtüvi-/eellasrakudembrüonaalses ja täiskasvanueasneerudon ainult residendist MSC-d riigisneerud, sealhulgas glomerulites, tuubulites, interstitsiumis ja papillas [13]. Lisaks on välja pakutud, et neerudes elavad MSC-d pärinevad perivaskulaarsetest rakkudest [60], mis selgitab, miks neerudtüvi-/eellasrakudsaab eraldada paljudest osadestneerudja nende MSC-sarnane välimus.

Peritsüüdid, mis on vaskulaarsed seinamaalingud, millel on angiogeneesi funktsioonneerud[80], moduleerivad veresoonte stabiliseerimiseks endoteeli fenotüüpi ja ekstratsellulaarse maatriksi koostist. Mesangiaalseid rakke kirjeldatakse kui glomerulus-spetsiifilisi peritsüüte [81]. Pange tähele, et mõningaid peritsüütide markereid, nagu CD146 ja CD73, ekspresseeritakse ka MSC-des [13]. Seetõttu arvatakse, et peritsüüdid, millel on mesodermaalse liini diferentseerumise potentsiaal, on neerudtüvi-/eellasrakudja neid peetakse kapillaaride seinte ümber asuvateks MSC-deks [13, 82-84].

Mõnda tüüpilisi MSC markereid ekspresseerivaid veresoonkonna ümber olevaid Gli1 plussrakke peetakse ebaküpseteks peritsüütideks. Neil on mesodermaalne diferentseerumisvõimeneerudja sellele palju kaasa aidataneerudfibroos. On selgunud, et umbes 45 protsenti müofibroblastidestneerudon saadud nendest Glil* MSC-sarnastest rakkudest[80]. Teine uuring on samuti näidanud, et peritsüüdid on müofibroblastide peamine allikasneerud[85]. Need viitavadtüvi-/eellasrakudvõib lisaks parandamisele olla ka halbu kõrvalmõjusid.

cistanche varre eelisedjaoksneerud

• Tsirkuleerivad luuüdist pärinevad tüvirakud/eellasrakud, mis suunduvad täiskasvanud neerudesse

Luuüdist saadudtüvi-/eellasrakud(BMDC-d) võivad vabaneda luuüdist perifeersesse verre ja seejärel liikuda vigastatud piirkonda, et parandada neerufunktsiooni pärast seda, kui neid meelitavad erinevad kasvufaktorid ja vigastatud piirkonnast vabanevad põletikulised tsütokiinid [53, {{1} }]. On teatatud, et meespatsientidel, kes on saanud aneerudnaisdoonorilt siirdamisel on mõned Y-kromosoomiga BMDC-dneerudtubulaarse epiteeliraku või podotsüütide fenotüübi ekspressiooniga. See näitab, et ringlevad BMDC-d võivad olla koduksneerudja diferentseeruvad tubulaarseteks epiteelirakkudeks ja podotsüütideks [91]. Imasawa et al. Samuti leiti, et pärast täiustatud rohelise fluorestsentsvalguga (EGFP) märgistatud BMDC-de sabaveeni süstimist ja sellele järgnevat piisavat perfusiooni PBS-iga, et eemaldada glomerulites ringlevad EGFP pluss rakud, on ülejäänud EGFP pluss rakkudel mitmeid glomerulaarsete mesangiaalrakkude omadusi ja markereid. Nende arv suureneb ajast sõltuval viisil, mis viitab sellele, et BMDC-d omavad võimet migreerudaneerudja transdiferentseeruvad pärast seda mesangiaalseteks rakkudeksneerudvigastus [92].

On teatatud, et BMDC-d võivad sulanduda somaatiliste rakkudega [93, 94], mis võib samuti viia BMDC markerite ja somaatiliste rakkude markerite esinemiseni samades rakkudes. Kuid need uuringud ei suuda selgitada, kas selles uuringus tuvastatud endoteelirakud, tubulaarsed epiteelirakud, podotsüüdid ja glomerulaarsed mesangiaalrakud tulenevad transdiferentseerumisest või rakkude liitmisest [91, 92, 95-99]. Sellele küsimusele vastamiseks viidi läbi uuring emaste hiirte luuüdi siirdamine isastele Fah-/- hiirtele. Peremeesmarkeri Y-kromosoomi olemasolu Fah* tuubulites, doonormarkeris, viitaks rakkude sulandumisele. Uuring näitab, et vähemalt pooled luuüdist pärinevatest tubulaarsetest epiteelirakkudest tekivad rakkude liitmise teel. Kuid Fah pluss Y-tuubulaarsed epiteelirakud võivad tekkida ka rakkude liitmisel, mitte BMDC-de otsesel transdiferentseerumisel, kuna see võib olla vähenenud jagunemise, Y-kromosoomi kadumise või koelõike analüüsi kunstlike piirangute tagajärg. 100].

Pärast isashiire HSC-de manustamist emastele isheemilistele hiirtele on mõnedel rakkudel neerude proksimaalne torukujuline raku fenotüüp ja Y-kromosoom, mis näitab, et HSC-sid saab värvata ja transdiferentseeruda tubulaarseteks epiteelirakkudeks [87, 101, 102]. Teine uuring näitab, et HSC-d võivad samuti transdiferentseeruda glomerulaarseteks mesangiaalrakkudeks [103]. Kuna rakkude sulandumise sagedus on 10-kraadise luuüdi rakkude kohta haruldane ja HSC-st pärinevate rakkude arv ületab oluliselt rakkude liitmise sagedust, usuvad teadlased, et HSC-d tõenäoliselt rakkude liitmises ei osale, kuigi see ei saa olla täielikult välistatud [87]. Ikarashi et al. leidis, et pärast EGFP pluss -luuüdi rakkude manustamist progresseeruva glomeruloskleroosi rotimudelis ekspresseerivad mõned glomerulaarsed endoteelirakud endoteelirakkude markereid PECAM-1 või RECA-1 koos EGFP kolokalisatsiooniga, mis viitab EPC-d glomerulaarsete endoteelirakkude ringluses [104]. Teised uuringud näitavad ka, et EPC-d vigastatutelneerudvõib diferentseeruda endoteelirakkudeks ja aidata kaasa glomerulaarsete kapillaaride taastumisele [89, 105-107]. Teadlased usuvad, et EPC-st pärinevad rakud on altid pigem transdiferentseerumisele kui rakkude sulandumisele, kuna rakkude liitmine on väga madala sagedusega sündmus. EPC-st pärinevate rakkude arv ületab oluliselt rakkude liitmise sagedust. Veelgi enam, rakkude liitmine tooks kaasa raku funktsiooni kadumise ja EGFP madalama ekspressiooni, mis on vastuolus selle olulise ravitoimega[104]. Ezquerra et al. leidis, et pärast EGFP pluss -BMSC-de sabaveeni süstimist avaldavad nad diabeetilise nefropaatia hiirtele renoprotektiivset toimet. EGFP plus -BMSC-d leiate jaotisestneeruddiabeetiliste hiirte puhul, samas kui need on tavalistel hiirtel tuvastamatud, mis viitab sellele, et vigastatudneerudvõiks värvata BMSC-sid [41]. Teine uuring näitab, et pärast EGFP-positiivsete rottide luuüdi siirdamist metsiktüüpi rottidele transdiferentseerub BMSC mesangiaalseteks rakkudeks, et pakkuda glomerulaarsetele kapillaaridele struktuurset tuge [108]. Teised uuringud näitavad ka, et BMSC-d on võimelised transdiferentseeruma podotsüütideks, mesangiaalseteks rakkudeks, tubulaarseteks epiteelirakkudeks jne nii in vitro kui ka vivo [88,109-111]. Kuigi rakkude liitmine on madala sagedusega sündmus ja see on vastuolus oluliste terapeutiliste toimetega, ei saa seda täielikult välistada, pidades seda parandusrežiimiks.

cistanche taimjaoksneerud

Ⅲ OSAKS KLIKI SIIA