Spontaanne granulotsüütiline leukeemia NOD/Shi-scid IL-2R null hiire korral

Abstraktne:Siin teatame spontaanse granulotsüütilise leukeemia juhtumist 51-nädalasel mehel NOD/Shi-scidIL-2R null (NOG) hiir. Hiir näitasprogresseeruv aneemiajakarm hingamisteede liikumine. Makroskoopiliselt oli põrn värvunud ja suurenenud. Histoloogiliselt luuüdirinnakuja reieluu oli väga rakuline ja peaaegu eranditult täidetudneoplastilised rakud. Neoplastiliste rakkude tuumad olid suured, ovaalsed kuni veidi ebakorrapärase kujuga ja vähesel arvul rakkudel olineerud- või rõngakujulised tuumad.Neoplastilised rakudtungis ulatuslikult organitesse ning põrn ja maks olid silmapaistvalt kaasatud. Immunohistokeemiliselt oli suur neoplastiliste rakkude populatsioon põrna punases pulbis ja maksa sinusoidis positiivnemüeloperoksüdaas. Histoloogiliste tunnuste põhjal diagnoositi see juhtumgranulotsüütiline leukeemia. See uudne teave selle kohtaspontaansed kasvajadvõib olla abiks selle hiiretüve asjakohaseks kasutamiseks edasistes uuringutes. (DOI: 10.1293/tox.{2}}; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Märksõnad: granulotsüütiline leukeemia, NOG hiir, spontaanne kasvaja

25% EHHINAKOSIIDI JA 9% AKTEOSIIDIGA LOODUSLIK ORGAANILINE KISTANŠEKSTRAKT NEERUTUNGIMISEKS KLÕPSA SIIA

Wecistanche'i tugiteenus - Hiina suurim tsistanšeksportija:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Lisateabe saamiseks ostke:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontaanne granulotsüütiline leukeemiaon harva teatatud mitmete hiiretüvede puhul, kuigi keemilised ained ja ioniseeriv kiirgus võivad mõnede hiiretüvede esinemissagedust suurendada1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) hiired on tõsiselt haiged.immuunpuudulikkusega loomad, ning esinevad defektid T-, B- ja looduslikes tapjarakkudes ning halvasti funktsioneerivates makrofaagides ja dendriitrakkudes IL-2 retseptorahela (IL2R c) katkestamise tõttu NOD-scid tüve3. Seda hiiretüve kasutatakse mittekliinilistes testides, näiteks tuumorigeensuse testis, et hinnata regeneratiivse meditsiini bioloogiliste toodete kvaliteeti ja ohutust, kasutades inimeselt saadud rakke/kudesid, kuna ksenogeensed rakud on märkimisväärselt paremad 4–6. Kuigi immuunpuudulikkuse seisundit ja selle mõju ksenotransplantaatidele on hästi uuritud, on selles hiiretüves esinevate spontaansete kasvajate kohta vähe teavet, nagu tüümuse lümfoom,piimanäärmednääre adenoom/adenokartsinoom, bronhioloalveolaarne kartsinoom, rabdomüosarkoomja teratoom7. Siin kirjeldame granulotsüütilise leukeemia juhtumit 51-nädalasel isasel NOG-hiirel.

Loom saadi ettevõttest In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Jaapan) 6 nädala vanuselt ja teda hoiti ravimata. Looma hoiti individuaalselt individuaalselt ventileeritava puurisüsteemiga (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokyo, Jaapan) plastpuuris keskkonnakontrolliga tõkkesüsteemi ruumis, mille temperatuur hoiti 22 ± 2 kraadi juures. õhuniiskus 50 ± 20% ja 12-h valguse/pimeduse tsükkel. Hiirt toideti autoklaavitud graanulitega dieediga (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokyo, Jaapan) autoklaavitud kraaniveega ja libitum. Looma käideldi vastavalt protokollile, mille on heaks kiitnud AAALAC Internationali akrediteeritud CMIC Pharma Science Co., Ltd. institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee.

Sellel hiirel ilmnesid 49–51 nädala vanused nõrgenemise kliinilised tunnused, nagu aneemia, hingamisraskused ja kehakaalu langus. Loom surmati 51 nädala vanuselt. Lahkamisel oli põrn värvunud ja suurenenud. Teistes elundites ei täheldatud ilmseid ebanormaalseid leide. Harknääre ja lümfisõlm olid atroofilised, sarnaselt normaalsete NOG hiirte omadega.

Kõik elundid ja koeproovid koguti rutiinselt, fikseeriti 10% neutraalses puhverdatud formaliinis, sisestati parafiini ja lõigati umbes 3 μm. Tema patoloogiliseks uurimiseks värviti lõigud hematoksüliini ja eosiiniga (HE). Põrna ja maksa lõigud värviti immunohistokeemiliselt küüliku anti-inimese müeloperoksidaasi (MPO) polüklonaalse antikeha (Dako Jaapan, Tokyo, Jaapan) kui müeloidraku markeri, küüliku inimese CD3-vastase monoklonaalse antikeha (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Jaapan) suhtes. ) T-raku markerina ja küüliku anti-inimese Pax{6}} monoklonaalset antikeha (Abcam Inc., Cambridge, UK) B-raku markerina8. Sektsioone inkubeeriti antikehadega toatemperatuuril 1 tund ja immuuntuvastus viidi läbi, kasutades Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.), kasutades kromogeenina 3,3'-diaminobensidiini/H202. Immuunvärvitud lõigud olid siisvärvitud hematoksüliiniga.

Histopatoloogiliselt oli rinnaku ja reieluu luuüdi väga rakuline ja peaaegu eranditult täidetud neoplastiliste rakkudega (joonis 1A). Rasvkude oli täielikult nihkunud. Aeg-ajalt esines luuüdis erütroid- ja megakarüotsüütilistest elementidest koosnevaid rakulisi koldeid, mida peeti luuüdi jäänusteks.normaalne vereloome. Enamikul neoplastilistel rakkudel oli blastne välimus, mida iseloomustasid suured, ovaalsed kuni veidi ebakorrapärase kujuga tuumad ja retikulaarne kromatiin, mis sisaldas ühte või mitut silmapaistvat tuuma. Seal oli väike arv neeru- või rõngakujuliste tuumadega rakke ja mõned lobed tuumadega rakud (joonis 1B). Graanulid neoplastiliste rakkude tsütoplasmas ei olnud HE-ga värvitud lõikudes ilmsed. Luuüdist leiti arvukalt mitootilisi figuure ja aeg-ajalt täheldati ka apoptootilisi kehasid. Neoplastilised rakud tungisid märgatavalt periosti ja ümbritsevasse skeletilihasesse. Neoplastilised rakud infiltreerusid ulatuslikult teistesse organitesse ja kudedesse ning põrn ja maks olid silmatorkavalt kaasatud. Põrnas täheldati neoplastilisi rakke kogu punase pulbi ulatuses (joonis 2). Neoplastiliste rakkude kapslite infiltratsioon oli ilmne. Täheldati mõnda arenevat erütroidi seeriat ja megakarüotsüüte. Aeg-ajalt täheldati megakarüotsüüte, mis sisaldasid tsütoplasmas ühte või mõnda müeloidrakku, mis viitab emperipoleesile. Maksas infiltreerusid neoplastilised rakud difuusselt Glissoni kapslisse ja maksa sinusoididesse (joonis 3). Mõnedes veresoontes ilmnesid ka neeru- või rõngakujuliste tuumadega neoplastilised rakud. Mõned periportaalse piirkonna hepatotsüüdid, millel oli silmapaistev neoplastiliste rakkude infiltratsioon, näitasid degeneratsiooni või nekroosi, samas kui maksasagara normaalne struktuur jäi puutumatuks. Neoplastiliste rakkude infiltratsioon leiti ka teistes elundites, sealhulgas kopsu alveolaarseinas ja perivaskulaarses piirkonnas, neerude interstaadiumis, neerupealistes sinusoidis ning maotraktis (maos ja sooltes) limaskestas ja submukoosis. Immunohistokeemiliselt oli suur neoplastiliste rakkude populatsioon põrna punases pulbis (joonis 4) ja maksa sinusoidis MPO suhtes positiivne. CD3 ja Pax-5 positiivseid rakke ei tuvastatud. CD3 ja Pax-5 immunovärvimise tulemused olid sarnased normaalsete NOG-hiirte põrna tulemustega, mis olid histoloogiliselt hüpoplastilised ega näidanud CD3- ega Pax{13}}-positiivseid rakke.

Immunohistokeemiline uurimine näitas, et neoplastilised rakud pärinesid müeloidrakkude liinidest. Mõnes asjaomastes piirkondades, eriti põrnas ja maksas, oli vähesel arvul rakkudel neeru-, rõngas- või lobed kuju, mis viitab diferentseeruvale müeloidseeriale. Need leiud viitavad sellele, et neoplastilised rakud pärinevad ebaküpsetest granulotsüütidest. Raske müelopoeesi juhtum võib ilmneda igat tüüpi arenevate müeloidsete seeriate olemasolust, erinevalt ebaküpsete rakkude domineerimisest leukeemia korral. Lisaks on progresseeruv aneemia granulotsüütilise leukeemia tavaline kliiniline tunnus ning erütroid- ja megakarüotsüütide rakkude arvu suurenemine on nõrk1. Vähene granulotsüütide populatsioon, mille tuumad on kahjustatud piirkonnas ilma ilmse põletikuta, näitavad, et käesoleva juhtumi leiud on neoplastilised ja mitte reaktiivsed müelopoeesid.

Granulotsüütilise leukeemia korral võib luuüdi asendada ebaküpsete ja küpsete müeloidrakkudega. Eelmises aruandes teiste hiiretüvede kohta infiltreerusid need neoplastilised rakud täielikult maksa, põrna, lümfisõlmedesse jne2 ning need põrna ja maksa rakud paiknesid peamiselt punases viljalihas ja Glissoni kapsli ümber1. Seega oli leukeemiliste rakkude jaotus käesoleval juhul identne eelmise juhtumiga. Rakkude morfoloogia põhjal liigitatakse hiirte granulotsüütleukeemia kahte tüüpi: juveniilne tüüp, mis on võrreldav inimese ägeda müelogeense leukeemiaga, ja küps tüüp inimese kroonilise müelogeense leukeemiaga1. Juveniilsel juhul domineerisid luuüdi, põrna ja maksa neoplastilistes rakkudes halvasti diferentseerunud rakud, samas on näha erinevat küpsemisastet esindavaid müeloidelemente ja müeloblastide protsent oli mõnel küpsel juhul madal2, 9. Käesoleval juhul domineeris leukeemilistes rakkudes ebaküps vorm suurte, ovaalsete kuni kergelt ebakorrapärase kujuga tuumadega. Lisaks, võttes arvesse kliinilisi leide, et üldine tervise halvenemine, sealhulgas progresseeruv aneemia ja raske respiratoorne liikumine, arenes ägedalt; seetõttu eeldatakse, et käesolev juhtum on alaealine.

Joonis 1. Reieluu luuüdi histoloogilised kujutised. V: Neoplastilised rakud vohavad difuusselt, asendades seeläbi luuüdi. B: tuumad on suured, ovaalsed kuni veidi ebakorrapärase kujuga. Väikesel arvul rakkudel on neeru- (kollane nooleots), rõnga- (roheline nooleots) või labakujulised (valge nooleots) tuumad. Mitootilist figuuri näitab valge nool. TE plekid. Must riba=50 μm (A), 10 μm (B).

Eelmises NOG-hiirte kohta avaldatud publikatsioonis olid neoplastilised kahjustused üldiselt aeg-ajalt; aga tüümuse lümfoomist on teatatud 0,82% vanuserühmas vanuses 16 kuni 40 nädalat7, 10. Meie teadmiste kohaselt ei ole NOG hiirtel varem teatatud spontaansest granulotsüütilisest leukeemiast. Mitmete hiirte tüvede puhul, sealhulgas B6C3F1 ja BALB/c, esines granulotsüütilist leukeemiat harva2, 11 ja nende hiirte puhul ei ole seda kirjeldatud 12 kuu vanuste või nooremate hiirte puhul. Käesoleval juhul tekkis granulotsüütiline leukeemia 51 nädala vanuselt, mis oli suhteliselt noor vanus. See uudne teave spontaansete kasvajate kohta võib olla abiks selle hiiretüve asjakohaseks kasutamiseks edasistes uuringutes.