Soospetsiifiline kaasasündinud immuunsus ja vananemine pikaealiste mageveekilpkonnade (Kinosternon Favescens: Kinosternidae) puhul

Abstraktne

Taust

Immuunsüsteemi järkjärgulist dereguleerimist vanusega, mida nimetatakse immunosensentsiks, on imetajate süsteemides hästi uuritud, kuid pikaealiste metsikute mitteimetajate populatsioonide immuunfunktsiooni uuringuid on vähe. Selles uuringus kasutame 38-aastast tagasipüüdmise uuringut, et kvantifitseerida pikaealiste roomajate ja kollamudakilpkonnade vanuse, soo, ellujäämise, paljunemisvõime ja kaasasündinud immuunsüsteemi vahelisi seoseid (Kinosternon favescens;Testudiinid; Kinosternidae).

cistanche toidulisandi eelised - suurendavad immuunsust

meetodid

Hindasime ellujäämismäära ja vanusepõhist suremust soo järgi 1530 täiskasvanud naise ja 860 täiskasvanud mehe üle 38 aasta vanuste tabamisandmete põhjal. Analüüsisime 200 täiskasvanul (102 naist; 98 meest) bakteritsiidset pädevust (BC) ja kahte immuunvastust võõraste punaste vereliblede suhtes – loomulikku antikehade poolt vahendatud hemaglutinatsiooni (NAb) ja komplemendi vahendatud hemolüüsivõimet (Lys). 7–58-aastased, kes püüti 2018. aasta mais, kui nad tärkasid ja mille kohta olid olemas andmed sigimise kohta ja pikaajalised jäljed.

Tulemused

Leidsime, et selles populatsioonis on naised väiksemad ja elavad kauem kui mehed, kuid suremuse kiirenemise määr täiskasvanueas on mõlema soo puhul sama. Seevastu meestel oli kõigi kolme mõõdetud immuunmuutuja puhul suurem kaasasündinud immuunsus kui naistel. Kõik immuunvastused varieerusid ka pöördvõrdeliselt vanusega, mis näitab immunosestsentsi. Eelneval sigimishooajal siginud emasloomade munamass (ja seega ka siduri kogumass) suurenes vanusega. Lisaks bakteritsiidse pädevuse immunosestsentsile oli väiksemaid sidureid tootnud emastel ka madalam bakteritsiidne pädevus.

Järeldused

Vastupidiselt selgroogsete üldisele mudelile, mille immuunvastus on meestel madalam kui naistel (mis peegeldab tõenäoliselt androgeenide supresseerivat toimet), leidsime meestel kõigi kolme immuunmuutuja kõrgema taseme. Lisaks avastasime vastupidiselt varasemale tööle, mille puhul ei leitud mingeid tõendeid värvitud kilpkonnade või punakõrv-kilpkonnade immunosestsentsi kohta, bakteritsiidse pädevuse, lüüsivõime ja looduslike antikehade vähenemise koos vanusega kollamuda kilpkonnade puhul.

Märksõnad

Kaasasündinud immuunfunktsioon, roomaja, vananemine, soopõhine, vananemine

cistanche toidulisandi eelised - suurendavad immuunsust

Taust

Paljude selgroogsete süsteemide vananemist iseloomustab organismi vananemine – füsioloogiliste ja rakuliste protsesside efektiivsuse ja jõudluse vähenemine [1], mis viib vanusega seotud elulemuse ja viljakuse languseni [2]. Selgroogsete metsikute populatsioonide vananemise uuringud on sageli keskendunud vanusega seotud muutuste kvantifitseerimisele viljakuses ja suremuses [3], kuid harvemini füsioloogilistele mehhanismidele, mis võivad sellisele demograafilisele vananemisele kaasa aidata (nt [4–6]). Üks selline kandidaadi füsioloogiline mehhanism on immuunfunktsioon, mis mängib ellujäämisel olulist rolli. On näidatud, et vähenenud immuunfunktsioon mõjutab negatiivselt ellujäämist ja paljunemist [6–8]. Immuunsüsteemi järkjärgulist deregulatsiooni vanusega, mida nimetatakse immunosensentsiks, on inimestel hästi uuritud nii kaasasündinud immuunsuse (mille düsregulatsioon vanusega võib põhjustada kroonilist põletikku [9]) kui ka omandatud immuunsuse puhul, kus kõige paremini uuritud muutused on mälu T-rakkude arvu suurenemine ja naiivsete T-rakkude arvu vähenemine vanuse kasvades (kuid ka siin on immunosenstsents endiselt mõistatuslik [10]). Siiski ei ole kirjanduses hästi kirjeldatud pikaealiste, metsikute ja mitteimetajate populatsioonide immuunsüsteemi vanusepõhiseid muutusi ning roomajate immunosensentsile keskenduvad uuringud on isegi haruldased (vaadatud artiklis [8]). Organismi vananemine, mis põhjustab populatsioonide demograafilist vananemist, arenes looduses. Seega on looduslike populatsioonide uuringud hästi paigutatud, et paljastada evolutsiooniliselt konserveerunud vananemisprotsesse, mis on vananemise võimalikud piirangud. Samal ajal pakub looduses organismide ja demograafilise vananemise uurimine realistlikku ökoloogilist konteksti ja näitab, mil määral on vananemismehhanismid paindlikud. Eelkõige on roomajatel palju omadusi, mis soovitavad neid vananemismehhanismide, sealhulgas immunosenstsentsi, uurimiseks. Esiteks on nad imetajate sõsarklaad, mis koos moodustavad amniootide monofüleetilise klaadi; immuunfunktsioon ja raku signaalirajad on amniootides väga konserveerunud (vaadatud punktis [11]). Teiseks on roomajatel mitmeid fenotüüpe, mis võimaldavad uurida vananemist erinevates füsioloogilistes ja morfoloogilistes kontekstides, mis ei ole enamiku imetajate liikide puhul võimalik (nt hüpoksiakindlus, külmutaluvus, mürk, soomus, kuumataluvus, mida käsitletakse artiklis [8) ]). Roomajad, välja arvatud linnud, on poikilotermilised ja paljud jätkavad täiskasvanuna kasvamist (nt [12], kuid vt [13]) ja suurendavad nende viljakust vanuse kasvades ([14–17], ülevaade [8]). Lisaks on paljudel roomajate liinidel ainulaadsed morfoloogilised tunnused. Viimaste näidete hulka kuuluvad kaitsefenotüübid – näiteks kilpkonnade välised roieteed ja mõnede madude mürk. Hiljutised fülogeneetilised analüüsid suremuse vananemise määra kohta näitasid tugevat toetust hüpoteesile, et kaitsvate fenotüüpidega roomajate suguvõsadel oli pikem eluiga ja aeglasem vananemine kui sarnase suurusega imetajatel, eriti kilpkonnade puhul [18] (vt ka [19, 20]). Tõepoolest, 300 looduslikust proovist võetud tetrapoodide liigist [18] olid kilpkonnad ainulaadsed selle poolest, et kogu suguvõsa iseloomustasid liigid, mille suremus vananeb ja eluiga oli pikk – see tunne peegeldub vangistuses [21]. Arvestades, et kasv (ja seega ka viljakus) võib jätkuda kogu täiskasvanud eluea jooksul, võib hilisealiste fenotüüpidega kahjulike mutatsioonide vastane valik olla kilpkonnade ja teiste nende omadustega roomajate vanemas eas tugevam, võrreldes imetajatega (nagu [22]). Need tunnused viitavad sellele, et immunosenstsents ei pruugi roomajatel avalduda samal viisil võrreldes teiste amnioni selgroogsetega, nagu imetajad või linnud, ning see võib isegi puududa selektiivse surve tõttu immuunfunktsiooni säilitamisele koos suurenenud paljunemisega (nt [5]). . Siin keskendume kilpkonnade vananemisuuringute võrdleva maastiku laiendamisele, et edendada nende kasutamist aeglase vananemise mudelitena. Kilpkonnade, nagu ka teiste amnioniloomade, immuunsüsteem sisaldab kaasasündinud ja omandatud komponente (vaadatud artiklis [23]), kuid hiljutised analüüsid näitavad, et roomajad võivad imetajate ja lindudega võrreldes rohkem toetuda kaasasündinud kaitsemehhanismidele [24]. Täpsemalt, kuigi roomajatel on B- ja T-rakud, mis on seotud adaptiivse immuunsusega, võib traditsiooniline adaptiivne kiire reaktsioon sekundaarsel kokkupuutel patogeenidega rohkem tugineda kaasasündinud immuunsusele [24]. Üha rohkem on kirjandust ektotermiliste roomajate kaasasündinud immuunsuse vanusega seotud mudelite kohta [4, 25–27], mis annab esimese kaitseliini võõraste patogeenide vastu. Samal ajal on nii organismi vananemise kui ka demograafilise vananemise sooliste erinevuste uurimine laienenud parema fülogeneetilise katvuseni, sealhulgas roomajate osas [28]. Oluline on see, et need uuringud on looduslikes populatsioonides võimalikud ainult siis, kui isendeid on võimalik täpselt vanandada, mis nõuab pikaealiste liikide pikaajalist uuringut ([29, 30], vaadatud [31]). Lisame sellele kirjandusele, uurides kaasasündinud immuunsuse soo- ja vanusespetsiifilisuse aspekte, ellujäämist, emaste paljunemist ja nendevahelisi suhteid pikaealise roomaja puhul. Kasutame 38-aastast uuringut teadaoleva vanusega kollamudakilpkonnade kohta (Kinosternon favescens), et kvantifitseerida kaasasündinud immuunsüsteemi vanuse, soo, ellujäämise ja paljunemisvõime vahelisi seoseid kui integreerivat lähenemisviisi immunosenstsentsi mõistmiseks. Nagu teistel kilpkonnadel, leiti, et selle liigi vananemine on aeglane, kui sugusid koos vaadelda [18]. Täpsemalt hindasime Nebraskas (USA) oma pikaajalises uuringupopulatsioonis kolme kaasasündinud immuunmeedet – ringlevaid looduslikke antikehi, komplemendi vahendatud lüüsivõimet ja plasma bakteritsiidset pädevust. Olemasoleva kaasasündinud immunosestsentsi paradigma järgi ennustasime, et kaasasündinud immuunsuse näitajad vähenevad vanuse kasvades, hoolimata mõningatest vastupidistest tõenditest [5, 32].

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

Tulemused

2018. aastal võeti immuunmuutujate (N=98 isast, N=102 emast) proovid kahesajalt loomalt ja need vaatlused hõlmavad meie immuunandmeid. Neist 102 emasloomast 85 paljunes 2017. aastal ja need hõlmavad meie naiste paljunemisandmeid. Lõpuks kasutasime elanikkonna kui terviku suremuse vananemise analüüsimiseks oma pikaajalist andmebaasi N=2380 ainulaadsest teadaolevas vanuses indiviidist (N=860 meest, N=1530 naist ). Meie immuunandmete valimisel (200 täiskasvanut) oli vanus tugevas korrelatsioonis keha suurusega; vanemad loomad olid suuremad nii massilt kui pikkuselt (nt kehamass, r=0.58, Pr.<0.0001; plastron length, r=0.60, Pr. <0.0001). Therefore body size was not included in models where age was an explanatory factor. In the immune data individuals, adult females were smaller than males and tended to be older (Table 1, Fig. S2), a result that is mirrored in the population as a whole (see Fig. 5 in [33]). Because adult females in our immune sample were significantly older than males, we z-transformed age for all analyses of innate immune function to dissociate the confound of age and sex. This allowed for a comparison of relatively old and young adult males and females.

Tabel 1 Suurus, vanus ja suremus Kollaste mudakilpkonnade vananemine

Populatsioonis tervikuna oli naiste keskmine ja maksimaalne täiskasvanuea eluiga (vanus, mil 50 ja 95% täiskasvanutest oli surnud). Täiskasvanud isas- ja emakilpkonnad näitasid nii vanusega seotud moraali tõusu, mis viitab vananemisele. Täiskasvanute esialgne suremus oli meestel kõrgem kui naistel, kuid suremuse kiirenemise määrad olid samaväärsed (tabel 1, joonis 1). Meie indiviidide immuunsüsteemi alavalimis olid kaasasündinud immuunfunktsiooni kolm mõõdet üksteisega märkimisväärselt (positiivselt) korrelatsioonis (looduslik antikehade vahendatud hemaglutinatsioon, komplemendi vahendatud hemolüüs ja bakteritsiidne pädevus, tabel S1). Aga kuna korrelatsioonid olid nõrgad (kõik |r|< 0.28), we analyzed each variable separately. For all three variables, batch represents the reagents used. For bactericidal competence, five individual lyophilized pellets of Escherichia coli were used to generate control plates across the experiment; as control plates decreased in their colony count, a fresh control solution was made. For natural antibodies and cell lysis capability, two separate bottles of rabbit red blood cells were used sequentially. Significant variation among E. coli pellets and individual rabbits (that generate the red blood cells) is expected, and we controlled for it here as a batch effect in our models. All three immune variables declined with advancing age (BC and Lysis, Pr< 0.05; Nabs, Pr=0.08, Table 2, Fig. 2) and were higher in males than females (Table 2, Fig. 3). For the 85 females in our data for which we had both most-recent reproductive output and immune measures, clutch size did not change with age, whereas egg mass increased with age (Tables 3, S2, Fig. 4). Because clutch size did not change with age, a third measure of reproductive effort, total clutch mass followed the identical trend as egg mass and was not considered further. Interestingly, the three females greater than 50 years old had lower age-corrected egg mass (age>50 aastat) kui naistel järgmises madalaimas vanusevahemikus (N=13 vanus 40–50 aastat (t=2.45, pr=0.014)), mis viitab vananemise võimalusele sigimisvõimsuses väga vanadel emastel (vt joonis 4). Nende 85 reproduktiivse emase puhul järgisid vanemad emased sama suundumust, mida täheldati kõigi täiskasvanute puhul: vähenenud bakteritsiidne toime ja komplemendi vahendatud hemolüüs koos vanusega (tabel 3, vt joonis 1). Lisaks oli suuremate siduritega emastel – olenemata vanusest – suurem bakteritsiidne pädevus kui väiksema siduriga emastel (joonis S1). Erinevalt siduri suurusest ei leidnud me munamassi mõju immuunfunktsioonile (andmeid pole näidatud).

Arutelu

Tistanche toidulisandi eelised - kuidas tugevdada immuunsüsteemi

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Suremus ja reproduktiivne vananemine

Emased kollased mudakilpkonnad elavad selles populatsioonis kauem kui isased; aga nad vananevad sarnase kiirusega (joonis 1) ja vanusespetsiifiline suremus suureneb koos vanusega mõlema soo puhul (joonis 1), kuigi aeglaselt. Need andmed näitavad selle liigi aeglast suremuse vananemist, kuid me ei leidnud oma emaste proovides tõendeid reproduktiivse vananemise kohta. Kilpkonnade täiskasvanud vanusespetsiifilise suremuse väikest kiirenemist on kirjeldatud suurte tetrapoodide fülogeneetilises uuringus [18], samuti üksikutes pikaajalistes uuringutes hiidkilpkonnade [34] ja maalitud kilpkonnade kohta ([35, 36], kuid vt [35, 36]). 37, 38] ja liigendseljakilpkonnade liigid [39]); teiste kilpkonnaliikide puhul jääb aga suremus täiskasvanuea kasvades sageli samaks [40] või väheneb koos vanusega [3, 15, 41]. Vangistuses peetavate kilpkonnapopulatsioonide lõikes (nt loomaaia andmed) da Silva et al. [21] leidis, et enamiku kilpkonnaliikide suremus vähenes vanusega aeglaselt või ebaoluliselt. Emaste sigimise vananemist (st vanusespetsiifilise paljunemisvõime langust) pole kilpkonnaliikide puhul seni täheldatud (värvitud kilpkonnad [30], Blandingi kilpkonnad [15, 41], kõrbekilpkonnad [3] ja kastkilpkonnad [42]) . Warner ja tema kolleegid [30] märkisid maalitud kilpkonnade koorumise vähenemist vanimate emaste maalitud kilpkonnade puhul, hoolimata sellest, et reproduktiivsus ei vähenenud. Lisaks on paljud kilpkonnade reproduktiivuuringud näidanud positiivset korrelatsiooni siduri suuruse, muna suuruse ja/või siduri massi ja kilpkonnade keha suuruse vahel ([43]; läbi vaadatud [44]), kus keha suurus on sageli positiivselt seotud vanusega. kilpkonnad (nt käesolev uuring, [17, 32], kuid vt [41]). Need andmed viitavad sellele, et kilpkonnade reproduktiivne vananemine toimub harva, kui üldse.

Joonis 1 Täiskasvanud isas- ja emasloomade K. favescensi ellujäämine ja vanusepõhine suremus. Keskmine (50% elus) ja maksimaalne (5% elus) eluiga on täiskasvanud emastel (mustad katkendjooned) kollase mudakilpkonnade puhul pikem kui täiskasvanud isastel (hallid pidevad jooned). Y-telg on täiskasvanute ellujäämise Lx, alates 11. eluaastast. X-teljele langevad jooned näitavad soospetsiifilist mediaani ja maksimaalset eluiga kronoloogilises vanuses. Sisend näitab Gompertzi mudeleid suremuse kiirendamiseks kogu täiskasvanueas; meeste esialgne suremus täiskasvanutel on oluliselt kõrgem kui naistel (joonte tõus), samaväärse kasvuga (joonte kalded) (tabel 1). Y-telg on kohandatud Gompertzi kiirendusmudeli vanusepõhise suremuse loomulik logaritm

Soospetsiifiline pikaealisus ja vananemine

Organismi ja demograafilise vananemise sooliste erinevuste uuringud on mitteimetajate liikide puhul haruldased. Sellel on tõenäoliselt kaks põhjust: looduslike populatsioonide demograafia esialgsed aruanded koondavad sageli andmeid piisava võimsuse jaoks, et hinnata suremuse kiirenemist; ja paljude liikide puhul on noorloomade sugu väliste suguelundite puudumise tõttu teadmata ja vastküpsete loomade soo määramiseks peavad nad tuginema sekundaarsete seksuaalfenotüüpide arengule. Vangistuses pikaealisuse andmete ülevaates teatasid da Silva ja tema kolleegid [21], et täiskasvanud meeste keskmine eluiga ületas emaste eluiga ligikaudu 20%, vastupidiselt meie tulemustele kollamuda kilpkonnade kohta. Siiski näib, et kilpkonnade metsikute populatsioonide emaste pikem eluiga on muster (värvitud kilpkonnad [28, 45]), täpilised kilpkonnad [46, 47], metskilpkonnad [48], kaardikilpkonnad [49] kaljukilpkonnad [50], kastkilpkonnad [51] ja punakõrvsed liugurid [52]). Seevastu oleme teadlikud ainult kahest uuringust, mis on teatanud, et isaskilpkonnad elavad looduses emasloomadest kauem (kutikilpkonnad [53], kuid vt [54], ja maalitud kilpkonnade populatsioon [36]. Vaja on täiendavaid andmeid, kuid need väljaandmed on vastuolus [21] poolt kokku võetud vangistuse kirjetega ja viitavad võimalikule soopõhisele keskkonnamõjule, mis on seotud pikaealisuse ja vananemisega.

Tabel 2 Täiskasvanud isaste ja emaste kollamudakilpkonnade immuunmuutujate dispersioonianalüüs

Soospetsiifiline immuunfunktsioon

Me leidsime, et meestel on immuunfunktsiooni tase kõrgem kui naistel, mis on vastupidine selgroogsete üldisele mustrile [55, 56] ja oletatavasti on see vähemalt osaliselt seotud androgeenide poolt põhjustatud immuunsüsteemi pärssimisega [57, 58]. Paljud kilpkonnaliigid on selle küsimuse jaoks sobivad mudelid, kuna neil puuduvad sugukromosoomid ja seetõttu on sugupoolte genoomi arhitektuur eostamise ajal identne. Selle asemel on tal temperatuurist sõltuv soo määramine (TSD), mille puhul soo määrab embrüonaalse arengu kriitilisel perioodil kogetav termiline keskkond, kõrvaldades igasuguse segaduse soospetsiifiliste genoomide ja soopõhise seksuaalarengu vahel [59]. López-Pérez ja tema kolleegid [60] ei leidnud muskuskilpkonnaliigi (teine ​​TSD-ga kinosterniidkilpkonn) puhul isaste ja emaste bakteritsiidsete omaduste erinevust. Samuti ei leidnud Zimmerman ja tema kolleegid [32, 61, 62] punakõrv-kilpkonnade (ka TSD-ga) kaasasündinud immuunsuse mõõtmisel soolist erinevust. Seevastu maalitud kilpkonnadel [5] – teine ​​TSD-ga liik – teatati isastel kõrgemast komplemendi vahendatud hemolüüsivõimest ja emasloomadel kõrgematest looduslikest antikehade tiitritest, kusjuures sugu ei mõjutanud bakteritsiidset võimet. Lisaks leidsid Freedberg ja tema kolleegid [63], et jahedad isaseid tootvad inkubatsioonitemperatuurid teises TSD-kilpkonnas suurendasid isaste immuunkompetentsust rohkem kui emastel, kuid sarnaseid toimeid ei leitud lähedalt seotud sugulaste puhul. Kuigi need esialgsed andmed näivad viitavat sellele, et kilpkonnad ei pruugi järgida üldist selgroogsete meeste immuunvastuse mustrit, on ilmselgelt vaja täiendavaid uuringuid. Järgides ökoimmunoloogia teooriat, mis loob seoseid immuunkaitse ja eluloostrateegiate vahel [64, 65], eeldame, et pikemaealised sugupooled investeerivad rohkem omandatud immuunsusesse võrreldes kaasasündinud immuunsusega [66]; piiratud andmed soopõhise pikaealisuse kohta välistavad igakülgse testimise liikide lõikes.

cistanche taime suurendav immuunsüsteem

Käitumiserinevused ja aktiivsusmustrid võivad emastele kollamudakilpkonnadele avaldada suuremat nakkussurvet kui isastel, mis võib pärssida naiste immuunfunktsiooni [55, 56]. Meie uuritavatel liikidel on ebatavaline aastane tegevustsükkel (vt meetodid). Meie uuringukohas väljuvad täiskasvanud isasloomad kevadistest pesitsustest keskmiselt 5 päeva enne emasloomi [Iverson ja Greene, avaldamata andmed], jäävad vees aktiivseks juunis emaste pikemate pesitsuskäikude ajal ja siirduvad keskmiselt suvisele hinnangule. hiljem kui emastel [67]. Seetõttu on selle liigi aastane tegevusperiood ebatavaliselt lühike, tüüpiline isane on vees võib-olla 25% pikem kui tavaline emane. Siiski pole selge, miks emaste lühem aktiivsushooaeg avaldaks neile suuremat immuunsüsteemi survet. Samuti on isas- ja emasloomade reproduktiivaktiivsus erinev, paaritumine ja viljastumine toimub veesambas, misjärel peavad emasloomad veest väljuma, et oma munad maanduda (samas isastel pole sellist kohustuslikku maale tungimist) [67]. hooajaline (nt [ Roomajate tsirkuleerivad steroidide kontsentratsioonid on kõrged 68, 69]) ja seega võib meestel täheldatud kõrgema immuunfunktsiooni muster olla tingitud proovide võtmisest ainult kevadise tärkamise ajal – st väga varajases hooajas. Kilpkonnade androgeenide hooajalist varieerumist on suhteliselt hästi uuritud ja isaste kilpkonnade testosterooni tase on varakevadel üldiselt väga madal (ülevaade [69]), samal ajal kui emastel on see kõrgeim kevadel, kui nad valmistuvad ovulatsiooniks [69– 74]. Testosteroon pärsib teadaolevalt immuunfunktsiooni ([57], kuid vt [58]) ja see võib seletada naiste madalamat immuunvastust kui meestel. Siiski on teada, et östradiool tugevdab immuunfunktsiooni [23] ja naistel on see tavaliselt kõrgenenud varakevadel, millele järgneb peagi pärast ovulatsiooni ja munaraku teket ([75], ülevaade [69]). Seega, meie varakevadise proovide võtmise põhjal on östradiooli ja testosterooni mustrid ebatõenäolised seletused meie naistel täheldatud madalamate immuunvastuste kohta. Kahjuks puuduvad meil andmed meie uuritavate liikide tsirkuleerivate hormoonide tasemete kohta, kuid äsja kirjeldatud üldisi mustreid arvestades ei ole ringlevate steroidide mõju immuunfunktsioonile ikka veel selge.

Joonis 2 Kaasasündinud immuunsus langeb koos vanusega täiskasvanud K. favescens'il. Bakteritsiidne pädevus ja B-komplemendi vahendatud lüüs vähenesid vanusega sarnaselt täiskasvanud isaste ja emaste kollamudakilpkonnade puhul (statistilist väljundit vt tabelist 2). C looduslikud antikehad (NAbs) näitasid sama suundumust. Kõigil paneelidel tähistab Y-telg lineaarsete mudelite jääke, mille vanus on mudelist eemaldatud (tabel 2). X-telg on z-transformeeritud vanus koos sisestusjoontega, mis näitavad täiskasvanud isaste ja emaste kilpkonnade vanust aastates. Regressioonid: BC jäägid=−{{10}}.138(zAge), R2=0.06; Lüüsijäägid =-0,01(zAge), R2=0.02; NAbs jäägid =-0,01(zAge), R2=0.01

Naiste paljunemine ja immuunfunktsioon

Me ei leidnud tõendeid naiste paljunemise immuunkulude kohta. Siduri suurus (tabel 3) ega munamass (andmeid pole näidatud) ei mõjutanud negatiivselt ühtegi immuunmuutujat. Tõepoolest, emastel, kes munesid suuremaid mune, oli suurem bakteritsiidne võime (joonis S1). Elulooteooria ennustab, et füüsilise vormi maksimeerimiseks peavad inimesed eraldama ressursse sellistele tunnustele nagu need, mis toetavad enesehooldust ja paljunemist [76]. Siiski on paljunemine emasloomadele märkimisväärne energeetiline kulu ja seega võivad paljunemiseks eraldatud ressursid tulla muude tunnuste arvelt [77]. Emased, kes investeerivad palju praegusesse paljunemisse, võivad seega kogeda kompromissi praeguse immuuntõhususega [78]. Seda kompromissi paljunemise ja immuunfunktsiooni vahel on uuritud teiste roomajate puhul erinevate tulemustega. Lääne maapealsetel ripskoes maod (Tamnophis elegans) näitasid vastusena mitogeenile madalamat T-lümfotsüütide proliferatsioonivõimet võrreldes mittegraviidsete liigikaaslastega, kuid neil ei olnud BC-s erinevusi paljunemisseisundite vahel [27]. Seevastu raskekujuliste pügmeede lõgismadudel (Sistrurus milarius) vähenes BC võime võrreldes mittegraviidsete madudega [79]. Värvitud kilpkonnade (Chrysemys picta) paljunemisseisundite vahelised kaasasündinud immuunsuse näitajad sõltusid vanusest [5]. Täpsemalt, noorematel emastel, kellel olid suured sidurid, oli suurem lüüsivõime kui vanematel emastel, kellel oli sama suur sidur. Samas uuringus leiti aga vanematel naistel suurenenud BC, mis on vastupidine selle uuringu tulemustele, mis näitavad, et vanusega väheneb immuunfunktsioon. Lisaks leidsime vanusest sõltumata, et suuremad siduri suurused olid korrelatsioonis kõrgema BC-ga ja et paljunemine ei mõjutanud looduslikku antikehade tootmist ega lüüsivõimet. Need tulemused viitavad sellele, et immuunfunktsiooni ja paljunemise vahelised kompromissid on tõenäoliselt immuunkomponendispetsiifilised.

Joonis 3 Kaasasündinud immuunsus on meestel oluliselt kõrgem kui emastel täiskasvanud K. favescensil. Tagasi transformeeritud vähimruut tähendab ±1 SE A) bakteritsiidse pädevuse (y-telg on tapetud E. coli kolooniate osakaal) ja B) looduslike antikehade (y-telg on maksimaalne lahjendustiiter, mille juures toimub küüliku punaste vereliblede hemaglutinatsioon). ) ja komplemendi vahendatud lüüsi (maksimaalne lahjendustiiter, mille juures toimub küüliku punaste vereliblede lüüs). Tärnid tähistavad olulist soolist erinevust antud immuunmõõdu puhul. (Statistilise väljundi kohta vt tabel 2). LS tähendab: BC=0.37, 0.62; NAbs=4.0, 4.6; Lys=8.2, 9.{18}}

Tabel 3 Immuunmuutujate ja paljunemisvõime analüüs emaste kollamudakilpkonnade paljunemisel

Joonis 4 Muna mass, mitte siduri suurus, suureneb emase K. favescensi paljunemisel vanusega. Y-telg tähistab tabelis 3 oleva lineaarse mudeli jääke, mille vanus on mudelist eemaldatud. Munamassi jäägid=0.025(vanus) – 0,73, R2=0,40

Immuunsus

Kaasasündinud immuunmuutujatest, mida uurisime kollamudakilpkonnade puhul, leidsime kõigi kolme puhul tõendeid immunosestsentsi kohta (joonis 2; tabel 2). Muude uuringute tulemused on erinevad. Näiteks suurematel (arvatavasti vanematel) punakõrvalistel liuguritel ei ilmnenud BC-s muutusi võrreldes väiksemate isenditega [32, 61], mis sarnaneb bakteritsiidse pädevuse leidudega maalitud kilpkonnadel, kelle vanus oli teada [5]. See viimane uuring teatas ka hemaglutinatsiooni suurenemisest vanematel loomadel. Ilmselgelt pole kilpkonnade kaasasündinud immuunsüsteemis vanusega seotud muutuste mustrit veel ilmne. Muude mittelindudest roomajate hulgas on tulemused samuti üsna varieeruvad (vaadatud [8, 26]). Näiteks ripskoes madude populatsioonides väheneb vanemate madude hemaglutinatsiooni- ja hemolüüsivõime [27, 80], nagu ka immuunvastus mitogeeni fütohemaglutiniini suhtes Dickersoni kaelussisalikel [81]. Vesipüütonitel suureneb hemaglutinatsioon koos vanusega [82]. Täiendavad uuringud on vajalikud, et mõista seda erinevust roomajate loomuliku immuunsuse vanusega seotud muutuste suunas üldiselt ja kilpkonnade puhul. Seevastu imetajate ja lindude andmed näitavad üldiselt immuunfunktsiooni langust vanusega. Lisaks toimus nendes taksonites enamik täheldatud immunosestsentsi adaptiivses immuunsüsteemis [83–85], kusjuures kaasasündinud immuunsuses leiti vähem väljendunud muutusi (vaadatud punktis [6]), kuigi ka siin ei pruugi mustrid olla kaasasündinud immuunsuse mõõtmiste puhul järjekindlad. 86]. Kuid roomajate puhul reageerib adaptiivne immuunsüsteem väljakutsetele aeglasemalt ja ei avalda korduva patogeeniga kokkupuute korral tugevat reaktsiooni (vaadatud [24, 87]). Seega võivad kaasasündinud immuunfunktsioonid ja vanusega seotud muutused sellises funktsioonis olla roomajate üldise immuuntervise jaoks kriitilised.

Järeldused

Siin oleme püüdnud laiendada kaasasündinud immunosestsentsi võrdlevaid kaalutlusi ja selle koostoimeid suremuse ja reproduktiivse vananemisega. Valisime nende vananemisnäitajate seoste testimiseks kaua uuritud metsiku (kollase muda) kilpkonnade populatsiooni, sest hiljutised laiaulatuslikud võrdlevad uuringud on tuvastanud kilpkonnade klade erakordselt aeglase vananemise ja pika elueaga. Sellele vaatamata nõuavad vananemismehhanismide mõõtmiseks teadaolevat vanust, mis on saavutatav ainult looduslike pikaealiste liikide pikaajalise uuringuga. Leidsime, et suremusel ja immuunsusel olid soopõhised omadused; naised elasid kauem ja neil oli madalam kaasasündinud immuunfunktsioon kui meestel. See tulemus on silmatorkav, tuginedes soo määramise temperatuurisõltuvusele, välistades seega sugukromosoomide panuse soopõhisesse vananemisse. Kõik kolm kaasasündinud immuunsuse mõõdikut langesid vanuse kasvades. Naistel suurenes siduri mass emastel vanuse kasvades ja paljunemisvõime ei ennustanud kaasasündinud immuunfunktsiooni, välja arvatud see, et suuremate siduritega emastel oli kõrgem bakteritsiidne pädevus, mis viitab ilmselgete kulude puudumisele, mis on seotud emaslooma immuunsusega. See on esimene uuring, milles uuritakse kilpkonnade kolme vananemise telge – rühma, mida iseloomustab aeglane kuni ebaoluline vananemine. Need leiud immunosestsentsi, suremuse ja paljunemise kohta viitavad kilpkonnadele kui uuele mudelile aeglase vananemise mehhanismide mõistmisel või täpsemalt universaalsete vananemismehhanismide (nagu immunosenstsents) uurimisel monofüleetilises rühmas, mida iseloomustab aeglane täiskasvanute suremuse kiirenemine ja ebaoluline reproduktiivne vananemine.

meetodid

Väliproovide võtmine

Koeproovide võtmine kollamudakilpkonnade (YMT) jaoks selle uuringu jaoks toimus 2. 018. mail Gimleti järvel meie pikaajalises uurimispaigas Crescent Lake'i riiklikus looduskaitseala (CLNWR) Gardeni maakonnas Nebraskas. , USA (41 kraadi 45,24′N, 102 kraadi 26,12′W). Gimleti järve rabakompleks on madal (keskmine sügavus 0,8 m), soolise elupaigaga liivamägi [88]. YMT-d näitavad temperatuurist sõltuvat soo määramist (TSD), kus emased on toodetud soojades inkubatsioonitingimustes ja nii isased kui ka emased on toodetud jahedamates tingimustes [59]. Aastatel 1981–2018 toimusid siin märkide tagasipüüdmise ja pesitsemise ökoloogilised uuringud. Selles kohas talvituvad YMT-d tavaliselt maismaal, olles maetud märgaladega külgnevatesse kõrgendike liivamägedesse, ilmuvad aprillis ja mais ning rändavad vette ning seejärel naasevad enamik emasloomi juunis pesitsevad samad liivamäed, kuigi mõned neist ei paljune igal aastal [67, 87]. Juulikuks hakkavad kõik kilpkonnad märgaladest lahkuma, et ülejäänud suveks liivamägedesse asuda (vt ka [89]). Põlluhooaegadel rajati kolme talvituskoha ja järve vahele paralleelselt kaldaga triivpiirdeid, mida jälgiti pidevalt iga päev. Aastatel (kaasa arvatud 2017), mil tarad olid pesitsushooajal paigas, tehti iga kinnipüütud emaslooma röntgeniga, et määrata siduri suurus, ja mõõdeti iga muna laius igal röntgenpildil. Regressioonivõrrand, mis seob siduri röntgenikiirguse keskmise laiuse ja muna tegeliku keskmise massi, mis pärinevad hiljem välja kaevatud pesade alamhulgast, võimaldas meil hinnata munade massi ja siduri massi (mõlemad grammides) iga emaslooma kohta 2017. aastal (n{{24} }). Nende seoste ja ft võrrandid on järgmised: muna tegelik laius=0.98(hinnanguline muna laius)+1.52, R2=0.89; Tegelik munamass=0,64 (hinnanguline munamass) – 6,07, R2=0,85; ja mitme aasta jooksul kogutud N=1795 YMT munade proovis saab muna laiust usaldusväärselt kasutada munamassi (ja seega ka siduri kogumassi) hindamiseks munamassi =0.68 (muna laius) – 6,77, R2=0.85 (Iverson, avaldamata andmed). See võimaldas meil uurida nende paljunemisvõime mõõtmise mõju immuunsusele 2018. aasta kevadel, kui need 85 emast kilpkonna kerkisid esile. Pärast kinnipüüdmist transporditi kilpkonnad tagasi välilaborisse, kus registreeriti morfomeetrilised andmed, sealhulgas maksimaalne seljapikkus (CL millimeetrites), maksimaalne plastroni pikkus (PL millimeetrites) ja kehamass (BM grammides). Emakakaela siinusest koguti 26-gabariidilise hepariniseeritud süstlaga kuni 0,5 ml täisverd ja tsentrifuugiti (7000 pööret minutis) krüotorus 5 minutit, et eraldada verekomponendid. Vereplasma pipeteeriti eraldi krüotorusse. Nii plasma kui ka pakitud punased verelibled külmutati kohe vedelas lämmastikus, kuni transporditi Iowa osariigi ülikooli säilitamiseks temperatuuril -80 kraadi. Proovist võetud kilpkonnad (98 isast ja 102 emast) transporditi tagasi nende esialgsesse püüdmiskohta ja lasti järvele suundumiseks lahti tara vastasküljel.

Vanuse määramine

Kuna see uuring algas 1981. aastal, hinnati iga kilpkonna vanust aastates pärast koorumise järgset talvede arvu. Vanuse hinnang on igal aastal sama ja seega kehtivad meie vanuse määramise meetodid kõigi siin käsitletud andmete (populatsiooni ja immuunsüsteemi alavalim) suhtes. Kuna selles populatsioonis toodetakse igal aastal ainult üks rõngas, võrdub ebaküpsete kilpkonnade vanus tavaliselt olemasolevate rõngaste koguarvuga. Äärmiselt karmidel aastatel ei pruugi aga kasvada ja kaks rõngast võivad ilmuda ühena. Seega on rõngaste arv vanuse alampiiriks ja neid võidakse alahinnata, kui rõngaid ei loeta ega hinnata kogu populatsiooni üldiste kestade kasvumustrite kontekstis. Võrreldes vananenud kilpkonna noorkilpkonna kasvutempot populatsiooni üldise kasvumustriga, saab vanust esmakordsel püüdmisel usaldusväärselt määrata kuni vähemalt 12 aastani. Loendasime uuringu algusaastatel püütud täiskasvanud kilpkonnade puhul minimaalse rõngaste arvu ja hinnati kõigi kilpkonnade vanust, kui rõngaste arv oli alla 20. Enamik kilpkonni märgiti aga algselt individuaalselt ja vanandati enne nende kuuendat talve ning seejärel vanandati tegeliku tagasipüüdmisintervalli alusel. Täiskasvanud naised olid meie proovides oluliselt vanemad (ja väiksemad) kui mehed (tabel S3; paaritu t-test, P=0.0003, vt joonis S2 ja joonis 5 punktis [33]). Seetõttu muudeti vanus igas soo piires z-ga ühikulise dispersiooniga keskmiseks 0. Seda muutujat "vanus" kasutati kõigis statistilistes analüüsides. Jätsime välja 26 soota alaealise andmed.

Reproduktiivanalüüs

Reproduktiivne väljund – siduri suurus, siduri kogumass – suurenes suuruse ja vanuse kasvades. Seetõttu kasutasime analüüside jaoks, mis hõlmasid mudelis naiste paljunemisvõimet koos vanusega, reproduktiivse väljundi töötlemata väärtusi ilma keha suurust korrigeerimata. Kõik lineaarsed mudelid viidi läbi versioonis SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, USA).

Ellujäämise analüüs

Lääne-Nebraskast pärit täiskasvanud Kinosternon favescens'i ellujäämise ja vanusepõhise suremuse määrad hinnati Gompertzi mudeli põhjal (tabel 1) [18, 90, 91], mis hindab esialgset suremuse tõenäosust algeas ja suremuse kiirenemist kogu maailmas. eluaeg. Keerulisemaid mudeleid (nt sisaldades püsivat Makehami terminit vanusest sõltumatu suremuse kohta, sealhulgas aeglustusparameetrit) need andmed AIC muutuse põhjal (arvutatud BaSTA R paketis [90]) ei toetanud. Gompertzi modelleerimist rakendati meie Gimlet Lake'i pikaajalise märgitagastusandmete kogumile, mis hõlmas andmeid 1530 naise ja 860 üksiku mehe kohta. Küpsusvanus oli mõlema soo puhul keskmiselt 11 aastat, mis on teada selle populatsiooni vanuse ja paljunemise pikaajalisest jälgimisest [88, 92, 93]. Kuna küpsemine sõltub suurusest, on need hinnangulised küpsemisea (st 11-aastane) maksimumhinnangud (näiteks võib aeg-ajalt isase kilpkonna tuvastada nooremas eas). Testisime 10-aastase keskmise küpsemisvanuse kasutamise tundlikkust, millel ei olnud märgatavat mõju eluea ja suremuse vananemise hinnangutele (andmeid pole näidatud). Täiskasvanute maksimaalne ja keskmine eluiga arvutati aastate arvuna pärast esmakordset paljunemist kuni 95. eluaastani ja hinnanguliselt suri 50% sünteetilise kohordi täiskasvanutest. Andmekogumeid analüüsiti, kasutades funktsiooni 'basta' BaSTA paketist R jaoks [90].

Immuunmeetmed

Loomulik antikehade vahendatud hemaglutinatsiooni ja komplemendi vahendatud hemolüüsi (NAbs, Lysis) võime on väidetavalt esimene kaitseliin selgroogsete patogeenide vastu (vaadatud [94]) ning neid kaasasündinud immuunfunktsiooni näitajaid on uuritud paljudel roomajatel. liigid (nt [4, 5, 32, 80, 82, 95]). Lõpetasime NAb-de ja lüüsivõime testid vastavalt hemolüüsi-hemaglutinatsiooni testile, mis on kohandatud [96] kasutamiseks maalitud kilpkonnades [5, 97]), kasutades küüliku punaseid vereliblesid. Kõigi analüüside lõpuleviimiseks kasutasime kahte pudelit küüliku punaseid vereliblesid (HemoStat HemoStat Laboratories, Dixon, CA, USA). Käitasime kõik positiivsete ja negatiivsete kontrollide ja proovidega plaadid kahes eksemplaris. Kõrgemad hemaglutinatsiooni tiitrid viitavad looduslike antikehade suuremale arvukusele plasmaproovis, kuna kõrged tiitrid näitavad, et looduslikud antikehad on kõrgel kontsentratsioonil isegi üha lahjendatud plasmas [96]. Samamoodi näitavad kõrgemad hemolüüsi tiitrid, et plasma on võimeline lüüsima RBC-sid isegi lahjendatud kontsentratsioonidel [96]. Seega on suurenenud loomulik antikehade tase ja lüüsivõime seotud suurenenud immuunfunktsiooniga. Hindasime plasma bakteritsiidset pädevust (BC), kvantifitseerides selle võimet inhibeerida Escherichia coli kasvu, kasutades meie avaldatud protokolli maalitud kilpkonnade jaoks [5, 97], kohandatud [98]. Käesolevas katses kasutati viit lüofiliseeritud E. coli pelletit (Microbiologics, ATCC#8739), kusjuures iga uut pelletit kasutati proovide edenedes uue kontrolllahuse loomiseks. Suurenenud bakteritsiidne pädevus vastab suurenenud immuunfunktsioonile. Kõik immuunanalüüsid viidi läbi 2019. aasta kevadel 2018. aasta kevadel kogutud proovidega.

Immuunsuse mõõt: statistilised analüüsid

Sõltuvaid muutujaid analüüsiti üldiste lineaarsete mudelite abil zAge selgitavate muutujatega (standardiseeritud vanus iga soo piires); sugu (täiskasvanud mehed ja täiskasvanud naised); kahesuunaline interaktsioon zAge ja Sex vahel; ja häiriva muutuja analüüsi partii (BC: N=4; NAbs ja Lysis: N=2), et võtta arvesse kontrollgraanuleid (BC) või küüliku punaste vereliblede pudelit (NAbs ja Lysis). Bakteritsiidne pädevus muudeti Arcsine'iga, et võtta arvesse proportsionaalseid andmeid ja vastata normaalsuse tingimustele. NAb-d ja Lysis muudeti log-10, et vastata normaalsustingimustele. Kõik lineaarsed mudelid viidi läbi versioonis SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, USA). Graafikud tehti ggplot2-s [99].

Viited

1. Harman D. Vananemine: ülevaade. Ann NY Acad Sci. 2001;928:1–21.

2. Ricklefs RE. Vananemise areng võrdlevast vaatenurgast. Funct Ecol. 2008;22:379–92.

3. Jones OR, Scheuerlein A, Salguero-Gómez R, Camarda CG, Schaible R, Casper BB jt. Vananemise mitmekesisus üle elupuu. Loodus. 2014;505(7482):169–73.

4. Schwanz L, Warner DA, McGaugh S, Di Terlizzi R, Bronikowski AM. Olekust sõltuv füsioloogiline hooldus pikaealises ektotermis, maalitud kilpkonnas (Chrysemys picta). J Exp Biol. 2011;214:88–97.

5. Judson JM, Reding DM, Bronikowski AM. Immuunsus ja selle mõju pikaealise selgroogse paljunemisele. J Exp Biol. 2020;223:jeb223057.

6. Peters A, Delhey K, Nakagawa S, Aulsebrook A, Verhulst S. Immunosenescence in wild animals: meta-analysis and outlook. Ecol Lett. 2019;22:1709–22.

7. Schmid-Hempel P. Muutused immuunkaitses kui evolutsioonilise ökoloogia küsimus. Proc R Soc B. 2003;270(1513):357–66.

8. Hoekstra LA, Schwartz TS, Sparkman AM, Miller DA, Bronikowski AM. Roomajate bioloogilise mitmekesisuse kasutamata potentsiaal, et mõista, kuidas ja miks loomad vananevad. Funct Ecol. 2020;34:38–54.

9. Franceschi C, Capri M, Monti D, Giunta S, Olivieri F, Sevini F jt. Infammaging ja põletikuvastane: süsteemne perspektiiv vananemise ja pikaealisuse kohta ilmnes inimestel tehtud uuringutest. Mech Age Develop. 2007; 128:92–105.

10. Pawelec G, Bronikowski AM, Cunnane SC, Ferrucci L, Franceschi C, Fülöp T, Gaudreau P, Gladyshev VN, Gonos ES, Gorbunova V, Kennedy BK, Larbi A, Lemaître JF, Liu GH, Maier AB, Morais JA Nóbrega OT, Moskalev A, Rikkert MO, Seluanov A, vanem AM, Ukraintseva S, Vanhaelen Q, Witkowski J, Cohen AA. Inimese immuunsüsteemi mõistatus on "vananemine". Mech Age Develop. 2020;192.

11. Schwartz TS, Bronikowski AM. Molekulaarse stressi rajad ning roomajate paljunemise ja vananemise areng. Väljaandes (T. Flatt & A. Heyland, toim.) Eluloo evolutsiooni molekulaarsed mehhanismid. Oxford: Oxford Univ Press; 2011. Lk. 193–209

12. Armstrong DP, Keevil MG, Rollinson NJ, Brooks RJ. Määratlemata kasvu peen individuaalne varieeruvus põhjustab pikaealiste roomajate ellujäämise ja eluaegse reproduktiivse väljundi olulisi erinevusi. Funct Ecol. 2007;32:752–61.

13. Omeyer LCM, Fuller WJ, Godley BJ, Snape RTE, Broderick AC. Määratud või määramatu kasv? Merikilpkonnade kasvustrateegia uuesti läbivaatamine. Märts Ecol Prog Ser. 2018;596:199–211.

14. Bronikowski AM, Arnold SJ. Sukapaela Thamnophis elegansi eluloo varieerumise evolutsiooniline ökoloogia. Ökoloogia. 1999;80:2314–25.

15. Congdon JD, Nagle RD, Kinney OM, van Loben Sels RC. Pikaealise selgroogse Blandingi kilpkonna (Emydoidea blandingii) vananemise hüpoteesid. Eksp Gerontol. 2001;36:813–27.

16. Wilkinson PM, Rainwater TR, Woodward AR, Leone EH, Carter C. Ameerika alligaatori (Alligator mississippiensis) kasv ja sigimine: tõendid pikaajaliste tagasipüüdmiste kohta. Copeia. 2016;104:843–52.

17. Hoekstra LA, Weber RC, Bronikowski AM, Janzen FJ. Soospetsiifiline kasv, kuju ja nende mõju pikaealise selgroogse eluloole. Evol Ecol Res. 2018;19(6):639–57.

18. Reinke BA, Cayuela H, Janzen FJ, Lemaître JF. Gaillard JM ja veel 110 inimest. Ektotermiliste tetrapoodide erinevad vananemismäärad annavad ülevaate vananemise ja pikaealisuse arengust. Teadus. 2022;376:1459–66.

19. Berkel C, Cacan E. Chordata pikaealisuse analüüs tuvastab taksonite seas erakordselt pikaealised liigid ja osutab pikema eluea arengule. Biogerontol. 2021;22:329–43.

20. Stark G, Tamar K, Itescu Y, Feldman A, Meiri S. Külmad ja isoleeritud ektotermid: reptiilsete pikaealisuse tegurid. Biol J Linn Soc. 2018;125:730–40.

21. da Silva R, Conde DA, Baudisch A, Colchero F. Aeglane ja tühine vananemine Testudinesi seas seab väljakutse vananemise evolutsiooniteooriatele. Teadus. 2022;376:1466–70.

22. Charlesworth B. Fisher, Medawar, Hamilton ja vananemise evolutsioon. Geneetika. 2000;156:927–31.

23. Zimmerman LM, Vogel LA, Bowden RM. Selgroogsete immuunsüsteemi mõistmine: ülevaated roomajate vaatenurgast. J Exp Biol. 2010;213:661–71.

24. Zimmerman LM. Roomajate vaatenurk selgroogsete immuunsusele: 10 aastat edusamme. J Exp Biol. 2020;223(Pt 21):jeb214171.

25. Palacios MG, Ganglof EJ, Reding DM, Bronikowski AM. Geneetiline taust ja termiline keskkond mõjutavad ektotermilise selgroogse varajases elus immuunkomponentide ontogeneesi erinevalt. J Anim Ecol. 2020;89:1883–94.

26. Field EK, Hartzheim A, Terry J, Dawson G, Haydt N, Neuman-Lee LA. Reptiilsete kaasasündinud immunoloogia ja ökoimmunoloogia: mida me teame ja kuhu me läheme? Integra Comp Biol. 2022;62:1557–71.

27. Palacios MG, Bronikowski AM. Immuunsuse varieerumine raseduse ajal viitab immuunkomponendispetsiifilistele paljunemiskuludele elavaloomulise mao puhul, kellel on erinevad eluloostrateegiad. J Exp Zool A. osa 2017;327:513–22.

28. Bronikowski AM, Meisel RP, Biga PR, Walters JR, Mank JE, Larschan E jt. Loomade soospetsiifiline vananemine: perspektiiv ja tulevikusuunad. Vananev rakk. 2022;21:e13542.

29. Reed TE, Kruuk LE, Wanless S, Frederiksen M, Cunningham EJ, Harris MP. Pikaealise merelindu sigimine: hilise eluea jõudluse languse määrad on seotud varajase paljunemise erinevate kuludega. Am Nat. 2008;171:E89–E101.

30. Warner DA, Miller DA, Bronikowski AM, Janzen FJ. Aastakümnete pikkused väliandmed näitavad, et kilpkonnad jäävad looduses ellu. Proc Natl Acad Sci US A. 2016;113(23):6502–7.

31. Reinke BA, Miller DAW, Janzen FJ. Mida on pikaajalised väliuuringud meile rahvastiku dünaamika kohta õpetanud? Ann Rev Ecol Evol Sys. 2019;50(1):261–78.

32. Zimmerman LM, Bowden RM, Vogel LA. Punakõrv-kilpkonnad ei reageeri võtmeaugu hemotsüaniiniga immuniseerimisele, kuid neil on kõrge looduslike antikehade tase. ISRN loomaaed. 2013a;2013:1–7.

33. Iverson JB. Kliima poolt vahendatud värbamise ebaõnnestumine kilpkonnapopulatsioonis ja selle mõju leviku põhjapiiridele. Chelonian Cons Biol. 2022;21(2):181–6.

34. Gibson CWD, Hamilton J. Populatsiooniprotsessid suures taimtoidulises roomajas: Aldabra atolli hiidkilpkonn. Ökoloogia. 1984;61:230–40.

35. Miller DAW, Janzen FJ, Fellers GM, Kleeman PM, Bronikowski AM. Ektotermiliste tetrapoodide biodemograafia annab ülevaate suremusmustrite arengust ja plastilisusest. In: Weinstein M, Lane MA, toimetajad. Sotsiaalsus, hierarhia, tervis: võrdlev biodemograafia. Washington DC: National Academies Press; 2014. lk. 295–313.

36. Reinke BA, Hoekstra L, Bronikowski AM, Janzen FJ, Miller DAW. Kasvu ja ellujäämise ühine hindamine märgi ja tagasipüüdmise andmete põhjal, et parandada metsikute populatsioonide vananemise hinnanguid. Ökoloogia. 2020;101(1):e02877. https://doi.org/10.1002/ecy.2877.

37. Keevil, MG 2020. Ühine kasvu ja ellujäämise hindamine märgi ja tagasipüüdmise andmete põhjal, et parandada metsikute populatsioonide vananemise hinnanguid: kommentaar. Ökoloogia e03232. https://doi.org/10.1002/ecy.3232.

38. Bronikowski AM, Reinke BA, Hoekstra L, Janzen FJ, Miller DAW. Kasvu ja ellujäämise ühine hindamine märgi ja tagasipüüdmise andmete põhjal, et parandada metsikute populatsioonide vananemise hinnanguid: vastus. Ökoloogia. 2022:103:e03571. https://doi.org/10.1002/ecy.3571.

39. Cayuela H, Akani GC, Hema EM, Eniang EE, Amadi N, Ajong SN jt. Troopiliste roomajate elulugu ja vanusest sõltuvad suremusprotsessid. Biol J Linn Soc. 2019;128:251–62. 40. Gibbons JW. Miks kilpkonnad nii kaua elavad? Bioteadus. 1987;37:262–9.

41. Congdon JD, van Loben Sels RC. Blandingi kilpkonnade (Emydoidea blandingii) paljunemisomaduste ja keha suuruse seosed suguküpsuse ja vanusega. J Evol Biol. 1993;6:547–57.

42. Miller JK. Põgenemine vananemisest: demograafilised andmed kolmevarvaste kilpkonnalt (Terrapene Carolina Triunguis). Eksp Gerontol. 2001;36(4–6):829–32.

43. Moll EO. Reproduktiivtsüklid ja kohanemised. In: Harless M, Morlock H, toimetajad. Kilpkonnad: perspektiivid ja uuringud. Malabar, Florida: John Wiley ja pojad; 1979. Lk. 305–20.

44. Iverson JB, Lindeman PV, Lovich J. Kilpkonnade reproduktiivallomeetria mõistmine: libe kalle. Ecol Evol. 2019; 9:11891–903.

45. Iverson JB. Chrysemys picta bellii (lääne maalitud kilpkonn). Pikaealisus. Herpetol Rev. 2022;53:484.

46. ​​Litzgus JD. Tähnikkilpkonna (Clemmys guttata) pikaealisuse sooerinevused. Copeia. 2006;2006:281–8.

47. Ernst CH. Tähnikkilpkonna (Clemmys guttata) kasv. J Herp. 1975;9:313–8.

48. Brown DJ, Schrage M, Ryan D, Moen RA, Nelson MD, Buech RR. Glyptemys insculpta (metsakilpkonn) pikaealisus looduses. Herpetol Rev. 2015;46:243–4.

49. Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. Indiana põhjapoolse kaardikilpkonna (Graptemys geographical) keha suurus, kasv ja pikaealisus. J Herp. 2019;53:297–301.

50. Munscher E, Campbell K, Hauge JB, Hootman T, Osborne W, Butterfeld BP jt. Pseudemys foridana peninsularis (poolsaare kooter) ja Pseudemys nelsoni (Florida punakõhuline kooter). Pikaealisus. Herpetol Rev. 2020;51:111–3.

51. Lewis EL, Iverson JB. Terrapene ornata (ehitis kastikilpkonn). Pikaealisus. Herpetol Rev. 2018;49:530.

52. Lewis EL, Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. Keha suurus ja kasv punakõrv-liuguris (Trachemys scripta) selle levila põhjaservas: kas Bergmanni reegel kehtib? Herp Conserv Biol. 2018;13:700–10.

53. Curtin AJ, Zug GR, Spotila JR. Kõrbekilpkonna (Gopherus agassizii) pikaealisus ja kasvustrateegiad kahes Ameerika kõrbes. J Aridi keskkond. 2009;73:463–71.

54. Medica PA, Nussear KE, Esque TC, Saethre MB. Kõrbekilpkonnade (Gopherus agassizii) pikaajaline kasv Lõuna-Nevada populatsioonis. J Herpetol. 2012;46:213–20.

55. Klein SL. Hormoonid ja paaritussüsteemid mõjutavad soolisi ja liikide erinevusi selgroogsete immuunfunktsioonis. Behav Proc. 2000;51:149–66.

56. Klein SL. Parasiitinfektsiooni soolisi erinevusi vahendavad hormonaalsed ja immunoloogilised mehhanismid. Parasiit Immunol. 2004;26:247–64.

57. Foo YZ, Nakagawa S, Rhodes G, Simmons LW. Suguhormoonide mõju immuunfunktsioonile: metaanalüüs. Biol Rev. 2007;92:551–71.

58. Kelly CD, Stoehr AM, Nunn C, Smyth KN, Prokop ZM. Loomade immuunsuse seksuaalne dimorfism: metaanalüüs. Ecol Lett. 2018;21:1885–94.

59. Janzen FJ, Paukštis GL. Keskkonna soo määramine roomajatel: ökoloogia, evolutsioon ja eksperimentaalne disain. Q Rev Biol. 1991;66(2):149–79.

60. López-Pérez JE, Meylan PA, Goessling JM. Seksipõhine kauplemine Sternotherus minori kaasasündinud ja omandatud immuunsüsteemiga. J Exp Zool. 2021;333:820–8.

61. Zimmerman LM, Paitz RT, Vogel LA, Bowden RM. Kaasasündinud ja adaptiivse immuunsuse hooajaliste mustrite varieerumine punakõrvalises liuguris (Trachemys scripta). J Exp Biol. 2010;213:1477–148358.

62. Zimmerman LM, Clairardin SG, Paitz RT, Hicke JW, LaMagdeleine KA, Vogel LA jt. Pikaealise ektotermi, punakõrv-kilpkonna puhul säilib huumoraalne immuunvastus koos vanusega. J Exp Biol. 2013b;216:633–40.

63. Freedberg S, Greives TJ, Ewert MA, Demas GE, Beecher N, Nelson CE. Inkubatsioonikeskkond mõjutab kilpkonna immuunsüsteemi arengut keskkonna soo määramisega. J Herpetol. 2008;2008(42):536–41.

64. Lee KA. Immuunkaitse ja eluloo sidumine indiviidi ja liigi tasandil. Integr Comp Biol. 2006;46:1000–15.

65. Sheldon BC, Verhulst S. Ökoloogiline immunoloogia: kulukas parasiitide kaitse ja evolutsioonilise ökoloogiaga kauplemine. Trends Ecol Evol. 1996;11:317–21.

66. Palacios MG, Cunnick JE, Bronikowski AM. Seisundi, eluloo ja valitseva keskkonna keeruline koosmõju kujundab madude immuunkaitset looduses. Physiol Biochem Zool. 2013;86:547–58.

67. Iverson JB. Pesitsemine ja vanemlik hoolitsus kilpkonnal, Kinosternon favescens. Kas J Zool. 1990;68:230–233.

68. Licht P. Endokriinsed mustrid kilpkonnade paljunemistsüklis. Herpetoloogiline. 1982;38:51–61.

69. Graham SP, Ward CK, Walker JS, Sterrett S, Mendonça MT. Reproduktiivhormoonide seksuaalne dimorfism ja seksuaalne varieeruvus Pascagoula kaardikilpkonnas, Graptemys gibbons. Copeia. 2015;103:42–50.

70. Shelby JA, Mendonça MT, Horne BD, Seigel RA. Isaste ja emaste kollalaiguliste kaardikilpkonnade Graptemys favimaculata paljunemissteroidide hooajaline erinevus. Gen Comp Endokrinool. 2000;119:43–51.