Oridoniini renoprotektiivne toime ägeda neerukahjustuse hiiremudelis makrofaagidega seotud põletiku pärssimise kaudu
Mar 17, 2022
SISSEJUHATUS
Oluline tunnus ägeneerukahjustus(AKI) on äkiline langusneerufunktsioon. See on ülemaailmne terviseprobleem, mis on tekitanud ühiskonnas laialdast muret. Statistika kohaselt kannatab maailmas igal aastal AKI-st umbes 13,3 miljonit inimest, kellest 85 protsenti on arengumaades, mis tapab 1,7 miljonit inimest.1,2) Nimelt ei ole AKI puhul tegemist üksiku haigusega ja see võib olla tüsistus. mitmetest haigustest. Tavaliselt võib selle põhjuseks olla sepsis, šokk, isheemia-reperfusioon ja mürgistus. Pärast pikaajalist arengut kipub see haigus krooniliseks muutumaneeruhaigus,kongestiivne südamepuudulikkus ja lõppstaadiumneeruhaigus.3–5) Kokkuvõttes võib AKI põhjustada tohutut majanduslikku koormust ning see suurendab praktiliselt patsientide psühholoogilist ja füüsilist koormust.Neerudisheemia-reperfusiooni peetakse praegu AKI kõige levinumaks põhjuseks ja see tekib tavaliselt trauma, kirurgilise resektsiooni võineeru siirdamine. Makrofaagid on üks peamisi põletikulisi rakke, millel on oluline roll AKI progresseerumisel. Mincle ekspresseerub peamiselt müeloidrakkudel ja neutrofiilidel, eriti makrofaagidel. Sellel on kõrgelt säilinud C-tüüpi lektiini domeen, mis on seenevastase immuunsuse peamine tegur. Algselt kinnitas Matsumoto mincle'i kui lipopolüsahhariidi (LPS) - indutseeritud valku, mis võib aktiveerida tuumafaktor-kappaB (NF-κB) Card{5}}Bcl10-MALT1 signaaliülekande kaudu, mille tulemuseks on tõhusate T-abistaja 1 (Th1) ja Th17 alatüüpide moodustumine, mis soodustavad põletikuliste tegurite ekspressiooni, et ühendada kaasasündinud ja adaptiivsed immuunvastused.6) Hiljutised uuringud on leidnud, et Mincle suudab rakkudes ära tunda ka igasuguseid ebanormaalseid aineid, tajuda kahjustusi. seotud signaale ja seejärel vastavatele vastustele vastata. Näiteks võib Mincle seostuda -GlcCeriga, mis on kahjustatud rakkudest pärit kõikjal esinev rakusisene metaboliit, aktiveerides ja indutseerides tsütokiine ning käivitades antigeenispetsiifilisi T-raku vastuseid.7) Mincle on retseptor, mis tunneb heterogeenset rakusurma, suudab ära tunda endogeense ligandi. SAP130, mida vabastavad surnud rakud, indutseerib põletikuliste tsütokiinide tootmist ja juhib neutrofiilide infiltratsiooni kahjustatud kudedesse.8,9) Nimelt kinnitab Lan'i töörühm, et Mincle indutseeritakse spetsiifiliselt M1 makrofaagidel ja see mängib võtmerolli põletikulise fenotüübi säilitamisel. M1 makrofaagid.6) Seetõttu võib sihipärane segateraapia olla AKI haiguse ravi võti.
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU FUNKTSIOONI
Oridoniin on Londonist ekstraheeritud kaurieeni luustikuga tetratsükliline dipeptiid, millel on lai valik bioloogilisi funktsioone, sealhulgas antimikroobne, kasvajavastane, põletikuvastane ja fibroosivastane. Paljud uuringud on teatanud nende looduslike diterpenoidide kasvajavastasest potentsiaalist ja mehhanismist paljudes vähirakuliinides.10,11) ning on kinnitatud, et Oridoniini kui vähivastase ravimina tehakse praegu I faasi kliinilisi uuringuid. Hiina. Oridonini roll aga aastalneeruhaigusteatatakse harva. Mitut tüüpi uuringud on kinnitanud, et Oridonin võib vähendada proteinuuria janeerukahjustusspontaanse erütematoosse luupuse hiiremudelites ja in vitro uuringud on leidnud, et Oridonin võib vähendada põletikuliste tsütokiinide sekretsiooni ja LPS-i poolt indutseeritud põletikulist vastust pärast ravi Oridoniniga.12,13) Selles uuringus keskendusime Oridoniini potentsiaali paljastamisele. AKI ravis ja kas selle aluseks olev mehhanism on seotud Mincle inhibeerimisega makrofaagides. See uuring võib anda tugevaid tõendeid AKI-ravimite skriinimiseks.
Märksõnad:Oridoniin; äge neerukahjustus (AKI); makrofaagid; hakkliha; põletik; neerufunktsioon
MATERJALID JA MEETODID LoomadKolmkümmend kuus isast C57BL/6 hiirt (vanuses 8–1 0 nädalat) saadi ettevõttest Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd. (Peking, Hiina) ning neid hoiti kontrollitud temperatuuri ja niiskusega ruumis. - Southwesti Meditsiiniülikooli loomkatsete keskuse kontrollitav ruum (vastavalt 21.0 ± 2,0 kraadi ja 65 ± 5 protsenti). Kõik hiired jagati stohhastiliselt kolme rühma: võltsrühm, isheemia-reperfusioonikahjustuse (IRI) mudelrühm (IRI rühm) ja Oridoniiniga töödeldud IRI rühm (OR rühm) (15 mg/kg). Enne operatsiooni anesteseeriti hiired intraperitoneaalse süstiga 45 mg/kg naatriumpentobarbitaali. AKI hiiremudel loodi kahepoolse klambriganeeru-arterites 35 minutit. Näidisrühma hiirtele eksponeeriti kõhuõõnde ainult 35 minutit, samal ajal kui OR-rühma hiirtele manustati 3 päeva pärast operatsiooni pidevalt intragastraalselt oridoniini ja teistele rühmadele anti kontrollrühmana sama kogus soolalahust. Hiired surmati kolmandal päeval soolalahusega lahjendatud pentobarbitaalnaatriumi (200 mg/kg) intraperitoneaalse süstiga. Kõik loomkatsete protseduurid viidi läbi vastavalt laboriloomade hooldamise juhistele (loa number 201812-55).
CISTANCHE PARANDAB neeru-/NEerupuudulikkust
Kemikaalid ja reaktiividOridoniin (BP1041, puhtus 95 protsenti või suurem) saadi ettevõttest Biopurify phytochemicals Ltd. (Chengdu, Hiina). NF-κB, p-AKT ja indutseeritavad lämmastikoksiidi süntaasi (iNOS) antikehad osteti ettevõttest Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA). Interleukiini (IL)-1, tuumori nekroosifaktori (TNF)-, Mincle, p-NF-κB ja AKT antikehad osteti ettevõttest Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Kogu RNA ekstraheerimise komplekt saadi firmalt Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd. (Peking, Hiina). Pöördtranskriptsiooni komplekt, reaalajas PCR komplekt, mille pakub Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd. (Shanghai, Hiina). LPS-i (Escherichia coli 055:B5) hankis Sigma Chemical (St. Louis, MO, USA). DNA transfektsiooni reaktiiv saadi firmast Zeta Life (Zeta Life, USA).
Rakukultuur ja transfektsioonidRAW264.7 rakud osteti Hiina Teaduste Akadeemia rakupangast (Shanghai, Hiina), kultiveeriti 37 kraadi juures 5% CO2 keskkonnas Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes (DMEM) kõrge glükoosisisaldusega söötmes. Seedimine viidi läbi, kui rakud kasvasid 80 protsendini. Kogu katses kasutati logaritmilise kasvufaasi rakke. Mincle üleekspressioon RAW264.7 rakkudes viidi läbi Mincle üleekspressiooni plasmiidi (Genechem, Shanghai, Hiina) transfektsiooniga rakkudesse Zeta Life Advanced DNA transfektsioonireagendiga. Rakkude morfoloogiat ja kasvustaatust jälgiti valgusmikroskoobiga.
Rakkude loenduskomplekti-8 (CCK-8) analüüsKolm tuhat rakku külvati 96-süvendiplaadile, kus iga rühma kohta oli 6 kordussüvend. Seejärel näljutati rakke seerumivabas söötmes 24 tundi, millele järgnes ravi ravimit sisaldava söötmega 24 tundi. Seejärel lisage pärast söötme eemaldamist igasse süvendisse 100 µL 10% CCK-8 reaktiivi ja inkubeerige 3 tundi. Rakkude ellujäämise määr arvutati iga süvendi neeldumisväärtuse järgi.
Neerufunktsiooni hindamineSeerumi kreatiniini ja uurea lämmastiku taset mõõdeti sobiva komplekti abil (Jiancheng, Nanjing, Hiina). Väärtused on väljendatud mmol/l seerumi kohta.
Hematoksüliini-eosiini (H&E) ja perioodilise happe-Schiffi (PAS) värvimineKogutudneerudkude pandi 24 tunniks 4-protsendilisse paraformaldehüüdi ja seejärel erineva kontsentratsiooniga etanoolilahustesse ning sisestamiseks ksüleeni- ja vahaplokkidesse. Enne värvimist pandi slaidid 2 tunniks 60-kraadisesse ahju ning seejärel vahatati ja rehüdreeriti. Mõned proovid värviti eosiini ja hematoksüliini pigmentidega, teistele proovidele lisati eraldi perioodiline happealkohol ja Schifffdye lahus. Lõpuks vaadeldi ja pildistati mikroskoobikaameras.
Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA)IL-1, IL-6 ja TNF- taset rakukultuuri supernatandis mõõdeti ELISA komplektidega (IL-1: Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience). , EMC004; TNF-: Neobioscience, 500850). Tehke proovide testimine vastavalt reaktiivi tarnija esitatud meetodile ja arvutage iga rühma kontsentratsiooni väärtus standardkõvera järgi.
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU VALU
Western BlotKõik looma- ja rakuproovid lüüsiti radioimmunosadestamise testi (RIPA) puhvris jääl ja tsentrifuugiti, et saada vastav valguproov. Iga proovi valgukontsentratsiooni määramiseks kasutati Coomassie briljantsinise testi ja geeli töödeldi teatud koguse valguproovidega. Iga valkude rühm eraldati naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga (SDS-PAGE) ja kanti seejärel polüvinülideendifluoriidi (PVDF) membraanile. Pärast membraani inkubeerimist primaarsete antikehadega üleöö temperatuuril 4 kraadi, inkubeeriti sekundaarseid antikehi toatemperatuuril 1 tund. Riba värv on välja töötatud värvi arendava lahendusega ja riba halli intensiivsus arvutati Image J tarkvara abil.
Reaalajas PCRKogu RNA saadi vastavalt Tiangeni komplekti kasutusjuhendile ja lahustati ensüümivabas vees. Vastavalt asjakohastele juhistele kasutame cDNA sünteesimiseks pöördtranskriptsioonikomplekti. RT-PCR reaktsioonitingimused viidi läbi järgmiselt: 37 kraadi 15 minutit, 95 kraadi 5 minutit ja seejärel 40 tsüklit
95 kraadi 10 minutit, 95 kraadi 15 sekundit ja 60 kraadi 1 min. Iga geeni suhteline mRNA ekspressioonitase normaliseeriti glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaasi (GAPDH) suhtes. Praimerite järjestused on näidatud tabelis 1.ImmunofluorestsentsvärvimineRAW264.7 rakud fikseeriti 4% paraformaldehüüdis, seejärel blokeeriti veise seerumi albumiiniga toatemperatuuril (rt) 1 tund ja inkubeeriti vastavate primaarsete antikehadega 4 kraadi juures üleöö. Pärast 3-kordset pesemist fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS) inkubeeriti rakke sekundaarsete antikehadega toatemperatuuril 1 tund. Tuum värviti 4′-6-diamidino- 2-fenüülindooliga (DAPI). Immunofluorestsentspildid jäädvustati Nikon Eclipse mikroskoobiga (Nikon, Tokyo, Jaapan).Statistiline analüüsStatistilise analüüsi tulemused on esitatud kui keskmine ± standardhälve (SD). Rühmadevahelised võrdlused viidi läbi ühesuunalise ANOVA abil, p.< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">
TULEMUSED
Oridoniini inhibeeritud isheemia-reperfusioonist põhjustatud neerukahjustus ja põletikSelleks, et hinnata oridoniini kaitsvat toimet AKI-leneerudisheemia-reperfusiooni poolt esile kutsutud, uurisime vere kreatiniini, uurea lämmastikku janeeru-hiirte tubulaarse vigastuse indeks igas rühmas, samuti põletikuliste tsütokiinide ekspressioon neerukoes ja hinnatineeru-patoloogia H&E ja PAS värvimisega. Tulemus on näidatud joonisel, et seerumi kreatiniini (joonis 1a) ja uurea lämmastiku (joonis 1b) tase AKI mudelrühmas vähenes, kui oridoniini süstiti pidevalt kolm päeva. Vastavalt näitas torukujulise vigastuse indeks, et Oridoniin vähendab tugevalt tubulaarset nekroosineerudAKI hiirtel (joonis 1c). Reaalajas PCR tulemused näitasid, et oridoniin vähendas oluliselt IL-1, MCP-1 ja F4/80 mRNA tasetneerudAKI mudelirühmast (joonised 1d–f). Veelgi enam, patoloogilise värvimise ja immunofluorestsentsi tulemused näitasid, et Oridonin vähendas oluliselt tubulaarset nekroosi (joonis 1g) ja põletikuliste tsütokiinide valgu taset (joonis 1h) AKI hiirtel, mis parandas tõhusalt neerukahjustusi, mis näitab, et Oridoninil oli märkimisväärne vigastusvastane toime. ja põletikuvastane toime AKI mudelile.
Oridoniini inhibeeritud Mincle/AKT/NF-κB signaalirada AKI hiirte neerudesOridoniini terapeutilise mehhanismi selgitamiseksneeru-põletikku, uurisime täiendavalt Mincle / AKT / NF-κB signaali aktiveerimist pärast Oridonini manustamist. Western blot tulemused näitasid, et Oridoniini sekkumine võib oluliselt vähendada põletikuga seotud valkude IL-1 ja iNOS ekspressiooni AKI-sneerudning vähendab AKT ja NF-κB raja valkude aktivatsiooni (joonised 2a–e), mis näitab, et oridoniin võib pärssida IRI poolt indutseeritud põletikkuneerudAKI-st. Nimelt näitasid reaalajas PCR ja Western blot tulemused, et Oridonin vähendas tõhusalt Mincle'i mRNA ja valgu taset veres.neerudAKI mudelist (joonised 2f, g). Mincle'i asukoha tuvastamiseksneerud, teostasime igas rühmas immunofluorestsentsi (joonis 2h), tulemused näitasid, et Mincle paiknesneeru-interstitium ja lokaliseeritud koos makrofaagimarkeriga F4/80, mis näitab, et Mincle ekspresseeriti peamiseltneeru-makrofaagid ja tugevalt ülesreguleeritud pärast AKI-d. Immuno-FL fluorestsentsi tulemused näitasid ka, et makrofaagid suurenesid oluliselt pärast AKI-d, mis viitab makrofaagide olulisele rollile AKI arengus. Nimelt inhibeeris Oridonin märkimisväärselt Mincle'ineeru-AKI hiirte makrofaagid. Ülaltoodud tulemused näitavad, et Oridonin võib paranedaneerudpõletik ja vigastus, pärssides Mincle / AKT / NF-KB signaaliülekannet.
Oridonin taastas märkimisväärselt LPS-i põhjustatud RAW264.7 makrofaagide morfoloogilisi muutusiOridoniini mõju uurimiseks põletikulistele makrofaagidele kasutasime LPS-i, et stimuleerida RAW264.7 rakke, et luuapõletikulise raku mudel. Oridoniini keemiline struktuur on näidatud joonisel 3a. Seetõttu testisime Oridoniini toksilisust erinevatel kontsentratsioonidel RAW264.7 rakkudel. CCK8 tulemused näitavad, et kui kontsentratsioon on 5 uM, ei oma oridoniinil olulist mõju raku morfoloogiale (joonis 3b), mida kasutati järgnevates in vitro katsetes. Üllatuslikult avastasime, et Oridonin parandas oluliselt LPS-i indutseeritud makrofaagide morfoloogiat (joonis 3c), sealhulgas vähendas rakusiseseid vakuoole ja muutis rakud tahkemaks.
Oridoniin pärssis LPS-stimuleeritud RAW264.7 põletikuliste faktorite sekretsiooni ja ekspressiooniRakud Oridoniini põletikuvastase toime selgitamiseks LPS-stimuleeritud RAW264.7 rakkudele kasutasime iga rakurühma poolt sekreteeritavate põletikuliste tegurite mõõtmiseks reaalajas FL-fluorestsents-PCR-i, ELISA-d ja immunofluorestsentsi. Tulemused näitasid, et Oridonin vähendas oluliselt IL-1, IL-6, TNF-, iNOS-i ja MCP-1 mRNA taset LPS-stimuleeritud rakkudes (joonised 4a–e). Lisaks vähendas Oridoniin oluliselt ka IL-1, IL-6 ja TNF- sekretsiooni supernatandis põletikulise raku mudelis (joonised 4f–h) ning valgu taset põletikulised tsütokiinid LPS-stimuleeritud makrofaagides (joonis 4i). Ülaltoodud tulemused näitavad, et Oridoniinil on makrofaagides ilmne põletikuvastane toime.
Oridoniin blokeeris Mincle / AKT / NF-κB signaaliraja põletikulistes makrofaagides in vitroMincle kui mustrituvastuse retseptor on oluline makrofaagidega seotud põletiku soodustamiseksneerudAKI-st. Ülaltoodud loomkatsete tulemused näitasid, et Oridonin võib Mincle ekspressiooni alla reguleeridaneerudAKI-st. Seetõttu uurisime täiendavalt, kas Oridonin võib LPS-stimuleeritud makrofaagide põletikumudelis vähendada Mincle mRNA ja valgu taset. Western blot, immunofluorestsentsi ja reaalajas PCR tulemused näitasid, et 5 µM oridoniin mitte ainult ei vähendanud oluliselt mRNA ekspressiooni (joonis 5c), vaid ka vähendas Mincle valgu taset põletikulistes makrofaagides (joonised 5a, b). , d). Lisaks reguleeris Oridonin märkimisväärselt iNOS-i ja fosforüülitud-AKT ja NF-KB valgu taset LPS-iga töödeldud RAW264.7 rakkudes.
Mincle'i üleekspressioon kõrvaldas oridoniini pärssiva toime põletikule LPS-stimuleeritud RAW264.7 rakkudesSelleks, et teha kindlaks, kas Mincle on Oridonini peamine sihtmärk, mis pärsib põletikku makrofaagides, transfekteerisime RAW264.7 rakud Mincle üleekspressiooniplasmiidiga, et reguleerida Mincle ekspressiooni. Vastavalt reaalajas PCR ja Western blot tulemustele näidati, et Mincle mRNA ja valgu tase RAW264.7 rakkudes tõusis pärast transfektsiooni (joonised 6a, b). Plasmiid transfekteeriti seejärel Oridoniiniga töödeldud põletikulistesse rakkudesse ja tulemused näitasid, et selle rühma rakkudes suurenes ka Mincle ekspressioon (joonised 6c, d). Vektor transfekteeriti rakkudesse negatiivse kontrollina. Taastumiskatsete tulemused näitasid, et Mincle'i üleekspressioon Oridoniiniga töödeldud põletikulistes makrofaagides reguleeris AKT ja NF-κB aktiveerimist, suurendades nende kahe valgu fosforüülimise taset (joonised 6d–g), mis viitab sellele, et Oridonin inhibeerib makrofaagide põletikku. võib läbi allareguleeriva Mincle'i ja selle allavoolu AKT ja NF-κB signaalimise. Veelgi enam, reaalajas PCR ja ELISA tulemused näitasid, et Mincle'i üleekspressioon taastas tsütokiinide ekspressiooni ja sekretsiooni Oridoniiniga töödeldud põletikulistes makrofaagides (joonised 6h–l). Ülaltoodud tulemused näitasid, et Oridonin inhibeerib põletikku makrofaagides, reguleerides Mincle / AKT / NF-κB signaaliülekannet.
ARUTELU
AKI on kliiniline sündroom, mida põhjustavad mitmesugused etioloogiad ja patoloogilised mehhanismid.Neerudisheemia-reperfusioonikahjustus on kliinikutes tavaline patofüsioloogiline protsess ja see on üks peamisi ägedate haiguste põhjuseid.neerukahjustus.14,15) Põletikuline reaktsioon on keeruline võrgustik, mis on seotudneeru-parenhüümirakud ja püsivad immuunrakud, milles makrofaagid mängivad olulist rollineerukahjustus.16) Immuunse mikrokeskkonna muutuste tõttu polariseeritakse makrofaagid mitmeks fenotüübiks, mis jagunevad peamiselt M1 ja M2 tüüpideks. iNOS-i avaldis on M1 tüüpi märk. Nii in vivo kui ka in vitro uuringutes leiti, et iNOS-i ekspressioon on mudelrühmas suurenenud ja pärast ravi ekspressioon väheneb. Makrofaagide poolt indutseeritud C-tüüpi lektiin (Mincle) on C-tüüpi lektiini retseptor, mida ekspresseeritakse aktiveeritud makrofaagidel ja mis paikneb geneetiliselt hiire 6F2 ja inimese kromosoomil 12P31. Mõned uuringud on teatanud, et Mincle osaleb kaasasündinud immuunvastuse algatamises, tuvastades patogeeniga seotud molekulaarse mustri tuvastamise retseptoreid.17) Mõned eksperimentaalsed uuringud on leidnud, et pärast ajuisheemia kahjustust hiirtel on valgete vereliblede suurenenud infiltratsioon vigastatud piirkonnas. võib põhjustada neuronite kadu veresoonte perfusiooni piirkonnas ja Mincle'i väljatõrjumine võib märkimisväärselt
aeglustada keskmise ajuarteri oklusiooni põhjustatud isheemilist vigastust. Viimased uuringud näitavad, et Mincle tunneb surmaneeru-tubulaarsed epiteelirakud, mis kombineeritakse -glükosüültseramiidiga, kiirendades põletikulist reaktsiooni ja viivitades põletiku eliminatsiooni.18) Uuringudneeruhaiguson sama, mis meie uurimistulemused, mis on näidanud, et Mincle ekspresseerub tugevalt nii isheemia-reperfusiooni kui ka tsisplatiini poolt indutseeritud AKI mudelites ning seda ekspresseeritakse spetsiifiliselt M1--tüüpi makrofaagidel. Kokkuvõttes võib Mincle'i sihipärane uuring olla uus ravimeetod põletikuliste makrofaagide põhjustatud seotud haiguste jaoks. Meie uuring näitas, et AKI hiirte mudelis on Mincle ekspressioon suurenenud
konstrueeritud isheemia-reperfusiooni teel. Immunofluorestsentsi kaaslokaliseerimise tulemuste kohaselt väljendub Mincle peamiseltneerudmudelrühma hiirte makrofaagid ja on kooskõlas Lani uuringute tulemustega. Mincle indutseeritakse spetsiifiliselt M1 makrofaagidel, kus Mincle-sky signalisatsioon soodustab ja säilitab M1 makrofaagide põletikulisi fenotüüpe ägedas staadiumis.neerupõletik.6) Mincle kuulub C-tüüpi lektiini retseptorisse (CLR), mis võib ära tunda seened ja muud mikroorganismide vormid või aseptilised ohud. Nad kutsuvad esile põletiku linkervalgu CARD9 kaudu, millele järgneb CARD9-Bcl10 kompleksi ja tüüpilise NF-κB regulatsiooni kokkupanek. Seal on regulatiivne suhe
NF-κB ja AKT valgu vahel.10,19) LPS-stimuleeritud makrofaagide põletikuuuringus kontrolliti, et AKT ja NF-κB ekspressioon on suurenenud. Seejärel transfekteerisime Mincle'i kõrge ekspressiooniga plasmiidi rakku, mida töödeldi ravimi sekkumisega, ja tulemused näitasid, et AKT ja NF-KB signaaliraja signaalirada oli uuesti aktiveeritud. Võib järeldada, et Mincle võib mõjutada selle raja valgu ekspressiooni. Siiski pole selge, kuidas Mincle neid kahte signaalirada üles reguleerib, ja pole selge, kas valk aktiveeritakse taevaraja kaudu, nagu teatatud uuringud näitavad.
Oridoniin on Orionist ekstraheeritud looduslik diterpenoidühend ja sellel on lai valik farmakoloogilisi toimeid, sealhulgas kasvajavastane, põletikuvastane ja neuroprotektsioon. Oridoniini neuroprotektiivset funktsiooni käsitlevas uuringus leidis Weni töörühm, et Oridonin võib blokeerida insuliiniresistentsust, pärssides autofagiat, et parandada kognitiivset düsfunktsiooni.20) Lini töörühm leidis, et Oridonin võib kaitsta Parkinsoni tõve ja krampide eest, vähendades neurooksüdatiivset stressi ja muid neuroprotektiivseid toimeid. 21) Kõige põhjalikumalt on uuritud Oridoniini kasvajavastast toimet. Uurimisrühm valmistas ravimi mitteväikerakk-kopsuvähi mudelhiirte raviks inhaleeritavateks osakesteks, millel oli tugev angiogeneesi inhibeeriv ja apoptootiline toime ning millel oli märkimisväärne vähivastane toime.22) Oridoniinil võib olla ka põletikuvastane toime. mõju. See võib pärssida Notchi rada, indutseerida makrofaagide polariseerumist, et lülituda põletikuvastasele fenotüübile ja pärssida autoimmuunse neuriidi teket.23)
Samuti võib see leevendada osteoartriidi teket, inhibeerides põletikuliste faktorite sekretsiooni ja redutseeriva oksüdaasi tootmist.24) Mõned uuringud on näidanud, et Oridoniinil on märkimisväärne mõju ka erinevateleneeruhaigused. Uuringud on näidanud, et oridoniin võib teha koostööd 5-fluorouratsiiliga (5-FU), et avaldada kasvajavastast toimet ja tugevdada 5-FU tsütotoksilisustneeru-Vähirakud.25) Selle uuringu in vivo katsetulemuste kohaselt võib Oridonin oluliselt vähendada seerumi kreatiniini uurea lämmastiku sisaldust isheemia-reperfusioonikahjustusega hiirtel ja oluliselt vähendada selle patoloogilisi kahjustusi. Tulemused näitasid ka, et Oridonin võib pärssida AKT ja NF-κB raja pärssimisega seotud põletikulist aktiivsust, mis on sarnane Oridonini diabeetilise nefropaatia sekkumise uurimistulemustega ning võib samaaegselt vähendada põletikuliste tsütokiinide infiltratsiooni ja teemaksu aktiivsust. nagu retseptor 4 (TLR4)/NF-κB signaaliülekanderada.26) Ülaltoodud tulemused näitasid, et Oridonin võib pärssida Mincle'i ja pärssida AKT ja NF-KB raja aktiivsust. In vitro katsetes suurendati neid radade indikaatoreid LPS-i poolt stimuleeritud makrofaagide põletiku mudelis ja vähendas neid ka Oridonin. Taastamiskatsete tulemused näitasid, et Mincle'i üleekspressioon Oridoniiniga töödeldud põletikulistes makrofaagides suurendas AKT ja NF-KB signaaliülekande aktiivsust, mille tulemuseks oli põletikuliste tsütokiinide ekspressiooni ja sekretsiooni ülesreguleerimine Oridoniiniga töödeldud rakkudes, mis viitab sellele, et Oridonin pärsib põletikku makrofaagid võivad Mincle ja AKT/NF-κB signaalide pärssimise kaudu
CISTANCHE PARANDAB NEeru-/NEERUNEKTSIOONI
AKI loommudelite konstrueerimiseks on palju võimalusi, sealhulgas kahepoolne isheemia-reperfusioon, ühepoolne IRI koos kontralateraalse nefrektoomiaga, tsisplatiin, difteeriatoksiin, LPS, aristolochhape või foolhape. Siiski ei saa tsisplatiini süstimine kliinilisi patsiente täielikult simuleerida. Difteeriatoksiini süstimisega indutseeritud mudel kipub pikendama haiguse progresseerumistneeruhaigus, mis võib peamiselt kaasa tuuaneeru-fifibroos ja glomerulaarskleroos, samuti kerge tubulaarkahjustus. Aristolohhappe nefropaatia on tubulointerstitsiaalne nefriit ja foolhape on ka nefrotoksilisuse indutseerija.neeru-fifibroos, kuid nende kahe kliiniline esinemissagedus on madal.27) IRI-st põhjustatud ägeneerukahjustuson ülemaailmne rahvatervise probleem, mis on seotud kõrge haigestumuse, suremuse ja tervishoiukuludega. Seetõttu kasutame akuutse konstrueerimiseks isheemia-reperfusioonineerudvigastatud hiirte mudel. Mitmed uuringud on teatanud erinevatest kinnitusaegadestneeru-arter. Uurimisrühm lõi kahepoolseks kinnitamiseks IRI loomamudelineeru-Sprague-Dawley (SD) rottide pediklid 1 tund.28) Teine uurimisrühm kinnitas kahepoolse klambriganeeru-arterites 45 minutit, et valmistada Wistari rottidel reperfusioonimudel. Lisaks viidi läbi uuring C57BL/6J hiirtega, et kinnitada kahepoolsed neerupead 35 minutiks, et ehitada mudel.29) Varasemate katsetulemuste põhjal leiti, et reperfusioon jätkus pärast kahepoolsetneeru-arter kinnitati 20 minutiks ja seerumi kreatiniinitase taastus kolm päeva hiljem normaalsele algtasemele. Seetõttu otsustasime enne reperfusiooni kahepoolsed neeruarterid 35 minutiks kinnitada ja seerumi kreatiniinisisalduse muutused olid pärast operatsiooni kolme päeva jooksul stabiilsed. Operatsiooni ajal võime jälgida, et värvineerudmuutub roosast helepunaseks, mis on põhjustatudneeru-arteri vaskulaarne isheemia. Pärast klambri eemaldamist 35 minutit hiljem võime jälgida, et klambri värvusneerudnaaseb normaalseks, konstrueeriti IRI-AKI mudel. Kokkuvõttes näitas see leid, et Oridoniinil on märkimisväärne põletikuvastane toime ja see võib kaitsta AKI-s neere vigastuste eest, mis võib peamiselt hõlmata Mincle'i pärssimist ja selle NF-KB ja AKT allavoolu signaaliülekande aktiivsust. See uuring pakub AKI jaoks uut potentsiaalset Oridoniini ravi mehhanismi, mis võib pakkuda võimalusi AKI kliiniliseks raviks.