Neerude säilivuse/reperfusioonikahjustuse vähendamine kontrollitud hüpertermia tõttu ex vivo masinperfusiooni ajal

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Thomas Minor1,*,† ja Charlotte von Horn1,†

Kontrollitud lühiajalise kuumašokiravi võimalik reno-kaitsev toime doonoritransplantaatide isoleeritud ex vivo masinperfusiooni ajal ennereperfusioontuleks uurida esmases in vitro uuringus.Sealihaneerud(n=14) saadi pärast 20-minutilist doonori südame seiskumist ja allutati 20-tunnisele staatilisele külmhoiustamisele Wisconsini ülikooli lahuses. Ennereperfusioon, neerudallutati 2-tunnisele konditsioneerimismasina perfusioonile koos perfusioonitemperatuuri järkjärgulise tõusuga kuni 35 kraadini. Poolesneerud(n=7), rakendati masina perfusiooniperioodil lühike hüpertermiline impulss (10 minutit perfusiooni 42 kraadi juures). Normotermilise reperfusiooni korral in vitro täheldati transplantaatide funktsionaalset taastumist. Hüpertermilise ravi tulemusena suurenes kuumašoki valgu (HSP) 70 ja HSP 27 mRNA sisaldus 50 protsenti ning sellega kaasnes naatriumi ja glükoosi tubulaarse reabsorptsiooni paranemine reperfusioonil umbes 50 protsenti võrreldes kontrollidega. Lisaks vähenes aspartaataminotransferaasi kadu neerude kaudu märkimisväärselt ühe kolmandikuni kontrollidest, nagu ka uriini valgu kadu, mida hinnati albumiini ja kreatiniini suhte järgi. On jõutud järeldusele, et ex vivo kuumašokiravi näib olevat kergesti rakendatav ja paljutõotav võimalus neerude enesekaitsemehhanismide tugevdamiseks.reperfusioonvigastuspärast säilitamist, mis väärib täiendavat uurimist prekliinilistes mudelites.

Cistanche dr vita opcon väga heaneerudreperfusioon

Uuringu tipphetked

MIS ON TEEMAL HETKE TEADMISED?

✔ Kuumašokivalkude (HSP) esilekutsumine kohalikes kudedes on hästi tuntud kaitsemehhanism vastuseks keskkonnastressidele. Nende molekulaarsete chaperonide ülesreguleerimine kutsub esile parandusmehhanismid ja tolerantsuse järgnevate raku suhtesvigastus. Kliinilineneerudsiirdamine tugineb üha enam laiendatud kriteeriumide alusel doonorelundite kasutamisele, millel on suurem vastuvõtlikkus isheemiale/reperfusioonilevigastus. Äärepoolsete elunditransplantaatide ex vivo masinperfusioon tagab privilegeeritud juurdepääsu transplantaadile ja uue perspektiivi hüpertermilise stimulatsiooni lihtsaks ja kontrollitud rakendamiseks isoleeritud elundile, et käivitada kuumašoki reaktsioone ja vabastada signaaliteed, mis mõjutavad soodsalt kudede järjestikust ägenemist. vigastada ja parandadaneeru-taastumine pärast siirdamist.

MILLIST KÜSIMUST SEE UURING Adresseeris?

✔ Uurime lühikese hüpertermilise stiimuli potentsiaalset kaitsvat toimet ex vivo siirdamiseelsel ajalneerudperfusioonfunktsionaalse tulemuse kohta postsheemia korralreperfusioon.

MIDA SEE UURING MEIE TEADMISELE LISAB ANNAB?

✔ See uuring annab mõningaid viiteid selle kohta, et hüpertermiline ravi ex vivo neerumasina perfusiooni ajal toimib võimaliku uudse vahendina vähesäilinud patsientide funktsionaalsete tulemuste parandamiseks.neerudPostiskeemilise reperfusiooni korral. Andmed toetavad HSP-de olulist rolli rakkude hävimise vähendamisel ja siirdamisjärgse tubulaarse neerufunktsiooni parandamisel.

KUIDAS SEE VÕIB MUUDADA KLIINILIST FARMAKOLI

OGYA VÕI TÕLKETEADUS?

✔ Lühiajalise kontrollitud hüpertermia lisamine kehtestatud normotermilise masina perfusiooniprotokolli on lihtsalt rakendatav meetod kliiniliseks kasutamiseks ja võib aidata kaasa elundite paranemisele pärast siirdamist.

Kliiniline neerusiirdamine tugineb üha enam laiendatud kriteeriumide alusel doonorelundite kasutamisele, mis on enne väljavõtmist kahjustatud või tõenäoliselt optimaalsest väiksemad.

kvaliteet. Koos nende organite osakaalu suurenemisega, millel on suurem vastuvõtlikkus isheemilise säilitamise korral kahjulikele vallandajatele, tekivad 1,2 kudede muutused.

isheemia/reperfusioonikahjustusega seotud probleem on neerusiirdamise puhul kasvav suur probleem, mis põhjustab reperfusioonil raku düsfunktsiooni.

Rakuliste chaperoonide esilekutsumine ja kaitsva signaali fenotüübi käivitamine (nt subkriitilise termilise stressi tõttu) on hästi tuntud mehhanism hilisema stressiolukorraga seotud kudede muutuste vähendamiseks ja koe homöostaasi mõjutamiseks.

Isoleeritud masinperfusiooni tulek alternatiivina või täiendusena marginaalsete doonoritransplantaatide isheemilisele külmhoiustamisele on avanud uue perspektiivi isoleeritud elundi hüpertermilise väljakutse hõlpsaks ja kontrollitud rakendamiseks, et vallandada kuumašoki reaktsioon ja vallandada signaal. teed, mis mõjutavad soodsalt koekahjustuse järjestikust ägenemist ja parandavad neerude taastumist pärast siirdamist.

Eksperimentaalselt on tõestatud, et kuumašoki reaktsiooni eelkonditsioneeriv toime on seotud tsütoresistentsuse ajutise normiülese suurenemisega5, samuti toimib raku sekundaarsete paranemismehhanismide tõhustamise kaudu.6 Hiljuti on näidatud, et induktsioon Kuumašokivalgud (HSP) võivad anda kaitse isegi siis, kui need on esile kutsutud varakult pärast seda, kui koe algne solvamine on juba toimunud.

Privilegeeritud juurdepääs isoleeritud elundile välistab tülikad nõuded kogu keha soojendamiseks ja avaldab kahjulikke kõrvalmõjusid doonor- või retsipientorganismidele.

Seetõttu oli see uuring mõeldud pilootuuringuks, et uurida esmaseid tõendeid hüpertermilise ravi kohta ex vivo neerumasina perfusiooni ajal, et toimida võimaliku uudse vahendina vähesel määral säilinud neerude funktsionaalse tulemuste parandamiseks postsheemilise reperfusiooni korral.

MEETODID

Kõik katsed viidi läbi neerudega, mis saadi surnud saksa maatõugu sigadelt (vanus: 10–12 nädalat, kaal: 25 ja 30 kg). Järgiti föderaalseadust loomade kaitse ja laboriloomade hooldamise põhimõtete kohta (National Institute of Health (NIH) väljaanne nr 85-23, muudetud 1985). Loomi koheldi vastavalt reeglitele ja pärast kohalike võimude heakskiitu.

Neerud eemaldati 20 minutit pärast vereringe seiskumist ja loputati tagalaual 100 cm raskusjõuga Wisconsini ülikooli külma (4 kraadise) lahusega, kuni heitvesi muutus selgeks. Hepariini ei antud kunagi.

Seejärel hoiti siirikuid 18 tundi keeduklaasis, mis oli täidetud Wisconsini ülikooli lahusega ja temperatuuri reguleeriti krüotermostaadi abil 4 kraadini.

Kontrollrühmas allutati neerudele 2 tundi hapnikuga küllastunud (95 protsenti O2; 5 protsenti CO2) normotermilist masinperfusiooni Aqix RS I lahusega, millele oli lisatud 40 g/l veise seerumi albumiini. Nagu varem välja pakutud, alustati 8,9 perfusiooni hüpotermia korral, millele järgnes astmeline tõus kuni 35 kraadini esimese 60 minuti jooksul, mida kontrollis programmeeritav tsirkuleeriv krüotermostaat.

Katserühmas lisati isoleeritud perfusioonile lühike kontrollitud hüpertermia (CH) periood

Ex vivo väiksemate organite siirikute kuumašoki ravi ja von Horni protokoll. Pärast 35 kraadini jõudmist tõsteti perfusaadi temperatuur ajutiselt 43 kraadini 10 minutiks (joonis 1) enne perfusiooni jätkamist 35 kraadi juures ülejäänud 2-tunnise perioodi jooksul. Temperatuuri tõusu aeg ja kõrgus on tuletatud eelnevatest järkjärgulistest sõelumiskatsetest, mille eesmärk on saavutada järjepidev mõju.

Kolmes katses kontrolliti hapniku osarõhku koes mikrokiust nõel-tüüpi optilise hapnikuanduri abil, mis oli ühendatud temperatuurikompenseeritud fiiberoptilise hapnikumõõturiga (Microx 4, PreSens precision sensing, Regensburg, Saksamaa), mis samaaegselt salvestas vastava temperatuuri termistori sondi abil.

Nõel asetati neeru sisemise kortikaalsesse piirkonda, et dokumenteerida kudede piisavat hapnikuga varustamist isegi hüpertermiliste perfusiooniperioodide ajal.

Isoleeritud neeru reperfusioonimudel

Neerude taastumist säilitus-/reperfusioonikahjustusest hinnati väljakujunenud in vitro reperfusioonimudeli abil, nagu eelnevalt kirjeldatud.10

Lühidalt öeldes loputati neerud külmalt 100 ml soolalahusega masina taastamisperioodi lõpus ja hoiti seejärel toatemperatuuril 20 minutit, et simuleerida teist sooja isheemiaperioodi kirurgilise implanteerimise ajal in vivo. Seda aega kasutati ka kusejuhi kanüülimiseks suure toruga, et võimaldada reperfusioonil uriini kogumist.

Neerud pandi termostaadiga kontrollitud pleksiklaasist kambrisse ja perfuseeriti neeruarteri kaudu keskmise pulseeriva rõhuga 90 mmHg. Venoosne heitvesi voolas vabalt reservuaari. Perfusaadi hapnikuga varustamine viidi läbi 95% O2/5% CO2-ga, kasutades termoreguleeritud õõneskiudoksügenaatorit. Arteriaalset rõhku hoiti servojuhitava rullpumba abil koos rõhuanduriga, mis oli ühendatud arteriaalse perfusioonikanüüliga. Uriin koguti PE-torust, mis sisestati kusejuhasse, mis juhiti reservuaari välisküljele. Iga 100 ml kogutud uriini filtreeriti ja infundeeriti uuesti reservuaari.

Joonis 1Neerudkortikaalse koe pO2 (punktiirjoon) ex vivo masinperfusiooni ajal vastava perfusaadi temperatuuri suhtes (pidev joon).

perfusaadi elektrolüüdi konstantse koostise säilitamiseks aja jooksul.

Analüütilised protseduurid

Hapniku osarõhku ning glükoosi ja elektrolüütide perfusaadi kontsentratsioone mõõdeti pH-veregaasi analüsaatoris (ABL 815flex happe-aluse laboratoorium, Radiometer, Kopenhaagen).

Aspartaataminotransferaasi (AST) ensüümi aktiivsus ja kreatiniini kontsentratsioonid määrati rutiinsel viisil peegeldusfotomeetriaga Reflotron Plusi hoolduspunktis (Roche Diagnostics, Mannheim, Saksamaa).

Neerudkliirens arvutati vastavate intervallide jaoks kui uriini kreatiniin × uriini vool / perfuseeritud kreatiniin.

Albumiini kontsentratsiooni uriinifraktsioonis mõõdeti katse lõpus fotomeetriliselt, kasutades ülikooli haigla laborikeskuses bromokresoolrohelise värvaine sidumisanalüüsi ja valgu kogus normaliseeriti vastavalt uriini albumiini kreatiniini kontsentratsioonile. kreatiniini suhe.

Filtreeritud naatriumikoormus (FL Na) arvutati järgmiselt

FL=GFR × Na

FRNa=(FLNa − Na(uriin) × uriinivool)∕FLNa

Filtreeritud koormus ja glükoosi osaline reabsorptsioon arvutati vastavalt.

Pöördtranskriptsioon ja sellele järgnev polümeraasi ahelreaktsioon

Kogu RNA eraldati välimise ajukoore kiirkülmutatud koeproovidest ja analüüsiti nii, nagu eelnevalt kirjeldatud.

Algväärtused arvutati koeproovide põhjal, mis olid võetud elutähtsastneerudex vivo. Tulemused kvantifitseeriti, kasutades ΔΔCt meetodit. Sihtgeenid normaliseeriti sisestandardina glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaasiks. Voldi geeniekspressiooni väärtused arvutati iga üksiku proovi jaoks, normaliseerituna algväärtuste suhtes.

Uuringus kasutati järgmisi praimereid (ostetud ettevõttest Qiagen GmbH, Hilden, Saksamaa): glütseraldehüüd 3-fosfaatdehüdrogenaas (nr PPS00192A), HSP72 (nr PPS00074A), HSP27 (nr PPS01262) ja HO{ {6}} (nr PPS01191A).

Western Blot

Valgu immunoblotanalüüs viidi läbi välimistest täisrakulüsaatidestneeru-ajukoore naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesi ja elektroforeetilise ülekandega nitrotselluloosmembraanile, nagu eelnevalt kirjeldatud.8 Värvimine viidi läbi Ponceau S-ga, mis kontrollis valgu laadimise ja ülekande ühtlust.

Inkubeerimine primaarsete antikehadega viidi läbi üleöö temperatuuril 4 kraadi (küüliku anti-fosfo ekstratsellulaarne signaaliga reguleeritud kinaas (ERK, Thermo Fisher, #MA5-15174—1:500) või anti-HSP 72 (StressMarq Bioscience, #SCM) -100—1:300). Pärast mädarõika peroksidaasiga seotud sekundaarse antikehaga (1:1,000) 1-tunnist inkubeerimist toatemperatuuril tuvastati valk tugevdatud kemoluminestsentsi abil, kasutades C-numbrilist bloti. Skänner (Li-COR).

Valgusisalduse kvantifitseerimine viidi läbi densitomeetriliselt UN-SCAN-IT geeli versiooniga 6.1 (Silk Scientific, Orem UT), mis normaliseeriti kogu ERK (Thermo Fisher, #MA5-15174) või ß-aktiini (Thermo Fisher) ekspressiooni suhtes. , #PA1-46296).

Statistika

Kõik väärtused on väljendatud keskmistena ±SD n {{0}} looma kohta rühma kohta ja rühmadevahelisi erinevusi testiti paaritu, kahepoolse t-testiga, kasutades Welchi ebavõrdsete dispersioonide korrektsiooni, kui pole teisiti näidatud. Statistiline olulisus määrati väärtusele P <>

TULEMUSED

Masina perfusioon

Masinaga perfuseeritud transplantaatide kontrollitud hapnikuga soojendamise ajal põhjustas ajutine hüpertermia nähtava mööduva languse.neeru-kortikaalse koe pO2 (joonis 1), mis jäi sellest hoolimata alati üle 200 mmHg ja vastas seega selgelt normotermilise perfusiooni füsioloogilistele nõuetele, milleks oli teatatud 30–50 mmHg.11,12

NeerudAST vabanemine tsirkuleerivasse perfusaati oli hüpertermia rühmas isegi veidi madalam kui kontrolltingimustes (19,8 ± 12,1 vs. 33,3 ± 25,9 U/L; CH vs kontroll, ei ole oluline).

Mööduva hüpertermia molekulaarne näit ex vivo masina perfusiooni ajal

Säilitamine ja reperfusioon põhjustavad HSP-de märkimisväärset indutseerimist isegi kontrolltingimustes, kus hemoksügenaasi 1, HSP 27 mRNA transkriptide arv suureneb ~ 2--, 8-- ja isegi 100--kordselt. ja HSP 72 vastavalt.

Sellegipoolest suurendas masina perfusiooni ajal kontrollitud mööduv hüpertermia seda geeni induktsiooni suurenemist kõigil juhtudel umbes 50 protsenti. Mõju leiti olevat väga oluline nii HSP 27 kui ka HSP 72 puhul, samas kui heemi oksügenaasi 1 indutseerimise kohta statistilist olulisust ei leitud (joonis 2).

ERK fosforüülimine kujutab endast kiiret, reageerivat kaitsesignaali sündmust, mis võib samuti soodustada HSP 72.13 ekspressiooni

Seda uuriti kui kuumastressi varajast mõju valgu tasemele. Western blot analüüsid näitasid, et masinperfusiooni ajal tekkinud mööduv hüpertermia suurendas oluliselt ERK fosforüülimise kogust koes võrreldes kontrollrühmaga (joonis 3). Vastavalt sellele leiti, et pärast kontrollitud hüpertermiat masina perfusiooni ajal oli HSP 72 valgu ekspressioon oluliselt kõrgem kui kontrollväärtused.

Mööduv hüpertermia paranebneeru-taastumine pärast säilitamist

Perfusaadi vool reperfusiooni ajal oli keskmiselt 300–400 ml/min, kusjuures nende kahe vahel ei olnud erinevusi

rühmad. Uriini tootmine oli mõlemas rühmas samuti sarnane, 897 ± 354 vs. 601 ± 280 ml/90 minutit (kontroll vs. CH).

NeerudAST vabanemist võeti globaalse rakukahjustuse parameetrina ja seda jälgiti reperfusiooni ajal (joonis 4). On näha, et hüpertermiline ravi andis algselt madalamad väärtused reperfusiooni alguses ja leevendas veelgi progresseeruvat tõusu käimasoleva perfusiooni ajal.

Neerudtubulaarsete rakkude funktsiooni hinnati naatriumi ja glükoosi reabsorptsiooni analüüsiga ultrafiltraadist (joonis 5). Leiti, et fraktsionaalne reabsorptsiooni määrad alatesneerud, kes oli eelnevalt masinaga perfusiooni ajal kontrollitud hüpertermiaga, ületas märkimisväärselt kontrollrühma omasid ~ 40 protsendi võrra.

Et välistada võimalus, et kontrollineerudvõis olla laetud absoluutselt suurema naatriumi- või glükoosikoormusega ultrafiltraadis, määrasime ka mõlema aine kogufiltratsioonikoormuse, mis aga ei erinenud kahe rühma vahel, kusjuures FL Na oli 2,7 ± {{3 }},7 ja 2,5 ± 0,8 mmol/min ning FL glu kuni 24,8 ± 12,1 ja 28,6 ± 9,4 mg/min (vastavalt kontroll vs. CH).

Glomerulaarfiltratsiooni kiirused olid mõlemas rühmas samuti kahemõttelised; kreatiniini kliirensi väärtused olid kontrollrühmas {{0}},25 ± 0.06 ml/g/minutis ja 0,24 ± 0,08 ml/g/minutis pärast CH.

Seevastu uriini valgu leke vähenes oluliseltneerudmis allutati CH-le (joonis 6).

ARUTELU

Ex vivo masinperfusiooni kasutamine kujutab endast arenevat suundumust transplantaadi säilitamise juhtimises enne elundisiirdamist.

Viimasel kümnendil on hüpotermiline masinperfusioon kujunenud paremaks säilitusmeetodiks võrreldes lihtsa staatilise külmhoonega14,15 ning muutunud populaarseks nii kõrge riskiga kui ka laiendatud kriteeriumiorganite säilitamiseks.14–16

Veresoonkonna pulseeriv stimulatsioon kehavälisel perioodil17 ja hapniku olemasolu18 säilitasidneeru-homöostaasi ja parandadafunktsionaalnetulemused pärast siirdamist.

Hiljutised tehnilised edusammud on soodustanud uut suundumust normotermilise masinperfusiooni kui hüpotermilise perfusioonitehnoloogia füsioloogilisema alternatiivi poole, mis kompenseerib suuremad kulutused metaboolse homöostaasi parema säilimise ja autentsema võimalusega hinnata säilinud transplantaati. enne siirdamist.19,20

Lisaks sellele kujutab normotermiline masinperfusioon ideaalset platvormi terapeutilisteks sekkumisteks isoleeritud elundisse, mis võib teenida konditsioneerimise eesmärke, mille eesmärk on leevendada eelneva eemaldamise/säilitamise vigastuse tagajärgi või eeltingimuseks hilisema reperfusioonikahjustuse tekkeks pärast teist sooja isheemiat ja reperfusiooni siirdamisel.

cistanche neeru wirkung

Leiti, et kuumašoki ravi kui terapeutiline lähenemisviis soodustab väga tõhusaid kaitsemehhanisme neerudes ja kutsub esile tolerantsuse spetsiifiliste solvangute suhtes, stabiliseerides valgu struktuuri ja raku terviklikkust. See toime põhineb peamiselt spetsiifiliste HSP-de sünteesil, mis ekspresseeruvad konstitutiivselt neerudes ja mida saab vastusena mitmesugustele stressitingimustele tugevalt reguleerida.

See uuring näitab, et lühike hüpertermiline väljakutse isoleeritud neerude perfusiooni ajal kutsub tõhusalt esile molekulaarse kuumašoki reaktsiooni, mida tõendab transkriptsioonieelne ja valgu tase, ning aktiveerib ellujäämise signaalimise ERK raja kaudu. Kirjeldatud protseduur ei olnud seega seotud nähtava kudede hüpoksiaga, hoolimata isoleeritud perfusioonist ilma täiendavate hapnikukandjateta.

Varem on kindlaks tehtud, et HSP-de indutseerimine võib alata < 1 tunni jooksul21 ja HSP 72 ekspressioon suureneb paljudeni juba 3 tunni pärast.22 HSP 70 on kõige silmapaistvam hüpertermilisele stressile reageeriv kaperoon ja sellel on pöördeline roll. roll kudede kaitses raku enesekaitsemehhanismide suurendamise kaudu.5

HSP 72 hoiab ära valkude vale voltimise,5 hõlbustab kahjustatud valkude eemaldamist6 ning osaleb valkude ümbervoltimises ja parandamises. Rakkude parandamise protsesside toetamine, mis on palju odavamad kui de novo süntees. HSP 72 vähendab seega metaboolseid vajadusi kriitilises olukorras reperfusioonil pärast rakukahjustust21 ja aitab seeläbirakkude taastuminesolvamisest.

Lüsosomaalsete membraanide stabiliseerimine vähendab happe hüdrolaaside põhjustatud rakukahjustusi ja järjestikust rakusurma esilekutsumist. Molekulaarsel tasandil näitavad varasemad uuringud, et HSP 72 aktiveerib MEK/Erk raja ning asjakohane kaitseefekt on seotud Raf, MEK ja Erk fosforüülimise ja rakkude ellujäämisega.24,25 Seega viis CH meie mudelis olulise AST üldise vabanemise vähenemine, mida peeti üldise rakukahjustuse parameetriks. Lisaks nõrgendas ravi märkimisväärselt ka AST-i järkjärgulist tõusu käimasoleva reperfusiooni ajal.

Koos sellega toimus märkimisväärne leevendamineneerufunktsiooni häirekuna leiti, et torukujuliste rakkude reabsorptsioonivõime on kontrollväärtustega võrreldes suurenenud ~ 50 protsenti.

HSP 27 on madala molekulmassiga HSP, mis leiti olevat oluline tegur ka kaitsvas kuumašoki reaktsioonis neerudes.4 Uuringud rottide torukujuliste rakkudega näitavad, et HSP 27 akumuleerumine proksimaalsetes tuubulite rakkudes on seotud elulemuse ja elulemuse suurenemisega. regeneratsioon.26

Käesoleva pilootuuringu tulemuste põhjal näib lühiajalise hüpertermilise väljakutse rakendamine ex vivo masina perfusiooniprotokolli olevat lihtne viis vähesel määral säilinud neerutransplantaatide seisundi parandamiseks, mis suurendab rakulise enesekaitse tugevdamise kaudu vastupanuvõimet reperfusioonikahjustuste suhtes. masinad. Endiselt on vaidlusi selle üle, kas masinperfusioon tuleks teha kohe pärast siiriku hankimist27, hoolimata logistilistest ebamugavustest või kui lühike isheemiline perfusiooniperiood pärast elundi transportimist staatilise külmhoonega oleks piisav ja hõlpsamini rakendatav. kliiniline rutiin.28,29 Transplantaadi ex vivo konditsioneerimine CH-ga oleks võimalik mõlemal viisil.

Siiski tuleb ennatlike lõppjärelduste suhtes olla ettevaatlik. Isoleeritud perfuseeritud neer (IPK) on kasulik tööriist funktsionaalsete sõeluuringute jaoks30 ning korrelatsioonid IPK andmete ja kliiniliste tulemuste vahel muudavad IPK mudeli potentsiaalselt kasulikuks vahendiks neerufunktsiooni hindamisel.17,31 Siiski on mudeli üsna konstantne funktsionaalne võimekus. on piiratud mõne tunniga,32 mis välistab pikaajalised vaatlused.

Kuna HSP-de maksimaalne ekspressioon võib siiski ilmneda pärast seda aega,22 ei võeta meie pilootseades arvesse hüpertermilise ravi kaitsva toime võimalikku edasist suurenemist (nt paranenud regeneratsiooni osas pärast isheemilist insuldi). Lisaks on varasematest teiste mudelite uuringutest hästi teada, et kuumašoki ravi või lentiviiruse poolt indutseeritud HSP 27 üleekspressioon võib leevendada vigastatud sihtorganite põletikulist reaktiivsust.

koos neutrofiilide koesse infiltratsiooni olulise vähenemisega.33,34

Leukotsüütide infiltratsioon on omakorda teadaolevalt juhtiv akuutset tüüpi nähtus, mis vallandab pärast neeruisheemiat ja reperfusiooni in vivo kahjustavaid põletikulisi reaktsioone.

Kuid selleks, et välistada vererakkude aktiveerimise kaasnevad kahjulikud mõjud tehistorude pindadele, mis oleks vältimatu laiendatud in vitro mudeli korral, näib tegelik siirdamine ja reperfusioon füsioloogilistes tingimustes, sealhulgas veresoonte loomuliku morfoloogia korral, olevat kohustuslik, et täpselt käsitleda rakuprobleeme. põletikulisi mõjusid, mida käesolevas katseuuringus seetõttu ei käsitletud.

Lõpuks näitasid hiljutised leiud märkimisväärsetsoolised erinevusedisaste ja emaste proksimaalsetes tuubulite rakkudes ekspresseeritud transkriptides, mis võivad kajastada sooga seotud erinevusi kroonilise neeruhaiguse või põletikueelsete geenimoodulite puhul.35 Meie uuringus kasutati ainult emaseid loomi, vältides seega oletatavaid sooga seotud erinevusi. kuumašoki reaktsioonid. Teisest küljest ei ole käsitletud meeste kudede võimalikku erinevat käitumist ja seega ei saa seda selles uuringus arvesse võtta.

Kokkuvõttes näitavad meie senised andmed, et lühike hüpertermiline ex vivo perfusioon on lihtne viis isoleeritud neerutransplantaadi chaperone induktsiooniks, mis annab parenhüümi kaitse varajasel reperfusioonil ja nõuab täiendavat kinnitust, kasutades in vivo siirdamismudeleid koos pikendatud vaatlusajaga.

Tänuavaldused. Autorid tunnustavad tänulikult Bastiani ja Regina Lüeri väärtuslikku tehnilist abi.

Rahastamine. Selle töö jaoks raha ei saadud.

Huvide konflikt. Autorid ei deklareerinud selles töös konkureerivaid huve.

Autori kaastööd. TM ja CvH kirjutasid käsikirja. TM ja CvH kavandasid uuringu. TM ja CvH viisid läbi uuringu. TM ja CvH analüüsisid andmeid.