Kvertsetiin kui nefroprotektor pärast sooja isheemiat: histomorfomeetriline hindamine näriliste mudelis

Gabriela F. ostab Gonçalvesi¹, Maria Eduarda M. Silva², Francisco JB Sampaio¹, Marco A. Pereira-Sampaio^{1, 3}, Diogo Benchimol de Souza¹

ABSTRAKTNE

Eesmärk:Kvertsetiini võimaliku pikaajalise kaitsva toime kvantitatiivseks hindamiseks neerusooja isheemia ajal.

Materjalid ja meetodid:Isased rotid jaotati 4 rühma: võlts (S), võlts kvertsetiin (SQ), isheemia (I) ja isheemia kvertsetiin (IQ). Rühmad SQ ja IQ said enne ja pärast operatsiooni kvertsetiini (50 mg/kg). I ja IQ rühma vasakpoolsed neerusooned olid 60 minutiks kinni. Kõik loomad surmati neli nädalat pärast protseduuri ning mõõdeti seerumi uurea ja kreatiniini taset. Neerude kaal ja maht, ajukoore ja mittekoore pindala suhe (C-NC), ajukoore maht (CV), glomerulaarne mahutihedus (Vv[glom]), mahuga kaalutud glomerulaarmaht (VWGV) ja glomerulite arv per kohtaneerud(N[glom]) hinnati stereoloogiliste meetoditega. Tulemusi peeti statistiliselt olulisteks, kui p<>

Tulemused:Seerumi uurea tase I rühmas tõusis S rühmaga võrreldes 10,4 protsenti, kuid teiste rühmade vahel erinevusi ei täheldatud. I rühma C-NC oli madalam kui kõigi teiste rühmade omadel ja rühma IQ tulemused olid sarnased võltsrühmadega. I rühma Vv[glom] ja N[glom] olid madalamad kui rühmal S (vastavalt 33,7 protsenti ja 28,3 protsenti) ning rühma IQ-l ei olnud S-rühmaga võrreldes olulist erinevust.

Järeldused:Kvertsetiin oli efektiivne nefroprotektiivse ainena glomerulaarde kadumise ärahoidmisel, mida täheldatineerudallutati soojale isheemiale. See viitab sellele, et seda flavonoidi võib kasutada ennetavaltneerudoperatsioon, kui on vajalik soe isheemia, näiteks osaline nefrektoomia.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

cistanche meessoost eelised

SISSEJUHATUS

Osalist nefrektoomiat on peetud paikse väikese neerumassi kullastandardseks raviks (1, 2) ja seda on üha enam tehtud tänu diagnostiliste meetodite arengule (3). Vaatamata pidevale uurimis- ja arendustegevusele uute kirurgiliste meetodite väljatöötamiseks, mis hõlmavad külmaisheemiat ja nullisheemiat (4, 5), kasutatakse osalise nefrektoomia ajal siiski enamasti veretu operatsioonivälja saamiseks neerusooja isheemiat (6).

Seevastu neeruisheemia nefroni säästva operatsiooni ajal on seotud operatsioonijärgse glomerulaarkao ja ülejäänud parenhüümi funktsionaalse langusega (7, 8), mis võib põhjustada neerupuudulikkust. Seetõttu ravimid, millel võib olla kaitsev toimeneerudpreoperatiivsel, perioperatiivsel ja postoperatiivsel perioodil on õigustatud (9, 10).

Kvertsetiin on andnud positiivseid tulemusi erinevates katsetingimustes, peamiselt selle antioksüdantsete ja põletikuvastaste omaduste tõttu (11-14). See flavonoid on osutunud paljulubavaks ka siis, kui see on seotud sooja isheemiaga erinevates organites ja kudedes (15-17) ning täpsemaltneerud(18-20). Kuid meie teadmiste kohaselt ei ole kvertsetiini veel uuritud glomerulaarde kaotuse ennetamiseks pärast sooja isheemiat.

Käesoleva uuringu hüpotees on, et kvertsetiin võib leevendada isheemia-reperfusiooni põhjustatud neerukahjustusi. Eesmärk on kvantitatiivselt hinnata kvertsetiini võimalikku pikaajalist kaitsvat toimet neerusooja isheemia ajal näriliste mudelis.

MATERJALID JA MEETODID

Kõik katsed viidi läbi kooskõlas riiklike ja rahvusvaheliste loomade teadusliku kasutamise seadustega ning selle projekti kiitis ametlikult heaks institutsionaalne loomkatsete eetikakomitee (CEUA 040/2017).

Kasutati 40 isast Wistari rotti vanuses 9 nädalat. Loomad jaotati juhuslikult 4 rühma: võlts (S) – rühm, kellele tehti laparotoomia ja neerupea dissektsioon (n=10); Sham Quercetin (SQ) – rühm, keda raviti kvertsetiiniga ja allutati samadele protseduuridele kui grupile Sham (n=10); Isheemia (I) – neerusooja isheemia all kannatav rühm (n=10); Isheemia kvertsetiin (IQ) – rühm, keda raviti kvertsetiiniga ja allutati neerusooja isheemiale (n=10). Rühmad SQ ja IQ said 50 mg/kg kvertsetiini (Quercetin, New Roots Herbal, Vaudreuil{11}}Dorion, Kanada) 3 päeva enne ja 3 päeva pärast operatsiooni sondiga ning ühe intraperitoneaalse manustamise 60 minutit enne kirurgilist protseduuri, ilma ravita. rühmad (S ja I) said soolalahust (kvertsetiini asemel), kasutades samu protokolle.

Kõik rotid anesteseeriti intramuskulaarse ketamiini (Cetamin, Syntec, Santana de Parnaíba, Brasiilia, 100 mg/kg) ja ksülasiini (Xilazin, Syntec, 20 mg/kg) kaudu. Aseptilise tehnika kohaselt kasutati kõhu siseelundite paljastamiseks ventraalset keskjoone sisselõiget, mis nihutati, et paljastada vasak.neerud. Vasak neeruarter ja veen eraldati nüri dissektsiooniga. I ja IQ rühmade loomadel kinnitati neerusooned 60 minutiks, samas kui rühmades S ja SQ lõigati pedikel lahti, kuid isheemiat ei indutseeritud. Kõik rühmad jäid anesteseerituks 60 minutiks, mille jooksul kõhu siseelundid asetati kõhu sisse ja sisselõige kaeti niisutatud marliga. Selle perioodi lõpus eemaldati veresoonte klambrid ja täheldati reperfusiooni (I ja IQ rühmas) ning kõhuõõs suleti tavapärasel viisil.

Vasakneerudkoguti ja fikseeriti 4-protsendilises fosfaatpuhverdatud formaldehüüdis. Neerud kaaluti ja neerude maht mõõdeti Scherle meetodil (21). Ajukoore ja mittekorteksi pindala suhe (C-NC) arvutati Cavalieri meetodil (22-24). Kortikaalne maht (CV) arvutati neerumahu korrutamisel C-NC-ga (24).

Loomad eutaniseeriti 4 nädalat pärast operatsiooni anesteetikumi üledoosi tõttu (Isoflurane, BioChimico, Rio de Janeiro, Brasiilia). Vahetult pärast surma võeti südamepunktsiooniga vereproov. Seda proovi kasutati uurea ja kreatiniini seerumitasemete analüüsiks automatiseeritud ensümaatilise meetodi abil. Vasakneerudkoguti ja fikseeriti 4-protsendilises fosfaatpuhverdatud formaldehüüdis. Theneerudkaaluti ja neerude mahtu mõõdeti Scherle meetodil (21). Ajukoore ja mittekorteksi pindala suhe (C-NC) arvutati Cavalieri meetodil (22-24). Kortikaalne maht (CV) arvutati neerumahu korrutamisel C-NC-ga (24).

Juhuslikult kogutud proovid kõigilt vasakultneerudtöödeldi parafiini sisestamiseks, lõigati 5 µm paksusega ja värviti hematoksüliini ja eosiiniga. Histoloogiline analüüs viidi läbi pimesi, kasutades 25 histoloogilist välja, mis saadi iga neeru viiest erinevast neerukoore sektsioonist. Glomerulaarne mahutihedus (Vv[glom]), mis näitab ajukoore glomerulite poolt hõivatud proportsionaalset mahtu, hinnati punktloenduse meetodil (22-24). Mahuga kaalutud glomerulaarmaht (VWGV) hinnati punktvalimiga lõikepunktide meetodil (22-24). Glomerulite koguarvu hinnang neeru kohta (N[glom]) arvutati valemiga: CVxVv[glom]/VWGV (24).

Tulemusi võrreldi ühesuunalise ANOVA abil Bonferroni posthoc testiga. Analüüsid viidi läbi programmiga GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, San Diego, USA). Kõiki tulemusi peeti olulisteks, kui p<0.05. all="" numerical="" data="" were="" presented="" as="" mean±standard="">

Lisaks uuris kogenud veterinaarpatoloog (ravitingimustest teadmata) kõiki histoloogilisi sektsioone ja kirjeldas histopatoloogilisi muutusi. Seejärel teatati täheldatud muutustest rühma kohta.

cistanche kulturism

TULEMUSED

Seerumi uurea tase I rühmas oli 10,4 protsenti kõrgem kui rühmas S. IQ rühma ja teiste rühmade vahel ei täheldatud seerumi uurea tasemete erinevust. Samuti ei täheldatud erinevust seerumi kreatiniini analüüsis kõigi rühmade vahel.

I rühma C-NC vähenes S-rühmaga võrreldes 9,3 protsenti. Kvertsetiiniga ravi IQ rühmas taastas selle parameetri normaalsed väärtused. Rühma IQ C-NC oli 5,9 protsenti kõrgem kui I rühmal ja selle väärtused olid sarnased rühmadele S ja SQ.

I rühma Vv[glom] oli 32,7 protsenti madalam kui rühmal S ja 34,2 protsenti väiksem võrreldes rühmaga SQ. Samal ajal kasvas rühma IQ võrreldes I rühmaga 33,7 protsenti ja SQ-ga võrreldes vähenes 12.0 protsenti. Neeruisheemiaga (IQ rühm) loomade ravi kvertsetiiniga hoidis ära Vv[glom] vähenemise, mida täheldati ravimata loomadel.

Isheemilineneerud(I rühm) näitasid vähendatud N[glom] võrreldes rühmadega S ja SQ (vastavalt 26.0 protsenti ja 33.0 protsenti ). Ravi kvertsetiiniga IQ rühmas hoidis ära selle glomerulite kadumise, kuna see rühm ei näidanud erinevust rühmade S ja SQ vahel, kuid 28,3 protsenti suurenes N[glom] võrreldes I rühmaga.

Mingit erinevust selles ei märgatudneerudkaal,neerudmaht, kortikaalne maht ja VWGV rühmade hulgas. Kõik andmed on esitatud tabelis-1 ning need on esitatud joonistel 1 ja 2.

Histopatoloogiline analüüs näitas mõnedel S- ja SQ-rühmade loomadel diskreetset torukujulist ja medullaarset ummistust, kuid kortikaalne arhitektuur säilis. Teisest küljest täheldati selles palju parenhüümi kahjustuste fookusineerudSee hõlmas amorfset materjali torukujulises luumenis, amorfset eosinofiilset materjali medullaarses piirkonnas, glomerulaardegeneratsiooni, mononukleaarset infiltratsiooni, glomerulite nähtavat kadu ja kortikaalse arhitektuuri kadu. Need patoloogilised leiud olid minimaalsedneerudallutati kvertsetiinravi ajal isheemiale (rühm IQ).

ARUTELU

Vaatamata suurtele jõupingutustele sooja isheemia vältimiseks osalise nefrektoomia ajal ilma klambri ja külma isheemia meetoditega (4, 5), on soe isheemia siiski vajalik enamiku nefroone säästvate operatsioonide (1, 2, 6) ja selle kahjulike ja püsivate tagajärgede korral. neerufunktsiooni ja ülejäänud parenhüümi morfoloogia (7, 8) põhjuseks on reaktiivsete hapnikuliikide kõrge tootmine ja sellest tulenev lipiidide peroksüdatsioon (25, 26). Arvestades seda, on antioksüdantide kasutamine võimalike nefronikaitsjatena usutav (9-11, 18-20) ning ka muudes isheemia/reperfusiooniga seotud organites ja kudedes (12-17) (9, 10, 15-20, 26).

Kvertsetiin on flavonoid, mis on osutunud tõhusaks võitluses reaktiivsete hapnikuliikide tootmise vastu ja on positiivselt muutnud elundite ja kudede homöostaatiliste funktsioonide biokeemiliste markerite väärtusi (12-17), sealhulgasneeruderinevates olukordades (11), näiteks sooja isheemia korral (18-20). Meie kvantitatiivsed tulemused kinnitavad, et kvertsetiini kasutamine on kasulik sooja neeruisheemia korral. Arvatakse, et kvertsetiini saanud loomadel täheldatud kaitsetulemused olid neerukoe vähenenud oksüdatiivse kahjustuse tagajärg. Oksüdatiivset stressi ei ole aga käesolevas uuringus, nagu ka teistes, otseselt hinnatud (27) ning tulevased uuringud peaksid selgitama toimemehhanisme. Selle flavonoidi kasutamine oli efektiivne glomerulaarde kadumise (N[glom]) ärahoidmisel, mis esines ainult neeruisheemiaga ilma kvertsetiinravita loomadel.

Kuigi käesoleva uuringu keskmes oli histomorfomeetriline hindamine, analüüsiti ka seerumi uurea ja kreatiniini taset, mis on kõige sagedamini kasutatavad neerufunktsiooni biokeemilised markerid (28). Seerumi uureasisaldus suurenes ainult isheemiarühmas, kinnitades, et ravi kvertsetiiniga vältis neerufunktsiooni häireid, nagu see marker näitab. See on kooskõlas varasemates uuringutes esitatud andmetega (18-20).

Nefroni säästva operatsiooni eesmärk on, nagu nimigi ütleb, eemaldada väikesedneerudmasse, säilitades samal ajal maksimaalse arvu nefroneid, et säilitada neerufunktsioon pikemas perspektiivis (1, 2, 6-8). Seetõttu annab glomerulite absoluutarvu kvantifitseerimine, mis on parenhüümis esinevate nefronite arvu ligikaudne tulemus (10, 22-24), lõpliku tulemuse, mis näitab, kas osaline nefrektoomia saavutab oma eesmärgi. Meie teadmiste kohaselt on see uuring esimene, mis teatab kvertsetiini ennetavast mõjust sooja neeruisheemia põhjustatud glomerulaarde kadumisele.

Näriliste mudelit kasutatakse laialdaselt uuringutes, mis keskenduvad neeruisheemia/reperfusiooni mõjudele (9, 18-20, 22) ning selle protseduuriga kaasnevad morfomeetrilised muutused on juba tõestatud (22). Meie tulemused on kooskõlas eelmise aruandega 60-minutise sooja neeruisheemia kohta selles mudelis (22), kusjuures C-NC, Vv[glom] ja N[glom] vähenesid isheemiarühmas võrreldes võltsrühm.

Kvertsetiiniga ravitud võltsloomadel ei esinenud kliinilisi, biokeemilisi ega morfomeetrilisi kvantitatiivseid neerumuutusi, mis näitab, et kvertsetiinil ei ole kõrvaltoimeid.neerud, mis on kooskõlas varasemate uuringutega (18-20, 26, 29). Veelgi olulisem on see, et meie tulemused kinnitavad, et see flavonoid hoiab ära isheemiast/reperfusioonist põhjustatud glomerulaarse kadu, kuna kvertsetiiniga ravitud isheemiarühma Vv [glom] ja N [glom] väärtused olid sarnased võltsrühma omadega.

Varem avaldatud uuringud näitasid kvertsetiini kaitsvat toimet lühiajalise perioodi jooksul, kuna nende uuringute analüüs viidi läbi üks päev pärast neerusooja isheemiat (18-20). Käesolev uuring lisas selleteemalist teavet, analüüsidesneerud4 nädalat pärast isheemilist vigastust, mis näitab, et kvertsetiini kaitsev toime on püsiv.

Sellegipoolest tuleb märkida, et käesoleval uuringul olid mõned piirangud. Patofüsioloogilised reaktsioonid isheemilisele kahjustusele on liikide lõikes erinevad. Kuigi neerusooja isheemia rotimudelit kasutatakse laialdaselt, on see siiski eksperimentaalne seade, millel on mitmeid erinevusi kliinilisest keskkonnast. Lisaks oleks tundlikuma funktsionaalse analüüsi jaoks soovitav hinnata neerukliirensit ja teisi neeruseerumi biomarkereid. Tulevased kliinilised uuringud, mis uurivad kvertsetiini kasutamist nefroprotektiivse ravimina patsientidel, kellele tehti sooja isheemiaga osaline nefrektoomia, on õigustatud.

Seega jõuti järeldusele, et kvertsetiin oli efektiivne nefroprotektiivse ainena, vähendades histopatoloogilisi modifikatsioone, hoides ära glomerulaarde kadumise ja säilitades normaalse uurea taseme seerumis pärast sooja isheemiat. Need tulemused viitavad sellele, et see flavonoid võib parandada pikaajalist{0}}neerufunktsiooni patsientidel, kellele tehti sooja isheemiaga osaline nefrektoomia.

Cistanche tubulosa hoiab ära neeruhaiguse, proovi saamiseks klõpsake siin

RAHASTAMINE

Järelevalve parandamise koordineerimine

-Kraadiõppe üliõpilased - KEEbid

Rio de teadusuuringute toetamise fond

Janeiro – FAPERJ

Riiklik teaduse ja tehnoloogia arengu nõukogu – CNPq

KONFLIKT OF HUVI

Ükski pole deklareeritud.

VIITED

1. Campbell S, Uzzo RG, Allaf ME, Bass EB, Cadeddu JA, Chang A jt. Neeru mass ja lokaalne neeruvähk: AUA juhis. J Urol. 2017; 198:20-9.

2. Cai Y, Li HZ, Zhang YS. Osalise ja radikaalse laparoskoopilise nefrektoomia võrdlus: kliinilise T1b neerurakulise kartsinoomi pikaajalised tulemused. Urol J. 2018; 15:16-20.

3. Salameh JP, McInnes MDF, McGrath TA, Salameh G, Schieda N. Dual-Energy CT diagnostiline täpsus neerumasside hindamiseks: süstemaatiline ülevaade ja metaanalüüs. AJR Am J Roentgenol. 2019; 212:W100-W105.

4. Simone G, Capitanio U, Tuderti G, Presicce F, Leonardo C, Ferriero M jt. On-clamp versus off-clamp osaline nefrektoomia: kalduvusskooriga sobitatud pikaajaliste funktsionaalsete tulemuste võrdlus. Int J Urol. 2019; 26:985-91.

5. Bertolo R, Garisto J, Dagenais J, Agudelo J, Armanyous S, Lioudis M jt. Külm versus soe isheemia Robot-abiga osaline nefrektoomia: funktsionaalsete tulemuste võrdlus kalduvusskooriga sobitatud riskirühma kuuluvatel patsientidel. J Endourol. 2018; 32:717-23.

6. Hur M, Park SK, Shin J, Choi JY, Yoo S, Kim WH jt. Kaug-isheemilise eelkonditsioneerimise mõju seerumi kreatiniinile patsientidel, kellele tehakse osaline nefrektoomia: randomiseeritud kontrollitud uuringu uuringuprotokoll. Katsumused. 2018; 19:473.

7. Lee H, Song BD, Byun SS, Lee SE, Hong SK. Sooja isheemia aja mõju operatsioonijärgsele neerufunktsioonile pärast osalist nefrektoomiat kliinilise T1 neerurakulise kartsinoomi korral: kalduvuse skooriga sobitatud uuring. BJU Int. 2018; 121:46-52.

8. Zabell JR, Wu J, Suk-Ouichai C, Campbell SC. Neeruisheemia ja funktsionaalsed tulemused pärast osalist nefrektoomiat. Urol Clin North Am. 2017; 44:243-55.

9. Ozkan TA, Karakoyunlu N, Polat R, Sarıbaş GS, Şener NC, Özdemir S jt. Esomeprasooli kaitsva toime hindamine neeruisheemia-reperfusiooni eksperimentaalses mudelis. Int Urol Nephrol. 2018; 50:217-23.

10. Damasceno-Ferreira JA, Abreu LAS, Bechara GR, Costa WS, Pereira-Sampaio MA, Sampaio FJB jt. Mannitool vähendab sigade mudelis nefronikadu pärast sooja neeruisheemiat. BMC Urol. 2018; 18:16.

11. Abharzanjani F, Afshar M, Hemmati M, Moussavi M. Kvertsetiini ja resveratrooli lühiajaline suur annus muudab inimese vananemismarkereidNeerRakud. Int J Prev Med. 2017; 8:64.

12. Patra A, Satpathy S, Shenoy AK, Bush JA, Kazi M, Hussain

MD. Kvertsetiini segapolümeersete mitsellide koostamine ja hindamine rinna-, munasarja- ja multiresistentsete kasvajate raviks. Int J Nanomeditsiin. 2018;13:2869-81.

13. Wang D, Lou X, Jiang XM, Yang C, Liu XL, Zhang N. Kvertsetiin kaitseb põletike, MMP-2 aktivatsiooni ja apoptoosi esilekutsumise eest kardiopulmonaalse elustamise rotimudelis Bmi{{2} moduleerimise kaudu. } avaldis. Mol Med Rep. 2018; 18:610-6.

14. Srinivasan P, Vijayakumar S, Kothandaraman S, Palani M. Phyllanthus Emblica L. puuviljadest ekstraheeritud kvertsetiini diabeedivastane aktiivsus: In silico ja in vivo lähenemisviisid. J Pharm. Anal. 2018;8:109-18.

15. Tóth Š, Jonecová Z, Čurgali K, Maretta M, Šoltés J, Švaňa M jt. Kvertsetiin nõrgendab isheemia reperfusioonist põhjustatud COX-2 ja MPO ekspressiooni peensoole limaskestas. Biomed Pharmacother. 2017; 95:346-54.

16. Park DJ, Shah FA, Koh PO. Kvertsetiin nõrgendab närvirakkude kahjustusi keskmise ajuarteri oklusiooni loomamudelis. J Vet Med Sci. 2018; 80:676-83.

17. Uyla MU, ahin A, ahintürk V, Alata Ö. Kvertsetiin mõjutab maksaisheemia ja reperfusioonikahjustuse saatust rottidel: eksperimentaalne uuring. Int J Surg. 2018; 53:117-21.

18. Kahraman A, Erkasap N, Serteser M, Köken T. Kvertsetiini kaitsev toime neeruisheemia/reperfusioonikahjustuse korral rottidel. J Nephrol. 2003; 16:219-24.

19. Kinaci MK, Erkasap N, Kucuk A, Koken T, Tosun M. Kvertsetiini mõju apoptoosile, NF-B ja NOS geeniekspressioonile neeruisheemia/reperfusioonikahjustuse korral. Exp Ther Med. 2012; 3:249-54.

20. Chen BL, Wang LT, Huang KH, Wang CC, Chiang CK, Liu SH. Kvertsetiin nõrgendab neeruisheemia/reperfusioonikahjustust AMP-aktiveeritud proteiinkinaasi poolt reguleeritud autofagia raja aktiveerimise kaudu. J Nutr Biochem. 2014; 25:1226-34