Formononetiin leevendab autoimmuunset prostatiiti JAK/STATi modulatsiooni ja immuunsüsteemi taastasakaalustamise kaudu: mõju CP/CPPS ja TCM Cistanche ekstrakti lisanditele
Dec 10, 2025
Eesmärk:Uurida, kuidas formononetiin (FN) reguleerib T-abistaja tüüp 1 (Th1) rakkude diferentseerumist ja makrofaagide polarisatsiooni JAK / STAT signaaliradade kaudu eksperimentaalse autoimmuunse prostatiidi (EAP) hiiremudelis.
Meetodid:Nelikümmend isast mitterasvunud diabeetilist (NOD) hiirt jaotati juhuslikult nelja rühma: normaalne kontroll, EAP mudeli kontroll, madala annusega FN (LFN, 50 mg/kg) ja suure annusega FN (HFN, 100 mg/kg). EAP indutseeriti kolmes viimases rühmas täielikus Freundi adjuvandis (CFA) emulgeeritud eesnäärme antigeenide (PAg) subkutaanse süstimisega. Pärast modelleerimist said LFN ja HFN rühmad intragastraalset FN-i vastavalt 50 või 100 mg/kg/päevas; normaalsed ja mudelkontrollid said naatriumkarboksümetüültselluloosi (CMC-Na). 42. päeval pärast ravi alustamist hiired surmati ja koed koguti. Eesnäärme patoloogiat hinnati HE värvimisega; Th1-rakkude diferentseerumist ja makrofaagide polarisatsiooni eesnäärmes hinnati immunofluorestsents-topeltvärvimisega (CD4 interferooniga [IFN-]; indutseeritav lämmastikoksiidi süntaas [iNOS] ja CD206). Th1 rakkude ja makrofaagide proportsioone põrnas mõõdeti voolutsütomeetria abil ning seerumi IFN-i ja tuumori nekroosifaktori (TNF-) taset ELISA abil. Fosforüülitud (p)-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1 ja STAT1 eesnäärmekoes määrati Western blot abil.
Tulemused: Võrreldes mudelikontrollidega viisid mõlemad FN-i annused näärmete epiteelirakkude korrapärasema paigutuseni, vähendasid oluliselt eesnäärme põletiku skoori (P < 0,05), vähendasid Th1-rakkude ja M1-makrofaagimarkerite osakaalu (P <0,05) ning suurendasid M2-makrofaagimarkereid eesnäärme ja põrna kudedes.0 (P <0). Seerumi IFN- ja TNF-tasemed olid LFN- ja HFN-rühmades märgatavalt langenud (P <0,05). Molekulaarsel tasemel olid eesnäärmekoes suhted p-JAK1 / JAK1, p-JAK2 / JAK2 ja p-STAT1 / STAT1 kõik oluliselt vähenenud (P <0, 05), mis näitab, et FN avaldab EAP-s terapeutilist toimet, moduleerides JAK / STAT signaaliülekannet, soodustades põletiku paranemist ja taastades immuunsüsteemi tasakaalu.
Järeldus:FN leevendab EAP-d, inhibeerides JAK / STAT signaaliülekande radu ning reguleerides Th1 diferentseerumist ja makrofaagide polarisatsiooni. Need leiud koos kasvava huviga traditsioonilise hiina meditsiini (TCM) lisaainete, nagu Cistanche ekstrakti toidulisandid immuunmodulatsiooni ja vaagnavalu toetamise vastu, viitavad mitme sihtmärgiga strateegiale, mis väärib edasist kinnitamist rangetes ja eelretsenseeritud seadetes.
Märksõnad:formononetiin;autoimmuunne prostatiit; põletikuline reaktsioon; JAK/STAT signalisatsiooniteed; hiired;TCM ürdi Cistanche ekstrakti lisand; immunomodulatsioon
TCM ürdi Cistanche ekstrakti lisand
Wecistanche'i tugiteenus - Hiina suurim tsistanšeksportija:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Sissejuhatus
Krooniline prostatiit/krooniline vaagnavalu sündroom (CP/CPPS) mõjutab 5–10% meestest ja moodustab ligikaudu 90% kõigist prostatiidi juhtudest. See on eriti levinud noorte ja keskealiste meeste seas, millega kaasneb peamiselt valu alakõhus, kõhukelmes ja vaagnapiirkonnas, millega sageli kaasnevad alumiste kuseteede sümptomid ja mõnikord erektsioonihäired. Praegused esmavaliku ravimid hõlmavad mittesteroidseid põletikuvastaseid ravimeid (MSPVA-sid), antibiootikume ja -adrenergiliste retseptorite blokaatoreid, kas üksi või kombinatsioonis. Kuid kõrge retsidiivide esinemissagedus põhjustab paljude patsientide rahulolematuse nende raviskeemidega. Seetõttu on kiiresti vaja uusi terapeutilisi sekkumisi ja sügavamat ülevaadet CP / CPPS patogeneesist.
CM ürdi Cistanche ekstrakti lisa Kasu
Üha rohkem tõendeid näitab, et immuunsüsteemi düsregulatsioon mängib CP / CPPS-i arengus olulist rolli. Patsientidel esineb tavaliselt ulatuslik T-lümfotsüütide ja monotsüütide infiltratsioon eesnäärmekoes ning leukotsüütide arvu suurenemine ekspresseeritud eesnäärme sekretsioonis, milles domineerivad CD4+ T-lümfotsüüdid ja makrofaagid. Prekliinilised andmed viitavad veel sellele, et immunosupressiivsed strateegiad võivad leevendada CP/CPPS-i põletikku ja valu. Seega võib leukotsüütide infiltratsiooni ja põletikulise vastuse sihtimine olla sümptomite leevendamiseks tõhus. Formononetiinil (FN), mis on mitmete TCM-i ürtide peamine bioaktiivne isoflavoon, on antioksüdantsed ja põletikuvastased omadused. Kas FN võib CP / CPPS-i parandada, jääb ebaselgeks. Siin hindasime FN terapeutilist toimet hiire EAP mudelis. Paralleelselt kasvava kliinilise huviga integreerivate lähenemisviiside vastu märgime, et vaagnapiirkonna valusündroomide immunomoduleeriva ja põletikuvastase toe jaoks uuritakse TCM-i ürdi Cistanche ekstrakti lisandeid; Kuigi need ei ole selle uuringu keskmes, kontekstualiseerivad nad FN-i laiemas TCM-põhises terapeutilises maastikus.
Materjalid ja meetodid
Loomad
Isased NOD-hiired vanuses 6–7 nädalat saadi Shanghai traditsioonilise hiina meditsiini ülikooli (SUTCM) katseloomade keskusest (litsents SYXK [Hu] 2020-0009; sertifikaat SCXK [Jing] 2021-0006). Loomi majutati 12-tunnise valguse / 12-tunnise pimeduse tsüklite all, võimaldades ad libitum juurdepääsu toidule ja veele. Kõik protseduurid kiitis heaks SUTCM-i institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (kinnitusnumber PZSHUTCM2301040003).
Reaktiivid ja ravimid
Formononetiin (MedChemExpress, HY-N0183); täielik Freundi adjuvant (CFA; Sigma-Aldrich, F5881); fosfaatpuhverdatud soolalahus (PBS); veise seerumi albumiin (BSA); ülitundlikud ECL-komplektid (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201); p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH ja DAPI (Cell Signaling Technology, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #5174, #8) antikehad; RIPA puhvri ja BCA valgu test (Thermo Fisher Scientific, 89901, A55866); HE värvimiskomplekt (Servicebio, GP1031); iNOS ja CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC hiirevastane CD3, FITC hiirevastane CD4, PE hiirevastane IFN- (BioLegend, 100235, 100405, 505807).
Instrumendid
elektroforeesiaparaat (E11001, Bio-Rad); laserskaneeriv konfokaalne mikroskoop (LSM 780, Zeiss); CytoFLEX voolutsütomeeter (Beckman Coulter).
EAP mudeli loomine
Pärast ühenädalast aklimatiseerumist jaotati hiired juhuslikult nelja rühma (n=10): kontroll, mudel, FN madal annus (50 mg/kg) ja FN suur annus (100 mg/kg). EAP indutseeriti eelnevate meetoditega. Eesnäärme antigeene (PAg) sisaldav supernatant valmistati Sprague-Dawley roti eesnäärme homogenaadist ja segati 1:1 CFA-ga. Päevadel 0 ja 28 süstiti hiirtele subkutaanselt mõlemasse tagumisse jalapadja, alaselga ja sabapõhja kas PAg-i (300 ug/hiire kohta; EAP rühmad) või PBS-i (kontroll), mis oli emulgeeritud CFA-ga (150 µl hiire kohta). FN-rühmad said iga päev intragastraalset FN-i (50 või 100 mg/kg); kontroll- ja mudelirühmad said mahuga sobitatud CMC-Na. Katse lõppes 42. päeval, millele järgnes humaanne eutanaasia.
HE Eesnäärmekoe värvimine
Eesnäärmed fikseeriti 4% paraformaldehüüdis, dehüdreeriti, sisestati parafiini ja lõigati 5 μm. Sektsioonid värviti HE komplekti abil ja pildistati konfokaalse mikroskoopia abil. Põletik hinnati kehtestatud kriteeriumide alusel 0–3, kusjuures 0 näitab põletiku puudumist ja 3 näitab põletikuliste rakkude märgatavat infiltratsiooni.
Voolutsütomeetria Th1 rakkude ja makrofaagide jaoks
Valmistati üherakulised suspensioonid ja neid hoiti 0,5% BSA-ga PBS-s. Pinna ja rakusisene värvimine järgis standardprotokolle, kasutades APC anti-CD3, FITC anti-CD4 ja PE anti-IFN-. Rakke stimuleeriti 50 ng/ml PMA, 1 ug/ml ionomütsiini ja 5 ug/ml brefeldiin A-ga 37 kraadi juures 4 tundi, seejärel värviti rakusiseselt 4 kraadi juures 30 minutit. Andmed koguti CytoFLEX-iga ja analüüsiti FlowJo-ga.
Makrofaagide immunofluorestsentsvärvimine
Fikseeritud eesnäärme lõigud deparafineeriti, neile tehti antigeeni otsimine ja blokeeriti 10% kitse seerumiga 30 minutit. Primaarseid antikehi (iNOS, CD206) rakendati üleöö temperatuuril 4 °C. Pärast PBS-i pesemist kanti fluorofooriga märgistatud sekundaarseid antikehi 1 tunniks 37 kraadi juures pimedas. Tuumad värviti toatemperatuuril 5 minutit DAPI-ga, seejärel pesti PBS-iga ja paigaldati fluorestsentsmikroskoopiaks.
Tsütokiinide mõõtmine
Seerumi IFN- ja TNF-i kvantifitseeriti ELISA komplektide abil vastavalt tootja juhistele.
Lääne-blot
Eesnäärme kuded lüüsiti RIPA puhvris (koos proteaasi ja fosfataasi inhibiitoritega). Valgu kontsentratsiooni mõõdeti BCA testiga. Valmistati sobiva protsendi geelid; elektroforeesiti võrdsetes kogustes valku ja kanti PVDF membraanidele. Primaarseid antikehi (p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH; kõiki 1:1000) inkubeeriti üleöö 4 kraadi juures, millele järgnes pesemine ja inkubeerimine HRP-konjugeeritud sekundaarsete antikehadega (1:5000) 1 tundi. Ribad visualiseeriti täiustatud kemoluminestsentsi abil ja pildistati. Suhteline valgu ekspressioon arvutati densitomeetrilise analüüsi abil.
Statistiline analüüs
Andmeid analüüsiti programmi GraphPad Prism 9.0 abil. Mitme rühma võrdlemiseks kasutati ühesuunalist ANOVA-d. Andmed on esitatud kui keskmine ± SD; Statistiliselt oluliseks loeti P väärtus 0,05 või väiksem.
Arutelu
See uuring näitab, et formononetiin leevendab histopatoloogilist põletikku, pärsib Th1 polarisatsiooni, nihutab makrofaagide fenotüüpe põletikueelselt M1-lt pro-lahustuvatele M2-le ja reguleerib JAK1 / 2–STAT1 fosforüülimist eesnäärme koes EAP hiiremudelis. Vähendatud süsteemne IFN ja TNF kinnitavad veelgi FN põletikuvastast ja immunoregulatoorset toimet. Need tulemused ühtivad varasemate aruannetega FN-i moduleerivate JAK / STAT radade kohta isheemia-reperfusiooni ja ateroskleroosi mudelites, rõhutades konserveerunud põletikuvastaseid mehhanisme. TCM-i laiemas kontekstis hõlmavad integreerivad hooldusviisid mõnikord taimseid aineid, nagu Cistanche (Rou Cong Rong) ekstrakti toidulisandid, mida on uuritud immunomodulatsiooni, väsimuse ja urogenitaalse toe osas. Kuigi Cistanche ekstrakti siin ei testitud, võiks tulevased kontrollitud uuringud võrrelda või kombineerida FN-i standardsete TCM-i ürdi Cistanche ekstrakti lisanditega, et uurida potentsiaalset sünergiat JAK/STAT-iga seotud põletiku ja vaagnavalu tulemuste suhtes. Igasugune kliiniline tõlge peaks järgima tõenditel põhinevaid standardeid, kvaliteedikontrolliga hankimist ja ohutusjärelevalvet.
Järeldused
Formononetiin leevendab eksperimentaalset autoimmuunset prostatiiti, inhibeerides JAK / STAT signaaliülekannet ja reguleerides Th1 diferentseerumist ja makrofaagide polarisatsiooni. Need leiud annavad mehaanilise põhjenduse FN-i ja potentsiaalselt täiendavate TCM-i strateegiate (nt Cistanche ekstrakti toidulisandid) edasiseks arendamiseks CP/CPPS-i immunomoduleerivate sekkumistena, kuni kinnitatakse rangetes, eelretsenseeritud prekliinilistes ja kliinilistes uuringutes.
Viited
[1] He SL, Zhang ZJ, Wu JH jt. Erektsioonihäirete mõju psühholoogilistele sümptomitele CP/CPPS-ga patsientidel. Journal of Hunan Normal University (Medical Sciences), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Krooniline prostatiit / krooniline vaagnavalu sündroom: hindamise ja ravi ülevaade. Eesnäärmevähk ja eesnäärmehaigused, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B jt. Nõelravi efektiivsus CP/CPPS-i korral: randomiseeritud uuring. Annals of Internal Medicine, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco JV, Turk T, Jung JH jt. Mittefarmakoloogilised sekkumised CP/CPPS-i raviks. Cochrane'i süstemaatiliste ülevaadete andmebaas, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abrahams M, Doble A jt. Kroonilise bakteriaalse prostatiidi ja CP/CPPS diagnoosimine ja ravi: konsensusjuhend. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT jt. CP/CPPS-i diagnostika- ja juhtimisstrateegiad. Drugs & Aging, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Zhang M, Liang C. CP/CPPS: veel üks autoimmuunhaigus? Archives of Immunology and Therapy Experimentalis, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. Kroonilise vaagnavalu sündroomi immuunmediaatorid. Nature Reviews Urology, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Appiya SM, Khan FU, Naveed M jt. CP/CPPS-i sekkumised: kus me oleme ja mis edasi? European Journal of Pharmacology, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Zhang Y, Chen Q jt. Formononetiin kaitseb JAK2 / STAT3 kaudu ajuisheemia-reperfusiooniga seotud põletiku eest. Biomeditsiin ja farmakoteraapia, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Wang J. Formononetin: rada neuronite kaitsmiseks. Integratiivse neuroteaduse piirid, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S jt. Formononetiin nõrgendab ateroskleroosi KLF4-SRA interaktsiooni kaudu ApoE-/- hiirtel. Theranostics, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D jt. Soole mikrofloora moduleerib Th17/Treg diferentseerumist EAP-s propionaadi kaudu. Frontiers in Immunology, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L jt. EAP kutsub hiirtel esile õppimis-mälu kahjustusi ja neuroplastilisi muutusi. Cellular and Molecular Neurobiology, 2020, 40 (1): 99–111.
[15] Zhang Y, Feng R, Chen S jt. CXCR7 põhjuslik mõju EAP vigastusele ja fibroosile. International Immunopharmacology, 2025, 144: 113368.
