Neeru müeloidiga seotud valgu 8 ekspressiooni ennustav tähtsus rasvumise või 2. tüüpi diabeediga seotud neeruhaigustega patsientidel

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Takashige Kuwabara¹, Kiyoshi Mori1,^2*, Masato Kasahara^1,3, Hideki Yokoi¹, Hirotaka Imamaki¹, Akira Ishii¹, Kenichi Koga¹, Akira Sugawara⁴, Shinji Yasuno³, Kenji Ueshima³, Takashi Morikawa⁵,Yoshio Konishi⁵, Masahito Imanishi⁵, Akira Nishiyama⁶, Kazuwa Nakao^1,2, Masashi Mukoyama¹

¹Kyoto ülikooli meditsiinikooli meditsiini ja kliiniliste teaduste osakond, Kyoto, Jaapan,

²Medical Innovation Center, Kyoto University Graduate School of Medicine, Kyoto, Jaapan,

³EBM-i uuringute osakond, Kliiniliste ja translatsiooniteaduste arendamise instituut, Kyoto ülikooli haigla, Kyoto, Jaapan,

⁴Osaka Punase Risti haigla nefroloogia osakond, Osaka, Jaapan,

5 Nefroloogia ja hüpertensiooni osakond, Osaka linna üldhaigla, Osaka, Jaapan,

6 Kagawa ülikooli meditsiinikooli farmakoloogia osakond, Kagawa, Jaapan

Abstraktne

Taust ja eesmärk: Oleme teatanud, et teemaksutaoline retseptor 4 (TLR4) ja üks selle endogeensetest ligandidest, müeloidiga seotud valk 8 (MRP8 või S100A8), mängivad olulist rolli diabeetilise nefropaatia progresseerumisel hiirtel. Selle uuringu eesmärk oli hinnata selle olulisustneerudMRP8 ekspressioon patsientidel, kellel onülekaalulisus- või 2. tüüpi diabeediga seotudneeruhaigused. Meetodid: diabeetikutel, rasvunud või kontrollisikutel määrati MRP8 mRNA ja valgu ekspressioonitasemed neerubiopsia proovides reaalajas RT-PCR ja immunohistokeemia abil (vastavalt n=28 ja 65) ning nende seosed algtasemega. analüüsiti prognostilisi parameetreid. MRP8 mõju põletikueelsetele geeniekspressioonidele uuriti makrofaagide abil. Tulemused:NeerMRP8 geeni ja valgu ekspressioonitasemed olid rasvunud või diabeetilistes rühmades kontrollrühmaga võrreldes kõrgemad. Ühemõõtmelise lineaarse regressioonianalüüsi põhjal korreleerusid glomerulaarsete MRP{1}}positiivsete rakkude arv ja tubulointerstitsiaalse MRP8-ala algtasemel mõlemad vastavalt mitte ainult erinevate teadaolevate diabeetilise nefropaatia riskifaktoritega (näiteks nagu süstoolne vererõhk, proteinuuria ja seerumi kreatiniinisisaldus), aga ka glomeruloskleroosi ja tubulointerstitsiaalse fibroosi ulatusega. Sõltumatuid tegureid, mis ennustasid uriini valgu taset aasta hiljem, uuriti mitme muutujaga analüüsiga ja nende hulka kuulusid glomerulaarne MRP8-positiivne rakkude arv (b=0.59, P,0.001), proteinuuria. (b=0.37, P=0.002) ja süstoolne vererõhk (b=0.21, P=0.04) algtasemel, pärast korrigeerimist teadaoleva riskiga tegurid. MRP8 valgu ekspressiooni täheldati CD{17}}positiivsetes makrofaagides ja atroofilistes tuubulites. Kultiveeritud hiire makrofaagides käivitasid MRP8 valgu poolt indutseeritud põletikueelsed tsütokiini ekspressioonid ka MRP8 automaatse induktsiooni TLR4-sõltuval viisil.

Järeldused: Glomerulaarne MRP8 ekspressioon näib olevat seotud proteinuuria progresseerumisega rasvunud või II tüüpi diabeediga patsientidel, võib-olla kutsudes esile TLR4 signaaliülekande kaudu makrofaagides põletikulisi muutusi.

Tistanche toime: neeruhaiguste ravi

Sissejuhatus

Krooniline põletik mängib olulist rolli diabeedi patogeneesis võiülekaalulisusja selle kardiovaskulaarsed tüsistused [1]. Kaasatud on kaasasündinud immuunretseptorite ja endogeensete ligandide kaasamine kroonilise põletiku protsessi. Müeloidiga seotud valk 8 (MRP8, tuntud ka kui S100A8 või kalgranuliin A) tuvastati algselt neutrofiilides ja monotsüütides tsütoplasmaatilise kaltsiumi siduva valguna [2] ning seda on laialdaselt tunnustatud kui tugevat endogeenset ligandit teemaksutaolise retseptori 4 (TLR4) jaoks. ) mitmesuguste haiguste, sealhulgas septilise šoki, veresoonte ja autoimmuunhaiguste korral [3, 4, 5]. Oleme hiljuti välja pakkunud, et MRP8 / TLR4 signaalimine mängib olulist rolli diabeetilise nefropaatia hüperlipideemiast põhjustatud progresseerumisel [6]. Glomerulaarsed makrofaagid ja koguvad kanalite rakud on MRP8 peamised allikad vastavalt diabeetilise nefropaatia [6] ja neerufibroosi [7] hiiremudelites. MRP8 plasmatase, mis tavaliselt moodustab heterodimeerse kompleksi koos seondumispartneriga MRP14 vereringes, on rasvunud isikutel suurenenud [8,9]. Siiski ei ole teateid MRP8 neerude ekspressiooni kohta rasvunud või rasvunud patsientideltüüp2 diabeetja selle seos neerude prognoosiga.

Selle uuringu eesmärk oli määrata MRP8 mRNA ja valgu ekspressioonitasemedneeruddiabeetilise nefropaatiaga (DN) Jaapani patsientidest,ülekaalulisus-seotud glomerulopaatia (ORG), minimaalse muutusega nefrootiline sündroom (MCNS) või väike glomerulaarne anomaalia (MGA), mis kõik diagnoositi neerubiopsiaga, ja hinnata, kas neeru MRP8 ekspressioon võib ennustada neerutulemusi.

Cistanche võib parandada neerufunktsiooni

Materjalid ja meetodid

Eetikaavaldus

Inimuuring viidi läbi vastavalt Helsingi deklaratsioonis väljendatud põhimõtetele ja selle kiitsid heaks vastavalt Kyoto ülikooli meditsiinikooli ja Osaka linna üldhaigla inimuuringute eetikakomiteed. Kõik osalejad andsid kirjaliku teadliku nõusoleku. Loomkatsete protokolli kiitis heaks Kyoto ülikooli meditsiinikooli loomauuringute komitee (loa number: Med Kyo 13318). Kõik loomade operatsioonid viidi läbi naatriumpentobarbitaali anesteesia all ja tehti kõik jõupingutused kannatuste minimeerimiseks.

Õppeained

Proteinurilised patsiendid, kellel onülekaalulisusvõi II tüüpi diabeeti, kellele tehti neerubiopsia, kaasati sellesse uuringusse. Nakkushaiguse, vähi, maksahaiguse või kollageenihaigusega patsiendid jäeti välja. Proteinuuria määratleti kui uriini valk, mis oli vähemalt kahel järjestikusel mõõtmisel suurem kui 0,5 g/g kreatiniini või uriini albumiin üle 300 mg/g kreatiniini.Rasvuminedefineeriti kui kehamassiindeksit (KMI), mis on suurem kui 25.{1}} (kg/m²). II tüüpi diabeet diagnoositi vastavalt Maailma Terviseorganisatsiooni kriteeriumidele. Ristlõike analüüsi lähtenäitajatena kasutati biokeemilisi mõõtmisi neerubiopsia jaoks. Hinnanguline glomerulaarfiltratsiooni kiirus (eGFR) arvutati Jaapani nefroloogiaühingu poolt välja pakutud lihtsustatud ennustusvõrrandi abil: eGFR (ml/min/1,73 m)²)=1946 [vanus (aastad)]20.287 6 [seerumi kreatiniin (mg perdl)]21.094 60.739 (naistele), mis on MDRD [ valideeritud kohalik modifikatsioon [ 10]. Kreatiniini kontsentratsiooni seerumis mõõdeti ensümaatilise meetodi abil.

Immunohistokeemia jaoks analüüsiti 65 Jaapani patsienti, kellele tehti aastatel 2000–2011 Kyoto ülikooli haigla meditsiini ja kliinilise teaduse osakonnas neerubiopsia. Kõigi selle perioodi patsientide biopsiaga tõestatud diagnoosid on loetletud faili S1 tabelis S1. Selles töös uuritud subjektide hulka kuulusid DN (n=19), ORG (n=10) ja mitterasvunud, mittediabeedi kontrollialused, kellel diagnoositi MGA(n=19) või MCNS (n=17). Mõned nende kategooriate juhtumid jäeti välja, kuna saadaolevad jääkproovid sisaldasid vähem kui 10 glomeruli. DN-i määratlus koosnes (1) enam kui 5-aastasest kestusest pärast diabeedi algust, (2) mikro- või makroalbuminuuria olemasolust, (3) DN-ga ühilduvatest histopatoloogilistest muutustest, nagu glomerulaarse basaalmembraani paksenemine, mesangiaalne laienemine, nodulaarne. skleroos (Kimmelstiel-Wilsoni sõlmed) ja/või arteriolaarne hüalinoos ning (4) muude neeruhäirete põhjuste välistamine [11]. ORG määratleti morfoloogiliselt kui fokaalset segmentaalset glomeruloskleroosi ja/või glomerulomegaaliat isikutel, kellel on mõlemadülekaalulisusja proteinuuria, mille määratlusi kirjeldati eespool [12,13].

MRNA ekspressioonianalüüsi jaoks jäeti välja madala kvaliteediga proovid, milles18S ribosomaalse RNA (rRNA) tasemed olid madalamad kui reaalajas RT-PCR tuvastamise tundlikkuse piir. Uuringusse kaasatud isikud koosnesid 22 II tüüpi diabeediga patsiendist, kellele tehti aastatel 2000–2010 Osaka linna üldhaiglas neerubiopsia, ja kuuest mittediabeedist kontrollisikust, kellel oli biopsiaga tõestatud MGA.

Tabelites 1 ja 2 on kokku võetud vastavalt immunohistokeemilise või geeniekspressiooni analüüsiga uuritud patsientide kliinilised algnäitajad. Valgusmikroskoopia jaoks töödeldi koeproove standardsete protseduuride kohaselt. Sektsioonid värviti hematoksüliin-eosiini, perioodilise happe-Schiffi, perioodilise happe-meteenamiini hõbeda või Massoni trikroomiga (joonis S1). Globaalse skleroosiga glomerulite arvu suhet kogu glomerulite ja tubulointerstitsiaalse fibroosi suhteliste piirkondade vahel hindasid sõltumatult kaks patoloogi, kes ei olnud teadlikud diagnoosist ja kliinilistest andmetest.

Tistanche toime: neeruhaiguste ravi

Neerude tulemuste määratlus

Järgmist kahte prognostilist näitajat uuriti vastavalt lineaarse regressiooni ja logistilise regressiooni analüüsiga: (1) proteinuuria ulatus, mõõdetuna aasta pärast biopsiat, ja (2) neeruhaigus, mis määratleti kui seerumi kreatiniinisisalduse aastane tõus 0,50 protsenti. alates ravi algusest või kroonilise dialüüsi algusest.

Immunohistokeemia

MRP8 ja CD68 immunohistokeemia viidi läbi kasutadesneerudsektsioonid (paksus 4 mm), mis on fikseeritud 4% puhverdatud paraformaldehüüdiga. Pärast antigeeni otsimist tsitraatpuhvriga inkubeeriti neerulõike 10% kitse seerumiga, millele järgnes hiire anti-inimese MRP8 (1:100; BMA biomedicals, Augst, Šveits)[14] või hiire anti-inimese CD68 antikehad (1:50). vastavalt DAKO, Ely, UK). Primaarsed antikehad visualiseeriti mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud sekundaarse antikeha ja 3,3-diaminobensidiintetrahüdrokloriidiga (Dako USA, Carpinteria, CA). Tuumad värviti hematoksüliiniga. MRP8-positiivsed rakud loendati enam kui 10 glomerulis ja MRP8-positiivne pindala tubulointerstitiumis mõõdeti kvantitatiivselt, et saada iga katsealuse keskmine, kasutades tarkvara MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, USA). ). CD68- ja MRP8-positiivsete rakkude kolokalisatsiooni hinnati jadalõikudega. Ei olnud ei MRP8 ega CD68 signaali negatiivsetes kontrollides, mis olid värvitud ilma esimese antikehata (joonis S2). MRP8-vastase antikeha eelinkubeerimine inimese rekombinantse MRP8 valgu 20 molaarse liiaga (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) temperatuuril 4 uC üleöö, värvumine vähenes märgatavalt, kui mitte täielikult, toetades veelgi antikeha spetsiifilisust (joonis S3). .

Cistanche neerude raviks

mRNA ekspressiooni hindamine

Külmunudneerudlõigud eraldati glomeruliteks ja mitteglomeruliteks kudedeks laserpüüdmise mikrodissekteerimisega (LM200; Olympus, Tokyo, Jaapan), nagu eelnevalt kirjeldatud [15]. Kogu RNA ekstraheeriti RNeasy minikomplektiga (Qiagen, Tokyo, Jaapan). mRNA ekspressioonitasemed määrati TaqMani reaalajas PCR abil (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) [16,17]. Kõigi geenide ekspressioonitasemed normaliseeriti 18S rRNA (sisekontrolli) tasemega. Praimeri ja sondi järjestuste kohta vaadake faili S1 tabelit S2. Eukarüootne 18S rRNA tuvastati PreDeveloped TaqMan Assay Reagents (Applied Biosystems) abil.

Tabel 1. Neerubiopsiaga patsientide kliinilised algnäitajad, keda analüüsiti MRP8 valgu ekspressiooni suhtes immunohistokeemia abil.

MGA: väike glomerulaarne anomaalia, MCNS: minimaalne muutus nefrootiline sündroom, ORG:ülekaalulisus-seotud glomerulopaatia, DN: diabeetiline nefropaatia, BMI: kehamassiindeks, BUN: vere uurea lämmastik, CRP: C-reaktiivne valk. Andmed on 6 SD. * Üldisi erinevusi MGA, MCNS, ORG ja DN rühmade vahel võrdles ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

Makrofaagide MRP8 ravi

Luuüdist pärinevad makrofaagid genereeriti metsiktüüpi või TLR4 knockout (KO) hiirtelt [18] C57BL/6J geneetilisel taustal (Oriental BioService, Kyoto, Jaapan), nagu eelnevalt kirjeldatud [6]. Lühidalt, pärast punaste vereliblede lüüsimist resuspendeeriti luuüdi rakud söötmes, mis sisaldas 20 protsenti vasika loote seerumit ja 50 ng/ml rekombinantset inimese makrofaagide kolooniaid stimuleerivat faktorit (Peprotech, Rocky Hill, NJ, USA) ning kultiveeriti 37uC 5% CO2 atmosfääris. 7. päeval inkubeeriti makrofaage 4 tundi rekombinantse hiire MRP8 (Abnova, Taipei, Taiwan) või kandjaga. Igasse süvendisse lisati polümüksiin B (25 mg/ml, NacalaiTesque, Kyoto, Jaapan), et minimeerida endotoksiini saastumist, nagu eelnevalt kirjeldatud [3,19]. Noendotoksiin tuvastati mis tahes MRP8 kontsentratsioonil, mida testiti pärast inkubeerimist 25 mg/ml polümüksiin B-ga ToxinSensorChromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (GenScript, Piscataway, NJ, USA) abil. Kogu RNA rakkudest ekstraheeriti RNeasy MiniKitiga ning interleukiin-1 beeta (IL-1b), kasvaja nekroosifaktor-alfa (TNFa) ja MRP8 mRNA ekspressioonitasemed määrati TaqManiga reaalajas. RT-PCR. Kõikide geenide ekspressioonitasemed normaliseeriti näriliste GAPDH tasemetega (sisekontroll, eelnevalt välja töötatud TaqMani analüüsi reaktiivid). Praimeri ja sondi järjestused reaalajas PCR jaoks on loetletud faili S1 tabelis S2.

Statistiline analüüs

Andmed on väljendatud keskmisena 6 SD või 695 protsendi usaldusvahemikku (CI), kui see on asjakohane. Nelja rühma võrdlemiseks kasutati ühe- või kahesuunalist ANOVA-d Bonferroni post-hoc analüüsiga ja kategoorilisi muutujaid võrreldi x2 testiga. Kahe rühma võrdlemiseks kasutati vastavalt vajadusele õpilase paaristamata t-testi. Spearmani korrelatsioonikoefitsiente hinnati kahe muutuja vahelise seose määramiseks. Glomerulaarse või tubulointerstitsiaalse MRP8 ekspressiooni või uriinivalgu taseme määramise algtaseme ühismuutujate mõju uurimiseks aasta pärast biopsiat viidi läbi ühe- ja mitmemõõtmelised lineaarsed regressioonianalüüsid. Logistilist regressioonianalüüsi kasutati neerusündmuste esinemist ennustavate selgitavate muutujate analüüsimiseks. Kõiki andmeid analüüsiti tarkvara StatView 5.{9}} abil (SAS InstituteInc., Cary, NC, USA). P väärtusi 0,05 peeti statistiliselt oluliseks.

Tistanche toime: neeruhaiguste ravi

Tulemused

Võrdlesime MRP8 valgu ekspressioonitasemeidneerudDN, ORG ja mitte-rasvunud, mittediabeetiliste kontrollrühmade (MGA ja KNS) seas. Immunohistokeemiline analüüs näitas, et nii glomerulaarsete MRP8-positiivsete rakkude arv (joonis 1A) kui ka tubulointerstitsiaalse MRP8-positiivne pindala (joonis 1B) DN-is olid oluliselt suuremad kui teistes rühmades, sealhulgas MGA, MCNS, ja ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

Tabel 2. Neerubiopsiaga patsientide kliinilised algnäitajad, keda analüüsiti MRP8 mRNA ekspressiooni suhtes reaalajas RT-PCR abil.

Seosed vahelneerudMRP8 signaale ja kliinilisi algtaseme parameetreid neerubiopsia ajal analüüsiti ristlõikes (tabel 3). Ühemõõtmelise analüüsi abil korreleerus glomerulaarne ja/või tubulointerstitsiaalne MRP8 valgu ekspressioon märkimisväärselt vanuse, süstoolse ja diastoolse vererõhu, uriinivalgu, kreatiniini, BUN- ja HDL-kolesterooli, eGFR-i seerumis ning globaalse glomeruloskleroosi ja tubulointerstitsiaalse fibroosi ulatusega. Neid parameetreid uuriti täiendavalt mitme muutujaga analüüsiga pärast diastoolse vererõhu, eGFR ja BUN väljajätmist kollineaarsuse tõttu. Tubulointerstitsiaalse fibroosi protsent oli sõltumatult korrelatsioonis glomerulaarsete MRP8 signaalidega (b=0,62, kohandatud P=0.02) ja tubulointerstitsiaalse MRP8 signaalidega (b=0,85, kohandatud P ,0,001). Lisaks korreleerusid tubulointerstitsiaalsed MRP8 signaalid sõltumatult ka proteinuuria algtasemega (b=0,20, korrigeeritud P=0,01). MRP8 signaalide hajutatud graafiku analüüsid glomerulites või tubulointerstitiumis ja kliinilised parameetrid näitasid, et MCNS-rühmal oli teistest rühmadest erinev jaotusmuster, eriti uriinivalgu ja seerumi LDL-kolesterooli taseme osas (joonis S5A-D, S6A-D). MCNS-rühma väljajätmine parandas korrelatsiooni MRP8 signaalide ja uriinivalgu või seerumi LDL-kolesterooli taseme vahel (joonis S5E-F, S6E-F). Seetõttu tegime alamanalüüsi, jättes välja MCNS-i patsiendid, ja leidsime, et uriini valk oli sõltumatu tegur, mis korreleerus glomerulaarsete MRP8 signaalidega mitme muutuja analüüsi abil (tabel 4; b=0.36, korrigeeritud P=0.03). ).

Järgmisena viisime läbi lineaarse regressiooni või logistilise regressiooni analüüsid, et tuvastada neerutulemusi ennustavad selgitavad tegurid, milleks oli proteinuuria ulatus aasta hiljem ja neeruhaigus aasta jooksul. Kuna glomerulaarsete ja tubulointerstitsiaalsete MRP8 signaalide vahel oli hea seos (joonis S7; R=0.67,P,0.001), kaasati need parameetrid alternatiivsetesse analüüsidesse. . Hindasime seost algparameetrite ja uriinivalgu vahel 1 aasta pärast neerubiopsiat mitme regressioonianalüüsi abil. Nagu on näidatud tabelis 5, oli glomerulaarne MRP8 signaal (b=0,59, korrigeeritud P,0,001) prognoositav tegur proteinuuria ulatuse osas aasta hiljem, samuti süstoolse vererõhu algväärtus (b {{13} },21, korrigeeritud P=0,04) ja proteinuuria algväärtus (b=0,37, korrigeeritud P=0,002). Need parameetrid ei sõltunud teistest teadaolevatest diabeetilise nefropaatia riskifaktoritest, sealhulgas neerufunktsiooni häiretest (seerumi kreatiniin) ning globaalse skleroosi ja tubulointerstitsiaalse fibroosi ulatusest [11, 21–24]. Teisest küljest ei olnud tubulointerstitsiaalne MRP8 signaal (b=0.34, korrigeeritud P=0.09) aasta hiljem uriini valgu taseme sõltumatuks ennustavaks teguriks. Neerukahjustused esinesid 7 patsiendil (6 patsiendil DN ja 1 ORG juhtudel) aasta jooksul pärast neerubiopsiat. Ühemõõtmelise analüüsi kohaselt ei olnud neerusündmuste esinemise olulised ennustavad tegurid mitte ainult glomeruloskleroosi ja tubulointerstitsiaalse fibroosi ulatus ning glomerulaarsed ja tubulointerstitsiaalsed MRP8 signaalid, vaid ka vererõhk, neerufunktsiooni häired ja uriini valgu tase algtasemel. Kuid mitme muutujaga analüüsi abil tühistati nende ühismuutujad üksteise poolt (tabel S3 failis S1), tõenäoliselt nende parameetrite kõrgete korrelatsioonide tõttu.

Lõpuks uurisime kultiveeritud makrofaagide abil MRP8 kui endogeense ligandi tugevust TLR4 jaoks. Metsiktüüpi hiirte luuüdist pärinevates makrofaagides põhjustas MRP8 valk põletikueelsete tsütokiini geenide, nagu IL-1b ja TNFa, ülesreguleerimise ning samuti vallandas MRP8 autoindutseerimine annusest sõltuval viisil vahemikus 1{{ 15}}–1000 ng/ml. Neid MRP8 toimeid suruti TLR4 KO hiirtelt saadud makrofaagides alla ligikaudu kahe kolmandiku võrra (P, 0,01) (joonis 3).

Joonis 1. MRP8 immunohistokeemilised ja mRNA analüüsid inneerudbiopsia proovid. Glomerulaarse MRP{{0}}positiivse rakkude arvu (A) ja tubulointerstitsiaalse MRP8-positiivse piirkonna (B) kvantifitseerimine. MRP8 mRNA ekspressioon glomerulaarsetes ja mitteglomerulaarsetes fraktsioonides (C). Avatud tulbad: mitterasvunud, mittediabeetilised kontrollid, mis on MGA või MCNS, suletud tulbad: ORG või DN (A–C). MGA, MCNS, ORG ja DN rühmade esinduslikud pildid (D–G). MGA: väike glomerulaarne anomaalia, MCNS: minimaalse muutusega nefrootiline sündroom, ORG: rasvumisega seotud glomerulopaatia, DN: diabeetiline nefropaatia. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

Arutelu

Käesolev uuring on näidanud, et MRP8 ekspresseerub ohtralt DNA-ga patsientide glomerulites ja tubulointerstitiumis võrreldes ORG-ga ja mitte-rasvunud, mittediabeetiliste kontrollidega (MGA ja MCNS). Veelgi enam, ORG subjektidel olid MRP8 ekspressioonitasemed kõrgemad kui MGA või MCNS subjektidel. Algtaseme ristlõikeuuringus, mis hõlmas kõiki katsealuseid, korreleerusid ühemõõtmelise lineaarse regressioonanalüüsi abil glomerulaarsete MRP{5}}positiivsete rakkude arv ja tubulointerstitsiaalse MRP8- positiivne pindala mitte ainult erinevate teadaolevate riskiteguritega. diabeetiline nefropaatia (nagu süstoolne vererõhk, proteinuuria ja seerumi kreatiniinisisaldus), aga ka glomeruloskleroosi ja tubulointerstitsiaalse fibroosi ulatusega. Mitmemõõtmelise analüüsi põhjal korreleerus tubulointerstitsiaalse MRP{7}}positiivne piirkond märkimisväärselt proteinuuria ja tubulointerstitsiaalse fibroosiga. Glomerulaarne MRP{8}}positiivne rakkude arv korreleerus märkimisväärselt tubulointerstitsiaalse fibroosiga esmases analüüsis ja proteinuuriaga alamanalüüsis, välja arvatud MCNS-i rühm. Immunohistokeemia näitas, et MRP8 ekspresseerisid vähemalt osaliselt CD68 (pluss) ekspresseerivad makrofaagid ja atroofilised tuubulid. Need leiud suurendavad võimalust, etneerudMRP8 signaalid glomerulites või tubulointerstitiumis võivad olla diabeetilise nefropaatia uudsed markerid.

Joonis 2. CD68 ja MRP8 valgu ekspressiooni lokaliseerimine diabeetilise nefropaatia juhtumite jadalõikudes. CD68 (A, B) ja MRP8 ekspressiooni (C, D) ekspressioon paaris neeruproovides (A ja C või B ja D). Nooled näitavad CD68 ja MRP8 signaalide kolokalisatsiooni.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

Prognostilises uuringus näitas mitme muutujaga analüüs, et uriini valgu tase aasta pärast neerubiopsiat oli sõltumatult seotud glomerulaarse MRP{0}}positiivse rakkude arvu, uriinivalgu ja süstoolse vererõhuga algtasemel. Märkimisväärne on see, et glomerulaarne MRP8 ekspressioon näitas aasta hiljem tugevaimat korrelatsiooni uriinivalguga (b= 0.87), mis on ühemõõtmelise analüüsi põhjal isegi tugevam kui algväärtus uriinivalgul (b=0.78). See on osaliselt tingitud sellest, et glomerulaarne MRP8 ekspressioon ei ole suurel määral kõrgenenud proteinuuria healoomuliste vormide korral, nagu need, mida täheldati MCNS-patsientidel, kelle proteinuuria tase on neerubiopsiaga diagnoosimisel äärmiselt kõrge, kuid tavaliselt taandub see aasta jooksul pärast immunosupressiivse ravi alustamist. Need leiud viitavad sellele, et glomerulaarsel MRP8 ekspressioonil võib haiguse markerina olla ainulaadne ennustav iseloom, mida ei saa asendada algtaseme proteinuuria või rutiinse patoloogilise analüüsiga, mis hindab globaalset glomeruloskleroosi ja tubulointerstitsiaalset fibroosi. Veelgi enam, me oletame, et glomerulaarne MRP8 ekspressioon ei ole lihtne marker ega kõrvalseisja, vaid aktiivne mängija glomerulaarkahjustuses, nagu allpool kirjeldatud.

Korduva regressioonianalüüsi selgitavate parameetritega arvutatud määramiskordaja (R2) oli vastavalt 0,52* ja 0,74#. y, aastat; BP, vererõhk; gCr, g kreatiniin; T-kool, üldkolesterool; HDL-Chol, HDL-kolesterool; LDL-kool, LDL-kolesterool; GS, glomeruloskleroos; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

Tabel 4. Algtaseme kliiniliste parameetrite ja MRP8 signaalide vahelise seose alamanalüüs pärast MCNS-rühma väljajätmist.

Tabel 5. Mitmekordne regressioonianalüüs uriinivalgu taset ennustavate tegurite tuvastamiseks 1 aasta pärast neerubiopsiat

Joonis 3. MRP8 mõju luuüdist pärinevatele makrofaagidele. Luuüdist pärinevaid makrofaage (BMDM) stimuleeriti rekombinantse hiire MRP8-ga 4 tundi. Vearibad näitavad 95 protsenti CI ja statistilised analüüsid viidi läbi logaritmiliselt teisendatud väärtustega. Kahesuunaline ANOVA näitas genotüüpide, MRP8 kontsentratsioonide ja nende interaktsioonide olulist mõju kõigi kolme geeni ekspressioonile (P,0.001 kõigi võrdluste puhul). n=4. WT, metsiktüüp; KO, nokaut; IL-1b, interleukiin 1 beeta; TNFa, kasvaja nekroosifaktor-alfa. *P,0,01 erinevate kontsentratsioonide hulgas, #P,0,01 genotüüpide hulgas.doi:10,1371/journal.pone.0088942.g003

Teises pikisuunalise uuringu katses ei suutnud logistiline regressioonanalüüs välja selgitada sõltumatuid ennustajaid neeruhaiguse esinemise kohta aasta jooksul. Spekuleerime, et see on osaliselt tingitud sellest, et tubulointerstitsiaalne MRP8 ekspressioon ja tubulointerstitsiaalne fibroos olid ühemõõtmelises analüüsis kaks potentsiaalset neerusündmuse ennustajat, kuid nende olulisus tühistati mitmemõõtmelises analüüsis. Need kaks parameetrit näitasid tugevat korrelatsiooni (R=0.68, P, 0.001) (joonis S8), mis viitab sellele, et need kaks parameetrit võivad olla samaväärsed neerusündmuste ennustamisega. Tõepoolest, interstitsiaalne MRP8 ekspressioon näitas üsna sarnast mustrit interstitsiaalse fibroosiga, mida hinnati Massoni trikroomvärvimisega. Interstitsiaalse MRP8 kogus sõltub suuresti positiivsetest signaalidest pigem atroofilistes tuubulites kui makrofaagides, mille omadus erineb glomerulaarse MRP8 omast punktjaotuse poolest. Veelgi enam, väike valimi suurus, lühike vaatlusperiood ja vähesed neeruhaigused arenevad isikud võisid tuvastamise võimsust vähendada. Kuna MRP8 ekspressioon tubulaarsetes epiteelirakkudes mängib neerufibroosi hiiremudelis [7] tubulointerstitsiaalse põletiku progresseerumisel põhjuslikku rolli, on tubulointerstitsiaalse MRP8 rolli selgitamiseks DN-is vaja täiendavat analüüsi.

Vastavalt meie eelmisele uuringule [6] oli MRP8 mRNA ülesreguleeritud valdavalt inimese DN-i subjektide glomerulaarfraktsioonis, võrreldes MGA-ga kontrollsubjektidega. Teisest küljest täheldati MRP8 valgu ekspressiooni mitte ainult glomerulites, vaid ka tubulointerstitiumis. Sellega seoses tuleb märkida, et DN-i tubulointerstitiumis esines kaks erinevat MRP8 värvimise mustrit. Üks oli intensiivne ja fokaalne värvumine tugevalt atroofilistes tuubulites. Teine oli kerge värvumine, mis jaotus proksimaalsete tuubulite harja piiril, mida leiti ka ORG-s ja MCNS-is. Viimased signaalid esindavad tõenäoliselt verest pärinevat ja proksimaalsetest tuubulitest reabsorbeeritud MRP8 valku, millega ei tohiks kaasneda suurenenud MRP8 mRNA ekspressioon. Mis puudutab muid valke peale MRP8, siis meie ja teised oleme hiljuti teatanud sarnastest immunoreaktiivsete valkude tuvastamise nähtustest proksimaalsetes tuubulites, mis on põhjustatud reabsorptsioonist, kuid mitte neerusünteesist [25, 26]. Teisest küljest, kuna antikehade absorptsioonitestis jäi veidi MRP8 värvimist, eriti glomerulaarsete eksudatiivsete kahjustuste ja atroofiliste tuubulite ümber olevate tugevate armidega fibrootiliste kahjustuste korral, ei saa mittespetsiifiliste signaalide olemasolu täielikult eitada (joonis S3).

Glomerulaarsed MRP8 signaalid näitasid peamiselt DN-i subjektide kirjavahemustreid (joonis 1, joonis S4). Kuna nii CD68 kui ka MRP8 tuvastati hiire monoklonaalsete antikehadega, hinnati nende molekulide lokaliseerimist jadalõikude, mitte topelt-immunovärvimise teel. MRP8 värvimismustrid ühildusid teiste põletikuliste neeruhaiguste, sealhulgas IgAnefriidi [27], membranoproliferatiivse glomerulonefriidi [14] ja ANCA-ga seotud glomerulonefriidi [20] värvimismustritega, mille puhul soovitati makrofaage MRP8 peamise allikana, nagu me teatasime närilise mudel [6]. Lisaks võib neutrofiile pidada veel üheks MRP8 allikaks, mis mõjutab veresoonte tüsistusi [28]. Praegu uurime molekulaarset mehhanismi, miks MRP8 on glomerulitesse infiltreeruvates müeloidse päritoluga rakkudes valdavalt ülesreguleeritud. In vitro uuring näitas, et MRP8 indutseeris põletikulise tsütokiini ekspressiooni ja võimendas ka MRP8 enda ekspressiooni makrofaagides TLR{18}}sõltuval viisil. Lisaks puudusid nodulaarsetes skleroseerivates kahjustustes MRP{19}}positiivsed rakud, mis viitab sellele, et glomerulaarne MRP8 võib kajastada jätkuvat glomerulaarkahjustust [20]. Oluline on see, et suurima ulatusega inimuuring näitas, et MRP8 geeni ekspressioon I tüüpi diabeediga patsientide vere mononukleaarsetes rakkudes on diabeetiliste tüsistustega, sealhulgas nefropaatiaga, isikutel märkimisväärselt kõrgem [29].

Kuna reniin-angiotensiini süsteemi (RAS) inhibeerimine on neerude tulemuste oluline tegur, uurisime RAS-blokaadi mõjuneerudMRP8 ekspressioon. Me ei leidnud olulist erinevust neeru MRP8 mRNA ekspressioonis RAS-i blokaadiga või ilma selleta ravitud DN-patsientide vahel (joonis S9), tõenäoliselt seetõttu, et RAS-i blokaadiga ravitud juhtudel esines raskem hüpertensioon ja proteinuuria kui RAS-i blokaadita juhtudel.

Rasvunud inimestel ja hiirtel võib plasma MRP8/14 kompleksi suurenemine kajastada teatud määralülekaalulisusja pärinevad nii adipotsüütidest kui ka leukotsüütidest [8, 9]. Meie ORG juhtumitel oli proksimaalsetes tuubulites MRP8 kerge värvumine, mis viitab MRP8 suurenenud plasmatasemele. Seevastu ei olnud olulist korrelatsiooni tubulointerstitsiaalse MRP8 ekspressiooni ja kehamassiindeksi vahel (joonis S6G). Seetõttu lokaalne MRP8 ekspressioonneerudvõib olla pigem neerukahjustuse kui markerinaülekaalulisus[8,9].

Cistanche neerufunktsiooni häirete parandamiseks

Meie uuringul on mitmeid piiranguid. Iga uuritud rühma valimite arv oli väike. Mitteidentsed isikud kaasati mRNA ja immunohistokeemilistesse analüüsidesse. Kuna analüüsisime ainult neid patsiente, kellele tehti neerubiopsia, ei pruugi siin uuritud patsientide koosseis kajastada 2. tüüpi diabeediga patsientide või üldise kroonilise diabeediga patsientide oma.neerudhaiguste subjektid. Kuigi meie andmetes ei peetud vanust sõltumatuks MRP8 signaalidega seotud teguriks (tabel 3), on teada, et vananemine on seotud kroonilise põletikuga [30]. Vanuse mõju ei saa täielikult tähelepanuta jätta. Kuigi enamik MRP8 signaale läksid antikehade absorptsioonitestis kaduma, jäid alles mõned positiivsed signaalid, mille põhjuseks võis olla esimese antikeha mittespetsiifiline seondumine. Nagu ülalpool arutatud, aitab neerude MRP8 ekspressiooni uurimine neerubiopsiaga mõista krooniliste neeruhaiguste patofüsioloogiat ja prognoosi.ülekaalulisusja diabeet, kuid sellel on puudus rutiinsel ja korduval kasutamisel ambulatoorsetes kliinikutes

Kokkuvõtteks võib öelda, et käesolev uuring viitab sellele, et MRP8 ekspressioonneerudpeegeldab praegust patoloogilist seisundit ja ennustab ka neerutulemusi patsientidel, kellel onülekaalulisusvõi2 tüüpi diabeet. Täiendavad uuringud uriini MRP8 tasemete uurimiseks rasvunud või diabeediga patsientide hulgas võivad olla õigustatud.

Toetav teave

Joonis S1 Tüüpilised fotod, mis näitavad DN-patsiendi neerubiopsia lõigud, mis on värvitud (A) perioodilise happega Schiff, (B) perioodilise happega meteenamiini hõbedaga või (C) Massoni trikroomiga. Globaalse skleroosiga glomerulite (nooled) suhe kogu glomerulite arvu ja tubulointerstitsiaalse fibroosi suhtelise pindala vahel oli sellel patsiendil vastavalt 33 protsenti ja 65 protsenti. (TIFF)

Joonis S2 MRP8 ja CD68 valkude immunohistokeemia DN patsientidel. Parempoolses veerus olevad fotod näitavad negatiivse kontrolli katseid ilma 1. antikehata. (TIF)

Joonis S3 Antikehade absorptsiooni test MRP8 värvimiseks. PBS: fosfaatpuhverdatud soolalahus, rhMRP8: rekombinantne inimese MRP8. (TIF)

Joonis S4 Tüüpilised fotod MRP8 ekspressioonist MGA, MCNS, ORG ja DN rühmades. (TIF)

Joonis S5 Korrelatsioon glomerulaarsete MRP{1}}positiivsete rakkude arvu ja kliiniliste parameetrite vahel. Kasutati MRP8 signaalide logaritmiliselt teisendatud väärtusi. Korrelatsioone analüüsiti kõigi nelja rühma (A–D, G) või kolme rühmaga, välja arvatud MCNS-rühm (E, F). Avatud ringid: väike glomerulaarne anomaalia (MGA), suletud ringid: minimaalne muutus nefrootiline sündroom (MCNS), avatud kolmnurgad:ülekaalulisus-seotud glomerulopaatia (ORG), suletud kolmnurgad: diabeetiline nefropaatia (DN).(TIF)

Joonis S6 Korrelatsioon tubulointerstitsiaalse MRP8-positiivse piirkonna ja kliiniliste parameetrite vahel. Kasutati MRP8 signaalide logaritmiliselt teisendatud väärtusi. Neid korrelatsioone analüüsiti kõigi nelja rühma (A–D, G) või kolme rühmaga, välja arvatud MCNS-rühm (E, F). (TIF)

Joonis S7 Korrelatsioon glomerulaarse ja tubulointerstitsiaalse MRP8 ekspressiooni vahel. Kasutati MRP8 signaalide logaritmiliselt teisendatud väärtusi. (TIF)

Joonis S8 Korrelatsioon tubulointerstitsiaalse MRP{1}}positiivse piirkonna ja tubulointerstitsiaalse fibroosi vahel. Kasutati MRP8 signaalide logaritmiliselt teisendatud väärtusi. (TIF)

Joonis S9 MRP8 neeru-mRNA ekspressioon reniini-angiotensiini blokaadiga või ilma selleta DN-patsientidel.NS: ei ole oluline. n=15 (jah), 6 (ei). 22 keeldumise juhtumist ei olnud ühel patsiendil teave ravimite kohta saadaval. (TIF)

Fail S1 tugitabelid.

Tabel S1, Patoloogilised diagnoosid kõikidel juhtudel, kellele tehti Kyoto ülikooli haigla meditsiini ja kliinilise teaduse osakonnas neerubiopsia aastatel 2000–2011. Tabel S2, TaqMani reaalajas RT-PCR praimeri ja sondi järjestused. Tabel S3, Logistiline regressioonianalüüs neeruhaiguse esinemise kohta aasta jooksul. (DOC) Tänuavaldused Täname S. Tanakat statistilise nõustamise eest, Y. Ogawat, N. Igarashit ja C. Kimurat tehnilise abi eest ning A. Yamamotot ja SOginot sekretäriabi eest. Autori kaastööd Katsete väljamõtlemine ja kavandamine: TK KM MK HY MI AN KNMM. Sooritas katsed: TK HI AI KK TM YK MI AN. Analüüsis andmeid: TK KM MK HY AS SY KU KN MM. Kaasatud reaktiivid/materjalid/analüüsivahendid: TK KM. Kirjutas referaadi: TK KMMM.

Tistanche toime: neeruhaiguste ravi

Viited

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) 2. tüüpi diabeet kui põletikuline haigus.Nat Rev Immunol 11: 98–107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L jt. (1987) Kaks kaltsiumi siduvat valku reumatoidartriidi infiltreeruvates makrofaagides. Nature 330: 80–82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C jt. (2007) Mrp8 jaMrp14 on Toll-sarnase retseptori 4 endogeensed aktivaatorid, mis soodustavad surmavat endotoksiinidest põhjustatud šokki. Nat Med 13: 1042–1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M jt. (2009) Müeloidiga seotud valk-8/14 on vaskulaarse vigastuse korral kriitilise tähtsusega bioloogilises vastuses. Circulation 120: 427–436.

5. Kaotaja K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V jt. (2010) Toll-like retseptori 4 ligandid Mrp8 ja Mrp14 on autoreaktiivsete CD8 pluss T-rakkude arengus üliolulised. Nat Med 16: 713–717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H jt. (2012) Diabeetilise nefropaatia ägenemist hüperlipideemiaga vahendab hiirtel Toll-sarnane retseptor 4. Diabetologia 55: 2256-2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) Neerude kogumiskanali epiteelirakud reguleerivad põletikku hiirte tubulointerstitsiaalsete kahjustuste korral. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T jt. (2012) S100A8/A9 kompleksi (kalprotektiini) kõrge tsirkulatsioonitase isastel jaapanlastel, kellel on kõhupiirkonna rasvumine ja S100A8 ja S100A9 düsreguleeritud ekspressioon rasvunud hiirte rasvkoes. Biochem Biophys Res Commun 419: 782–789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP jt. (2009) Kalprotektiin – uudne markerülekaalulisus. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K jt. (2009) Seerumi kreatiniinisisalduse hinnangulise GFR-i muudetud võrrandid Jaapanis. Olen JNeerDis53: 982–992.

11. Gross JL, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML jt. (2005) Diabeetiline nefropaatia: diagnoosimine, ennetamine ja ravi. Diabetes Care 28:164–176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)Rasvumine-seotud glomerulopaatia: tekkiv epideemia.NeerInt 59: 1498–1509.

13. Praga M, Morales E (2006)Rasvumine, proteinuuria ja neerupuudulikkuse progresseerumine.Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481–486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M jt. (2005) Müeloidiga seotud valgu 8 ekspressioonid makrofaagidel on kasulik prognostiline marker neerufunktsiooni häirete korral lastel, kellel on MPGN tüüp 1. Am JNeerDis 45: 510–518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M jt. (2011) Uriini angiotensinogeen peegeldab intrarenaalse reniin-angiotensiini süsteemi aktiivsust IgA nefropaatiaga patsientidel. Nephrol Dial Transplant 26: 170–177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K jt. (2012) Natriureetilise peptiidi retseptor guanilüültsüklaas-A kaitseb podotsüüte aldosteroonist põhjustatud glomerulaarkahjustuste eest. J Am Soc Nephrol 23: 1198-1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T jt. (2008) Sidekoe kasvufaktori üleekspressioon podotsüütides halvendab hiirte diabeetilist nefropaatiat.NeerInt 73: 446–455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T jt. (1999) Tipptasemel: Toll-like retseptor 4 (TLR4) puudulikkusega hiired reageerivad lipopolüsahhariidile vähe: tõendid TLR4 kui Lps geeniprodukti kohta. J Immunol.162: 3749–3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X jt. (2007) Toll-sarnase retseptori 4 / NF-kappaB raja roll küllastunud rasvhapete põhjustatud põletikulistes muutustes adipotsüütide ja makrofaagide vahelises interaktsioonis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27: 84-91.

20. Pepper RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N jt. (2013) Leukotsüütide ja seerumi S100A8 / S100A9 ekspressioon peegeldab haiguse aktiivsust ANCA-ga seotud vaskuliidi ja glomerulonefriidi korral.NeerInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) Peamised nefropaatia riskitegurid II tüüpi suhkurtõve korral on plasma kolesteroolitase, keskmine vererõhk ja hüperglükeemia. Arch Intern Med 158: 998–1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR jt. (2000) Süstoolse vererõhu seos II tüüpi diabeedi makrovaskulaarsete ja mikrovaskulaarsete tüsistustega (UKPDS 36): perspektiivne vaatlusuuring. BMJ 321: 412–419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) -2 tüüpi suhkurtõve nefropaatia. J Assoc. Nephrol 9: 2157–2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) Kliinilised ja histoloogilised korrelatsioonid neerufunktsiooni languse kohta proteinuuriaga diabeetikutel. Diabeet 43: 1046-1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A jt. (2012) Liverangiotensinogeen on neeru angiotensiin II peamine allikas. J Am Soc Nephrol23: 1181–1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H jt. (2009) Uriini neutrofiilide želatinaasiga seotud lipokaliini tase peegeldab glomerulite, proksimaalsete tuubulite ja distaalsete nefronite kahjustusi.NeerInt 75: 285–294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y jt. (2009) Müeloidiga seotud valku 8 ekspresseerivate makrofaagide kogunemine, mis on seotud sklerootiliste muutuste progresseerumisega IgA nefropaatiaga lastel. Tohoku J Exp Med 218: 49–55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S jt. (2013) Hüperglükeemia soodustab müelopoeesi ja halvendab ateroskleroosi paranemist. Cell Metab 17: 695-708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X jt. (2013) I tüüpi diabeediga patsientide perifeerses veres on põletikuliste geenide ekspressioon ülereguleeritud. Diabeedihooldus.

30. Longo VD, Finch CE (2003) Evolutsiooniline meditsiin: kääbusmudelitest tervete saja-aastaste inimesteni? Teadus 299: 1342–1346.

Tsitaat: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H jt. (2014) Predictive Significance ofNeerMüeloidiga seotud valgu 8 ekspressioon patsientidel, kellel onRasvumine- või 2. tüüpi diabeediga seotud neeruhaigused. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

Toimetaja: Utpal Sen, Louisville'i ülikool, Ameerika Ühendriigid

Saabunud 11. september 2013; Vastu võetud 14. jaanuaril 2014; Avaldatud 18. veebruaril 2014

Autoriõigus: 2014 Kuwabara et al. See on avatud juurdepääsuga artikkel, mida levitatakse Creative Commonsi omistamislitsentsi tingimuste alusel, mis lubab piiramatut kasutamist, levitamist ja reprodutseerimist mis tahes kandjal, eeldusel, et on märgitud originaalautor ja allikas.

Rahastamine: seda tööd toetas osaliselt Jaapani tervishoiu-, töö- ja heaoluministeeriumi (KM-i) diabeetilise nefropaatia ja nefroskleroosi uurimise abiraha ning Jaapani haridus-, kultuuri-, spordi- ja teadusministeeriumi uurimistoetused. , ja tehnoloogia (TK-le, KM-ile ja MM-ile), Jaapani Rakendusensümoloogia Fondilt (TK-le) ja Suitsetamisuuringute Fondilt (MM-ile). Rahastajatel ei olnud mingit rolli uuringu kavandamisel, andmete kogumisel ja analüüsimisel, avaldamisotsuse tegemisel ega käsikirja ettevalmistamisel.

Konkureerivad huvid: autorid on teatanud, et konkureerivaid huvisid ei eksisteeri.

* E-post: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp