Cistanche fenüültanooli glükosiidide farmakodünaamika uuring gentamotsiini poolt indutseeritud ägeda neerukahjustuse kohta rottidel

Märksõnad: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Abstraktne

Eesmärk Uurida kaitsev toimefenüületanoidi glükosiidid(phG)gentamotsiinist põhjustatudäge neerukahjustusRottidel. Meetodid Kokku jagati kontrollrühma 54 isast SD rotti juhuslikult(10 d,15 d,normaalne soolalahus 10 ml/kg), mudelirühm(10 d,15 d,tavaline soolalahus 10 ml/kg), phGs500 mg/kg rühm(10 d,15 d), PHG 250 mg/kg rühm(10 d,15 d)ja simuleeritud kliiniline rühm (21 d, normaalne soolalahus 10 ml/kg), igas rühmas oli kuus rotti. Ägeda neerukahjustuse rotimudel määrati kindlaks gentamotsiini intraperitoneaalse süstimisega kiirusel 75 mg/kg 10 päeva jooksul. Katse lõpus koguti rottide 24 h uriin, rottide veri võeti kõhu aordist, võeti rottide kahepoolsed neerud ja arvutati neeruindeks. Seerumi kreatiniini (Scr), vere karbamiidi lämmastikku (BUN) mõõdeti autoanalüsaatoriga. Avastati superoksiidi dismutaasi(SOD), glutatiooni peroksüdaasi(GSH-Px), kataaasi (CAT) ja malonaldehüüdi (MDA) tasemed neerukoes. Tulemused Võrreldes tühja kontrollrühmaga suurenesid Scr, BUN,24 h uriini maht ja MDA ekspressiooni tase neerukoes 10 d ja 15 d mudelirühmas ning SOD, CAT ja GSH-PX aktiivsus neerukoes de-kortsutati märkimisväärselt(P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">äge neerukahjustusRottidel.

Märksõnad:Cistanche Herba;fenüületanoidi glükosiids; gentamitsiin;äge neerukahjustus

Cistanche Herba

Äge neerukahjustus (AKI)on neerufiltreerimisfunktsiooni äkilise ja kiire languse või kadumise kliiniline sündroom, mis on põhjustatud erinevatel põhjustel [1]. Praegu suureneb AKI esinemissagedus aasta-aastalt. Selle põhjused on erinevad ja võivad põhjustada mitmesuguseid tüsistusi ning kliinilise ravi sekkumismeetodid on väga piiratud [2·3]. Uuringud on leidnud, et pidev ravi aminoglükosiidi antibiootikumidega on AKI [4] sõltumatu riskitegur ja selle indutseeriv mehhanism on seotud ravimite vahendatud vabade radikaalide tootmise, fosfolipiidse ladestumise, neeruverevoolu vähenemise ja kohaliku põletikuga [5]. Kliiniliselt kasutatakse aminoglükosiidi antibiootikumide põhjustatud ägeda neerufunktsiooni vigastuse raviks sageli terapeutilisi ravimite jälgimise meetodeid, kuid need ei saa parandada ega ümber pöörata selliste antibiootikumide põhjustatud neerukahjustuse riski algpõhjusest [6]. Aminoglükosiidi antibiootikumide nefrotoksilisuse varajane sekkumine on kuum koht aminoglükosiidi antibiootikumide ratsionaalse kasutamise uuringutes. Traditsiooniline hiina meditsiinTsistanchesHerba on kuiv lihav vars, millel on ketendavad lehedTsistanchesOrobanchaceae perekonda kuuluv taimTsistanches. Sellel on neeru yangi toitmise funktsioonid ja toitev olemus ja veri [7]. See on looduses soe, maitselt magus ja naaseb neeru meridiaanile.fenüületanoidi glükosiididon peamised keemilised komponendidCistanche, mis võib suurendada seerumi superoksiidi dismutaasi aktiivsust, pärssida malondialdehüüdi ekspressiooni, suurendada organismi võimet püüda hapnikuvabu radikaale, vähendada vabade radikaalide kogunemist kehas ja kaitsta keha liigse stressi eest. Oksüdatiivse kahjustuse efekt [8]. Selles uuringus kasutati gentamitsiini ägeda neerukahjustuse rotimudeli ehitamiseks, et uurida tsitroneella ennetavaid ja terapeutilisi mõjusid.fenüületanoidi glükosiididgentamitsiinist põhjustatud ägeda neerukahjustuse korral. Raport on järgmine.

1 Materjal ja meetodid

1.1 Katseloomad

54 SD rotid, isane, kehakaal (200 ± 20) g, ostetud Xinjiangi Meditsiiniülikooli loomaeksperimentaalsest keskusest, loomakasvatuse litsentsi number: SCXK (uus) 2016-0003, kõik loomad kasvatatakse Xinjiangi Meditsiiniülikoolis SPF barjäärikeskkond Animal Experiment Center, litsentsi number: SYXK (uus) 2016-0002, ümbritseva õhu temperatuur 24 ~ 26 ° C, püsiv temperatuur ja niiskus, suhteline õhuniiskus 40%~ 70%, Rotid söövad ja joovad vabalt.

1.2 Testravim

Tsistanche fenetüül glükosiidide koguarv (see uurimisrühm on rikastatud ja puhastatud Cistanche tubulosast, fenetüülalkoholi glükosiidi kogusisaldus on 89,5%, echinakosiidi sisaldus on suurem kui 40% ja verbaskosiidi sisaldus on üle 16,0%); Gentamitsiini süstimine (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., partii number 16122411), malondialdehüüdi (MDA) tuvastuskomplekt (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., partii number VAAAK6S286), superoksiidi ebaproportsionatsiooniensüüm (SOD) avastamiskomplekt (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., partii number WSH27SS9GB), Catalase (CAT) tuvastuskomplekt (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., partii number FGS3J66D2K), Valley Glutathione Peroxidase (GSH-PX) Detection Kit (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., partii number DK8A622XZP), BCA valgu kvantifitseerimise komplekt (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., partii number 20190622).

1.3 Katsevahend

TD50002A elektrooniline tasakaal (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co., Ltd.), Multiskani täislaineline mikroplaadilugeja (U.S. Thermo Fisher Company), BS-320 automaatne biokeemiline analüsaator (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.), Biofugeprimo lauaarvuti külmutustsentrifuug (Thermo Fisher Company, USA).

1.4 Modelleerimis-, rühmitamis- ja haldusmeetodid

Pärast 1nädalast adaptiivset söötmist jagati 54 isast SD rotti juhuslikult 10d, 15d tühja kontrollrühma, 10d, 15d mudelirühma, 10d, 15d Cistanche cistanche fenetüülalkoholi suure annusega rühma, 10d, 15d Cistanche fenüülataanooli väikese annusega rühma Annuserühm ja 21d simuleeritud kliiniline ravirühm, igas rühmas on 6 looma. Välja arvatud 10d ja 15d tühjad kontrollrühmad, süstiti igas rühmas rotte intraperitoneaalselt gentamitsiiniga (75 mg/kg kehakaalu kohta) 10 järjestikuse päeva jooksul, et luua äge neerukahjustuse mudel. Manustamismeetod: (1) 10d ja 15d tühja kontrollrottidele tehti vastavalt normaalse soolalahuse (10mL/kg kehakaalu) ja 10d ja 15d normaalse soolalahuse (10 ml/kg kehakaalu) ja gavage intraperitoneaalne süst; (2) 10d ja 15d mudelrotid on modelleeritud samaaegselt Rottidele 10d ja 15d suurtes annustes rühmades anti normaalne soolalahus (10 ml/kg kehamassi kohta) vastavalt 10d ja 15d võrra; Kõht kuni 10d ja 15d; (4) 10d ja 15d väikese annusega rühma rotid modelleeriti iga päev ja neile manustati Tsistanche fenelütanoolide koguglükosiide (250mg/kg kehakaalu kohta) gavage'iga 10d ja 15d puhul; (5) 21d simuleeritud kliiniline rühm Samal ajal anti rottidele normaalne soolalahus (10mL/kg kehakaalu kohta) gavage poolt 21 päeva. Rotte kaalutakse iga nädal ja ravimi annust kohandatakse vastavalt kehakaalule.

1.5 Näidiskogu

Rotid igas rühmas koguti 24h uriiniga 10., 15. ja 21. päeval (loom paigutati eelmisel päeval metaboolsesse puuri ja üks loom igas metaboolses puuris, mis võeti välja pärast 24 tundi), tsentrifuugeeriti 3000r / min 20min 4 ° C juures, koguge supernatant ja külmutage -20 ° C hiljem kasutamiseks. Pärast katset paastuti iga rühma rotid ilma toiduta ja tuimastati kõhuõõnes 10% kloorihüdraadiga. Veri võeti kõhu aordist ja lubati seista toatemperatuuril 1h juures 4 °C juures, tsentrifuugeeriti 3500r /min juures 15min ja ülemine kiht helekollase selge vedeliku ülemine kiht aliquoted. Hoida külmutada 20 °C juures hilisemaks kasutamiseks. Iga rühma rotid tuimastati, kõhuõõne oli täielikult avatud, neerukudede distaalsete ja proksimaalsete otste arterid ja veenid fikseeriti hemostaatiliste tangidega, neeruveenid lõigati ja 4 °C isotoonilist normaalset soolalahust süstiti läbi kõhu aordi ja neerude värv oli läbi imbunud. Pärast kahvatuks muutumist eemaldage kiiresti mõlemad neerud ja asetage need filterpaberile, et imada vett ja kaaluda neid elundiindeksi arvutamiseks. Võtke 0,4 g värsket roti paremat neerukoort, lisage eelnevalt jahutatud normaalne soolalahus 1:9 juures, tehke 10% neerukude homogenaadiks madala temperatuuriga keskkonnas, külmutage see ja reserveerige see hilisemaks kasutamiseks. Elundiindeksi arvutusvalem on järgmine: Neeruindeks = kahepoolne neerumass × 103/roti kehamassi.

1.6 Seerumi kreatiniini ja karbamiidi lämmastikusisalduse avastamine rottidel

Võtke seerumiproovid testimiseks ja pange need määramiseks automaatsesse biokeemilisse analüsaatorisse. Vastavalt komplekti juhistele määrake kreatiniini ja karbamiidi lämmastiku sisaldus roti seerumis.

1.7 SOD, CAT, GSH-PX ja MDA avastamine roti neerukudedes

Võtke roti neeru homogenaat, et sulatada toatemperatuuril, tsentrifuugi kiirusel 3000r / min 20 minutit 4 ° C juures, koguda supernatant ja kasutada BCA komplekti roti neerude testimiseks igas rühmas Koevalgu kontsentratsioon. Järgige komplekti juhiseid, et määrata kindlaks superoksiidi dismutaasi (SOD), katasaasi (CAT), glutatiooni peroksüdaasi (GSH-Px) ja malondialdehüüdi (MDA) sisalduse aktiivsus neerukoes. 1.8 Statistiliseks analüüsiks kasutati statistiliseks analüüsiks statistilist analüüsi SPSS21.0 statistilist tarkvara. Mõõtmisandmeid väljendati keskmise ± standardhälbena (-x ± s). Kahe rühma võrdlus viidi läbi t-testiga, mille testitase oli α=0,05.

cistanche ekstrakt

2 Tulemused

2.1 Tsistanche fenetüülalkoholi glükosiidide kogumõju rottide kehamassile, neeruindeksile ja 24h uriiniväljundile igas rühmas

Enne modelleerimist ei olnud igas rühmas rottide kehamassis olulist erinevust (P>0,05). Pärast modelleerimist, võrreldes tühja kontrollrühmaga, vähenes iga mudelirühma kehamass ning neeruindeks ja 24h uriini väljund suurenesid, erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)

2.2 Tsistanche fenüületanoidi glükosiidide mõju rottide seerumi kreatiniinisisaldusele igas rühmas

Võrreldes tühja kontrollrühmaga suurenes rottide seerumi kreatiniinisisaldus igas mudelirühmas ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.3 Tsistanche fenüületanoidi glükosiidide mõju rottide seerumi karbamiidisisaldusele igas rühmas

Võrreldes tühja kontrollrühmaga suurenes rottide seerumi karbamiidi lämmastikusisaldus igas mudelirühmas ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically="">0 voodi lähedal. 0 grupp 5)

2.4 Cistanche fenüületanoidi glükosiidide mõju SOD aktiivsusele iga rottide rühma neerukoes

Võrreldes tühja kontrollrühmaga vähenes sod aktiivsus iga mudelirühma neerukoes ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><>

2.5 Tsistanche fenüületanoidi glükosiidide mõju CAT aktiivsusele iga rottide rühma neerukoes

Võrreldes tühja kontrollrühmaga vähenes CAT aktiivsus iga mudelirühma neerukoes ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05)

2.6 Cistanche fenüületanoidi glükosiidide mõju GSH-PX aktiivsusele rottide neerukudedes igas rühmas

Võrreldes tühja kontrollrühmaga vähenes GSH-PX aktiivsus iga mudelirühma neerukoes ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.7 Cistanche fenüülethanoidglükosiidide mõju MDA sisaldusele rottide neerukudedes igas rühmas

Võrreldes tühja kontrollrühmaga suurenes MDA sisaldus iga mudelirühma neerukoes ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05)

cistanche kaitsta neeru funktsiooni

3 Arutelu

Aminoglükosiidi antibiootikumide tavaline tõsine kõrvaltoime on nefrotoksilisus [9]. Seda tüüpi ravimit filtreeritakse kergesti läbi glomeruluse prototüübi ravimina ja mõned ravimid erituvad uriiniga ning enamik ravimeid koguneb selektiivselt neerukooresse, muutes kontsentratsiooni selles kohas mitu korda kõrgemaks kui ravimi kontsentratsioon seerumis (10) ], sellise ravimi kogunemine põhjustab paratamatult rakukahjustusi ja neerufunktsiooni vähenemist. Pikka aega on aminoglükosiidi ravimite põhjustatud AKI kliiniline ravi alati järginud ravimite ärajätmise ja rutiinse rehüdratsiooni sümptomaatilise ja toetava ravi põhimõtet. kahju. Seetõttu loodi selles uuringus 21-päevane simuleeritud kliiniline ravirühm, et simuleerida rutiinset kliinilist ravi ja keha taastusravi nii palju kui võimalik, et veelgi objektiivsemalt uurida Cistanche fenüületanoidi glükosiidide terapeutilist toimet. Kliinilises ravis kasutatakse Scri ja BUN-i sageli neerufunktsiooni hindamiseks indikaatoritena. Mida kõrgem on Scri ja BUN tase, seda tõsisem on neerufunktsiooni kahjustuse peegeldumine [11]. Selles uuringus loodi AKI mudel gentamitsiini 75 mg/kg intraperitoneaalse süstimisega rottidel 10 järjestikuse päeva jooksul. Võrreldes tühja kontrollgrupiga suurenes Scr ja BUN tase mudeligrupis, mis näitab, et mudel oli edukas. Pärast Cistanche fenüületanoidi glükosiidide sekkumist 10 ja 15 päeva jooksul vähenes rottide Scr ja BUN igas ravirühmas, mis näitab, et tsistanche fenüületanoidi glükosiidid avaldasid head mõju gentamotsiini põhjustatud AKI parandamisele.

Uuringud on leidnud, et reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) suurenemine mängib olulist rolli gentamotsiini põhjustatud neerutoruliste kahjustuste patoloogilises protsessis [12]. MDA on üks peamisi aineid, mis peegeldavad KEHA ROS-i taset [13-14]. Antioksüdantide (antioksüdantide) kaitsesüsteem kehas ROS-i vastu sisaldab SOD-d, CAT-i, GSH-PX-i jne. Cistanche deserticola peamise tõhusa komponendina võivad fenüületanoidi glükosiidid avaldada loomadel märkimisväärset antioksüdantset toimet [15]. Pärast Cistanche fenetüülalkoholi koguglükosiidide sekkumist vähenes oluliselt MDA sisaldus rottide neerukoes manustamisrühmas ning SOD, CAT ja GSH-PX aktiivsus suurenes oluliselt, mis viitab sellele, et Cistanche fenetüülalkoholi kogu glükosiidid võivad parandada neeru oksüdatiivse stressi kahjustusi ja leevendada neerukahjustusi.

Kokkuvõtteks võib öelda, et tsistanche fenetüülalkoholi glükosiidid avaldavad kaitsvat mõju gentamotsiini põhjustatud ägedale neerukahjustusele. See avaldab antioksüdantset toimet, pärssides vabade radikaalide tootmist ja aktiveerides vabu radikaalseid puhastusensüüme, parandades organismi oksüdatiivset stressiseisundit ja suurendades organismi antioksüdantset toimet. Oksüdeeriv võime, vähendada neerukahjustusi.

cistanche kaitsta neeru funktsiooni