1. OSA Fenüületanoolglükosiidi liposoom inhibeerib PDGF-i indutseeritud HSC aktiveerimist FAK/PI3K/Akt signaaliraja reguleerimise kaudu

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye ja Tao Liu 1,*

1 Toksikoloogia osakond, rahvatervise kool, Xinjiangi meditsiiniülikool, Xinjiangi uiguuride autonoomne piirkond, Xinyi tee nr 393, Urumqi 830011, Hiina

2 Uiguuri meditsiini võtmelabor, Xinjiangi Materia Medica instituut, Xinjiangi uiguuri autonoomne piirkond, Tianshani piirkond, Xinhua lõunatee nr 140, Urumqi 830004, Hiina

Lisateabe saamiseks võtke ühendust:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticolal on palju mõjusid, lisateabe saamiseks klõpsake siin

Abstraktne: Cistanche tubulosaon traditsiooniline Hiina taimne ravim, mida kasutatakse laialdaselt immuunsuse reguleerimiseks jafenüületanoidglükosiidid(CPhG-d) on selle tegevuse eest vastutavate peamiste komponentide hulgas. CPhG-de kasutamist mõjutavad aga negatiivselt nende halb imendumine ja vähene suukaudne kasutamine. Ravimite sihipärane kohaletoimetamine on farmaatsia oluline arengusuund. Varasemad uuringud on näidanud, et CPhG-d võivad blokeerida TGF-p1 / smad signaaliradade juhtivuse ja pärssida maksa tähtrakkude (HSC) aktiveerimist. Selle uuringu eesmärk oli hinnata CPhG liposoomide maksafibroosivastast toimet, inhibeerides HSC aktivatsiooni, soodustades apoptoosi, blokeerides rakutsüklit, pärssides signaaliradade juhtivust fokaalses adhesioonikinaasis (FAK)/fosfatidüülinositoolis-3- kinaasi (PI3K) / proteiinkinaasi B (Akt) ja nende in vitro hepatoprotektiivse aktiivsuse määramine. In vitro vabanemisuuringud näitasid, et CPhG liposoomidel on prolongeeritult vabastav toime võrreldes ravimite CPhG-dega. HSC proliferatsioon inhibeeriti pärast töötlemist CPhG liposoomidega (29,45, 14,72, 7,36 µg/ml), IC50 väärtused olid MTT testis 42,54 Rg/ml. CPhG liposoomide erinevad kontsentratsioonid võivad pärssida HSC proliferatsiooni, soodustada apoptoosi ja blokeerida rakutsüklit. MTT meetod näitas HSC proliferatsiooni ilmset pärssimist pärast CPhG liposoomi ja rekombinantse roti trombotsüütidest pärineva kasvufaktori-BB (rrPDGF-BB) töötlemist. Kollageeni-1, metallopeptidaasi inhibiitori 1 (TIMP-1), silelihaste aktiini (a-SMA) ja fosforüülitud PI3K/Akt tasemed olid alareguleeritud ning maatriksi metalloproteinaasi-1 (MMP{) {23}}) reguleeriti üles eeltöötlemisel CPhG liposoomide erinevate kontsentratsioonidega. Veelgi enam, 29,45 Rg/ml CPhG liposoome võib FAK geeni üleekspressiooni tõttu vähendada FAK valgu ja fosforüülitud PI3K ja Akt valgu ekspressiooni FAK-st allavoolu. See katse viitab sellele, et CPhG liposoomid võivad pärssida HSC-de aktiveerimist, inhibeerides FAK-i ja seejärel vähendades fosforüülitud Akt/PI3K ekspressiooni, pakkudes seeläbi uusi teadmisi CPhG-de kasutamisest maksafibroosi korral.

Märksõnad: fenüületanoidglükosiididliposoom; maksa tähtrakud; levik; apoptoos; rakutsükkel; FAK/PI3K/Akt,

tegurid, nagu TGF-p1, alkohol, toksiinid ja steatoos, võivad põhjustada HSC-de aktiveerumist. PDGF võib samuti põhjustada HSC-de aktiveerimist [4]. Praegu hõlmavad HSC-dele suunatud terapeutilised strateegiad maksafibroosi ennetamiseks HSC-de aktivatsiooni, proliferatsiooni ja rakutsükli pärssimist, samuti HSC-de apoptoosi stimuleerimist [5].

Cistanche tubulosa(perekond Orobanchaceae), parasiittaime, kasvatatakse laialdaselt Hiinas Xinjiangi lõunaosas.C. tubulosaon näidanud erinevaid tegevusi, sealhulgas organismi immuunsuse tugevdamine, organismi vastupidavuse parandamine, neerude toitmine, impotentsuse ravi ja intelligentsuse suurendamine;

1. Sissejuhatus

sellel on ka oksüdatsiooni- ja vananemisvastased omadused [6]. See taim sisaldab fenüületanoidglükosiide (CPhG), iridoide ja polüsahhariide, millest CPhG-d on mõned peamised aktiivsed bioaktiivsed liigid [7]. Eelmises uuringus leidsime, et CPhG-d võivad blokeerida TGF-p1/smad signaaliradade juhtivuse, inhibeerida HSC-de aktivatsiooni ja avaldada ennetavat toimet veise seerumi albumiinist põhjustatud maksafibroosile rottidel [7,8]. Siiski on CPhG-del hea vees lahustuvus ja halb lipiidide lahustuvus ning neid mõjutavad välistegurid, nagu happesus ja lagunemisensüümid, mis vähendavad CPhG-de stabiilsust ja efektiivsust [9]. Pärast intragastraalset manustamist on CPhG-d rottide seedetraktis ebastabiilsed ja võib kergesti tekkida glükosiidsidemete hüdrolüüs. Suukaudne biosaadavus rottidel oli ainult 0,83 protsenti, seega on selle terapeutilist rolli raske kindlaks teha [10]. Seetõttu peame leidma HSC-de jaoks ohutu, tõhusa, püsiva ja sihipärase antifibrootilise ravimi, et parandada nende terapeutilist efektiivsust. Nanoosakeste ravimite kohaletoimetamise süsteemid pakuvad alternatiivset strateegiat nende puuduste ületamiseks nende eeliste, sealhulgas suure ravimi laadimisvõime ja pika vereringe tõttu [11]. Neil on tugev afiinsus maksa suhtes ja need võivad endotsütoosi ja fusiooni kaudu ravimeid otse rakkudesse toimetada. Modifitseerimata liposoomid jaotuvad peamiselt retikuloendoteliaalse süsteemi (RES) poolt välja töötatud kudedes või elundites ja nende funktsioon on passiivne maksa sihtimine [12]. Seetõttu valmistati CPhG liposoomid membraani dispersiooni ja sekundaarse kapseldamise teel, et tagada fibroosivastane toime. Selles uuringus püüdsime uurida CPhG liposoomide mõju HSC proliferatsioonile, apoptoosile ja rakutsüklile, samuti selle mehhanisme.

2. Tulemused

2.1. CPhG liposoomi füüsikalised omadused

Valmistatud CPhG liposoomide füüsikalised omadused olid järgmised: osakeste suurus oli (216,7 ± 3,47) nm, Zeta potentsiaal oli (-55,6 ± 1,3) mV. Nagu on näidatud joonisel 1, olid osakesed ümmargused, kaetud ühtlase paksusega ja osakeste suuruse jaotus oli ühtlane. CPhG liposoomide ravimi laadimise ja kapseldamise efektiivsus oli (3,71 ± 0,32) protsenti ja (38,46 士 7,85) protsenti.

2.2. In vitro vabanemine CPhG liposoomidest ja CPhG-dest

CPhG liposoomide ja CPhG-de hinnanguline kumulatiivne vabanemiskiirus arvutati ja joonistati aja funktsioonina (joonis 2). Käesolevas uurimuses; CPhG-de vabanemiskiirus 12 tunni pärast normaliseeriti 100 protsendini, samas kui CPhG liposoomide vabanemiskiirus oli 24 tunni pärast 100 protsendi lähedal ja CPhG-de vabanemiskiirus suurenes aja jooksul. Andmeid analüüsiti, kasutades kontrollitud vabastamismehhanismide jaoks erinevaid sobitusmudeleid, sealhulgas nulljärku, esimest järku ja Higuchi võrrandeid. Kolme vabastusmudeli sobitatud võrrandid ja korrelatsioonikoefitsiendid on näidatud tabelis 1.

Parim mudel, mis sobib CPhG-de ja CPhG liposoomide jaoks, on Higuchi ja esimest järku võrrandid. CPhG liposoomide in vitro vabanemise uuring ei näidanud lõhkemisefekti. Lahustumisparameetrite T50 (lahustuvus 50 protsenti) arvutamiseks valiti välja kõige sobivam jaotusfunktsioon. Tulemused näitavad, et CPhG liposoomide keskmine retentsiooniaeg on pikem kui CPhG-de oma ja CPhG liposoomide T50 on 9,39 tundi. Võrreldes CPhG-de 1, 69 tunniga, on CPhG liposoomidel ilmne toimeainet prolongeeritult vabastav toime (tabel 2).

Esmalt uurisime CPhG liposoomide tsütotoksilist toimet HSC-dele MTT testiga in vitro. HSC-sid eksponeeriti 24 tunni jooksul erinevatele CPhG liposoomide kontsentratsioonidele, vahemikus 0 kuni 117,79 卩g/ml. CPhG liposoomid vähendasid HSC-de elujõulisust annusest sõltuval viisil ja nende IC50 väärtus oli 42,535 (nt/ml. CPhG liposoomide (29,45, 14,72 ja 7,36 ^g/mL) toime rakkudele 24 °C juures, 48 ja 72 tundi on näidatud joonisel 3. Pärast töötlemist CPhG liposoomidega oli HSC-de proliferatsioon erinevatel ajahetkedel märkimisväärselt pärsitud (joonis 3).

HSC-de laktaatdehüdrogenaasi (LDH) vabanemine tuvastati pärast 24-tunnist töötlemist erinevate CPhG liposoomide kontsentratsioonidega. Tulemused on näidatud tabelis 3. CPhG liposoomidega töödeldud HSC-del ei olnud olulist mõju LDH vabanemisele.

2.4. CPhG liposoomid kutsuvad esile HSC-de apoptoosi ja peatavad rakutsükli

HSC-sid eksponeeriti CPhG liposoomidega (29, 45, 14, 72, 7, 36 卩g / ml) 24 tunni jooksul ja apoptoosi tuvastamiseks voolutsütomeetria abil viidi läbi anneksiin-V-FITC / PE topeltvärvimine, nagu on näidatud joonisel 4a. Rakkude koguapoptoos suurenes statistiliselt võrreldes kontrollrühmaga (p < 0,05).="" pärast="" 24-tunnist="" ravi="" hsc-dega="" igas="" annuserühmas="" võisid="" cphg="" liposoomid="" (29,45="" μg="" ml)="" esile="" kutsuda="" hsc-de="" hilise="" apoptoosi="" ja="" hiliste="" apoptootiliste="" rakkude="" protsent="" oli="" kõrgem="" kui="" varajaste="" apoptootiliste="" rakkude="" oma.="" varaste="" apoptootiliste="" rakkude="" osakaal="" oli="" palju="" suurem="" kui="" hiliste="" apoptootiliste="" rakkude="" osakaal="" cphg="" liposoomiga="" (14,72="" ja="" 7,36|^g/ml)="" töödeldud="" rühmades.="" need="" tulemused="" näitavad="" selgelt,="" et="" cphg="" liposoomid="" kutsuvad="" esile="" hepatotsüütide="" apoptoosi,="" eriti="" hsc-de="" hilises="" staadiumis.="" lisaks="" suurenes="" kogu="" apoptoos="" cphg="" liposoomide="" annusega.="" need="" tulemused="" viitavad="" sellele,="" et="" cphg="" liposoomid="" võivad="" pärssida="" hsc-de="" aktivatsiooni="" ja="" maksafibroosi,="" kutsudes="" esile="" hsc-de="">

Et määrata CPhG liposoomide mõju HSC-de rakutsüklile, töödeldi HSC-sid CPhG liposoomidega 24 tunni jooksul kontsentratsioonides 29,45, 14,72 ja 7,36 µ/mL ning analüüsiti voolutsütomeetria abil (joonis 4b). Tulemused näitasid, et rakkude osakaal G0/G1 faasis oli oluliselt suurenenud (p < {{10}},05),="" samas="" kui="" rakkude="" protsent="" s-faasis="" oli="" oluliselt="" suurenenud.="" vähenenud="" (p="">< 0,05).="" veelgi="" enam,="" rakkude="" osakaal="" g2/m="" faasis="" oli="" kontrollrühmaga="" võrreldes="" oluliselt="" vähenenud=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. C PhG liposoomide in vitro toimemehhanismi(de) uuring

2.5.1. CPhG liposoomid inhibeerivad HSC-de proliferatsiooni rrPDGF-BB stimulatsiooniga

Et täiendavalt uurida CPhG liposoomide mõju HSC-de rrPDGF-BB poolt stimuleeritud proliferatsioonile, viidi läbi MTT test, et mõõta nende HSCde elujõulisust, mida töödeldi 24, 48 ja 72 tundi CPhG liposoomide eelseadistatud kontsentratsioonidega ( Joonis 5).

Pärast 24-tunnist ravi rrPDGF-BB ja 29,45, 14,721 ja 7,36 µl/ml CPhG liposoomidega stimuleeritud HSC-dega oli rakkude elulemus igas annuserühmas vastavalt 67,5%, 75,3% ja 89,2%. 48 tunni pärast oli elulemus rakkudes vastavalt 49,2%, 58,6% ja 73,5%.
iga annuserühma kohta. Pärast 72-tunnist ravi oli rakkude elulemus igas annuserühmas vastavalt 45,3%, 59,2% ja 79,2%. Tulemused näitasid, et CPhG liposoomidel oli märkimisväärne inhibeeriv toime rrPDGF-BB poolt stimuleeritud HSC-dele ja see inhibeeriv toime muutus ilmsemaks, kui annust suurendati. Arvatakse, et CPhG liposoomide inhibeeriv toime HSC-dele aitab kaasa CPhGliposomo proliferatsioonivastasele toimele.

2.5.2. CPhG liposoomid inhibeerivad HSC aktiveerimist in vitro

Disse'i ruumis olevad HSC-d toodavad ECM-i komponente, nagu kollageen-1, (s-SMA ja kollageen III). HSC-d toodavad ka muid ECM-ide arengut reguleerivaid tegureid, nagu MMP-d ja TIMP-d [5]. HSC-des indutseeritud rrPDGF-BB mehhanismide edasiseks uurimiseks hindasime ECM-iga seotud valkude, sealhulgas kollageeni-1, Cosma, kollageen III, MMP-1 ja TIMP{{8} ekspressiooni. }. Joonis 6a näitab, et CPhG liposoomide (29,45, 14,72, 736 4g/mL) rühmad võivad vähendada kollageeni-1, a-SMA ja TIMP{18} mRNA ekspressioonitaset. } ja tõsta MMP-1 mRNA ekspressioonitaset rohkem kui rrPDGF-BB rühmal.

Joonis 6. CPhG liposoomide mõju kollageeni -1, a-SMA, TIMP-1 ja MMP-1 ekspressioonile HSC-des. (a) Kollageeni-1, a-SMA, TIMP-1 ja MMP-1 mRNA ekspressioon HSC-des (RT-PCR test). (b) Kollageeni {{10}} ja a-SMA valgu ekspressioon. A, kontrollrühm; B, rrPDGF-BB-ga töödeldud rühm; C, rrPDGF-BB pluss CPhG liposoomi 29,45 g/ml töödeldud rühm; D, rrPDGF-BB pluss CPhG liposoom 14.72 (_ig/mL töödeldud rühm; E, rrPDGF-BB pluss CPhG liposoom 7.3 6 卩g/mL ravitud rühm; andmed on väljendatud keskmine 土 SD kasutati sisekontrollina.

CPhG liposoomid tõstsid ka MMP{0}} mRNA taset. rrPDGF-BB-aktiveeritud HSC-des ekspresseeriti kõrgelt a-SMA ja kollageeni-1 tase. Seevastu CPhG liposoomid vähendasid a-SMA ja kollageeni -1 taset (joonis 6b). Eriti kõrgel kontsentratsioonil (29,45 ^g/ml) vähendas CPhG liposoom suurenenud kollageeni-1 ja a-SMA ekspressiooni rrPDGF-BB kaudu.

2,53 CPhG liposoomid inhibeerivad PI3K/Akt signaalirada

PI3K/Akt on oluline signaaliülekande rada, mida vahendavad türosiinkinaasi retseptorid. PI3K/Akt signaalirada toimib andurina vastuseks ekstratsellulaarsetele stiimulitele ja vahendab raku signaale, mängides seega kriitilist rolli raku apoptoosis ja proliferatsioonis, mõjutades allavoolu efektormolekulide aktiivsust [13]. Selleks, et kontrollida, kas PI3K / Akt rada osaleb CPhG liposoomide proliferatsioonivastases toimes HSC-dele, uuriti PI3K / Akt ekspressiooni ja fosforüülimise taset Western blot analüüsiga. Tulemused näitasid, et p-PI3K ja p-Akt tasemed langesid järjekindlalt HSC-des pärast 24-tunnist töötlemist CPhG liposoomidega, mis näitab, et CPhG liposoomide proliferatsioonivastane toime HSC-de vastu on seotud PI3K/Akt raja deaktiveerimisega. , nagu on näidatud joonisel 7.

2.5.4. CPhG liiposoomid võivad alareguleerida PI3K / Akt raja valkude ekspressiooni rrPDGF-BB-vahendatud FAK üleekspressiooniplasmiidi HSC-des

FAK on kriitiline geen, mis reguleerib PI3K/Akt signaalirada. Aktiveeritud FAK võib fosforüülida PI3K, mis viib veelgi Akt fosforüülimiseni. FAK vahendab türosiin-proteiinkinaasi retseptori, integriini ja muude radade signaaliülekannet rakkudesse, mis on HSC-de aktiveerimise ajal mitmete intratsellulaarsete radade ristmik ja keskus. Seetõttu me spekuleerisime

et CPhG liposoomid võivad pärssida PI3K / Akt signaaliraja aktiivsust, kahjustades FAK aktiveerimist. Seejärel kinnitasime seda hüpoteesi, näidates FAK geeni üleekspressiooni.

(pEX{{0}}NC) pluss CPhG liposoomi 29,45 Lg/mL rühmas vähenes oluliselt (p < 0,01).

estern blotting spetsiifiliste primaarsete antikehadega. ** p < 0,01,="" oluliselt="" erinev="">

rrPDGF-BB stimulatsioon pluss pEX-3-FAK rühm. pluss p < 0.05,="" oluliselt="" erinev="" võrreldes="" rrpdgf-bb-ga="" ravitud="" rühmaga.="" &="" p="">< 0,01,="" oluliselt="" erinev="" võrreldes="" rrpdgf-bb="">

pluss pEX{0}}NC-rühm. -aktiini kasutati sisekontrollina.

cistanche on vähivastane

3. Arutelu

On näidatud, et CPhG-del on mitmesugused bioloogilised toimed, sealhulgas põletikuvastane toime [14,15], osteoporoosivastane toime [16,17], rahustav toime [18], väsimusevastane toime [19], neuroprotektiivne toime. 20] ja hepatoprotektiivne toime [21,22]. Yang et al. leidis, et väljavõteC. tubulosavõib märkimisväärselt edasi lükata eksperimentaalse keemilise maksafibroosi kulgu, inhibeerides kollageeni sünteesi ja vähendades oksüdatiivset stressi [22]. Kuid CPhG-de efektiivsust kui

kuumakaitsevahendeid piirab nende halb läbilaskvus ja madal biosaadavus [23]. Seetõttu on nende tagasilöökide ületamiseks vaja laiendada CPhG-de rakendust, töötades välja tõhusa tarnesüsteemi.

Viimastel aastatel on nii ravimiuuringud kui ka kliinilised uuringud kinnitanud, et nanoosakeste kasutamine ravimikandjatena võib parandada ravimite efektiivsust in vivo. Liposoomid on ühed kõige olulisemad nanoosakesed [24].

Liposoome saab kasutada ravimikandjatena põletikuvastaste ravimite, vähivastaste ravimite, antibiootikumide, seenevastaste ravimite ja muude erinevate ravimite kategooriate edukaks manustamiseks [25]. Liposoomid võivad samuti parandada ravimi stabiilsust, suurendada ravimi lahustuvust ja soodustada biosobivust [26]. Teisest küljest on uuringud näidanud, et tahkete nanoosakeste ravimi kohaletoimetamise süsteem (vahemikus 10-1000 nm) suudab kontsentreerida 80 protsenti ravimi annusest maksas, võimaldades ravimil siseneda. maksarakud [27]. Jing Zhu et al. leidis, et galaniin-liposoomidel on hea maksa sihtimise toime [28]. Seetõttu saab nano-Hiina ravimite passiivset sihtimisefekti kasutada maksahaiguste või muude haiguste raviks. Käesolevas uuringus valmistatud CPhG liposoomide osakeste suurus, mis on teatud määral suunatud maksale, on (216,7 ± 3,47) nm. Ravimite vabanemise käitumine on nanoravimite manustamissüsteemide oluline omadus. Kuna CPhG-d lahustuvad hästi vees, kasutatakse vabastamiskeskkonnana PBS-i puhverlahust (pH=6.0). Vabanemiskõveralt on näha, et enne 2 tundi oli CPhG liposoomide vabanemise protsent alla 40 protsendi, äkilist vabanemist ei toimunud ja võrreldes CPhG-de vabanemisega oli teatav prolongeeritud vabanemise efekt. Paigaldatud vabanemiskõvera võrrandi põhjal on CPhG liposoomide vabanemine fosfaatpuhverlahuses pH=6,0 juures kooskõlas Higuchi võrrandiga.

cistanchesaabapoptoosivastane toime

Krooniliste maksahaiguste korral põhjustab HSC-de pidev aktiveerimine maksafibroosi [29]. Seetõttu võib HSC-de aktivatsiooni, proliferatsiooni ja rakutsükli pärssimine või HSC apoptoosi esilekutsumine olla uus lähtepunkt maksafibroosi sihipärasele ravile [30-33]. Paljud uuringud on leidnud, et apoptoos on võti maksafibroosi tagasipööramiseks, soodustades apoptoosi [34]. Maksafibroosi areng sõltub HSC-de aktiveerimisest, mis võib pakkuda potentsiaali inhibeerida HSC aktivatsiooni ja kutsuda esile apoptoosi, et vältida või ravida maksafibroosi [35,36]. LDH on raku tsütosoolis sisalduv ensüüm, mis rakumembraani kahjustamisel vabaneb söötmes. Nendel põhjustel viisime läbi in vitro uuringud rakkude elujõulisuse määra, LDH sisalduse kohta rakkudes ning CPhG liposoomidega kokkupuutunud HSC-de apoptoosi ja rakutsükli kohta. Tulemused näitasid, et CPhG liposoomid inhibeerivad tugevalt HSC-de elujõulisust ja proliferatsiooni ning suurendavad apoptootiliste rakkude protsenti kontsentratsioonist sõltuval viisil. Veelgi enam, rakutsükli tulemused näitavad, et CPhG liposoomid võivad G1 faasis esile kutsuda rakutsükli peatamise. Tulemused näitavad, et CPhG liposoomide võti maksafibroosi ennetamiseks ja raviks on rakkude proliferatsiooni, apoptoosi ja rakutsükli reguleerimine. Võrreldes tühja kontrollrühmaga on LDH sisaldus iga rühma vahel järk-järgult suurenev. Siiski ei esinenud olulist erinevust (p > 0,05), mis näitab, et kuigi CPhG liposoomide poolt mõjutatud HSC-de aktiivsus väheneb, jääb enamik rakumembraane puutumatuks. HSC-de proliferatsiooni pärssimine CPhG liposoomide poolt ei ole tingitud ravimite toksilisusest rakkudele.

PDGF on kõige kriitilisem tegur, mis mõjutab HSC-de levikut. PDGF-retseptorid (PDGF-Ra ja -p) kuuluvad türosiinkinaasi retseptorite perekonda. PDGF-AA seondub eranditult PDGF-Ra-ga, samas kui PDGF-B ahelad seonduvad ja dimeriseerivad nii PDGF-Ra kui ka -p-ga [37]. Pärast ligandi seondumist PDGF-R-ga retseptorid dimeriseerivad, mis viib seejärel sisemise türosiinijäägi fosforüülimiseni ja mitmete allavoolu signaaliradade aktiveerimiseni, indutseerides lõpuks aktiveeritud HSC-de proliferatsiooni ja migratsiooni. Selle protsessi tulemuseks on kollageeni ja teiste ECM-ide ülemäärane tootmine ja ladestumine, soodustades seeläbi maksafibroosi teket ja progresseerumist [38]. Breitkopf jt. näitas, et PDGF-BB maksa üleekspressioon põhjustab HSC proliferatsiooni ja maksafibroosi [39]. Meie uuringus kasutasime HSC-de aktiveerimiseks stimulaatorina rrPDGF-BB-d ja iga doseeritud CPhG liposoomirühm võib pärssida HSC-de proliferatsiooni ja tekitada näilise annuse-mõju suhet. Arvatakse, et CPhG liposoomide inhibeeriv toime HSC-dele aitab kaasa CPhG liposoomide proliferatsioonivastasele toimele.

HSC-de aktiveerimine on seotud paljude muutustega rakkude geeniekspressioonimustrites. Eelkõige on muutused kollageeni -1 ja a-SMA geeniekspressioonis kõige enam korrelatsioonis aktiveeritud HSC-de fibroosiomadustega [40]. MMP-d on tsingist sõltuvad endopeptidaasid, mis mängivad olulist rolli kõigi ECM-i valgukomponentide lagunemisel füsioloogilistes ja patoloogilistes tingimustes. MMP-d ja TIMP-d vahendavad vastavalt ECM-i sünteesi ja lagunemist. MMP-d võivad soodustada ECM-i lagunemist. MMP-de ja TIMP-de õrn tasakaal määrab maksafibroosi esinemise [29]. Võrreldes rrPDGF-BB rühmaga suurenes TIMP-1, a-SMA ja kollageeni-1 ekspressioon CPhG liposoomirühmades oluliselt, samas kui MMP-9 ekspressioon vähenes. CPhG liposoomiravi muutis märkimisväärselt rrPDGF-BB poolt indutseeritud ebanormaalsed ekspressioonid HSC-des. Need andmed näitavad, et CPhG liposoomid võivad pärssida ECM-i teket, taastades tasakaalu MMP-de ja TIMP-de vahel, suurendades seeläbi MMP-1 taset ning vähendades TIMP-1, a-SMA ja kollageeni-1 ja potentsiaalselt soodustades rakuvälise maatriksi lagunemist.

FAK on omamoodi fokaalne adhesioonikompleks. PDGF võib aktiveerida ka FAK-i, interakteerudes integriini kaudu ECM-valguga [41]. Fokaalne adhesioonikompleks annab otsese anduri rakuvälise keskkonna terviklikkuse jaoks. FAK aktiveerimine põhjustab PI3K aktiveerimise. On näidatud, et PI3K osaleb mitmete rakutüüpide proliferatsioonis [42]. Selle otsustavat rolli HSC-des näidati PI3K-spetsiifiliste inhibiitorite LY294002 ja wortmanniini kasutamisega, et blokeerida PDGF-i indutseeritud mitogeneesi ja kemotaksist, mõjutamata seejuures PDGF-i retseptori autofosforüülimist [43]. PI3K värvatakse dimeriseeritud fosforüülitud PDGF retseptoritesse, mis aktiveerivad proteiinkinaasi C (PKC), Akt ja p70S6 kinaase (p70S6K) [44]. On teatatud, et dominant-negatiivset FAK-i (Ad-FAKCD) kasutati FAK aktiivsuse blokeerimiseks ja PDGF-i ja HSC-de proliferatsioonist põhjustatud PI3K aktivatsiooni pärssimiseks pärast PDGF-ravi [45]. Seetõttu püstitasime hüpoteesi, et FAK / PI3K / Akt rada on CPhG liposoomide võimalik sihtmärk.

Meie tulemused näitavad, et võrreldes rrPDGF-BB stimulatsiooni pluss X-3-FAK rühmaga olid FAK, fosforüülitud PI3K ja fosforüülitud Akt valgu ekspressioonitasemed rrPDGF-BB stimulatsiooni pluss X-3-FAK puhul allareguleeritud. pluss CPhG liposoom 29,45 Lg/mL rühm. Need tulemused näitavad, et CPhG liposoomi 29,45 Lg/ml töötlemine võib vähendada FAK-i valgu ja fosforüülitud PI3K- ja Akt-valkude ekspressiooni FAK-st allavoolu.

Traditsioonilise hiina meditsiini keemia ja farmakoloogia uuringute süvenedes on leitud ja kinnitust leidnud üha enam traditsioonilise Hiina meditsiini toimeaineid. Paklitakseeli, artemisiniini ja teisi ravimeid on laialdaselt tunnustatud esmavaliku ravimitena sarnaste haiguste raviks kogu maailmas. Kuid samal ajal leitakse, et kuigi paljude Hiina meditsiiniliste koostisosade in vitro farmakoloogiline toime on väga tugev, on neil halb lahustuvus vees, lühike poolestusaeg, halb stabiilsus, madal biosaadavus, toksilised kõrvaltoimed ja palju muud probleemid, mis piiravad tõsiselt nende meditsiinilist ja kliinilist kasutamist. Nanoravimite kohaletoimetamise süsteem on uus ravimite kohaletoimetamise süsteem, millel on suur arengupotentsiaal ja mis on kaasaegsete farmaatsiauuringute leviala. Selle kasutamine traditsiooniliste hiina ravimite uute vormide uurimisel ja väljatöötamisel mitte ainult ei paranda Hiina meditsiini traditsioonilisi vorme, vaid parandab teatud määral ka traditsiooniliste Hiina ravimite ravitoimet ja suurendab ravimite stabiilsust in vivo. Veelgi enam, RES absorbeerivad enamasti modifitseerimata liposoome, sõltuvalt nende osakeste suurusest, pinna omadustest ja muudest teguritest. Samuti on need passiivselt suunatud maksale. Tavaliste liposoomide maksa sihtimise efektiivsuse parandamiseks saab sihtkoe kontsentratsiooni tõsta spetsiifiliste ligandide või spetsiifiliste funktsionaalrühmade ühendamise teel.

Seetõttu peaksime tulevastes uuringutes tähtsustama CPhG ekstraheerimise ja puhastamise füüsikalisi ja keemilisi omadusi, nagu lahustuvus, stabiilsus, happesus ja aluselisus, samuti biofarmatseutika ja farmakokineetika uurimist. Peaksime looma CPhG-de jaoks ainulaadse koostise kavandamise teooria, valmistamise tehnoloogia platvormi ja kvaliteedi hindamise meetodi ning töötama välja ka mitmesuguseid nanoravimite laadimissüsteeme CPhG-de jaoks, et tagada CPhG-de võimalikult põhjalik kasutamine. Nende eeliste täielik ärakasutamine on meie tulevase uurimistöö suund.