Cistanche Deserticola mannoglükaani keemilised omadused

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materjalid

Kasutati kahe erineva tootja hobustele mõeldud suukaudseid pastasid, mis sisaldasid vastavalt 10 mg/g (A) või 20 mg/g (B) ivermektiini. Viidi läbi ivermektiini kvantitatiivne analüüs ja selle sisaldus oli 104,4–107,7 protsenti deklareeritud kontsentratsioonist.

2. Lahustumiskatse

Katse viidi läbi Ph. Eur. mõlaseade (Pharma Test, Heinberg, Saksamaa), segamisel kiirusel 75 p/min või 50 p/min, temperatuuril 37 -0,5 C. Naatriumlaurüülsulfaat (BDH Chemicals, Poole, Inglismaa) 0,5 protsenti (w Lahustuskeskkonnana kasutati vesilahust (900 ml). Pasta (4 g A või 2 g B) asetati anumasse kanüüliga süstlaga (A) või tilgutades proovi lahustuskeskkonna (B) pinnale. Pärast ajavahemikke (15, 30, 45, 60 min ja 2 tundi) võeti lahustumiskeskkonna proov (2 ml), filtriti läbi klaasfiltri ja analüüsiti.

3. HPLC analüüs

Ivermektiini määramine viidi läbi modifitseeritud HPLC meetodil, nagu on kirjeldatud Ph. Eur. Analüüsitud lahused lahjendati metanooliga (1:10). HPLC süsteem koosnes oktadetsüülkolonnist (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integraatorist D-12500 A, detektorist UV-Vis L{{7} }, pump L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Saksamaa). Liikuva faasina kasutati atsetonitriili:metanooli:vee segu (64:24:16) voolukiirusega 1,9 ml/min. Süstitud proovi maht oli 20 ml ja tuvastamine viidi läbi 254 nm juures.

4. Lahustuvusuuringud

Ainet loksutati tihedalt suletud klaaskolbides sobiva lahustiga (tabel 1) 20 tundi temperatuuril 37 0,1 C. Suspensioonid filtriti ja filtraati analüüsiti pärast metanoolis lahjendamist HPLC-ga. .

5. Stabiilsus happelises lahuses

Ivermektiini lahuseid HCl-s {{0}},1 M säilitati tihedalt suletud klaasviaalides temperatuuril 20 C ja 37 C. Lahuste kromatogrammid registreeriti t ¼ 0 ja 1, 2 ja 6 tunni pärast. Arvutati ivermektiini pindala (retentsiooniaeg 10,5 min) ja täiendavad piigid.

Viited

FDA juhised tööstusele: SUPAC-SS mittesteriilsed pooltahked ravimvormid. Suurendamis- ja kinnitusjärgsed muudatused: keemia, tootmine ja juhtelemendid; in vitro vabanemiskatsed ja in vivo bioekvivalentsuse dokumentatsioon. mai 1997. FIP juhised tahkete suukaudsete toodete lahustuvuse testimiseks (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) FIP/AAPS juhised uudsete/spetsiaalsete ravimvormide lahustumise/in vitro vabanemise testimiseks, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artikkel 7 Traditsioonilise hiina meditsiini kaasaegne uurimiskeskus, kool Pharmaceutical Sciences, Pekingi ülikooli terviseteaduste keskus, Peking, Hiina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Vastu võetud 13. veebruaril 2004, vastu võetud 4. aprillil 2004, prof dr Pengfei Tu, traditsioonilise hiina meditsiini kaasaegne uurimiskeskus, farmaatsiateaduste kool, Pekingi ülikooli terviseteaduste keskus, nr 38, Xueyuan Road , Haidiani piirkond, Peking 100083, Hiina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Uus mannoglükaan päritCistanche deserticolaHiinast pärit on iseloomustatud. Ühend vastutab mitogeeni poolt indutseeritud T- ja B-lümfotsüütide proliferatsiooni kerge stimuleerimise eest.

Cistanche deserticolaYC Ma on kaheidulehelise taime Haloxylon ammodendron Bunge juurtel kasvav holoparasiit, mis on laialt levinud Loode-Hiinas. Kuna tegemist on idamaises meditsiinis olulise toonikuga, on väidetud palju aktiivseid komponente ja farmakoloogilisi toimeid (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa jt 1990). Need omadused võivad olla seotud mõne polüsahhariidkomponendigaCistanchemida pole veel uuritud. Mitogeensed pektiinpolüsahhariidid ja neutraalsed polüsahhariidid on eraldatud ja iseloomustatudCistanche deserticolaMongooliast (Radna jt 1996; Anna jt 1997; Bozena jt 1999). Siin kirjeldame uue mannoglükaani keemilisi omadusiCistanche deserticolaHiinast, mis vastutab mitogeeni poolt indutseeritud T- ja B-lümfotsüütide proliferatsiooni kerge stimuleerimise eest. Pärast varredCistanche deserticolaYC Ma ekstraheeriti 95% etanooliga, jäägi ekstraheerimiseks kasutati külma destilleeritud vett. Külma vee ekstrakt sadestati EtOH-ga, valk eemaldati ja dialüüsiti, saades toorpolüsahhariidi CCDP. Toorpolüsahhariid fraktsioneeriti DEAE kolonnis ja Sephadex G-150 kolonnis, et saada valguvaba polüsahhariid (CDP-6), mis koosnes glükoosist (89,2 protsenti) ja mannoosist (1{{58}). },4 protsenti ) ja millest keskmine hr oli hinnanguliselt 6.8 -104. Polüsahhariid CDP{10}} näitas [a 20 D 42 (c 1, H2O). Suhkrute absoluutsed konfiguratsioonid määrati TMS (– )-2-butüülglükosiidide GC abil. CDP-6 metüleeriti (Needs et al. 1993), hüdrolüüsiti, muundati alditoolatsetaatideks ja analüüsiti GC ja GC-MS abil (tabel). See tulemus koos metüülimise analüüsi molaarsuhte andmetega viitas sellele, et CDP-6-l on valdavalt 1,6-seotud Glcp ja selgroog 1,6-, mis on väiksemal määral seotud hargnenud O{{ 24}} mannoosi. Kahe osalise hüdrolüüsi käigus saadud polümeeri (CDP-6-1, CDP-6–2) metüülimise analüüs kinnitas, et CDP-6-l on selgroog, mis koosneb 1,6-seotud glükosüüli jääkidest ja 1,6-seotud mannosüüljääk, mis on mannoosi O-3 juures asendatud harudega, mis koosnevad terminaalsest, 1,6- seotud glükosüüljäägist ja 1,3,{{38} }seotud mannosüüljäägid. Vastavalt molaarsuhetele ja kirjandusele (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996) näitas CDP-6 13C NMR spekter signaale, mis on tingitud a-d-Glcp (C{{45) anomeersetest süsinikest. }} 98,4 ppm), bd-Map (C-1 104,3–104,9 ppm) ja ad-Map (C-1 100,0 ppm). CDP-6-21H NMR spekter D2O-s näitas prootonisignaale, mis vastavad ad-Glcp-le (H-1 4,94–4,95 ppm juures) ja a-d-Map-ile (H-1) 4,96–5,00 ppm). CDP-6-2 13C NMR spekter D2O-s näitas prootonisignaale, mis vastavad aD-Glcp-le (C-1 98,6 ppm juures) ja ad-Map-ile (C-1 98,4 ppm juures). Mannoglükaanidel on väidetavalt 1,4-seotud glükopüranaani ja 1,{92}}seotud mannopüranaani selgroog (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6-l on a-1,6-lingitud Glcp ja b-1,6-lingitud kaardi selgroo tõttu mõned erinevad struktuuriomadused ning see on asendatud mannoglükaani harudega (joon.). Kasutamise uurimiseksCistanche deserticolarahvameditsiinis hinnati CDP{0}} mõju T- ja B-rakkude süsteemidele. Leiti, et see stimuleerib kergelt mitogeeni poolt indutseeritud T- ja B-lümfotsüütide proliferatsiooni.

Eksperimentaalne

1. Üldised protseduurid

Optilist pöörlemist mõõdeti automaatse polarimeetriga W22-1S. IR-spektrid määrati Perkin-Elmer 599B spektromeetriga. GC analüüs viidi läbi seadmega Agilent HP6890N, mis oli varustatud FID-detektoriga. GC-MS viidi läbi Finnigan Trace GC-MS instrumendiga. CDP-6 homogeensust ja Mr.

Agilent 1100 seeria aparaat Shodex KS-805 kolonniga.1H NMR ja 13C NMR spektrid registreeriti INOVA-500 instrumendiga. Valgusisaldust analüüsiti Bradfordi meetodil (Andre et al. 1975). Monosahhariide analüüsiti nende alditoolatsetaadi suhtes pärast nende hüdrolüüsimist (2 M TFA, 2 tundi, 110 °C), redutseerimist ja atseteerimist. Hüdrolüsaate analüüsiti TLC-ga silikageeliplaadil, mis sisaldas 5% naatriumdivesinikfosfaati BuOH-EtOAc-isopropüülalkoholi-HOAC--H2Opüridiinis (3,5:10:6:3,5:3:3) ja suhkrud tuvastati ortsinooliga pihustades. -H2SO4. Saadud alditoolatsetaadid analüüsiti GLC abil, kasutades HP{25}} kapillaarkolonni (30 m 0,32 mm). CDP-6 metüüliti Ciucanu meetodil, millele järgnes hüdrolüüs ja analüüsiti GC-MS abil osaliselt metüülitud alditoolatsetaatidena. Pärast osalist hüdrolüüsi saadused dialüüsiti ja eraldati, saades kaks polümeeri, CDP-6-1 ja CDP-6–2.

2. Taimne materjal

Taim koguti 2001. aasta augustis Hiinast Sise-Mongoolia provintsist ja selle tuvastas Pekingi ülikooli terviseteaduste keskuse farmaatsiateaduste kooli loodusmeditsiini osakond Hu-Biao Chen. Selle taime vautšeri näidis [E-1-(9)] deponeeriti Pekingi ülikooli farmaatsiateaduste kooli. 3. Polüsahhariidi CDP ekstraheerimine, eraldamine ja puhastamine-6Cistanche deserticolaYC Ma (1500 g) ekstraheeriti püstjahuti all 95% etanooliga (6 L). Kuivatatud etanoolis lahustumatut jääki leotatakse kolm korda külma destilleeritud veega 12 tunni jooksul. Külma vee ekstrakt filtriti ja filtraati tsentrifuugiti. Pärast nelja mahu EtOH-ga sadestamist (segamine ja 24 tundi 4 °C juures seismine) saadi sade (35,5 g). Sademe valk eemaldati Savage'i meetodil. Pärast destilleeritud vees lahustamist jääk (25,5 g) dialüüsiti ja lüofiliseeriti (saagis: 10,6 g). Toorpolüsahhariid (8 g) lahustati destilleeritud vees (100 ml, 8 massiprotsenti) ja eraldati DEAE kolonni abil (70 5 cm, gradient 0–2 M NaCl, 1,5 l kohta). Saadi veega elueeritud fraktsioon (600 mg). Proov (250 mg) puhastati kolonngeel-permeatsioonkromatograafiaga Sephadex G- 150 kolonnidel (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml fraktsiooni kohta). CDP-6 fraktsioonid (1500–1600 ml) ühendati, dialüüsiti ja külmkuivatati. Pärast soola eemaldamist Sephadex G-25-ga (60 1 cm). Saadi CDP-6 (110 mg), mis määrati HPSGC abil ühe piigina.

Tunnustus:Autor tänab dr Baomei Shaot ja prof Xiaoming Gaot Pekingi ülikooli terviseteaduste keskuse meditsiiniteaduste koolist CDP immunomoduleeriva aktiivsuse mõõtmise eest-6.