Uued fenüületanoidglükosiidid firmalt Cistanche Tubulosa (SCHRENK) HOOK. FI

HIROMI KOBAYASHI. HIROKO OGUCHI, NOBUO TAKIZAWA, TOSHIO MIYASE, AKIRA UENO, KHAN USMANGHANI ja MANSOOR AHMAD

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Jaapan, Shizuoka farmaatsiakolledž,2-2-1 Oshika, Shizuoka- shi 422, Jaapan ja Farmakognoosia osakond, Farmaatsiateaduskond, Karachi Ülikool, c Karachi-32, Pakistan

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Abstraktne

Neli uutfenüületanoidglükosiidid, on tubulosiidid A (II), B (VI), C (VII) ja D (VIII) eraldatudCistanchetubulosa(SCHRENK) KONKS. f. (Orobanchaceae), koos nelja teadaolevagafenüületanoidglükosiidid, ehhinakosiid (I), akteosiid (III), akteosiidi isomeer (IV) ja 2'-atsetüüllakteosiid (V). II, VI, VII ja VIII struktuurid määrati kindlaks keemiliste tõendite ja spektriandmete põhjal. Ühendites VII ja VIII on terminaalse suhkruna triatsetüülramnosüülfragment.

Cistanchefenüületanoid glükosiidKasu tervisele on palju

Märksõnad:Cistanchetubulosa; Orobanchaceae; parasiitaim;fenüületanoid glükosiid; tubulosiid A; tubulosiid B; tubulosiid C; tubulosiid D

Meie uuringute sarjas Cistanche spp. keemiliste koostisosade kohta. (Orobanchaceae),fenüületanoidglükosiidid1-3) ja iridoid4) Cistanche salsa (CA MEY.) G. BECK kohta on teatatud. Käesolevas artiklis käsitletakse Cistanche tubulosa (SCHRENK) HOOKi fenüületanoidglükosiide. f. kogutud Pakistanis. Cistanche tubulosa (SCHRENK) KONKS. f.5) on parasiitaim, mis kasvab Salvadora ja Calotropis spp. juurtel ning esineb laialdaselt Põhja-Aafrikas, Araabias, Lääne-Aasias kuni Pakistani ja Indiani. Tervet taime kasutatakse Pakistanis meditsiiniliselt kõhulahtisuse ja haavandite raviks.6)

Nüüd soovime teatada nelja uue isoleerimisestfenüületanoidglükosiidid, mida nimetatakse tubulosiidideks A (II), B (VI), C (VII) ja D (VIII), samuti neli teadaolevat fenüületanoidglükosiidi, ehhinakosiid (I), akteosiid (III), akteosiidi isomeer (IV) ja 2' -atsetüüllakteosiid (V). Nende ühendite struktuurid määrati keemiliste tõendite ja spektroskoopiliste uuringute põhjal.

FenüületanoidGlükosiididsissecistanchevõib olla põletikuvastane

Kogu taime etanooliekstrakt suspendeeriti vees. Seda suspensiooni ekstraheeriti etüülatsetaadiga ja seejärel veega küllastatud n-butanooliga. N-butanooli lahustuv fraktsioon kromatografeeriti polüamiid- ja silikageelikolonnidel ning allutati järjestikku kõrgsurvevedelikkromatograafiale (HPLC), et saada kaheksa fraktsiooni.fenüületanoidglükosiidid(I-VIII).

Ühendid I, III, IV ja V isoleeriti amorfsete pulbritena, mille spektrid olid sarnased ehhinakosiidi, 1) akteosiidi, 1) akteosiidi isomeeri 7) ja 2'-atsetüüllakteosiidi 2) spektriga ning identifitseeriti otsesel võrdlusel autentse ainega. proovid [õhekihikromatograafia (TLC), infrapuna (IR), prootoni tuumamagnetresonantsi (1H-NMR) ja süsiniku -13 tuumamagnetresonantsi (13C-NMR) spektrid].

Tubulosiid A (II) eraldati amorfse pulbrina, [ƒ¿]D{{0}},7•‹ (MeOH), C37H48O21.3/2 H2O. IR-spekter viitas hüdroksüülrühmade (3440 cm-1), konjugeeritud estri (1705 cm-1), kaksiksideme (1634 cm-1) ja aromaatsete tsüklite (1608, 1522 cm-1) ja ultraviolett (UV) spekter näitas neeldumismaksimumeid lainepikkustel 220, 250 sh, 292 sh ja 334 nm. II 1H-NMR spekter näitas ramnoosi metüülrühma signaale [6 1,07 (3H, d, J= 6 Hz)], atsetoksüüülrühma metüülrühma [{{27} },98 (3H, s)], bensüülmetüleenprootonid [6 2,70 (2H, t, J= 7 Hz)], kaks glükoosianomeerset prootonit [6 4,32, 4,54 (igaüks 1H, d, J= 8 Hz)], ramnoosanomeerne prooton [6 5,11 (1H, br s)], kaks trans-olefiinset prootonit [6 6,25 , 7,64 (igaüks 1 H, d, J= 16 Hz)] ja aromaatsed prootonid [6 6.5 7 ,2 (6H)]. Atsetüülimisel andis II alamatsetaadi (IIa), mis oli identne ehhinakosiidi (I) dodekaatsetaadiga. Ühendi II 13C-NMR spekter oli peaaegu identne ühendi I omaga, välja arvatud signaalid, mis tulenevad otseselt aglükooniga seotud glükoosist ja atsetoksüülrühmast [6 20,9 (CH3), 171,5 (C {{62). }})], mis viitab sellele, et atsetoksüülrühm on seotud glükoosiosaga. II 13C-NMR spektris nihkub atsüülimine81 [-2,3 (C-1), -0,9 (C-2) ja -1 0,0 (C-3)] täheldati siseglükoosi C-1, C-2 ja C-3 juures, kui seda üksikasjalikult võrreldi I spektriga, mis näitab, et atsetoksüülrühm on seotud II glükoosifragmendi C-2 hüdroksüülrühmaga. Ühendi II metanolüüsil atsetüülkloriidiga metanoolis tuvastati TLC ja HPLC abil metüülkofeaat ja 3,{80}}dihüdroksüfenetüülalkohol. Ühendi II happeline hüdrolüüs 10% väävelhappega andis glükoosi ja ramnoosi vahekorras 2:1.

Ülalnimetatud tõendite põhjal määrati tubulosiid A struktuuriks 2-(3,4-dihüdroksüfenüül)etüül0-aL-ramnopüranosüül-(1•¨3)- [ƒÀ-D-glükopüranosüül-(1-6)]-(4-O-kofeoüül1)-2-O-atsetüül-fl-D-glükopüranosiid (II).

Tubulosiid B (VI) eraldati amorfse pulbrina [a]D,{0}}.0•‹ (MeOH), C31H38016, mille 1H-NMR spekter näitas alifaatse atsetoksüülrühma olemasolu. [6 1,98 (3H, s)]. Ühendi VI 13C-NMR spekter oli väga sarnane akteosiidi isomeeri (IV) omaga, kuid erines glükoosiosa ja atsetoksüülrühma [6 20,9 (CH3), 171,6 () tõttu signaalides veidi. C =0)]. Atsetoksüülrühma asukoht ühendi VI glükoosifragmendis määrati selle13C-NMR spektri põhjal üksikasjaliku võrdlusega ühendi IV omaga.

Glükoosiosa C{{0}}, C-2 ja C-3 signaalid näitasid atsüülimise nihkeid (-2.5 (C-1). ), –0 ,6 (C-2) ​​ja -1.4 (C-3)], nagu II puhul, mis näitab, et atsetoksürühm on seotud C{ {12}} VI glükoosiosa hüdroksüülrühm. Atsetüülimisel andis VI oktatsetaadi (VIa), mis oli identne ühendi IV nonatsetaadiga. VI metanolüüsimisel atsetüülkloriidiga metanoolis, metüülkofeaadis ja 3,{{ 14}}dihüdroksüfenetüülalkohol tuvastati TLC ja HPLC abil. VI happeline hüdrolüüs 10% väävelhappega andis glükoosi ja ramnoosi vahekorras 1:1. Nende tulemuste põhjal jõudsime järeldusele, et tubulosiidi B struktuur on {{18} }(3,4-dihüdroksüfenüül)etüül-0-aL-ramnopüranosüül-(1-3)-(6-0-koffeo1)- 2-0-atsetüül143-D - glükopüranosiid (VI).

Toimeaine,Cistancheonvähivastanemõju

Tubulosiid C (VII) eraldati amorfse pulbrina [a],-104.8•‹ (MeOH), C43H54024 H20, mille 1H-NMR spekter näitas nelja alifaatse atsetoksüülrühma [{{7} },80, 1,92, 1,95 ja 2,08 (igaüks 3H, s)]. VII C-NMR spekter oli peaaegu identne tubulosiidi A (II) omaga, millel on alifaatne atsetoksüülrühm siseglükoosis, välja arvatud ramnoosiosast tulenevad signaalid. Lisaks VII 13C NMR spektris , atsüülimise nihkeid') täheldati ramnoosiosa C-2, C-3 ja C-4 põhjustatud signaalides, kui neid üksikasjalikult võrrelda II kohta saadud andmetega. Järelikult asukohad neljast atsetoksüülrühmast määrati rühma VII sisemise glükoosi C-2 ja ramnoosiosa C-2, C-3, C-4. Atsetüülimisel VII andis oktaatsetaadi, mis oli identne tubulosiidiga A atsetaadi (IIa) keskkonnas. VII metanolüüsil atsetüülkloriidiga metanoolis tuvastati TLC ja HPLC abil metüülkofeaat ja 3, 4-dihüdroksüfenetüülalkohol. VII happeline hüdrolüüs 10% väävelhappega andis glükoosi ja ramnoosi vahekorras 2:1.

Ülaltoodud tulemuste põhjal määrati tubulosiid C struktuuriks 2-(3,4- dihüdroksüfenüül)etüül-2,3,4-tri-O-atsetüül-aL-tamnopüranosüül- (1 - pluss 3)-[/9-D-glükopüranosüül-(1 - pluss 6)]-(4-0-caffeoy1)-2-0-atsetüül-fl-D - glükopüranosiid (VII).

Tubulosiid D (VIII) eraldati amorfse pulbrina, [oc], -91,4 kraadi (MeOH), C43H54023. H2O, mille 1H-NMR spekter näitas nelja alifaatse atsetoksüülrühma olemasolu [6 1,81, 1,93, 1,96 ja 2,09 (igaüks 3H, s)]. Atsetüülimisel saadi VIII heptaatsetaat (VIIa), mille 1H-NMR spekter näitas kaheksat alifaatset [6 1,87, 1,94, 1,96, 1,99, 2,10 (iga 3H, s) ja 2,02 (9H, s)] ja kolm aromaatset [6 2,27, 2,30 ja 2,32 (3H, s)] atsetoksüülmetüülsignaali. VIII 13C-NMR spekter oli peaaegu identne tubulosiidi C (VII) omaga, välja arvatud p-kumaarhappe fragmendist tulenevad signaalid. Ühendi VIII metanolüüsil atsetüülkloriidiga metanoolis tuvastati TLC ja HPLC abil metüül-p-kumaraat ja 3,{44}}dihüdroksüfenetüülalkohol. Ühendi VIII happeline hüdrolüüs 10% väävelhappega andis glükoosi ja ramnoosi vahekorras 2:1.

Nende tulemuste põhjal määrati tubulosiid D struktuuriks 2-(3,4- dihüdroksüfenüül)etüül-2,3,4-tri-O-atsetüül-a-Lramnopüranosüül- (1•¨3)-[ƒÀ-D-glükopüranoosi-](1→6)} (4-0-p-kumaar1)-2-0-atsetüül-fl-D-glükopüranosiid (VIII).

Paljufenüületanoidglükosiididnagu forsütosiid A, 'kraad) leukosceptosiid A, 7 isomar tynosidell) ja nii edasi, millel on teatatud terminaalse suhkruna ramnoosiosast. Nendel juhtudel ei ole ramnoosi fragment atsetüülitud. Tubulosiidid C (VII) ja D (VIII) sisaldavad atsetüülitud ramnoosi fragmenti ja on esimesed looduslikult esinevad ühendid, mis sisaldavad triatsetüülramnoosi fragmenti.

Toimeaine,Cistancheonneuroprotektiivnemõju

Eksperimentaalne

Sulamistemperatuurid määrati Mitamura mikrosulamistemperatuuri aparaadiga ja need on korrigeerimata. Optilisi pöördeid mõõdeti JASCO DIP-140 digitaalse polarimeetriga. IR-spektrid registreeriti Hitachi 270-30 infrapunaspektrofotomeetriga ja UV-spektrid Hitachi 200-20 spektromeetriga. 'H-NMR ja "CN MR spektrid registreeriti JEOL FX-90Q-masinaga (vastavalt 89,55 ja 22,5 MHz). Keemilised nihked on antud skaalal 6 (ppm), kusjuures sisemine tetrametüülsilaan (TMS) standard (s, singlett; d, dublett; t, triplett; br, lai). Gaas-vedelikkromatograafia (GC) viidi läbi Shimadzu GC-4CM aparaadil leekionisatsioonidetektoriga. HPLC viidi läbi Hitachi 655A-11 masin. Kolonnkromatograafiaks kasutati silikageeli (Wako gel C-300, Wako Pure Chemical. TLC jaoks kasutati Kieselgel 60 F254 (Merck) eelkaetud plaate ja tuvastamine viidi läbi pihustamise teel 10 protsenti H2SO4, millele järgneb kuumutamine.

Isolatsioon

Värsked terved C. tubulosa taimed (22 kg), mis koguti 1984. aasta detsembris Pakistanis Karachis, ekstraheeriti EtOH-ga. Etanoolne ekstrakt suspendeeriti vees ja ekstraheeriti EtOAc-ga ja seejärel H20-ga küllastatud n-BuOH-ga. N-BuOH ekstrakt (99,1 g) absorbeeriti Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) kolonnis ja vaiku elueeriti pärast H20 pesemist Me0H-ga. . Me0H eluaat (15,4 g) kromatografeeriti polüamiid-C-200 (Wako Pure Chemical) kolonnis, kasutades H20 ja seejärel Me0H. Me{{50}}H-ga elueeritud fraktsioon kontsentreeriti, saades jäägi (fenoolsed toorglükosiidid) (8,0 g). Pärast jäägi korduvat kromatograafiat silikageelil CHC13-Me0H-H20-ga (70:30:5) ja HPLC-d H2O-CH3CN või H2O-MeOH lahustisüsteemiga eraldati kaheksa glükosiidi (I---VIII). I, 230 mg; II, 200 mg; III, 240 mg; IV, 60 mg; V, 210 mg; VI, 100 mg; VII, 60 mg; VIII, 65 mg. HPLC tingimused: kolonn, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); lahusti, I, II (17 protsenti CH3CN), III, IV (20 protsenti CH3CN), V (22 protsenti CH3CN), VI (25 protsenti CH3CN), VII (53 protsenti Me0H), VIII (55 protsenti Me0H); detektor (UV), 220 nm; voolukiirus, 6,9 ml/min.

ehhinakosiid (I)

Amorfne pulber. IR 0,;,Eas,r, cm-1: 3400, 1690, 1625, 1600, 1518. 11-I-NMR (metanool-d4) 6: 1,09 (3H, d) , J=6 Hz, ramnoosi CH3), 2,79 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,29, 4,37 (igaüks 1 H, d, J{{ 28}} Hz, glükoosi H-1), 5,16 (1H, d, J=1 Hz, ramnoosi H-1), 6,26 (1H, d, J{{38} } Hz, Ar-CH=CH-), 6.4-7,1 (6H, aromaatne H), 7,59 (1H, d, J= Hz, Ar-CH{{ 51}}CH-). 13C-NMR: tabel I.

Tubulosiid A (H)

Amorfne pulber, [a]{{0}},7 (c=1.08, Me0H). Anal. arvut. C371-14021 3}/2H20 jaoks: C, 51,93; H, 6,01. leitud: C, 51,80; H, 5,81. IR vrtr, cm': 3440, 1732, 1705, 1634, 1608, 1522. UV An" nm (loge): 220 (4,14), 250 sh (3,85), 292 sh (3,95), 334 (4,3). 'H-NMR (metanool-d4): vt teksti 13C-NMR: tabel I.

Akteosiid (III)

Amorfne pulber. IR v cm-1: 3420, 1696, 1634, 1606, 1520. 'H-NMR (metanool-d4) 5: 1,10 (3H, d, J=6 Hz, ramnoosi CH3), 2,78 ( 2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,36 (1 H, d, glükoosi J= 8 Hz, H-1), 5,17 (1 H, d, J=1 Hz, ramnoosi H-1), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{{ 40}},1 (6H, aromaatne H), 7,58 (1 H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: tabel I.

Akteosiidi isomeer (IV)

Amorfne pulber. IR v cm{0}}: 3280, 1686, 1624, 1602, 1512. 11-I-NMR (metanool-d4) 6: 1,26 (3H, d, J=6 Hz, CH3 of ramnoos), 2,77 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-Cl.2-I.2 4,33 (3H, d, J=8 Hz, H{ {26}} glükoosist), 5,18 (1H, br s, ramnoosi H-1), 6,28 (1H, d, 1=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{39}},1 (6H, aromaatne H), 7,54 (1 H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-).13C-NMR: tabel I.

2'-atsetüüllakteosiid (V)

Amorfne pulber. IR vT cm{0}}: 3450, 1735, 1705, 1640, 1610, 1535. 'H-NMR (metanool-d4) 6: 1,07 (3H, d, 1= 6 Hz, ramnoosi CH3), 1. (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,50 (1H, d, J=8 Hz, H{30) }} glükoosist), 5,16 (1H, br s, ramnoosi H-1), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6 .5-7,2 (6H, aromaatne H), 7,59 (1 H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: tabel I.

Tubulosiid B (VI)

Amorfne pulber, [{{0}}.0 kraadi (c= 1.05, Me0H). Anal. arvut. Cm H38016 jaoks: C, 55,85; H, 5,75. leitud: C, 55,91; H, 6.{13}}. IR v:,111 cm{15}}: 3420, 1734, 1696, 1634, 1608, 1522. UV 4ear nm (log e): 220 (4,32), 246 sh (4,09), 292 sh (4,21), 34 (4,31). 'H-NMR (metanool-d4) 6: 1,24 (3H, d, J=6 Hz, ramnoosi CH3), 1,98 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,48 (1H, d, glükoosi J=8 Hz, H-1), 6,32 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH - CH-), 6.{67}},2 (6H, aromaatne H), 7,61 (1 H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: tabel I.

Tubulosiid C (VII)

Amorfne pulber, [a] - iO4.8© (c=1.86, Me0H). Anal. arvut. C43H54024' H20 jaoks: C, 53,08; H, 5,80. leitud: C, 53,28; H, 5,68. IR v cm': 3440, 1748, 1634, 1608, 1522. UV 2" nm (log c): 220 sh (4,06), 250 sh (3,7), 292 sh (3,88), 333 (4,04). 'H-NMR (metanool-d4) 6: 1,02 (3H, d, J=6 Hz, ramnoosi CH3), 1,80, 1,92, 1,95, 2,08 (igaüks 3H, s, OAc), 2,70 (2H, t, J{ {57}} Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,56 (igaüks 1H, d, J=8 Hz, glükoosi H-1), 5,02 (1H, br s, ramnoosi H-1), 6,30 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{79}},2 (6H, aromaatne H 7,66 (1 H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-).13C-NMR: tabel I.

Tubulosiid D (VIII)

Amorfne pulber, [a]P{{0}},4 kraadi (c= 1.85, Me0H). Anal. arvut. C43H54023' H20 jaoks: C, 54.{9}}; H, 5,90. leitud: C, 54,10; H, 5,75. IR v:,111 cm{17}}: 3440, 1750, 1634, 1608, 1518. UV 2,',1,2" nm (loga): 228 (4,16), 292 sh (4,21), 302 sh (4,26), 318 (4,35). 11-I-NMR (metanool-d4) 6:1.{44}} (3H, d, J=6 Hz, ramnoosi CH3), 1,81 1,93, 1,96, 2,09 (igaüks 3H, s, OAc), 2,70 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,53 (igaüks 1 H, d, J{ {68}} Hz, glükoosi H-1), 5,03 (1H, br s, ramnoosi H-1), 6,38 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6.{82}},75 (3H, aromaatne H), 6,84 (2H, d, J= 9 Hz, H-3, H{{90 p-kumaarhappe }}), 7,54 (2H, d, J=9 Hz, H-2, p-kumaarhappe H-6), 7,74 (1H, d, J =16 Hz, Ar-CH =CH-).13C-NMR: tabel I.

II ja VII atsetüülimine

Ühendi II või VII (3{10}} mg) töötlemine Ac20 (1 ml) ja püridiiniga (1 ml) toatemperatuuril üleöö, millele järgnes tavaline töötlemine, andis tooratsetaadi, mis puhastati kromatograafiaga silikageelil. benseen-atsetooniga (5:1), et saada alamatsetaat (IIa) (25 mg) ühendist II või oktaatsetaat (22 mg) ühendist VII värvitute nõeltena Me0H-st, mp 130-131 C. IR v cm ': 1775, 1660, 1523, 1450. 'H-NMR (CDC13) 6: 1,05 (3H, d, J= 6 Hz, ramnoosi CH3), 1,89, 1,96, 1,97, igaüks 2,11 (3H2). s, OAc), 2,03 (9H, s, OAc x 3), 2,29 (3H, s, Ar-OAc), 2,31 (9H, s, Ar-OAc x 3), 2,88 (2H, t, J{{52 }} Hz, Ar-CH2-), 6,35 (1 H, d, J= 16 Hz, Ar-CH=CH-), 7.0-7,4 ( 6H, aromaatne H), 7,66 (1 H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). Otseses võrdluses (TLC, segatud mp, IR ja 1H-NMR) leiti, et need produktid on identsed ehhinakosiidi (I) dodekaatsetaadiga.

VI atsetüülimine

Ühend VI (40 mg) atsetüüliti samal viisil, nagu on kirjeldatud II puhul ja reaktsioonisaadus puhastati kromatograafiaga silikageelil benseen-atsetooniga (9:1), et saada oktaatsetaat (VIa) (30 mg) amorfse ainena. pulber. IR v cm': 1742, 1630, 1498. 'H-NMR (CDC13) 6: 1,14 (3H, d, J=6 Hz, ramnoosi CH3), 1,95, 2,03, 2,05, 2,09 (3H, igaüks 21. , s, OAc), 2,27, 2,31 (igaüks 6H, s, Ar-OAc x 2), 2,87 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 6,42 (1 H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 69-7,5 (6H, aromaatne H), 7,64 (1 H, d, J= 16 Hz, Ar CH=CH-). Otseses võrdluses (TLC, IR ja 11-1- NMR) leiti, et VIa on identne akteosiidi isomeeri (IV) nonatsetaadiga.

VIII atsetüülimine

Ühend VIII (35 mg) atsetüüliti samal viisil, nagu on kirjeldatud II puhul, saades heptaatsetaadi (VIIIa) (30 mg) amorfse pulbrina. IR v cm': 1760, 1638, 1604, 1510. 'H-NMR (CDC13) 6: 1,03 (3H; d, J= 6 Hz, ramnoosi CH3), 1,87, 1,94, 1,96, 2,10 (2,1. igaüks 3H, s, OAc), 2,02 (9H, s, OAc x 3), 2,27, 2,30, 2,32 (igaüks 3H, s, Ar-OAc), 2,88 (2H, t, J=7 Hz, Ar -CH2-), 6,36 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 7.{52}},2(3H, aromaatne H) , 7,25 (2H, d, J=9 Hz, p-kumaarhappe H-3, H-5), 7,57 (2H, d, J=9 Hz, H -2, p-kumaarhappe H-6), 7,72 (1 H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-).

II, VI, VII ja VIII metanolüüs

Ühendit II, VI, VII või VIII (umbes 1 mg) keedeti püstjahutiga 5% metanoolilahuses CH3COCl (2 ml) 3 0 min ja seejärel aurustati reagendid välja. TLC abil demonstreeriti metüülkofeaadi ja 3,4- dihüdroksüfenetüülalkoholi II, VI ja VII jäägis ning metüül-p-kumaraadi ja 3,4-dihüdroksüfenetüülalkoholi esinemist ühendi VIII jäägis. [CHC13-MeOH (20: 1)] ja HPLC [kolonn, TSK GEL LS-410AK (4 x 300 mm); lahusti, H20—Me0H (4:6); detektor (UV), 250 nm; voolukiirus, 1,0 ml/min]. Metüülkofeaat [R•¬ 0,20, tR (min) 10,8], metüül-p-kumaraat [R•¬ 0,40, tR (min) 15,6], 34-dihüdroksüfenetüülalkohol [R•¬ 0,06, tR (min) ) 2.8].

II, VI, VII ja VIII happehüdrolüüs

Glükosiidi (umbes 2 mg) lahust 1 0 protsendilises H2SO4-s (1 ml) kuumutati keevas veevannis 30 minutit. Lahus lasti läbi Amberlite IR -45 kolonni ja eluaat kontsentreeriti, et saada jääk, mida redutseeriti naatriumboorhüdriidiga (ca. 3 mg) 1 tund. Reaktsioonisegu lasti läbi Amberlite IR-120 kolonni ja kontsentreeriti kuivaks. Boorhape eemaldati destilleerimisega MeOH-ga ja jääk atsetüüliti Ac2O (1 tilk) ja püridiiniga (1 tilk) temperatuuril 100 °C 1 tund. Reaktiivid aurustati ära. Glütsitoolatsetaati ja ramnitoolatsetaati tuvastati GC abil vahekorras 2:1 ühendist II, VII ja VIII ning 1:1 suhtes VI. tR (min): 2,0 (ramnitoolatsetaat), 5,5 (glütsitoolatsetaat). GC tingimused: kolonn, 1,5 protsenti OV-17 (3 mm x 1,5 m); kolonni temp., 180•Ž; kandegaas, N2 (30 ml/min).

Tunnustus

Oleme tänulikud Karachi ülikooli botaanikaosakonna prof dr SI Alile taime tuvastamise eest.

Viited ja märkmed

1) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3009 (1984).

2) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3880 (1984).

3) a) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 33, 1452 (1985); b) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Yakugaku Zasshi, 106, 562 (1986); c) Idem, ibid., 106, 721 (1986).

4) a) H. Kobayashi ja J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 1729 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985).

5) E. Nasir ja SI Ali, "Flora of West Pakistan", kd. 98, Shamin Printing Press, Karachi, 1976, lk. 4.

6) SR Baquar ja M. Tasnif, "Medicinal Plants of Southern West Pakistan", Vol. 3, Pakistani teadus- ja tööstusuuringute nõukogu bülletään/monograafia, Karachi, 1967, lk. 56.

7) T. Miyase, A. Koizumi, A. Ueno, T. Noro, M. Kuroyanagi, S. Fukushima, Y. Akiyama ja T. Takemoto, Chem. Pharm. Bull., 30, 2732 (1982).

8) K. Yoshimoto, Y. Itatani ja Y. Tsuda, Chem. Pharm. Bull., 28, 2065 (1980).

9) I. Kitagawa, HK Wang, M. Saito, A. Takagi ja M. Yoshikawa, Chem. Pharm. Bull., 31, 698 (1983).

10) K. Endo, K. Takahashi, T. Abe ja H. Hikino, Heterocycles, 16, 1311 (1981). 11) I. Calis, MF Lahloub, E. Rogenmoser ja O. Sticher, Phytochemistry, 23, 2313 (1984).