Cistanche Tubulosa pikaealisuse edendamise ja kognitiivse parandamisega seotud molekulaarsed teed Drosophilas

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Wei-Yong Lin et al

Abstraktne:

Taust:Vananemisprotsesse, sealhulgas füüsilist düsfunktsiooni ja vanusega seotud mäluhäireid (AMI), peetakse korrelatsiooniks kumulatiivsete oksüdatiivsete kahjustuste ja insuliini/IGF-1 signaaliülekande radadega. Eesmärk: Käesoleva uuringu eesmärk oli selgitada in vivo mõju vananemise edasilükkamisele ja AMI-le ning selle aluseks olevatele molekulaarsetele mehhanismideleCistanche tubulosa(CT), ravimtaim, mida kasutatakse traditsioonilises hiina meditsiinis seksuaalfunktsiooni parandamiseks ja neerufunktsiooni häirete raviks

Meetodid:CT-ga töödeldud ja töötlemata kärbsed(Cistanche Tubulosa), täheldati eluiga, resistentsust oksüdatiivse stressi suhtes H2O2 või parakvaadiga, nälgimistesti, kognitiivset käitumist T-labürindiga ja sihtgeenide transkriptsioonitasemeid kvantitatiivse RT-PCR abil.

Tulemused:CT manustamine(Cistanche Tubulosa)pikendas kärbeste keskmist ja maksimaalset eluiga ning suurendas vastupidavust oksüdatiivsele stressile. CT(Cistanche Tubulosa)täiendamine suurendas ka noorte kärbeste mälu teket ja pärssis AMI vananemist. On tuvastatud, et mitmed geenid ja signalisatsiooniteed, sealhulgas rapamütsiini (mTOR) ja Notchi võrkude mehaaniline sihtmärk, põhjustavad neid farmakoloogilisi toimeid ja muutusi glutamaadi retseptorite geeniekspressioonis.

Järeldus:Meie tulemused näitavad, et CT(Cistanche Tubulosa)toidulisandid võivad aidata aeglustada vananemisfenotüüpe ja leevendada kärbeste kognitiiv-käitumuslikku langust, näidates potentsiaalset rakendatavust inimeste tervise parandamisel ja vastuvõtlikkuse vähendamisel vanusega seotud häirete suhtes.

Märksõnad:vananemine,Cistanche tubulosa,Kognitiivne käitumine, Herb

Kliki Cistanche varretoodetele

Sissejuhatus

Kuna eakate arv kogu maailmas kasvab, on tervena vananemise ja pikaealisuse soodustamine teaduse, ühiskonna ja arstiabi valdkonna jaoks üha olulisem rahvatervise probleem. Arvatakse, et vananemisprotsessi juhivad keerulised mehhanismid, mida juhivad laialdane geneetiliste ja keskkonnategurite koosmõju. Järk-järguliste kahjustuste tõttu raku- ja koetasandil on vanus krooniliste haiguste, nagu vähk, samuti südame-veresoonkonna ja neurodegeneratiivsete haiguste riskitegur ja tugevas korrelatsioonis vastuvõtlikkusega (Kenyon, 2005). Vananemine vähendab ka sünaptilist aktiivsust, uute valkude sünteesi ja kognitiivset funktsiooni. Need funktsionaalsed muutused aitavad kaasa vanusega seotud mälukahjustusele (AMI) (Burke ja Barnes, 2010; Schimanski ja Barnes, 2010). Seetõttu võib vanusega seotud patoloogia ja kognitiivse vananemise edasilükkamiseks mõeldud ravimite väljatöötamine olla kasulik inimeste elukvaliteedile. Selles uuringus kasutasime ravimi efektiivsuse hindamiseks ja vananemise ja AMI leevendamise aluseks olevate molekulaarsete mehhanismide uurimiseks Drosophila melanogasterit, mis on oma lühikese eluea tõttu ideaalne organism in vivo vananemisuuringuteks.

Herbacistanche, tuntud ka hiina nime Rou CongRong all, on parasiitaim, mida levitatakse peamiselt Loode-Hiina kõrbetes. Kaks Cistanche liiki, Cistanche deserticolaY. C. Ma jaCistanchetubulosa(Schrenk) Wight on lisatud Hiina farmakopöasse (2005. aasta väljaanne) nende sarnaste keemiliste koostisosade ja farmakoloogilise toime tõttu. Nende varreekstrakti on laialdaselt kasutatud tuhandeid aastaid toonilise vahendina, peamiselt mitmesuguste sümptomite, sealhulgas neerupuudulikkuse, impotentsuse, viljatuse ja katarsise leevendamiseks, nagu on kirjeldatud iidsetes Hiina meditsiiniraamatutes. Sellest on eraldatud arvukalt keemilisi koostisosi, sealhulgas eeterlikke õlisid, fenüületanoidglükosiide (PhG), iridoide, lignaane ja sahhariide.Cistancheliigid ja kaks peamist PhG komponenti, akteosiid ja andehhinakosiid, valitakse tavaliselt Herba cistanche kvaliteedi hindamise markeriteks nende olulise farmakoloogilise toime tõttu (Wang et al., 2012).

Cistanche tubulosa(CT) ekstraktidel on mitmesugused bioloogilised funktsioonid, sealhulgas immuunaktiivsuse moduleerimine, seksuaalfunktsiooni tugevdamine, juuste kasvu soodustamine ja muud antioksüdatsiooni-, hepatokaitse-, osteoporoosivastased ja kasvajavastased omadused (Li et al., 2016; Seok et al., 2015). Wang et al., 2012). Lisaks näitas in vitro uuring, et Herbacistancheekstrakt võib kaitsta dopamiinitaolisi neuroneid H2O2-indutseeritud oksüdatiivse kahjustuse eest ning tõsta märkimisväärselt närvikasvufaktori ja ajust pärineva neurotroofse faktori taset (Lin et al., 2013). Ehhinakosiid hoidis ära dopamiini neuronite surma Parkinsoni tõve MPTP-kahjustusega hiiremudelis (Zhao et al., 2010). Lisaks CT(Cistanche Tubulosa)ekstrakt leevendas kognitiivset düsfunktsiooni, vähendades amüloidi ladestumist ning suurendades atsetüülkoliini ja dopamiini taset Alzheimeri tõve (AD) rotimudelis (Wu et al., 2014). Kuigi Herba terapeutiline toimecistancheon endiselt vajalik, et kinnitada väikese suurusega platseebokontrollita kliiniline uuring CT-ga(Cistanche Tubulosa)glükosiidiekstraktid näitasid, et ravimil on potentsiaali ravida kerge kuni mõõduka AD-ga patsiente ja sellel on suhteliselt kerged kõrvaltoimed, isegi pärast pikaajalist manustamist (Guo et al., 2013). Need andmed viitavad sellele, et Herbas on glükosiidiekstraktidcistancheneil on neuroprotektiivne ja dementsusevastane toime. Vaatamata CT erinevatele eelistele(Cistanche Tubulosa)Selle molekulaarseid mehhanisme ja mõju vananemise edasilükkamisele ja AMI leevendamisele ei ole selgitatud. Selles uuringus CT mõju(Cistanche Tubulosa)eluea olulisel pikenemisel uuriti CT võimaliku kliinilise kasulikkuse kindlakstegemiseks paranenud vastupidavust keskkonnastressile ja allasurutud vanusega seotud kognitiivset düsfunktsiooni(Cistanche Tubulosa)vananemisprotsessi aeglustamisel.

Materjalid ja meetod

Taimne ravim

Päritolu identifitseerimineCistanche tubulosa(Schrenk) Wight (Orobanchaceae) (CT) kontrolliti Ko Da PharmaceuticalCo. Ltd. (Taoyuan, Taiwan), kus hoitakse vautšeri näidiseid (10 603 205) ja toodetakse CT kontsentreeritud taimseid ravimeid. Lühidalt öeldes ekstraheeriti CT kuivatatud lihav vars 1 tund 12-kordses keedetud vees, millele järgnes filtreerimine. Filtraadid koguti ja allutati ekstraktide saamiseks vaakumis ja alandatud rõhul kontsentreeriti 1 tund. CT ekstraktid segati tärklisega vahekorras 1:1 (mass/mass) ja pihustusgranuleeriti CT pulbri saamiseks.

Kärbsevarude hooldus ja eluea mõõtmine

Selles uuringus kasutatud metsikut tüüpi kärbseliin oli CantonS, mis saadi Bloomington Drosophila Stock Centerist. Kärbseid kasvatati ja hoiti maisijahu standardsöötmes 25 kraadi juures 50–60-protsendilise suhtelise õhuniiskusega 12-h valguse-pimeduse tsükli ajal. Tekkivad täiskasvanud kärbsed koguti 24 tunni jooksul ja eraldati soo järgi. Alates varasest täiskasvanueast täiendati kärbseid CT-ga. CT(Cistanche Tubulosa)pulber lahustati vees ja lisati maisijahu söötmele kontsentratsioonides 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml, mis olid proportsionaalsed inimesele suukaudseks manustamiseks mõeldud efektiivse ööpäevase annusega. Eluea analüüsis kasvatati kakskümmend kuni kolmkümmend kärbest toiduviaalis CT-ga või ilma(Cistanche Tubulosa); iga ravi korral viidi läbi vähemalt 250 kärbest. Toiduviaale vahetati iga 3–4 päeva järel ja sel ajal loendati surnud kärbseid

Stressiresistentsuse testid

Täiskasvanud kärbsed koguti ja seejärel eeltöödeldi kontrolldieediga ilma CT-ta(Cistanche Tubulosa)ja eksperimentaalsed dieedid, millele on lisatud 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT 20 päeva jooksul 25 kraadi juures. Nälgimise analüüsiks hoiti kärbseid ainult märja paberiga viaalides ja hinnati nende vastupidavust nälgimisest põhjustatud oksüdatiivse stressi suhtes. Oksüdatiivse stressi testimiseks viidi kärbsed toiduvabadesse viaalidesse, mis sisaldasid vesinikperoksiidi (H2O2) (Sigma Aldrich) filterpaberit 5-protsendilises glükoosilahuses, et mõõta kärbeste vastupidavust H2O2-indutseeritud hüdroksüülradikaali (OH) suhtes. −) stress. Sarnaselt viidi kärbsed üle viaalidesse, mis sisaldasid 10 mM parakvaadiga (Sigma-Aldrich) küllastunud filterpaberit, mis tekitab superoksiidi anioone (O2-), mis põhjustavad loomadele oksüdatiivseid kahjustusi. Kärbeste suremust hinnati vähemalt kolm korda päevas, kuni kõik olid surnud. Ühe ravi kohta tehti vähemalt 250 kärbest. Nagu öeldakse, pandi 0 ja 16 tunniks parakvaadiga kokku puutunud kärbsed plastviaali ja koputati õrnalt põhja. Viaali ülaosas olevate kärbeste arv loendati pärast 18-sekundilist ronimist.

Viljakuse hindamine

Nii neitsi isased kui ka emased said 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-d(Cistanche Tubulosa)20 päeva toimisid katserühmadena. Kümme eksperimentaalset emast paaritati võrdse arvu neitsi isastega, kes olid 9-päevased ja ei saanud CT-d. Samamoodi paaritati eksperimentaalsed isased samas seisundis neitsi emasloomadega. Paaritatud emased kärbsed viidi seejärel 24 tunniks munemiseks uude viaali ja viaalidesse munetud munad loendati käsitsi. Viljakuse anindeks arvutati kui keskmine päevane munatoodang emase kohta. Iga ravi kohta tehti vähemalt viis viaali ja kärbseid kokku n=50–80.

Haistmisassotsiatiivne õppimine ja mälu

Kärbsed koguti pärast sulgemist ja neid töödeldi 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-ga.(Cistanche Tubulosa)toimisid katserühmadena ja kontrollkärbsed ei olnud saanud CT-d(Cistanche Tubulosa)5 ja 20 päeva 25 kraadi juures. Eelmise uuringu kohaselt viidi läbi üks treeningkatse (Dubnau et al., 2001). Lühidalt, ligikaudu 100 kärbest puutusid kokku kahe lõhnaga, kas 3-oktanooliga (OCT, Sigma-Aldrich) või 4-metüültsükloheksanooliga (MCH, Sigma-Aldrich). Esimese lõhnaga (konditsioneeritud stiimul, CS pluss) kokku puutunud kärbsed ühendati 80 V elektrilöökidega ja seejärel said teise lõhna (CS-) ilma põrutusteta. Õppimisvõime määrati kohe pärast treenimist ning 3- ja {{ võimed 12}}h mälu on sooritanud testide järeltreeningu protseduuri vastavalt 3 ja 24 tundi. Katse läbiviimiseks püüti treenitud kärbsed T-labürindi valikupunkti, kus nad puutusid samaaegselt kokku OCT ja MCH-ga. Arvutati toimivusindeks (PI), mis esindab konditsioneeritud lõhna vältimist. PI null näitas jaotust 50:50 ja aPI 100 näitas 0:100 jaotust CS pluss lõhnast eemal.

Transkriptsioonitasemete mõõtmine reaalajas kvantitatiivse PCR-i (qPCR) abil

Kärbsed koguti pärast sulgemist ja neid töödeldi eelnevalt 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-ga(Cistanche Tubulosa)20 päeva 25 kraadi juures tegutsesid katserühmadena ja kontrollkärbsed ei olnud saanud CT-d. Kogu RNA ekstraheeriti RNeasy Mini komplekti (Qiagen) abil ja cDNA sünteesiti kogu RNA-st pöördtranskriptsioonireaktsiooni teel, kasutades suure võimsusega cDNA pöördtranskriptsiooni (Thermo Fisher Scientific). Sihtgeenide transkriptsioonitasemed kvantifitseeriti reaalajas kvantitatiivse polümeraasi ahelreaktsiooni (Applied Biosystems ViiATM 7 Real-Time PCR System) abil, kasutades FastStart SYBR Green Masteri (Roche) vastavalt tootja juhistele. Suhteline transkriptsioonide arvukus normaliseeriti, kasutades võrdleva tsükli läve meetodit, kasutades sisestandardina majapidamisgeeni RpLP0. Eksperimentaalsete rühmade sihtgeenide suhtelised ekspressioonierinevused normaliseeriti kontrollrühma omadega ja esitati korduva muutusena. Sihtgeenide praimerid on loetletud täiendavas tabelis 1.

Võrgu ehitus ja analüüs

Meie tuvastatud erinevalt ekspresseeritud geenide poolt vahendatud funktsionaalse tõlgenduse ja bioloogiliste protsesside analüüsimiseks kasutati annotatsiooni, visualiseerimise ja integreeritud avastamise andmebaasi (DAVID) Kyoto geenide ja genoomi entsüklopeedia (KEGG) raja ja geeni rikastamise annoteerimiseks ja analüüsimiseks. Nende geenide ontoloogia (Jiao et al., 2012). Diferentsiaalselt ekspresseeritud geenide otsese ja kaudse interaktsiooni analüüsimiseks laaditi geeniloend üles ka interakteeruvate geenide/valkude otsimise otsingutööriista (STRING), et hankida interaktsiooniteavet ja luua valkude interaktsioonivõrgustikke (Franceschini et al., 2013).

Statistiline analüüs

Kõik katsed viidi läbi vähemalt kolme sõltumatu kordusega ja statistilised analüüsid viidi läbi tarkvaraga SigmaStat v3.5 (Systat Software, Inc., IL). Andmed eluea pikendamise ja oksüdatiivse stressi väljakutsete kohta viidi läbi kärbeste koguarvuga, mis jäi vahemikku 250–350, ning erinevate analüüside jaoks hinnati logaritmilist järjestust. Rühmade võrdlusi viljakuse hindamiseks ja kognitiivseks testiks hinnati ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Dunnetti post-hoc test. Teisi eksperimentaalseid võrdlusi tehti Studenti t-testi ja kontrollrühmaga võrreldes. Andmed on esitatud kui keskmine ± SEM ja p-väärtust < 0,05="" peeti="">

Tulemused

CT (Cistanche Tubulosa) lisamine pikendab kärbse eluiga

Et uurida, kas CT(Cistanche Tubulosa)täiendamine võib pikendada kärbeste eluiga, kärbsetele lisati 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-d vahetult pärast 25-kraadist sulgemist kogu katseprotseduuride jooksul. Meie andmed näitasid, et CT(Cistanche Tubulosa)toidulisand võib pikendada nii isaste kui ka emaste kärbeste eluiga. Nagu on näidatud joonisel fig. Nagu on näidatud joonisel 1A, pikendati isaskärbeste eluiga kõigi CT annuste võrra(Cistanche Tubulosa). Rühmade keskmine eluiga, millele oli lisatud 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-d, suurenes oluliselt, vastavalt 18,9%, 10,3% ja 9,9%. CT(Cistanche Tubulosa)samuti suurendas märkimisväärselt kõigi CT rühmade maksimaalset eluiga võrreldes kontrollrühmaga 88 päevalt 102, 98 ja 102 päevale pärast ravi 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-ga(Cistanche Tubulosa), vastavalt. Naistel CT(Cistanche Tubulosa)suurendas oluliselt CT-rühmade keskmist eluiga võrreldes kontrollrühmaga (joonis 1B). Keskmine eluiga pikenes 5,4 mg/ml CT-ga 18,8 protsendini(Cistanche Tubulosa)ning 5,5 protsenti ja 6,7 ​​protsenti vastavalt 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-ga. Samuti täheldasime, et maksimaalne eluiga pikenes märkimisväärselt 91 päevalt (kontroll) 109, 98 ja 102 päevani pärast ravi 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-ga.(Cistanche Tubulosa), vastavalt; maksimaalne eluea pikenemise ulatus oli 19,8 protsenti 5,4 mg/ml CT juures(Cistanche Tubulosa). Meie tulemused näitavad, et CT(Cistanche Tubulosa)toidulisand pikendab oluliselt nii isaste kui ka emaste kärbeste eluiga. Kurkumiini (10 μM) kasutati positiivse kontrollina ja see oli efektiivne eluea pikendamisel, nagu on näidatud täiendaval joonisel 1.

CT lisamine suurendab vastupanuvõimet nälgimisele ja oksüdatiivsele stressile

Eluea pikenemist seostatakse sageli vananemisprotsessi ajal suurenenud resistentsusega oksüdatiivse stressi suhtes. Hindasime, kas CT(Cistanche Tubulosa)toidulisandid suurendavad vastupanuvõimet oksüdatiivsele stressile. Isaseid ja emaseid kärbseid töödeldi eelnevalt erinevate CT annustega(Cistanche Tubulosa)20 päeva jooksul ja hinnati nende ellujäämist pärast nälgimist (joonis 2A). Mõlema soo keskmine ellujäämisaeg ja maksimaalne eluiga võrreldes kontrollrühma omadega näitasid märkimisväärselt pikenemist 5,4 ja 10,8 mg/ml CT rühmas, kuid mitte 21 .6 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)Grupp. Eeltöödeldud kärbeste ellujäämist hinnati ka pärast H2O2 ja parakvaadiga nakatamist, mis toodavad rakkude vananemise ja rakusurma vallandamiseks reaktiivseid hapniku liike (ROS). Leidsime, et CT(Cistanche Tubulosa)kaitsesid nii isas- kui emaskärbseid H2O2 toksilisuse eest ning pikendasid nende keskmist ja maksimaalset eluiga (joonis 2B, p < 0.01 ja 0,001, 5,4 ja 10,8 mg/ml CT juures(Cistanche Tubulosa)vastavalt). Täheldati ka sarnast suundumust, mis näitas suurenenud vastupanuvõimet parakvaadi väljakutsele. Isased kärbsed, keda toideti kõigi CT annustega, ja emased, eriti need, millele on lisatud 5,4 mg/ml CT-d(Cistanche Tubulosa) (Cistanche Tubulosa), säilis kauem kui kontrollrühmad (joonis 3A, p < 0.001).="" seoses="" ronimisvõimega="" manustati="" nii="" isas-="" kui="" ka="" emaskärbestele="" 10,8="" mg/ml="">(Cistanche Tubulosa)ilmnes nõrgestatud parakvaadist põhjustatud lokomotoorsete funktsioonide häire 16 tundi pärast parakvattset (joonis 3B, kõik p < 0,05).="" need="" tulemused="" näitavad,="" et="" ct="" lisamine="" parandab="" resistentsust="" teatud="" oksüdatiivse="" stressi="" suhtes,="" mis="" viitab="" sellele,="" et="">(Cistanche Tubulosa)-indutseeritud eluea pikenemine on seotud suurenenud antioksüdatiivse kaitsega.

CT (Cistanche Tubulosa) mõju paljunemisvõimele

Kuna vananemise teooria näitab, et vananemisprotsess mõjutab paljunemist negatiivselt, uurisime, kas CT(Cistanche Tubulosa)mõjutanud paljunemisvõimet, analüüsides täiskasvanud kärbeste munemisvõimet. Täiskasvanud kärbsed koguti pärast sulgemist, eraldati soo järgi ja neile manustati 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-d(Cistanche Tubulosa)20 päevaks. Neitsi isased või emased kärbsed, kellele manustati CT(Cistanche Tubulosa)paaritati 9-päevaste kärbestega, kellele ei manustatud CT-d(Cistanche Tubulosa). Täheldasime annusest sõltuvat munade arvu suurenemist päevas emase kohta, nimelt 30,3% ja 57,2% haigestunud kärbseid, keda raviti 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-ga.(Cistanche Tubulosa), võrreldes kontrollidega (joonis 4, p < 0.05).="" need="" andmed="" viitavad="" sellele,="" et="">(Cistanche Tubulosa)toidulisand võib soodustada eakate naiste paljunemisvõimet, kuid tõenäoliselt mitte eakatel meestel.

CT (Cistanche Tubulosa) täiendus parandab kognitiivseid võimeid

Me tegime kindlaks, kas CT(Cistanche Tubulosa)toidulisanditel on kasulik mõju õppimisele ja mäluvõimele, viidi läbi üks haistmisassotsiatiivse treeningu tsükkel. Hindame nii õppimisvõimet kui ka 3- ja 24-h mälu, mida on peetud keskmiseks mäluks ja pikaajaliseks mäluks. Esiteks täiendati kärbseid erinevate CT annustega(Cistanche Tubulosa)5 päevaks. Õppimisvõime oli sarnane nii CT- kui kontrollrühmas (joonis 5A). Mis puudutab 3-h mälu, siis 10,8 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)rühmal oli suurem jõudlusindeks (PI) kui kontrollidel (joonis 5B, 51,5 ± 3,2 versus 42,6 ± 2,1), kuigi olulist erinevust ei esinenud. Lisaks 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-d(Cistanche Tubulosa)parandas oluliselt kärbeste {{0}}h mälu võrreldes kontrollidega (joonis 5C, PI=41.6 ± 3,6 ja 45,9 ± 3.0 versus 29,6 ± 2,9, vastavalt , p < 0,05="" ja="" 0,01).="" need="" tulemused="" näitasid,="" et="" ct="" täiendamine="" parandab="" noorte="" kärbeste="" mälu="" teket.="" teiseks,="" samas="" kui="">(Cistanche Tubulosa)toidulisandid suurendasid kärbeste pikaealisust ja oksüdatsiooniresistentsust, määrasime lisaks kindlaks, kas toidulisand võib parandada ka eakate kärbeste kognitiivset käitumist. Kärbestele manustati standardtoitu 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT-ga või ilma.(Cistanche Tubulosa)20 päeva, et jäljendada vananemist; kärbseid täiendati nende CT annustega(Cistanche Tubulosa)olid õppimise PI-d oluliselt kõrgemad (vastavalt 67,6 ± 1,9, 72,5 ± 0,5 ja 75,2 ± 1,3) kui kontrollidel (58.0 ± 2.0; joonis 5D , p < 0.001), mis viitab sellele, et CT(Cistanche Tubulosa)avaldab soodsat mõju vanusega seotud õppimise languse edasilükkamisele. Sarnased tulemused näitasid ka, et 5,4 mg/ml CT(Cistanche Tubulosa)rühmal oli mälu säilitamine tõhusam {{0}}tunnis (joonis 5E, 47,5 ± 1,9 versus kontroll37.{{10}} ± 2,9, p < 0,05)="" ja="" 24-="" h="" mälutestid="" (joonis="" 5f,="" 31,8="" ±="" 3,8="" versus="" kontroll="" 19,3="" ±="" 2,4,="" p="">< 0,01).="" need="" tulemused="" näitavad,="" et="">(Cistanche Tubulosa)toidulisand mitte ainult ei paranda noorte kärbeste mälu teket, vaid lükkab edasi ka kognitiivse käitumise häireid ning säilitab vanusega tõhusama õppimis- ja mäluvõime.

Molekulaarsed rajad, mis on seotud CT lisamise pikaealisuse edendamise ja kognitiivse parandamisega

CT(Cistanche Tubulosa)toidulisand pärsib AMI-d ja pikendab eluiga. Seetõttu arutlesime, et AMI-ga ja pikaealisusega seotud geene võib määrata, hinnates qPCR-i kaudu erinevat ekspressiooni kontroll- ja 5,4 ja 10,8 mg / ml CT-rühmade vahel. CT-ga töödeldud kärbeste geeniekspressiooni muutusi võrreldi kontrollrühma omadega, mis on näidatud joonisel 6A. Vananemisprotsessis võib osaleda mitmete sihtgeenide, sealhulgas Sirt6, Sir2, Sod, p38b ja Sirt2, ülesreguleeritud ekspressioon. Samuti suurenesid S6k, raptori, Psn, Rpd3 ja N transkriptsioonitasemed, mis viitab sellele, et CT(Cistanche Tubulosa)täiendamine muudab nende TOR ja Notchi radade signaaliülekannet. Lisaks mõjutas CT lisamine oluliselt Nmdar1, Nmdar2 ja SkpA mRNA ekspressiooni. Et tõsta esile CT-ga seotud valkude interaktsioone, mis pikendavad eluiga ning parandavad õppimist ja mälu, loodi kirjanduspõhine qPCR-sõelutud geenide valkude interaktsioonivõrgustik (joonis 6B). Iga sõlm esindab ühte valku, samas kui iga serv tähistab ühte kirjanduspõhist interaktsiooni. Sõlmed on rühmitatud vastavalt KEGG rajale ja geeniontoloogia bioloogilisele protsessile (GOBP). Nagu on näidatud joonisel fig 6B, on GOBP neuroaktiivse ligandi ja retseptori interaktsioon, mis mõjutab õppimist ja mälu, ja teine ​​GOBPof vananemine, mis on korrelatsioonis elueaga, mõlemad seotud Notchi signaalirajaga. Lisaks mõjutab vananemise GOBP-d mTOR-i signaalirada. CT-indutseeritud geenide üleekspressiooni olulisust nendel GOBP-del ja radadel on kirjeldatud jaotises Arutelu.

Joonis 6. Erinevalt ekspresseeritud geenide võrguanalüüs. Kärbsed, mida on eelnevalt töödeldud 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-ga(Cistanche Tubulosa)ja kontrolldieedid 25 kraadi juures 20 päeva jooksul koguti diferentsiaalse geeniekspressiooni kvantifitseerimiseks. (A) Sihtgeenide suhtelised transkriptsioonitasemed kontrollide suhtes kvantifitseeriti qPCR abil. n=4 iga rühma jaoks. (B) Rakusignaali ülekandes osalevad ülesreguleeritud geenid ja nende interaktsioonivõrk. Sõlmed esindavad geene. Üleekspressiooniga geenid on ümbritsetud rohelisega. Servad tähistavad geeniproduktide vahelisi koostoimeid. Interaktsioonitüübid on joonisel tähistatud erinevate värvidega. (Selle joonise legendi värviviidete tõlgendamiseks viitab lugeja selle artikli veebiversioonile.)

Arutelu

Tasakaalustamatus vabade radikaalide tekke ja elimineerimise vahel endogeensete antioksüdatiivsete kaitsesüsteemide poolt võib vananedes põhjustada kudede oksüdatiivseid kahjustusi; seega arvatakse, et vabad radikaalid mängivad vananemises kriitilist rolli (Dato et al., 2013). Siin näitasime, et CT(Cistanche Tubulosa)Kärbeste lisamine pikendab eluiga ja tagab mõlema soo kõrge tolerantsi H2O2 ja parakvaadi poolt põhjustatud oksüdatiivsete kahjustuste suhtes. Uuringud korreleerusid CT-ga(Cistanche Tubulosa)ja vananemisvastast toimet on vähem uuritud, kuid C. deserticola ekstraktid võivad pikendada kiirenenud vananemissoodumusega hiirte 8 (SAM-P8) eluiga (Zhang et al., 2014) ja ehhinakosiidiga, mis on üks peamisi CT-s leiduvaid ühendeid. , avaldab kasulikku mõju C. elegansi eluea pikenemisele ja stressitaluvusele (Wang et al., 2015).

Hiljutised loomkatsed näitasid, et ehhinakosiidil on kaitsev toime bisfenool A-indutseeritud munanditoksilisuse vastu ja see suurendab testosterooni biosünteesi, indutseerides munandisteroidgeenseid ensüüme, sealhulgas CYP11A1, 3 -HSD ja CYP17A1 (Jiang et al., 2016). CT(Cistanche Tubulosa)etanooliekstrakt soodustab ka sperma elujõulisust ja kvaliteeti rottidel (Wang et al., 2016). Kuigi korrelatsioon CT(Cistanche Tubulosa)ja östrogeen vajab veel uurimist, teatas üks uuring, et ehhinakosiid suurendab oluliselt östrogeeniretseptorite ekspressiooni, sarnaselt östradiooliga ravitud rühmale munasarjade eemaldamisega rottidel (Li et al., 2013). Kuna paljunemisvõime on vanusega negatiivses korrelatsioonis (Kenyon, 2005), uurisime, kas CT-st on kasu vanade kärbeste puhul. CT mõjutatud reproduktiivsus(Cistanche Tubulosa)täheldati ainult emastel, mis viitab sellele, et emaskärbsed võivad CT-le paremini reageerida(Cistanche Tubulosa)täiendamine. Need tulemused näitavad, et CT võib omada suguhormoonide sarnast toimet ja aeglustada reproduktiivset vananemist, mis on kooskõlas CT kliinilise kasutamisega(Cistanche Tubulosa)inimeste seksuaalhäirete raviks.

Akteosiid võib selgitada D-galaktoosi ja AlCl3 kombinatsiooni poolt indutseeritud vananeva hiiremudeli neuronite apoptoosi ja mälukaotuse vähendamise kaitsvat toimet, mis viitab sellele, et CT-l võib olla neuroprotektiivseid ja mälu parandavaid omadusi (Gao et al., 2015; Peng jt, 2015). Meie andmed näitasid, et mälu moodustumine paranes CT-ga täiendatud noorte kärbeste puhul. Seetõttu hindasime, kas CT(Cistanche Tubulosa)Lisandid on kasulikud mälu säilitamiseks vananemisel, sest kognitiivsed funktsioonid on teadaolevalt normaalse vananemise korral halvenenud. Meie tulemused näitasid, et CT-ga saab leevendada mitut tüüpi AMI-sid, sealhulgas õppimist, 3- ja 24-mälu.(Cistanche Tubulosa)täiendus 20 päeva.Vastavalt eelnimetatud tulemustele, CT(Cistanche Tubulosa)toidulisandil võib olla kasulik mõju pikaealisusele ja mälu moodustumise parandamisele, samuti võib AMI piisavalt edasi lükata.

Loommudelite kasutamine hõlbustab võimalike mehhanismide ja CT sõltuvuse tuvastamist(Cistanche Tubulosa)aeglustada aju vananemist ja lükata edasi AMI raku tasandil. Keskendusime vananemise, neuronaalse ülekande ja oksüdatiivse stressi aluseks olevatele molekulaarsetele mehhanismidele ning arutlesime, et AMI-ga ja pikaealisusega seotud geene saab tuvastada, uurides qPCR-i kaudu erinevat ekspressiooni kontroll- ja CT-rühmade vahel. Notchi signaalirada on Drosophilast inimesteni väga konserveerunud; see väljendub täiskasvanud kesknärvisüsteemis neuraalse plastilisuse tagamiseks ja reguleerib neuraalset diferentseerumist koos selle inhibeerimisega arengu ajal (Presente et al., 2001). Notchi heterosügootset mutatsiooni kandvatel hiirtel puudub ruumiline õppimine ja mälu (Costa et al., 2003). Preseniliini (Psn) on vaja Notch'i rakusiseseks domeeniks lõhustumise aktiveerimiseks ja Psn-i väljalülitamine põhjustab sünaptilise plastilisuse ja mälu moodustumise halvenemist (Saura et al., 2004). Meie andmed näitasid annusest sõltuvat Notchi ja Psn-i ülesreguleerimist CT-s(Cistanche Tubulosa)täiendatud kärbsed, muutumatu tuima ekspressioonitasemega, mis viitab Notchi signaalirajale kui tugevale mehhanismile mälu parandamiseks CT-lisandiga. Lisaks Notchi signaalimisele, N-metüül-D-aspartaadi retseptor (NMDAR), glutamaadi ja D-seriini juhitav ioonkanal neuronites, kontrollib sünaptilist plastilisust ja mälufunktsiooni (Furukawa et al., 2005). Drosophila genoom sisaldab kahte NMDAR-i allüksused Nmdar1 ja Nmdar2 ning mõlemad on mälufunktsioonis üliolulised. Nmdar1 katkestamine Drosophilas kahjustab õppimist ja mälu (Xia et al., 2005), samas kui Nmdar2 üleekspressioon hiirtel suurendab õppimist ja mälu (Tang et al., 2001). Meie andmed näitasid Nmdar1 ja Nmdar2 ülesreguleerimise annusest sõltuvat suurenemist CT-ga täiendatud kärbestel, mis viitab veel ühele potentsiaalsele mehhanismile mälu parandamiseks CT abil.(Cistanche Tubulosa)täiendamine.

Kahvelpea kasti transkriptsioonifaktori (FoxO) raja klass O on liikide seas konserveeritud ja oluline ainevahetuse, stressitaluvuse ja eluea pikendamise seisukohalt (Lehtinen et al., 2006). Translatsioonijärgsed modifikatsioonid, sealhulgas fosforüülimine, atsetüülimine ja ubikvitüülimine, reguleerivad FoxOs aktiivsust (van der Horst ja Burgering, 2007). Vaikne teaberegulaator 2 (Sir2; imetajate homoloog on tuntud kui SIRT1) reguleerib FoxO aktiivsust deatsetüülimise kaudu ja mõjutab loomade eluiga, mis on seotud insuliinitaolise kasvufaktori (IGF) rajaga (Lemieux et al., 2005). Sirt6 defosforüülib FoxO, põhjustades isastel hiirtel eluea pikenemist (Kanfi et al., 2012). Meie andmed näitasid Sir2 ja Sirt6 ülesreguleerimist CT-ga täiendatud kärbestes, mis tähendab, et särkide FoxO reguleerimine võib olla tõhus mehhanism eluea pikendamiseks CT abil.(Cistanche Tubulosa)täiendamine. Metaboolsete protsesside käigus tekkivad vabad radikaalid kahjustavad DNA-d ja valke, lühendades seega eluiga. Sir2 on ka oksüdatiivse stressireaktsiooni geen (Whitaker et al., 2013) ja üleekspresseeritud superoksiidi dismutaas (SOD), mis muudab O2− H2O2-ks ja lõpuks H2O-ks katalaasi ja glutatioonperoksidaasi abil, pikendab kärbeste eluiga ( Le Bourg, 2001). Meie andmed näitasid annusest sõltuvat Sodi ja Sir2 ülesreguleerimist CT-ga täiendatud kärbestes, mis viitab sellele, et antioksüdatiivsed rajad võivad olla CT-ga eluea pikendamise tugev mehhanism.(Cistanche Tubulosa)täiendamine.

Teist vananemise võtmeteed reguleerivad mTOR-kompleksid mTORC1 ja mTORC2, mis mõlemad soodustavad organismi kujunemist evolutsiooniliselt konservatiivsel viisil. Insuliiniretseptori signaalid aktiveerivad mTORC1 läbi fosfoinositiidi3-kinaasi-Akt raja, et soodustada valkude sünteesi ja põletikku ning pärssida autofagiat ja glükolüüsi, kasutades erinevaid allavoolu valke (Johnson et al., 2013). Valgu sünteesi aktiveerib ribosomaalne proteiin S6 kinaas (S6K), mis moodustab insuliiniretseptori signaaliülekande pärssimiseks negatiivse tagasiside ahela (Hands et al., 2009). mTORC1 inhibeeriv sihtmärk on sarnane Drosophila valk (sima), mille homoloogi imetajatel tuntakse kui hüpoksiaga indutseeritavat faktorit 1 alfa (HIF1). HIF1 mängib kaitsvat rolli veresoonte ja motoorsete neuronite vanusest sõltuvate kahjustuste eest (Oosthuyse et al., 2001; Rivard et al., 2000). Meie andmed näitasid, et mTOR kompleksi allüksuste, sealhulgas Tor, rictor ja raptor, ekspressioonitase on muutumatu. arvestades, et CT(Cistanche Tubulosa)täiendus annusest sõltuvalt ülesreguleeritud S6K ja sima, mis tähendab CT kaitsvat rolli(Cistanche Tubulosa)mTOR aktiivsuse vastu.

Järeldused

Vaatamata sellele, et on tuvastatud mõned seotud rajad, aitas CT kaasa pikaealisusele ja kõrgele intelligentsusele(Cistanche Tubulosa)sekkumine võib olla apolügeenne tunnus, mida mõjutab mitme geeni koosmõju, ja vananemisprotsessi võivad moduleerida ka muud geneetilised tegurid, mida me pole selgitanud. Eakate jaoks peaks vananemist käsitlevate uuringute oluliseks saavutuseks olema soovitud füüsilise vormi ja kognitiivsete võimete säilitamine, et lükata edasi või ennetada dementsust ja kroonilisi haigusi. Kuna CT(Cistanche Tubulosa)kõrbe ženšennina tuntud, millel on märkimisväärne tervendav toime neerude yangi tugevdamisele, mis toidab kõiki elundeid ja täiendab traditsioonilise hiina meditsiini elutähtsat olemust, usume, et meie uuring annab tõendeid, mis toetavad CT kliinilist ravi.(Cistanche Tubulosa)ning see võib anda väärtuslikku teavet uute ravimite või toidulisandite väljatöötamiseks, et mitte ainult aeglustada vananemist ja vanusega seotud haigusi, vaid ka parandada inimeste elukvaliteeti.

Huvide konflikt

Autorid kinnitavad, et neil ei ole huvide konflikti.

Tänuavaldused

Seda tööd toetas Hiina meditsiiniülikool (CMU103-S-25); Hiina meditsiiniülikooli haigla (DMR-101-065, DMR-103-099); Taiwani teadus- ja tehnoloogiaministeerium (NSC 102-2632-B-039-001-MY3, MOST 104-2632-B-039-002) ​​ja osaliselt Taiwani tervishoiu- ja heaoluministeeriumi kliiniliste uuringute ja uuringute keskus tipptasemel (MOHW105-TDU-B-212-133019).

Täiendavad materjalid

Selle artikliga seotud lisamaterjali leiate veebiversioonist aadressil doi:10.1016/j.phymed.2017.01.006.

Alates: "Molekulaarsed rajad, mis on seotud pikaealisuse edendamise ja kognitiivse parandamisegaCistanche tubulosaDrosophilas' pooltWei-Yong Lin et al

--W.-Y. Lin et al. / Fütomeditsiin 26 (2017) 37–44

Viited

Burke, SN, Barnes, CA, 2010. Senescent synapses and hipokampuse ahela dünaamika. Trends Neurosci. 33, 153–161.

Costa, RM, Honjo, T., Silva, AJ, 2003. Learning and memory deficit in Notchi mutant hiirtel. Curr. Biol. 13, 1348–1354.

Dato, S., Crocco, P., D'Aquila, P., de Rango, F., Bellizzi, D., Rose, G., Passarino, G., 2013. Geneetilise varieeruvuse ja elustiili rolli uurimine oksüdatiivses stressireaktsioon tervisliku vananemise ja pikaealisuse tagamiseks. Int. J. Mol. Sci. 14, 16443–16472.

Dubnau, J., Grady, L., Kitamoto, T., Tully, T., 2001. Neurotransmissiooni häire Drosophila seente kehas blokeerib otsimise, kuid mitte mälu omandamise. Loodus 411, 476–480.

Franceschini, A., Szklarczyk, D., Frankild, S., Kuhn, M., Simonovic, M., Roth, A., Lin, J., Minguez, P., Bork, P., von Mering, C. , Jensen, LJ, 2013. STRING v9.1: valk-valk interaktsioonivõrgud, suurema katvuse ja integreeritusega. Nucleic Acids Res. 41, D808–D815.

Furukawa, H., Singh, SK, Mancusso, R., Gouaux, E., 2005. Subühikute paigutus ja funktsioon NMDA retseptorites. Loodus 438, 185–192.
Gao, L., Peng, XM, Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. D-gal ja AlCl3 kombinatsiooni indutseeritud akteosiidi (Verbascoside) mälu parandamine vananevas hiiremudelis. Fütoter. Res. 29, 1131–1136.
Guo, Q., Zhou, Y., Wang, CJ, Huang, YM, Lee, YT, Su, MH, Lu, J., 2013. Avatud, platseebokontrollita uuringCistanche tubulosaglükosiidikapslid (Memoregain((R))) mõõduka Alzheimeri tõve raviks. Olen. J. Alzheimeri dis. Teised Demenid. 28, 363–370.
Hands, SL, Proud, CG, Wyttenbach, A., 2009. mTOR roll vananemisel: valgusüntees või autofagia? Vananemine (Albany, NY) 1, 586–597.
Jiang, Z., Wang, J., Li, X., Zhang, X., 2016. Ehhinakosiid jaCistanche tubulosa(Schenk) R. Wight leevendas bisfenool A-indutseeritud munandite ja sperma kahjustusi rottidel sugunäärmete teljega reguleeritud steroidogeensete ensüümide kaudu. J. Ethnopharmacol 193, 321–328.
Jiao, X., Sherman, BT, Huang da, W., Stephens, R., Baseler, MW, Lane, HC, Lempicki, RA, 2012. DAVID-WS: olekupõhine veebiteenus, mis hõlbustab geenide/valkude loendi analüüsi. Bioinformaatika 28, 1805–1806.
Johnson, SC, Rabinovitch, PS, Kaeberlein, M., 2013. mTOR on vananemise ja vanusega seotud haiguste võtmemodulaator. Loodus 493, 338–345.
Kanfi, Y., Naiman, S., Amir, G., Peshti, V., Zinman, G., Nahum, L., Bar-Joseph, Z., Cohen, HY, 2012. Sirtuiin SIRT6 reguleerib meeste eluiga hiired. Loodus 483, 218–221.
Kenyon, C., 2005. Vananemise plastilisus: pikaealiste mutantide ülevaated. Lahter 120, 449–460.
Le Bourg, E., 2001. Oksüdatiivne stress, vananemine ja pikaealisus Drosophila melanogasteris. FEBS Lett. 498, 183–186.
Lehtinen, MK, Yuan, Z., Boag, PR, Yang, Y., Villen, J., Becker, EB, DiBacco, S., de la Iglesia, N., Gygi, S., Blackwell, TK, Bonni, A., 2006. Konserveeritud MST-FOXO signaalirada vahendab oksüdatiivse stressi reaktsioone ja pikendab eluiga. Cell 125, 987–1001.
Lemieux, ME, Yang, X., Jardine, K., He, X., Jacobsen, KX, Staines, WA, Harper, ME, McBurney, MW, 2005. Sirt1 deatsetülaas moduleerib insuliinitaolise kasvufaktori signaaliülekande rada imetajad. Meh. Aging Dev. 126, 1097–1105.
Li, F., Yang, X., Yang, Y., Guo, C., Zhang, C., Yang, Z., Li, P., 2013. The antiosteoporotic activity of echinacoside in ovariectomized rotts. Phytomedicine 20, 549–557.
Li, Z., Lin, H., Gu, L., Gao, J., Tzeng, CM, 2016. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): traditsioonilise hiina meditsiini üks parimaid farmaatsia kingitusi. Front Pharmacol. 7, 41.
Lin, S., Ye, S., Huang, J., Tian, ​​Y., Xu, Y., Wu, M., Wang, J., Wu, S., Cai, J., 2013. Kuidas hiina keel ravimid, mis toniseerivad neerusid, pärsivad dopamiinergiliste neuronite apoptoosi? Neuraalne Regen. Res. 8, 2820–2826.

Oosthuyse, B., Moons, L., Storkebaum, E., Beck, H., Nuyens, D., Brusselmans, K., Van Dorpe, J., Hellings, P., Gorselink, M., Heymans, S. , Theilmeier, G., Dewerchin, M., Laudenbach, V., Vermylen, P., Raat, H., Acker, T., Vleminckx, V., Van Den Bosch, L., Cashman, N., Fujisawa, H., Drost, MR, Sciot, R., Bruyninckx, F., Hicklin, DJ, Ince, C., Gressens, P., Lupu, F., Plate, KH, Robberecht, W., Herbert, JM, Collen , D., Carmeliet, P., 2001. Hüpoksia-vastuse elemendi kustutamine veresoonte endoteeli kasvufaktori promootoris põhjustab motoorsete neuronite degeneratsiooni. Nat. Genet. 28, 131–138.

Peng, XM, Gao, L., Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. D-gal ja AlCl3 kombinatsiooni indutseeritud akteosiidi (Verbascoside) mälu parandamise mehhanism vananevas hiiremudelis. Phytother, Res. 29, 1137–1144.
Presente, A., Andres, A., Nye, JS, 2001. Requirement of Notch in adulthood for neurological function and longevity. Neuroreport 12, 3321–3325.
Rivard, A., Berthou-Soulie, L., Principe, N., Kearney, M., Curry, C., Branellec, D., Semenza, GL, Isner, JM, 2000. Vanusest sõltuv defekt veresoonte endoteeli kasvus faktori ekspressioon on seotud hüpoksiaga indutseeritava faktori 1 aktiivsuse vähenemisega. J. Biol. Chem. 275, 29643–29647.
Saura, CA, Choi, SY, Beglopoulos, V., Malkani, S., Zhang, D., Rao, Shankaranarayana, Chattarji, BS, Kelleher, S., 3., RJ, Kandel, ER, Duff, K., Kirkwood , A., Shen, J., 2004. Preseniliini funktsiooni kadumine põhjustab mälu ja sünaptilise plastilisuse kahjustusi, millele järgneb vanusest sõltuv neurodegeneratsioon. Neuron 42, 23–36.
Schimanski, LA, Barnes, CA, 2010. Neuraalne valkude süntees vananemise ajal: mõju plastilisusele ja mälule. Eesmise vananemise neuroosid. 2. Seok, J., Kim, TS, Kwon, HJ, Lee, SP, Kang, MH, Kim, BJ, Kim, MN, 2015. EfektiivsusCistanche Tubulosaja Laminaria Japonica ekstraktid (MK-R7) täiendavad mustrilist juuste väljalangemist ja parandavad peanaha tervist. Clin. Nutr. Res. 4, 124–131.
Tang, YP, Wang, H., Feng, R., Kyin, M., Tsien, JZ, 2001. Rikastamise diferentsiaalne mõju õppimisele ja mälufunktsioonile NR2B transgeensetes hiirtes. Neuropharmacology 41, 779–790.
van der Horst, A, Burgering, BM, 2007. FoxO valkude rolli rõhutamine elueas ja haigustes. Nat. Rev Mol. Kamber. Biol. 8, 440–450.
Wang, T., Chen, C., Yang, M., Deng, B., Kirby, GM, Zhang, X., 2016.Cistanche tubulosaetanooliekstrakt vahendab roti suguhormoonide taset munandite steroidgeensete ensüümide indutseerimise teel. Pharm. Biol. 54, 481–487.
Wang, T., Zhang, X., Xie, W., 2012.Cistanche deserticolaYC Ma, "Kõrbe ženšenn": ülevaade. Olen. J. Chin. Med. 40, 1123–1141.
Wang, X., Zhang, J., Lu, L., Zhou, L., 2015. The longevity effect of ehhinakosiidi in Caenorhabditis elegans mediated through daf-16. Biosci. Biotehnoloogia. Biochem. 79, 1676–1683.
Whitaker, R., Faulkner, S., Miyokawa, R., Burhenn, L., Henriksen, M., Wood, JG, Helfand, SL, 2013. Drosophila Sir2 suurenenud ekspressioon pikendab eluiga annusest sõltuval viisil. Aging (Albany, NY) 5, 682–691.
Wu, CR, Lin, HC, Su, MH, 2014. Pööramine veepõhiste ekstraktide abilCistanche tubulosaAlzheimeri tõvega sarnase roti mudeli käitumishäiretest: olulisus amüloidi ladestumise ja tsentraalse neurotransmitteri funktsiooni jaoks. BMC täiendus. Altern. Med. 14, 202.
Xia, S., Miyashita, T., Fu, TF, Lin, WY, Wu, CL, Pyzocha, L., Lin, IR, Saitoe, M., Tully, T., Chiang, AS, 2005. NMDA retseptorid vahendavad haistmisõpe ja mälu Drosophilas. Curr. Biol. 15, 603–615.
Zhang, K., Ma, X., He, W., Li, H., Han, S., Jiang, Y., Wu, H., Han, L., Ohno, T., Uotsu, N., Yamaguchi, K., Ma, Z., Tu, P., 2014. Cistanche deserticola ekstraktid võivad antagoniseerida immunosenstsentsi ja pikendada vananemiskiirendatud hiire eluiga
Kalduvad 8 (SAM-P8) hiired. Evid. Põhinev komplement. Alternatiiv. Med. 2014, 601383.
Zhao, Q., Gao, J., Li, W., Cai, D., 2010. Ehhinakosiidi neurotroofsed ja neurorescue-efektid Parkinsoni tõve subakuutses MPTP hiiremudelis. Brain Res. 1346, 224–236.