TLR9 aktiveerimine indutseerib IgA nefropaatia korral aberrantse IgA glükosüülimise APRIL- ja IL-6-vahendatud radade kaudu

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yuko Makita1, Hitoshi Suzuki1, Toshiki Kano1, Akiko Takahata1, Bruce A. Julian2,3, Jan Novak3 ja Yusuke Suzuki1

MÄRKSÕNAD: APRILL; galaktoosi puudulikkusega IgA1; IgA nefropaatia; IL-6; immuunkompleks

Galaktoosipuudulik IgA1 (Gd-IgA1) mängib olulist rolliIgA nefropaatia(IgAN). Siiski ei ole Gd-IgA1 tootmist juhtivaid patogeenseid mehhanisme täielikult välja selgitatud. On teada, et kaasasündinud immuunne aktiveerimine Toll-sarnase retseptori 9 (TLR9) kaudu osaleb Gd-IgA1 tootmises. Samuti on teada, et proliferatsiooni indutseeriv ligand (APRIL) ja IL-6 võimendavad Gd-IgA1 sünteesi IgAN-is. Selle taustal uurisime, kuidas TLR9 aktiveerimine IgA-d sekreteerivates rakkudes põhjustab nefritogeense IgA ületootmist IgAN-ile kalduvas ddY hiires ja inimese IgA{14}}sekreteerivates rakkudes. TLR9 ligandi CpG-oligonukleotiidide süstimine suurendas ddY hiirtel hälbivalt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA immuunkomplekside tootmist, mis omakorda süvendasneerukahjustus. CpG-oligonukleotiidiga stimuleeritud hiirtel oli APRIL-i kõrgenenud seerumi tase, mis korreleerus ebanormaalselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA immuunkomplekside tasemetega. In vitro,TLR9 aktiveeriminesuurendas nefritogeense IgA, aga ka APRIL-i ja IL{0}} tootmist ddY hiirte splenotsüütides ja inimese IgA1- sekreteerivates rakkudes. Kuid APRIL-i siRNA katkestamine surus täielikult maha IL-6 poolt indutseeritud Gd-IgA1 ületootmise. IL-6 neutraliseerimine vähendas CpG-oligonukleotiidide poolt indutseeritud Gd-IgA1 ületootmist. Lisaks põhjustasid APRIL ja IL{11}} mõlemad sõltumatult vahendatud TLR9- Gd-IgA1 ületootmise. Seega suurendas TLR9 aktiveerimine ebanormaalselt glükosüülitud IgA sünteesi, mis IgAN-i hiiremudelis suurendas veelgi neerukahjustusi. Seega suurendavad APRIL ja IL{16}} sünergistlikult ja ka sõltumatult Gd-IgA1 sünteesi.

Tõlkeavaldus

Haigusspetsiifiline ravi, mis on suunatud galaktoosipuuduse IgA1-le, võib olla edaspidiseks raviksIgA nefropaatia. Selle uuringu tulemused, mis näitasid proliferatsiooni indutseeriva ligandi (APRIL) ja interleukiini-6 (IL-6) osalust aberrantselt glükosüülitud IgA ületootmises, toetavad APRIL-i ja IL-i sihtimise põhjust. {3}} IgA nefropaatia (IgAN) korral. Tegelikult näitas hiljutine uuring APRIL-i vastase monoklonaalse antikeha positiivset toimet hiire IgAN-is1 ja praegu on käimas kliiniline uuring neutraliseeriva APRIL-i antikehaga IgAN-iga patsientidel.

IgA nefropaatia (IgAN), kõige levinum primaarne glomerulonefriit,2 põhjustab lõppstaadiumis neeruhaigust 20–40 protsendil patsientidest 20 aasta jooksul pärast selle haiguse algust.3 Kuigi IgAN-i patogenees tuleb veel täielikult välja selgitada, on episoodiline makroskoopiline hematuuria, mis kaasneb ülemiste hingamisteede infektsiooniga, viitab sellele, et limaskesta immuunsüsteem mängib IgAN-i kliinilistes ilmingutes olulist rolli.4

Cistanchetubulosatakistabneerudhaigus, näidise vaatamiseks klõpsake siin

IgA ebanormaalne glükosüülimineon IgAN patogeneesis kesksel kohal. Glomerulaarne IgA IgAN-iga patsientidel on piiratud IgA1 alamklassiga ja on rikastatud molekulidega, millel on mõned liigendpiirkonna O-glükaanid, millel on galaktoosipuudus (galaktoosipuudulik IgA1 [Gd-IgA1]).5,6 Lisaks Gd seerumitasemed -IgA1 ja IgA{11}}sisaldavadimmuunkompleksid(IC) Gd-IgA1-spetsiifiliste autoantikehadega on IgAN-iga patsientidel kõrgenenud.7–9 Gd-IgA1 tootmise mehhanismid ei ole siiski veel täielikult teada.

Selles uuringus kasutasime IgAN-ile kalduvat ddY hiiremudelit. ddY hiirtel tekivad glomerulaarsed vigastused, mis jäljendavad IgAN-iga inimeste omasid.10 Kuigi hiirtel ei ole inimese IgA1-le tüüpilisi O-glükaane sisaldavaid IgA molekule, on inimese IgAN-il ja sellel IgAN-ile kalduval ddY hiiremudelil mõned haigusele iseloomulikud tunnused, näiteks seerumi tõus. aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC.6,11 Tegelikult indutseerib N-glükaanide b1 puudulikkusest tingitud ebanormaalne IgA glükosüülimine, 4-galaktosüülimine hiire IgAN-i, kuna kõrge molekulmassiga seerumitasemed tõusevad IgA-d ja IgA-d sisaldav IC koos järgneva neerude ladestumise ja glomerulaarkahjustusega.12 ddY hiirtel ilmneb proteinuuria ja mesangiaalne proliferatiivne glomerulonefriit koos IgA ja C3 sadestumisega glomerulites. Kogu genoomi hõlmav assotsiatsiooniuuring tuvastas kandidaat lookused, mis on seotud IgAN progresseerumisega ddY hiirtel.13 Need lookused sisaldavad funktsionaalselt sarnaseid geene, mis on seotud inimese IgAN-iga.14,15 Need leiud viitavad sellele, et ddY hiirtel ja inimestel võib IgAN olla mõjutatud. vähemalt osaliselt samade vastuvõtlikkuse geenide poolt. Kuigi hiire IgA ja inimese IgA1 molekulaarsed omadused erinevad, kaldub ebanormaalselt glükosüülitud IgA moodustama polümeerseid IgA ja IgG-IgA IC-sid, mis järgnevalt põhjustavad neerukahjustuse progresseerumist IgAN ddY hiiremudelis, aga ka inimese IgAN-is. Seega on ddY hiirte mudelil inimese IgAN-iga mõned ühised tunnused ja see võib olla kasulik vahend IgAN-i erinevate patogeneetiliste tunnuste analüüsimiseks.

Toll-like retseptorid (TLR-id) on kaasasündinud immuunsüsteemi võtmemolekulid ja need on seotud IgAN patogeneesiga.16–20 Patogeenidest pärinevad eksogeensed antigeenid aktiveerivad TLR9-MyD88 signaaliülekanderaja.21 See protsess viib suurendas oluliselt põletikuliste tsütokiinide, nagu 1. tüüpi interferoon ja interleukiin-6 (IL-6) ​​sünteesi.22 Hiljuti näitasime, et TLR9 aktivatsioon süvenesneerukahjustusIgAN-ile kalduvatel ddY hiirtel koos IgA ja IgG-IgA IC-de taseme tõusuga seerumis.16 Lisaks on spetsiifilised TLR9 polümorfismid seotud haiguse progresseerumisega IgAN-iga patsientidel.16 Kasvaja nekroosifaktori-a ja IL{{ 6}} on IgAN-iga patsientidel kõrgenenud.23 Lisaks suurendavad IL-6 ja IL-4 IgA1 tootmist ja suurendavad galaktoosi puudulikkuse astet, suurendades Gd-IgA1 sünteesi IgA poolt{{13} }sekreteerivad IgAN-iga patsientidelt rakuliine.24 Need leiud viitavad sellele, et IL-6 võib olla selle protsessi peamine vahendaja.24,25.

Tuumori nekroosifaktori ligandi superperekonna liikme 13 (TNFSF13) geen kodeerib proliferatsiooni indutseerivat ligandit (APRIL), mis on B-rakkude küpsemise ja ellujäämise keskne tsütokiin.26 APRIL jagab mõningaid B-rakkude arenguks olulisi signaaliretseptoreid teistega. TNF superperekonna ligand, B-raku aktiveeriv faktor (BAFF). BAFF osaleb ka B-rakkude afiinsusküpsemises. Kogu genoomi hõlmavas assotsiatsiooniuuringus tuvastati TNFSF13 kui üks IgAN-iga seotud kandidaatgeene.27 Tõepoolest, IgAN-iga patsientidel on APRIL-i tase seerumis kõrgenenud28 ja see on seotud neerude prognoosiga.28

Et paremini mõista mehhanisme, mis on seotud aberrantselt glükosüülitud IgA ületootmisega ligandi CpG oligodeoksünukleotiidide (ODN) poolt aktiveeritud TLR9 kaudu, kasutasime IgAN-ile kalduvaid ddY hiiri ja inimese IgA 1- sekreteerivaid rakke.

TULEMUSED

TLR9 aktiveerimine süvendas ddY hiirte neerukahjustusi, suurendades nefritogeense IgA tootmist

TLR9 saab aktiveerida vastavate liganditega, nagu CpG-ODN. TLR9 aktiveerimise mõju testimiseks IgAN-i hiiremudelis kasutasime ligandi süstimist IgAN-ile kalduvatele ddY hiirtele. CpG-ODN-ga süstitud hiirtel arenes mesangiaalne proliferatsioon ja rakuvälise maatriksi laienemine (joonis 1a). Mesangiaalse proliferatsiooni ja mesangiaalse maatriksi laienemise põhjal saadud neerude histoloogilised skoorid hiirtel, kellele süstiti CpG-ODN, olid oluliselt kõrgemad kui kontrollhiirtel (P < 0.01;="" joonis="" 1a).="" cpg-odn-ga="" süstitud="" hiirte="" albumiini="" tase="" uriinis="" oli="" kontrollhiirtega="" võrreldes="" oluliselt="" kõrgem="" (p="">< 0.{{20}}1;="" joonis="" 1a).="" ainult="" cpg-odn-ga="" süstitud="" hiirtel="" tekkisid="" iga,="" igg="" ja="" komplemendi="" c3="" mesangiaalsed="" ladestused="" (joonis="" 1b).="" cpg-odn-ga="" süstitud="" hiirtel="" oli="" oluliselt="" kõrgem="" seerumi="" iga="" (p="">< 0,01)="" ja="" igg="" (p="">< 0,01)="" tase="" kui="" kontrollhiirtel="" (joonis="" 1c).="" cpg-odn-ga="" süstitud="" hiirte="" seerumi="" iga-l="" oli="" väiksem="" reaktiivsus="" ricinus="" communis="" aglutiniin-i="" (rca-i)="" ja="" sambucus="" nigra="" aglutiniini="" lektiinidega="" kui="" kontrollhiirtel="" (joonis="" 1c),="" mis="" näitab="" madalamat="" galaktoosi="" ja="" siaalhappe="" sisaldust="" n-s.="" -="" hiire="" iga="" glükaanid.="" lisaks="" oli="" seerumi="" igg-iga="" ic="" tase="" hiirtel,="" kellele="" süstiti="" cpg-odn,="" oluliselt="" kõrgem="" kui="" kontrollhiirtel="" (p="">< 0,05;="" joonis="" 1c).="" need="" leiud="" näitasid,="">TLR9 aktiveerimineCpG-ODN poolt põhjustas aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC ületootmise, mis viisimmuunkompleksladestumine ja neerukahjustus.

B-rakud ja dendriitrakud osalesid CpG-ODN vastustes

Uurisime, millised rakutüübid on seotud ebanormaalselt glükosüülitud IgA ületootmise indutseerimisega vastuseks CpG-ODN-ile. B-rakud ja dendriitrakud (DC-d) eraldati ddY hiirte põrnast, kasutades hiire CD19- ja CD11c-vastaseid antikehi vastavalt FL-fluorestsents-aktiveeritud rakkude sorteerimisega. Eraldatud B-rakkude CpG-ODN stimulatsioon kutsus esile IgA ületootmise. Lisaks suurendas CpG-ODN oluliselt IgA tootmist, kui B-rakke kasvatati koos DC-dega (täiendav joonis S1). Need tulemused viitasid sellele, et CpG-ODN aktiveeris otseselt B-rakke ja DCS suurendas TLR9 aktiveerimisel veelgi IgA tootmist.

APRIL-i ületootmine suurendas ebanormaalselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC-de sünteesi

Hindasime, kas APRIL ja / või BAFF osalesid TLR9 aktiveerimise poolt indutseeritud nefritogeense IgA sünteesis. CpG-ODN süstimine ddY hiirtele tõstis oluliselt APRIL-i ja BAFF-i seerumitasemeid (joonis 2a). APRIL-i ekspressioonitasemed splenotsüütides korreleerusid ebanormaalselt glükosüülitud IgA tootmise ja IgG-IgA IC moodustumisega (joonis 2b). BAFF-i ekspressioonitasemed splenotsüütides korreleerusid ebanormaalselt glükosüülitud IgA tootmisega, kuid mitte IgG-IgA IC moodustumisega (joonis 2b). Veelgi enam, APRIL-i, kuid mitte BAFF-i seerumitasemed korreleerusid märkimisväärselt ebanormaalselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC kõrgenenud seerumitasemetega CpG-ODN-ga süstitud hiirtel (joonis 2c). Need leiud viitavad sellele, et nii APRIL kui ka BAFF võivad olla seotud aberrantselt glükosüülitud IgA tootmisega, kuigi APRIL võib olla rohkem seotud IgG-IgA IC tootmisega.

Joonis 1|CpG-oligodeoksünukleotiidi (ODN) stimulatsioonist põhjustatud nefritogeense IgA tootmine. CpG-ODN-i süstimine suurendas aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA immuunkompleksi (IC) taset veres ja süvendas neerukahjustusi ddY hiirtel. ( a ) ddY hiired enne arengutIgA nefropaatia(IgAN) süstiti ip CpG-ODN-ga kolm korda nädalas 12 nädala jooksul. Glomerulaarsete kahjustuste histoloogilises analüüsis näitasid CpG-ODN-ga süstitud hiirtel mesangiaalsete rakkude proliferatsiooni ja rakuvälise maatriksi laienemist. Parempoolne paneel näitab neerukahjustuste hindamist poolkvantitatiivse skooriga. Neeru histoloogilised skoorid, mida hinnati ülalnimetatud kahjustustega glomerulite protsendi järgi, näitasid, et CpG-ODN-iga süstitud hiirte neerukahjustus süvenes. CpG-ODN-ga süstitud hiirte albumiini tase uriinis oli kontrollhiirtega võrreldes oluliselt kõrgem. Alumiste paneelide ribad ¼ keskmine ± SEM. (b) Glomerulaarsete IgA, IgG ja C3 ladestiste immunohistokeemiline analüüs. Ainult CpG-ODN-ga süstitud hiirtel tekkisid IgA, IgG ja C3 mesangiaalsed ladestused. ( c ) IgA, IgG ja IgG-IgA IC-de tasemed seerumis tõusid pärast 12-nädalast CpG-ODN-ravi märkimisväärselt. Seerumi IgA hiirtel, kellele oli süstitud CpG-ODN, näitas oluliselt madalamat reaktiivsust Ricinus communis aglutiniin-I (RCA-I) ja Sambucus nigra aglutiniini (SNA) lektiinidega kui IgA kontrollhiirtel. Need tulemused näitavad, et CpG-ODN süstimine suurendas aberrantselt glükosüülitud IgA taset seerumis. Näidatud on üksikud punktid. *P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" optiline="" tihedus.="" selle="" pildi="" vaatamise="" optimeerimiseks="" vaadake="" selle="" artikli="" veebiversiooni="" aadressil="">

Joonis 2|Korrelatsioon proliferatsiooni indutseeriva ligandi (APRIL) ületootmise ja ebanormaalselt glükosüülitud IgA vahel hiirtel, kellele süstiti CpG-oligodeoksünukleotiidi (ODN). ( a ) CpG-ODN ddY hiirte süstimine suurendas B-raku aktiveeriva faktori (BAFF) ja APRIL-i taset seerumis. ( b ) BAFF-i ekspressioonitasemed tervetes splenotsüütides korreleerusid vähenenud reaktiivsusega Ricinus communis aglutiniin-I (RCA-I) lektiiniga, kuid ei olnud korrelatsioonis IgG-IgA immuunkompleksi (IC) moodustumisega. Samal ajal seostati APRIL-i ekspressioonitasemeid ebanormaalselt glükosüülitud IgA tootmise ja IgG-IgA IC moodustumisega. ( c ) CpG-ODN-ga süstitud hiirtel seostati APRIL-i seerumitasemeid IgA vähenenud reaktiivsusega RCA-I lektiiniga ja IgG-IgA IC kõrgenenud tasemega. BAFF-i tasemed seerumis ei olnud korrelatsioonis glükosüülitud IgA tootmise ja IgG-IgA IC moodustumisega. Tulpe ¼ tähendab – SEM. *P < 0.05.="" od,="" optiline="">

IL-6 indutseeris ebanormaalselt glükosüülitud IgA tootmist

CpG-ODN-ga süstitud hiirte IL{0}} seerumitasemed olid kontrollhiirtega võrreldes oluliselt kõrgemad (P < 0,05;="" joonis="" 3a).="" kasutades="" igan-ile="" kalduvate="" ddy="" hiirte="" splenotsüüte,="" uurisime,="" kas="" il-6="" vahendas="" tlr9-indutseeritud="" raku="" aktivatsiooni="" ja="" hälbivalt="" glükosüülitud="" iga="" ületootmist.="" cpg-odn="" stimulatsioon="" suurendas="" il-6="" tootmist="" splenotsüütide="" poolt="" in="" vitro.="" il{10}}="" lisamine="" splenotsüütide="" söötmele="" suurendas="" iga="" tootmist.="" lisaks="" suurendas="" il-6="" aberrantselt="" glükosüülitud="" iga="" sünteesi="" ja="" igg-iga="" ic="" moodustumist="" ning="" suurendas="" april-i="" tootmist="" (joonis="" 3a).="" il-6="" –="" neutraliseeriv="" antikeha="" vähendas="" cpg-odn-indutseeritud="" kogu="" iga,="" hälbivalt="" glükosüülitud="" iga="" tootmist="" ja="" igg-iga="" ic="" moodustumist="" (joonis="" 3b).="" need="" leiud="" näitavad,="" et="" tlr9="" aktiveerimist="" vahendas="" vähemalt="" osaliselt="" il-="" 6.="" peale="" selle="" võib="" hälbivalt="" glükosüülitud="" iga="" tootmisse="" kaasata="" mõni="" teine="" ​​tlr{20}}vahendatud="">

cistanchesaab parandadaneerudfunktsiooni

APRIL ja IL{0}} suurendasid Gd-IgA1 sünteesi inimese IgA1- sekreteerivates rakkudes

Lisaks testisime, kas APRIL ja IL{0}} on ühised peamiste vahendajate jaoks, mis suurendavad nefritogeense IgA tootmist inimese IgA1-sekreteerivates rakkudes. CpG-ODN lisamine suurendas IL-6 suurenemist, APRIL-i ekspressiooni, APRIL-valgu tootmist ning IgA ja Gd-IgA1 tootmist (joonis 4a). Stimuleerimine IL-6 ja APRIL-iga suurendas IgA ja Gd-IgA1 tootmist (joonis 4b, c). CpG-ODN-i stimuleerimise mõju IgA ja Gd-IgA1 tootmisele vähendasid osaliselt IL-6-neutraliseerivad antikehad (joonis 4d). Lisaks vähendas APRIL-i väike, segav (si)RNA knockdown ka IL-6-stimulatsioonist indutseeritud IgA ja Gd-IgA1 tootmist (joonis 4b), mis näitab, et APRIL ja IL-6 soodustavad sünergistlikult Gd teket. -IgA1.

ARUTELU

Inimese IgAN-i mesangiaalne IgA ei hõlma IgA1 alamklassi, mis näitab ebanormaalset O-glükosüülimist. 29,30 Inimese IgA1-l on O-glükaanidega liigendpiirkond, mis puudub hiire IgA-s.6,31,32 Kuid N-glükaanide hälbiv glükosüülimine on seotud IgAN-i hiiremudeli patogeneesiga ddY hiirtel. aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgA-d sisaldava IC taseme tõus.11,12 IgA süsivesikute ebanormaalsed modifikatsioonid kas O- või N-glükaanides on nefritogeense IgA-d sisaldava IC iseloomulikud omadused.

Mitmed uuringud on näidanud TLR9 aktivatsiooni IgAN progresseerumisel.17–19 Käesolevas uuringus näitasime, et TLR9 aktiveerimine CpG-ODN ip süstimisega ddY hiirtele süvendas neerukahjustusi, millega kaasnesid glomerulaarsed IgA ja IgG ladestused, tõenäoliselt seetõttu, et aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC suurenenud seerumitasemed. Lisaks näitasime, et TLR9 aktiveerimine osales Gd-IgA1 sünteesis inimese IgA{9}} sekreteerivates rakuliinides.

Joonis 3|CpG-oligodeoksünukleotiidi (ODN) ja interleukiini (IL) -6 mõju ddY hiirte kultiveeritud splenotsüütidele. (a) CpG-ODN-ga süstitud hiirte seerumi IL-6 tase oli kontrollhiirtega võrreldes oluliselt kõrgem. CpG-ODN stimulatsioon suurendas kultuuris ddY hiirte splenotsüütide IL-6 tootmist. DdY-hiirte splenotsüütide inkubeerimine rekombinantse IL-6-ga suurendas kogu IgA ja aberrantselt glükosüülitud IgA tootmist, mille tulemuseks oli IgG-IgA immuunkompleksi (IC) moodustumine. Rekombinantne IL-6 suurendas proliferatsiooni indutseeriva ligandi (APRIL) ületootmist. (b) Kultuuris olevaid splenotsüüte stimuleeriti CpG-ODN-ga IL-6-neutraliseeriva antikeha juuresolekul või puudumisel. Anti-IL-6 antikeha vähendas kogu IgA ja hälbivalt glükosüülitud IgA tootmist ning sellest tulenevalt vähendas CpG-ODN poolt indutseeritud IgG-IgA IC moodustumist. Tulbad ¼ keskmine ± SEM. * P < 0.05,="" **p="">< 0,01.="" od,="" optiline="" tihedus;="" pbs,="" fosfaatpuhverdatud="" soolalahus;="" rca-i,="" ricinus="" communis="" aglutiniin-i;="" sna,="" sambucus="" nigra="">

Joonis 4|CpG-oligodeoksünukleotiidi (ODN) või proliferatsiooni indutseeriva ligandi (APRIL) lisamise mõju inimese IgA1-eritavatele rakuliinidele IgA1, galaktoosipuuduliku IgA1 (Gd-IgA1) ja interleukiini (IL){{ 9}} toodang. (a) CpG-ODN lisamine suurendas IL-6 tootmist. CpG-ODN suurendas APRIL-i geeniekspressiooni. Western blot analüüs näitas, et CpG-ODN suurendas APRIL-i valgu taset. Tulemusi hinnati densitomeetriliselt. Stimuleerimine CpG-ODN-ga kutsus esile IgA ja Gd-IgA1 tootmise. (b) APRILI väike, segav RNA (siRNA) knockdown vähendas IL-6-indutseeritud IgA ja Gd-IgA1 ületootmist. (c) IgA{{2{{30}}}}rekombinantse APRIL-iga stimuleeritud rakud tootsid rohkem IgA ja Gd-IgA1. (d) IgA1-sekreteerivaid rakke inkubeeriti pärast CpG-ODN stimuleerimist anti-IL-6 antikehaga. CpG-ODN-i poolt indutseeritud IgA ja Gd-IgA1 suurenenud produktsioon vähenes anti-IL-6 antikeha ja APRIL-i siRNA knockdowniga. Tulbad ¼ keskmine ± SEM. *P < 0,05,="" **p="">< 0,01.="" gadph,="" glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaas;="" pbs,="" fosfaatpuhverdatud="">

Hindasime mehhanismi, mille abil TLR9 aktiveerimine vahendas aberrantselt glükosüülitud IgA suurenenud tootmist. BAFF ja APRIL on tuntud oma rollide poolest B-rakkude ellujäämises ja diferentseerumises. McCarthy et al.33 näitasid, et BAFF-i üleekspresseerivatel transgeensetel hiirtel tekivad mesangiaalsed IgA ladestused koos neerukahjustuse ja kuseteede kõrvalekalletega.33 Hiljuti näitasime, et APRIL-i geeniekspressioon on kõrgem IgAN-iga patsientide mandlite idukeskustes. Lisaks korreleerus APRIL-i üleekspressioon mandlite idukeskustes seerumi Gd-IgA1 taseme ja haiguse raskusastmega IgAN-iga patsientidel.34 Need leiud viitavad sellele, et nii BAFF kui ka APRIL võivad olla seotud IgAN-i patogeneesiga. Seos BAFF / APRIL ja TLR9 aktiveerimise vahel on aga ebaselge. Käesolevas uuringus suurendas TLR9 aktiveerimine APRIL-i geeniekspressiooni ja seerumi taset. Aberrantselt glükosüülitud IgA seerumitasemed korreleerusid BAFF-i ja APRIL-i ekspressioonitasemetega splenotsüütides. Kuid IgG-IgA IC seerumitasemed korreleerusid APRIL-i, kuid mitte BAFF-i ekspressioonitasemetega. Lisaks seostati APRIL-i seerumitasemeid TLR{12}}aktiveeritud hiirtel ebanormaalselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC ületootmisega. IgA{13}}sekreteerivates rakkudes kutsus TLR9 aktiveerimine APRIL-i kaudu esile ka Gd-IgA1 ületootmise. Need tulemused viitasid sellele, et APRIL mängib olulist rolli TLR{18}}indutseeritud nefritogeense IgA üleproduktsioonis ja IgG-IgA IC moodustumisel.

Tuleks selgitada vastust rakutüübi järgi B- ja T-rakkude ning DC-de rolli määramiseks. Käesolevas uuringus hindasime B-rakkude ja plasmatsütoidsete DC-de rolli. TLR9 ekspresseerivad DC-d, B-rakud ja makrofaagid, kuid mitte T-rakud.35–37 BAFF/APRIL-i panus T-rakkudest sõltumatusse antikehavastust on teada.38,39 Siin testisime, kas TLR9 aktiveerimine võib suurendada antikehade sünteesi. aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC moodustumine APRIL-i kaudu T-rakkudest sõltumatul viisil. Kasutasime ka kloonitud inimese IgA1- sekreteerivaid rakuliine ja näitasime, et TLR9 aktiveerimine suurendas Gd-IgA1 tootmist APRIL-i ja IL-6 kaudu, mis viitab sellele, et protsess on T-rakkudest sõltumatu. Lisaks hindasime B-rakkude ja DC-de rolli. Näitasime, et B-rakkude ja DC-de suhtes spetsiifiline CpG-ODN suurendas aberrantselt glükosüülitud IgA tootmist tervetes splenotsüütides. Lisaks uurisime, kas CpG-ODN stimulatsioon in vitro võib suurendada IgA tootmist. Eraldatud B-rakkude CpG-ODN stimulatsioon kutsus esile IgA ületootmise. Lisaks suurendas CpG-ODN oluliselt IgA tootmist, kui B-rakke kasvatati koos DC-dega (täiendav joonis S1). Need tulemused viitavad sellele, et CpG-ODN aktiveerimine annab suurema tulemuseIgA tootmine ja ebanormaalne glükosüüliminevahendab TLR9 T-rakkudest sõltumatul viisil.

On teada, et IL-6 võimendab immunoglobuliini tootvate rakkude proliferatsiooni ja plasmarakkude terminaalset diferentseerumist.40–42 Lisaks võib IL-6 olla ka esmane tsütokiin T-folliikulite abistajarakkude diferentseerumisel. .43,44 T-folliikulite abistajarakud on olulised B-rakkude afiinsuse küpsemiseks, klassilüliti rekombinatsiooniks ning mälu B-rakkude ja plasmarakkude genereerimiseks idukeskuses.43,44 Luupushiire mudelis on IL-6 defitsiit takistas T-folliikulite abistajarakkude diferentseerumist ja idukeskuse B-rakkude laienemist, mille tulemusena vähenes autoantikehade tootmine.45 Käesolev uuring selgitas, et TLR9 aktiveerimine CpG-ODN poolt suurendas IL-6 tootmist hiire IgAN-i splenotsüütides. IL-6 indutseeris IgAN-i hiiremudelis aberrantselt glükosüülitud IgA ja IgG-IgA IC üleproduktsiooni. Inimese IgA1-sekreteerivates rakkudes kinnitasime, et IL-6 suurendas Gd-IgA1 tootmist.24 Meie tulemused näitavad, et IL-6 võib olla üks peamisi molekule, mis kutsub esile nefritogeense IgA ületootmise. vahendab TLR9 aktiveerimine.

APRIL mängib olulist rolli IgA-klassi vahetamisel ja plasmatsütoidide diferentseerumisel.46,47 IL-6 soodustab B-rakkude terminaalset diferentseerumist IgA-d sekreteerivateks plasmarakkudeks.41,42 Käesolev uuring näitas, et IL{{7} } stimulatsioon kutsus esile APRIL-i tootmise. Seejärel püstitasime hüpoteesi, et APRIL-i ja IL-6 vahel on seos, mida vahendab TLR9 aktiveerimine, mis indutseeris ebanormaalselt glükosüülitud IgA tootmist. Leidsime, et IL-6-neutraliseeriv antikeha ei blokeerinud täielikult CpG-ODN-indutseeritud Gd-IgA1 ületootmist ja APRIL-i siRNA-st pärssimine vähendas IL-6 poolt indutseeritud Gd-IgA1 ületootmist. Need andmed viitasid sellele, et APRIL ja IL{17}} soodustasid sünergistlikult Gd-IgA1 tootmist, mida vahendas TLR9 aktiveerimine. Lisaks vähendasid nii IL-6-neutraliseeriv antikeha kui ka APRIL-i siRNA-d pärssimine IgA ja Gd-IgA1 tootmist rohkem kui IL-6-neutraliseeriv antikeha üksi. Seega hõlmab TLR9 aktivatsioonirada IL-6 ja APRIL-i sünergistlikku toimet antikehade tootmisele ja glükosüülimisele (joonis 5). Hiljutised uuringud on samuti näidanud, et IL-6 kombinatsioonis APRIL-iga indutseeris plasmarakkude teket ja ellujäämist.48,49 Siiski on vaja tulevasi uuringuid, et selgitada rakkudevahelisi signaaliülekandeteid APRIL-i ja IL-i -6 vahel. nefritogeense IgA tootmine.

cistanchejaoksneerudinfektsioon

Kokkuvõtteks,TLR9 aktiveeriminesüvendas neerukahjustust hiire IgAN mudelis, suurendades aberrantselt glükosüülitud IgA tootmist ja IgG-IgA IC moodustumist. Selles protsessis suurendas TLR9 aktivatsioonist põhjustatud APRIL-i ja IL-6 ületootmine nefritogeense IgA tootmist. Lisaks selgitas käesolev uuring, et APRIL ja IL-6 toimivad sünergistlikult ja ka sõltumatult, tekitades ebanormaalselt glükosüülitud IgA. Need leiud võivad anda teavet IgAN-i uute terapeutiliste lähenemisviiside edasise väljatöötamise kohta.

Joonis 5|Sünergistlik roll Toll-sarnase retseptori 9 (TLR9), proliferatsiooni indutseeriva ligandi (APRIL) ja interleukiini (IL) -6 vahel IgA-d tootvates rakkudes IgA nefropaatia (IgAN) korral. TLR9 aktiveerimine kutsus esile APRIL-i ja IL-6 tootmise, mille tulemuseks oli

aberrantselt glükosüülitud IgA ületootmine. APRIL ja IL-6 toimivad sünergistlikult, soodustades aberrantselt glükosüülitud IgA teket. Lisaks sellele, et APRIL indutseerib IL-6 tootmist, nagu varem teatati, võib IL-6 tõhustada ka APRIL-i sünteesi. Lisaks soodustavad APRIL ja IL-6 sõltumatult aberrantselt glükosüülitud IgA tootmist. NF-kB, tuumafaktor-kB.

MEETODID

Loomad ja katseprotokollid

IgAN-ile kalduv ddY hiir on tuntud spontaanse IgAN-i mudel, millel on erinev glomerulaarkahjustuse esinemissagedus ja ulatus, mis jäljendab inimese IgAN-i.10 ddY hiired jagatakse 3 rühma vastavaltneerukahjustus: hiired varajase või hilise algusega ja rahuolekus olevate hiirtega. Varajase algusega haigus ddY hiirtel ilmneb proteinuuria ja glomerulaarsete IgA ladestumisega pärast 20 nädala vanust.13 Seetõttu kasutasime 18 nädala vanuseid ddY hiiri, et hinnata, kas TLR9 aktiveerimine süvendas selles mudelis IgAN-i. Kokku 30 emast ddY hiirt (SLC Jaapan, Shizuoka, Jaapan) peeti Jaapanis Tokyos asuvas Juntendo ülikooli loomakasvatusasutuses. Hiirtele toideti tavalist toitu (Oriental Yeast Co., Tokyo, Jaapan) ja vett ad libitum ning neid hoiti spetsiifilises patogeenivabas ruumis. Katseprotokolli kiitis heaks Juntendo ülikooli arstiteaduskonna loomkatsete eetikakomitee. 6 nädala vanuselt jagati hiired juhuslikult 2 rühma. Üks rühm sai CpG-ODN-i süstituna ip 3 korda nädalas 12 nädala jooksul; teisele rühmale (kontroll) süstiti mitte-CpG-ODN-i. CpG-ODN ja mitte-CpG-ODN sünteesiti keemiliselt (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Kanagawa, Jaapan). ODN-i järjestused on vastavalt TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCCG või TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCC (50/30) CpG või mitte-CpG ODN-ide jaoks.

IgA, IgG, IgG-IgA IC ja aberrantselt glükosüülitud IgA määramine hiire seerumis

Vereproovid koguti põseveenist. Seerumi IgA, IgG ja IgG-IgA IC mõõdeti sandwich-ensüümiga seotud immunosorbenttestiga (ELISA; Bethyl Laboratories, Montgomery, TX), kasutades meie eelmisel aruandel põhinevat modifitseeritud meetodit.50 Lektiini sidumise testid olid kasutatakse juurdepääsuks IgA glükovormile. Selles testis kasutati biotinüülitud RCA-I (Vector Laboratories, Burlingame, CA) ja Sambucus nigra koorektiini (Vector Laboratories), mis tuvastasid vastavalt galaktoosi ja galaktoosiga seotud siaalhappe (peamiselt a2,6 sidemega).51 Lahjendatud seerumid. lisati 100 ng IgA süvendi kohta. Mikrotiiterplaate, mis olid kaetud 1 mg/ml kitse hiirevastase IgA-ga (100 ml süvendi kohta) seerumi IgA kvantifitseerimiseks, inkubeeriti nende proovidega ja seejärel lisati biotinüülitud Sambucus nigra aglutiniin või RCA-I. Kasutati avidiini-mädarõika peroksidaasi konjugaati (ExtrAvidin; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Aberrantselt glükosüülitud seotud IgA tasemed seerumis väljendati ühikutes (1 ühik optilise tihedusena 1,0, mõõdetuna 490 nm juures). APRIL-i ja BAFF-i seerumitasemeid mõõdeti hiire APRIL ELISA komplekti (MyBioSource, San Diego, CA) ja hiire BAFF ELISA komplekti (R&D Systems, Minneapolis, MN) abil vastavalt tootja protokollidele.

Inimese IgA{2}}sekreteerivate rakkude poolt toodetud Gd-IgA1 analüüs

Gd-IgA1 kihiline ELISA konstrueeriti, kasutades Gd-IgA1-spetsiifilist antikeha (IBL, Jaapan).52 Gd-IgA1-spetsiifiline antikeha (7,5 mg/ml), mis oli lahjendatud fosfaatpuhverdatud soolalahusega, kaeti ELISA plaadile 18 ug. tundi toatemperatuuril. Proovid kanti ja inkubeeriti 2 tundi toatemperatuuril. Plaate pesti ja inkubeeriti 2 tundi toatemperatuuril 1:1000- lahjendatud mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud hiire anti-inimese IgA1 a1-ahelaspetsiifilise monoklonaalse antikehaga (Southern Biotech, Birmingham, AL). Pärast pesemist töötati plaadid välja SIG-MAFAST o-fenüleendiamiini lahusega (Sigma-Aldrich) ja reaktsioon peatati 1 M väävelhappe lisamisega (Wako, Osaka, Jaapan). Gd-IgA1 tasemed ekstrapoleeriti optilise tiheduse standardkõvera (4-parameetri logistilise kõvera sobivus) alusel 490 nm juures ja väljendati ühikutes. Ensümaatiliselt genereeritud Gd-IgA1 inimese plasmast IgA152 lahjendati seeriaviisiliselt (1,37–1000 ng/ml), et saada standardkõver. Selles uuringus määratleti 1 ühik kui 1 ng/ml standardset Gd-IgA1.52.

Neerukahjustuse hindamine ddY hiirtel

Neerudwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >50 protsenti 20 glomeruli).13,53,54 Iga sektsiooni maksimaalne punktisumma oli 9. Immunofluorestsentsi jaoks võetud neeruproovid sukeldati optimaalse lõiketemperatuuri segusse (Sakura Finetek Japan Co., Tokyo, Jaapan) ja säilitati –80 kraadi juures. Proovid lõigati 3-mm paksusteks osadeks, fikseeriti atsetooniga –20 kraadi juures 5 minutiks, pesti fosfaatpuhverdatud soolalahusega, blokeeriti blokeeriva ainega (DS Pharma Biomedical Co., Osaka, Jaapan) toatemperatuuril 30 minutit ja seejärel inkubeeriti toatemperatuuril 2 tundi järgmiste primaarsete antikehadega: kitse hiirevastane IgA, Alexa konjugeeritud kitse hiirevastane IgG ja roti anti-C3 (Bethyl Laboratories). Pärast veel 3 pesemist fosfaatpuhverdatud soolalahusega paigaldati alusklaasid paigaldusainega (Dako, Tokyo, Jaapan). Proove analüüsiti ja pildistati konfokaalse lasermikroskoopia abil (Olympus Corporation, Tokyo, Jaapan).

Reaalajas kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon

Põrnarakkude RNA ekstraheeriti Torizoli lahuse abil (Invitrogen, Tokyo, Jaapan) ja puhastati RNeasy Mini Kitiga (74106; Qiagen, Valencia, CA). Reaalajas kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon viidi läbi, kasutades Applied Biosystems 7500 Real-Time polümeraasi ahelreaktsiooni süsteemi, kasutades SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Tokyo, Jaapan) ja spetsiifilisi praimereid: hiire TLR9 päripraimer TCTCCCAACATGGTTCTCCGTCG, pöördpraimer TATGCCCAGTCCGATGCCCAGT; hiire MyD88 päripraimer GCACCTGTGTCTGGTCCATT, pöördpraimer CTGTTGGA CACCTGGAGACA; ja majapidamisgeen glütseraldehüüd{6}}fosfaatdehüdrogenaasi päripraimer CATTGTGGAAG GGCTCATGA, pöördpraimer TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. Amplifikatsioonitingimused olid järgmised: eelkuumutamine 95 kraadi juures 20 sekundit ja seejärel 40 denatureerimistsüklit 95 kraadi juures 3 sekundit ning lõõmutamine ja pikendamine 60 kraadi juures 30 sekundit. APRIL-i, Hs00601664_g1, Mm03809849-s1 ja BAFF, Mm01168134-m1 praimeri jaoks osteti Homo sapiens-spetsiifilised TaqMani geeniekspressiooni testid (Life Technologies, Carlsbad, CA). . TaqMani polümeraasi ahelreaktsiooni tsüklitingimused olid järgmised: eelkuumutamine 95 kraadi juures 20 sekundit ja seejärel 40 denatureerimistsüklit 95 kraadi juures 3 sekundit ning lõõmutamine ja pikendamine 60 kraadi juures 30 sekundit.

In vitro uuringud ddY hiirte splenotsüütidega

Splenotsüüte kasvatati Roswell Park Memorial Institute-1640 söötmes, millele oli lisatud 20 protsenti vasika loote seerumit, 100 mg/ml streptomütsiini ja 100 U/ml penitsilliini. Punaseid vereliblesid lüüsiti punaste vereliblede lüüsipuhvris (R7757; Sigma-Aldrich) toatemperatuuril 1 minut, millele järgnes pesemine Roswell Park Memorial Institute-1640 söötmes.50 Rakukultuure hoiti niisutatud inkubaatoris 37 kraadi juures. 5 protsenti CO2. TLR9 ligandina kasutati C-klassi CpG-ODN-i (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG). Rekombinantne IL-6, anti-IL-6 antikeha ja roti IgG1 isotüübi kontroll saadi ettevõttelt R&D Systems. Rakke kultiveeriti CpG-ODN söötme või soovitatud kontsentratsiooniga, 10 ng/ml rekombinantse IL{19}} ja 100 ng/ml anti-IL6 antikehaga. Splenotsüütide poolt toodetud IgA, aberrantselt glükosüülitud IgA, IgG-IgA IC ja APRIL mõõdeti ELISA abil pärast 72-tunnist inkubeerimist in vitro.

In vitro uuringud inimese IgA{0}}sekreteerivate rakuliinidega

Terve inimese verest pärit B-rakud immortaliseeriti Epstein-Barri viirusega, subklooniti IgA1-sekreteerivate rakuliinide saamiseks ja kultiveeriti vastavalt kirjeldusele.9 Lisaks kinnitasime APRIL/BAFF ja IL retseptorite ekspressiooni. -6. Rakke kultiveeriti Roswell Park Memorial Institute-1640 söötmes, millele oli lisatud 20 protsenti vasika loote seerumit, streptomütsiini ja penitsilliini, niisutatud inkubaatoris 37 kraadi juures 5 protsenti CO2-ga. TLR9 ligandina kasutati B-klassi CpG-ODN-i (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT). Rekombinantne IL-6, rekombinantne APRIL, anti-IL-6 antikeha ja kitse IgG kontrollantikeha saadi ettevõttelt R&D Systems. Rakke kultiveeriti 72 tundi söötme või soovitatava kontsentratsiooniga CpG-ODN, 50 ng/ml rekombinantse IL-6, 40 ng/ml rekombinantse APRIL-i ja 100 ng/ml anti-IL{18}} antikehaga.

Western blotting

Supernatandid IgA{0}}sekreteerivatest rakkudest eraldati naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidgeelelektroforeesiga redutseerivates tingimustes, kasutades 5–15-protsendilisi gradientplaatgeele. Geelid kanti üle polüvinülideendifluoriidmembraanidele ja inkubeeriti APRIL-i (Abcam Inc., Cambridge, MA) ja glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaasi (Abcam Inc) spetsiifiliste antikehadega. Blotid visualiseeriti kemoluminestsentsi abil, kasutades täiustatud kemoluminestsentsi (GE Healthcare, Tokyo, Jaapan) ja luminestsentsi detektorit (Konica Minolta Healthcare, Tokyo, Jaapan). Tulemusi hinnati densitomeetriliselt.

APRILL siRNA knockdown

Inimese IgA{0}}sekreteerivaid rakke kultiveeriti 24-süvendiga kultiveerimisplaatidel ja transfekteeriti APRIL-spetsiifilise siRNA-ga (GS8741, Qiagen) või siRNA mittesihtmärgiga kontrolliga (GS10673, Qiagen), kasutades transfektsiooniprotokolli vastavalt tootja juhistele. . Pärast 24-tunnist inkubeerimist inkubeeriti rakke 50 ng/ml rekombinantse IL-6-ga (R&D Systems) 72 tundi. Pärast inkubeerimist koguti rakud ja supernatandid IgA ja Gd-IgA1 mõõtmiseks.

Statistiline analüüs

Erinevate parameetrite vahelist korrelatsiooni analüüsiti dispersioonanalüüsi abil. Andmed väljendati keskmiste ± SD või mediaanväärtustena. P väärtused < {{0}},05="" loeti="" statistiliselt="" oluliseks.="" kõik="" statistilised="" analüüsid="" viidi="" läbi="" graphpad="" prism="" versiooniga="" 6.0="" windowsi="" jaoks="" (graphpad="" software,="" san="" diego,="">

cistanchejaoksneerudhaiguse sümptomid

AVALIKUSTAMINE

Kõik autorid ei deklareerinud konkureerivaid huve.

TUNNUSTUS

Seda uuringut toetasid osaliselt JSPS KAKENHI toetus nr 18K08252 ja Jaapani Meditsiiniuuringute ja Arendusagentuuri AMED praktiline neeruhaiguste uurimisprojekt. JN-i ja BAJ-i toetasid osaliselt riiklike tervishoiuinstituutide stipendiumid DK078244 ja DK082753. Täname pr Terumi Shibatat suurepärase tehnilise abi eest. Samuti täname pr Takako Ikegamit ja pr Tomomi Ikedat (Juntendo ülikooli meditsiinikooli molekulaar- ja biokeemiliste uuringute osakond) ja pr Tamami Sakanishit (Juntendo ülikooli meditsiinikooli rakubioloogia osakond) suurepärase tehnilise abi eest .

LISAMATERJAL

Täiendav fail (PDF)

Joonis S1. CpG-oligodeoksünukleotiidi (ODN) aktiveeritud B-rakud ja dendriitrakud (DC-d) suurendavad veelgi IgA tootmist. B-rakud ja DC-d eraldati ddY hiirte põrnadest. CpG-ODN stimulatsioon suurendas IgA tootmist isoleeritud B-rakkudes. Seda suurenemist suurendas veelgi B-rakkude kultiveerimine DC-dega. *P < 0.05.="" üksikasjalikud="" meetodid="" on="" esitatud="" lisameetodites.="" täiendavad="">

VIITED

1. Myette JR, Kano T, Suzuki H jt. Proliferatsiooni indutseeriva ligandi (APRIL) suunatud antikeha on hiire IgA nefropaatia ohutu ja tõhus ravi. Kidney Int. 2019;96:104–116.

2. Levy M, Berger J. IgA nefropaatia ülemaailmne perspektiiv. Olen J Kidney Dis. 1988;12:340–347.

3. D'Amico G. Kõige tavalisem glomerulonefriit maailmas: IgA nefropaatia. QJ Med. 1987; 64:709–727.

4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE jt. IgA süsteemi järjestikune uuring retsidiveeruva IgA nefropaatia korral. Kidney Int. 1986;30:924–931.

5. Wyatt RJ, Julian BA. IgA nefropaatia. N Engl J Med. 2013;368:2402–2414.

6. Suzuki H, Yasutake J, Makita Y jt. IgA nefropaatial ja IgA vaskuliidil koos nefriidiga on ühine tunnus, mis hõlmab galaktoosipuuduliku IgA1- orienteeritud patogeneesi. Kidney Int. 2018;93:700–705.

7. Klaassokk RJ. Antikehade aktiivsuse analüüs IgA nefropaatia korral. J Clin Invest. 2009;119:1450–1452.

8. Moldoveanu Z, Wyatt RJ, Lee JY jt. IgA nefropaatiaga patsientidel on suurenenud seerumi galaktoosi puudulikkusega IgA1 tase. Kidney Int. 2007;71: 1148–1154.

9. Suzuki H, Moldoveanu Z, Hall S et al. IgA1-sekreteerivad rakuliinid IgA nefropaatiaga patsientidelt toodavad ebanormaalselt glükosüülitud IgA1. J Clin Invest. 2008;118:629–639.

10. Imai H, Nakamoto Y, Asakura K jt. Spontaanne glomerulaarne IgA ladestumine ddY hiirtel: IgA nefriidi loommudel. Kidney Int. 1985; 27:756–761.

11. Okazaki K, Suzuki Y, Otsuji M jt. Varajase algusega IgA nefropaatia mudeli väljatöötamine. J Am Soc Nephrol. 2012; 23:1364–1374.

12. Nishie T, Miyaishi O, Azuma H jt. Immunoglobuliin A nefropaatia-sarnane haigus beeta-1,4-galaktosüültransferaas-I puudulikkusega hiirtel. Olen J Pathol. 2007;170:447–456.

13. Suzuki H, Suzuki Y, Yamanaka T jt. Uudse IgA nefropaatia mudeli genoomi hõlmav skaneerimine tuvastab tundlikkuse lookuse hiire 10. kromosoomis, inimese IGAN1-ga sünteetilises piirkonnas kromosoomil 6q22-23. J Am Soc Nephrol. 2005;16:1289–1299.

14. Takei T, Iida A, Nitta K jt. Seos ühe nukleotiidi polümorfismide vahel selektiini geenides ja immunoglobuliin A nefropaatia vahel. Olen J Hum Genet. 2002;70:781–786.

15. Gharavi AG, Yan Y, Scolari F jt. IgA nefropaatia, mis on kõige levinum glomerulonefriidi põhjus, on seotud 6q22-23-ga. Nat Genet. 2000;26:354–357.

16. Suzuki H, Suzuki Y, Narita I jt. Toll-like retseptor 9 mõjutab IgA nefropaatia raskust. J Am Soc Nephrol. 2008;19:2384–2395.

17. Nakata J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. Nefritogeense seerumi galaktoosipuuduliku IgA1 muutused IgA nefropaatias pärast tonsillektoomiat ja steroidravi. PLoS One. 2014;9:e89707.

18. Sato D, Suzuki Y, Kano T jt. Tonsillaarne TLR9 ekspressioon ja tonsillektoomia efektiivsus steroidimpulssraviga IgA nefropaatia patsientidel. Nephrol Dial siirdamine. 2012;27:1090–1097.

19. Coppo R, Camilla R, Amore A jt. Immunoglobuliin A nefropaatiaga patsientide tsirkuleerivates mononukleaarsetes rakkudes on 4. teemaksulaadse retseptori ekspressioon suurenenud. Clin Exp Immunol. 2010;159:73–81.

20. Maiguma M, Suzuki Y, Suzuki H jt. Toiduga saadav tsink on IgA nefropaatia progresseerumisel peamine keskkonnamuutja. PLoS One. 2014;9: e90558.

21. Kawai T, Akira S. Signaling to NF-kappaB by Toll-like receptors. Trends Mol Med. 2007;13:460–469.

22. Kuwata H, Matsumoto M, Atarashi K jt. IkappaBNS inhibeerib Toll-tüüpi retseptorist sõltuvate geenide alamhulga esilekutsumist ja piirab põletikku. Immuunsus. 2006;24:41–51.

23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G jt. Seerumi põletikueelsete tsütokiinide ja nende lahustuvate retseptorite tasakaalustamatus: oletatav roll idiopaatilise IgA nefropaatia (IgAN) ja Henoch Schönleini purpura nefriidi progresseerumisel ning immunoglobuliiniravi potentsiaalne sihtmärk? Clin Exp Immunol. 1998;114:468–476.

24. Suzuki H, Raska M, Yamada K jt. Tsütokiinid muudavad IgA1 O-glükosüülimist, reguleerides C1GalT1 ja ST6GalNAc-II ensüüme. J Biol Chem. 2014;289:5330–5339.

25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M jt. STAT3 signaaliülekande pärssimine vähendab IgA1 autoantigeeni tootmist IgA nefropaatia korral. Kidney Int Rep. 2017;2:1194–1207.

26. Schneider P, MacKay F, Steiner V jt. BAFF, kasvaja nekroosifaktorite perekonna uus ligand, stimuleerib B-rakkude kasvu. J Exp Med. 1999;189: 1747–1756.

27. Kiryluk K, Li Y, Scolari F jt. IgA nefropaatia uute riski lookuste avastamine hõlmab geene, mis on seotud soolepatogeenide vastase immuunsusega. Nat Genet. 2014;46:1187–1196.

28. Han SS, Yang SH, Choi M jt. TNF superperekonna liikme 13 roll IgA nefropaatia progresseerumisel. J Am Soc Nephrol. 2016;27:3430–3439.

29. Hiki Y, Odani H, Takahashi M jt. Massispektromeetria tõestab glomerulaarse IgA1 glükosüülimist IgA nefropaatias. Kidney Int. 2001;59: 1077–1085.

30. Allen AC, Bailey EM, Brenchley PE jt. Mesangiaalne IgA1 IgA nefropaatias näitab kõrvalekalduvat O-glükosüülimist: tähelepanekud kolmel patsiendil. Kidney Int. 2001;60:969–973.

31. Hiki Y. IgA1 hingepiirkonna O-seotud oligosahhariidid: selle ebanormaalse struktuuri roll IgA nefropaatia esinemisel ja/või progresseerumisel. Clin Exp Nephrol. 2009;13:415–423.

32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z jt. IgA1 molekulide ebanormaalse glükosüülimise roll IgA nefropaatia patogeneesis. Kidney Blood Press Res. 2008;31:29–37.

33. McCarthy DD, Kujawa J, Wilson C jt. BAFF-i üleekspresseerivatel hiirtel tekib kommensaalne flfloorast sõltuv IgA-ga seotud nefropaatia. J Clin Invest. 2011;121:3991–4002.

34. Muto M, Manfroi B, Suzuki H jt. Toll-like retseptori 9 stimulatsioon kutsub IgA nefropaatias esile proliferatsiooni indutseeriva ligandi ebanormaalse ekspressiooni mandlite idukeskuse B-rakkude poolt. J Am Soc Nephrol. 2017;28:1227–1238.

35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A jt. TLR9 signaalid pärast translokatsiooni ER-st CpG DNA-sse lüsosoomis. Nat Immunol. 2004; 5:190–198.

36. Hornung V, Rothenfusser S, Britsch S et al. Tollilaadse retseptori 1-10 mRNA kvantitatiivne ekspressioon inimese perifeerse vere mononukleaarsete rakkude alamrühmades ja tundlikkus CpG oligodeoksünukleotiidide suhtes. J Immunol. 2002;168:4531–4537.

37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S jt. Inimese dendriitrakkude prekursorite alamhulgad ekspresseerivad erinevaid teemaksutaolisi retseptoreid ja reageerivad erinevatele mikroobsetele antigeenidele. J Exp Med. 2001;194:863–869.

38. He B, Xu W, Santini PA jt. Soolebakterid käivitavad T-rakkudest sõltumatu immunoglobuliini A(2) klassi ülemineku, kutsudes esile tsütokiini APRIL epiteelirakkude sekretsiooni. Immuunsus. 2007;26:812–826.

39. Mackay F, Schneider P. BAFF-koodi purustamine. Nat Rev Immunol. 2009;9: 491–502.

40. Kunimoto DY, Nordan RP, Strober W. IL-6 on IL-1 võimas kofaktor IgM sünteesis ja IL-5 IgA sünteesis. J Immunol. 1989;143:2230–2235.

41. Beagley KW, Eldridge JH, Lee F jt. Interleukiinide ja IgA süntees. Inimese ja hiire interleukiin 6 indutseerib IgA-ga seotud B-rakkudes suure IgA sekretsiooni. J Exp Med. 1989;169:2133–2148.

42. Ramsay AJ, abikaasa AJ, Ramshaw IA jt. Interleukiini-6 roll limaskestade IgA antikehade vastustes in vivo. Teadus. 1994; 264:561–563.

43. Nurieva RI, Chung Y, Martinez GJ jt. Bcl6 vahendab T-folliikulite abistajarakkude arengut. Teadus. 2009;325:1001–1005.

44. Poholek AC, Hansen K, Hernandez SG jt. Bcl6 ja T folliikulite abistajarakkude arengu in vivo reguleerimine. J Immunol. 2010;185: 313–326.

45. Jain S, Park G, Sproule TJ jt. Interleukiin 6 kiirendab suremust, soodustades BXSB.Yaa hiirte süsteemse erütematoosluupuselaadse haiguse progresseerumist. PLoS One. 2016;11:e0153059.

46. ​​Litinskiy MB, Nardelli B, Hilbert DM jt. DC-d kutsuvad esile CD40-sõltumatu immunoglobuliiniklassi ülemineku BLyS-i ja APRIL-i kaudu. Nat Immunol. 2002;3:822–829.

47. Castigli E, Wilson SA, Scott S et al. TACI ja BAFF-R vahendavad isotüübi vahetamist B-rakkudes. J Exp Med. 2005;201:35–39.

48. Jourdan M, Chen M, Robert N jt. IL-6 toetab inimese pikaealiste plasmarakkude teket koos APRIL-i või stroomarakkudes lahustuvate faktoritega. Leukeemia. 2014;28:1647–1656.

49. Chu VT, Fröhlich A, Steinhauser G jt. Eosinofiilid on vajalikud plasmarakkude säilitamiseks luuüdis. Nat Immunol. 2011;12: 151–159.

50. Suzuki H, Suzuki Y, Aizawa M jt. Th1 polarisatsioon hiire IgA nefropaatias, mida juhivad luuüdist pärinevad rakud. Kidney Int. 2007;72: 319–327.

51. Chintalacharuvu SR, Emancipator SN. Hiire B-rakkude poolt toodetud IgA glükosüülimist muudavad Th2 tsütokiinid. J Immunol. 1997;159:2327–2333.

52. Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H jt. Uudne lektiinist sõltumatu lähenemisviis galaktoosipuuduliku IgA1 tuvastamiseks IgA nefropaatias. Nephrol Dial siirdamine. 2015;30:1315–1321.

53. Katafuchi R, Kiyoshi Y, Oh Y jt. Glomerulaarskoor IgA nefropaatia prognoosijana: selle kasulikkus ja piirang. Clin Nephrol. 1998;49:1–8.

54. Ballardie FW, Roberts IS. Kontrollitud prospektiivne uuring prednisolooni ja tsütotoksiliste ainete kohta progresseeruva IgA nefropaatia korral. J Am Soc Nephrol. 2002;13: 142–148.