Elaeagnus Umbellata fraktsioonide pärssiv toime melanogeneesile -MSH-stimuleeritud B16-F10 melanoomirakkudes

Abstraktne:

Kui nahk puutub kokku UV-kiirgusega, toodavad melanotsüüdid melaniini. Liigne melaniini tootmine toob kaasa naha pigmentatsiooni, mis põhjustab erinevaid kosmeetilisi ja terviseprobleeme. Seetõttu on vaja välja töötada ohutud looduslikud ravimid, mis pärsivad melaniini tootmist. Elaeagnus umbellata (EL) on pikka aega olnud laialdaselt kasutusel rahvapärase ravimtaimena, kuna selle farmakoloogilised omadused hõlmavad haavandivastaseid, antioksüdantseid ja põletikuvastaseid omadusi.

Selles uuringus uurisime EL-i fraktsioonide antioksüdantset aktiivsust ja melanogeneesi inhibeerivat toimet B16-F10 melanoomirakkudes. EL-i fraktsioonid näitasid annusest sõltuvat antioksüdantide aktiivsuse suurenemist radikaalide eemaldamise aktiivsuses. Lisaks hindasime EL-i fraktsioonide mõju türosinaasi aktiivsusele ja melanogeneesile melanotsüüte stimuleeriva hormooni poolt indutseeritud B16-F10 melanoomirakkudes. EU oli mittetsütotoksiline kontsentratsioonis 12,5–50 µg/ml. EU fraktsioonid pärssisid tõhusalt türosinaasi aktiivsust ja melanogeneesi, pärssisid melanogeneesi rajas osalevate CREB ja ERK fosforüülimist ning vähendasid melanogeneesiga seotud valkude ekspressiooni. Huvitaval kombel oli melanogeneesivastane toime kõige tõhusam kontsentratsioonil 50 µg/mL EU ja fraktsioonide mõju oli parem kui ekstraktil. Seetõttu viitab meie uuring sellele, et ELil on potentsiaali ohutuks raviks liigse pigmentatsiooni korral või kosmeetikatoodete loodusliku koostisosana.

Inimese naha ja uute rakkude kasvutempo meie kehas aeglustub, naha ainevahetus aeglustub, vananevad rakud ei saa õigeaegselt ja sujuvalt metaboliseerida ning melaniinil on raske kaduda. Koos looduslike niisutavate tegurite järkjärgulise kadumisega naha pinnal pakseneb ja kuhjub sarvkiht, suureneb melaniinisisaldus ning nahale tekivad järk-järgult tuhmid tumedad laigud. Olenemata sellest, kui palju valgendavaid nahahooldustooteid kasutatakse, on nahka raske imenduda. Seetõttu leidsime oma uurimistöö käigus, et Cistanche tubulosa funktsionaalse koostisosa Cistanche deserticola totaalsed glükosiidid suudavad tõhusalt eemaldada erinevaid aktiivseid hapniku vabu radikaale (O2·-, OH·, H2O2, 1O2) ja kaitsta nende põhjustatud DNA kahjustuste eest. OH·vabad radikaalid ja Cistanche deserticola polüsahhariidid võivad aeglustada elundite füsioloogilist degeneratsiooni ja rakkude morfoloogilist transformatsiooni. Ülaltoodud koostisosadel võib olla antioksüdatiivne ja vananemisvastane toime. Samal ajal võib Cistanche deserticola valgendava efekti saavutamiseks pärssida ka türosinaasi aktiivsust.

Click cistanche tubulosa ekstrakti pulbertoode

Märksõnad:

Elaeagnus umbellata; naha valgendamine; antioksüdant; melanogenees; -MSH.

1. Sissejuhatus

Inimeste nahavärv sõltub geneetiliselt esinevate melanosoomide hulgast ja sellest, mil määral need melanosoomid nahas hajuvad, ning seda mõjutab ka päikesevalguse ja keskkonnasaaste [1]. Melaniin on loomades ja taimedes leiduv suure molekulmassiga ühend ning see on oluline pigment, mis määrab inimese silmade, naha ja juuste värvi. Melanogenees viitab melaniini tootmisprotsessile, mis on inimese naha pigmentatsiooni peamine põhjus. Melaniin võib kaitsta nahka kahjuliku UV-kiirguse eest, kuid liigne melaniini tootmine võib põhjustada esteetilisi probleeme, sealhulgas melasmi ja tedretähne, aga ka terviseprobleeme, sealhulgas põletikujärgset hüperpigmentatsiooni [2].

Melaniinil on ülioluline roll naha kaitsmisel erinevate stiimulite eest, nagu UV, reaktiivsed hapniku liigid (ROS) ja melanotsüüte stimuleeriv hormoon (-MSH) [3]. Kui nahk puutub kokku UV-kiirgusega, tekib ROS ja naharakud toodavad liigset melaniini. See tekitatud ROS hävitab ühe- ja kaheahelalise DNA ning ründab valgu- ja lipiidimolekule [4]. Melaniin ja antioksüdantsed ensüümid, nagu peroksidaas, glutatioon ja katalaas, neutraliseerivad tekkinud ROS-i, et säilitada teatud taset [5,6]. Kontrollimatu ülemäärane ROS-i tootmine põhjustab aga mitmesuguseid probleeme, näiteks vähki [7]. Melanotsüüdid asuvad epidermise basaalkihis ja neid moduleerib türosinaas. Need rakud toodavad melaniini melanogeneesi kaudu ja selles protsessis osalevad sellised tegurid nagu mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktor (MITF) ja türosinaasiga seotud valk (TRP{10}}) [8]. Türosinaas osaleb protsessis, mille kaudu L-türosiin muutub 3,4-dihüdroksüfenüülalaniiniks (DOPA), mis seejärel muundatakse dopakinooniks, millest sünteesitakse melaniin. Seetõttu on türosinaas oluline tegur, mis reguleerib naharakkudes melanogeneesi.

Hiljuti on paljud meditsiini- ja kosmeetikatööstused keskendunud türosinaasi aktiivsuse inhibiitoritele [9], et lahendada pigmentatsioonist ja liigsest melanogeneesist põhjustatud pigmendihäired. Nahka valgendavate ainetena kasutatakse mitmesuguseid kemikaale, nagu arbutiin, kojhape, hüdrokinoon ja askorbiinhape, mis on melaniini sünteesi inhibiitorid [10]. Siiski ei tungi need ained läbi naha hästi ja pikemal kasutamisel võivad tekkida kõrvaltoimed, nagu nahaärritus, põletik, sügelus ja pigmentatsioon [11]. Seetõttu on vaja välja töötada tõhusad valgendavad ained, mis suudaksid ohutult ravida ja ennetada inimese naha hüperpigmentatsiooni ilma ärrituseta.

Elaeagnus umbellata (EU) on taim, mis on laialt levinud kogu Aasias ja mida on selle farmakoloogilise toime tõttu pikka aega kasutatud rahvapärase ravimtaimena. Traditsiooniliselt on EL-i õisi ja seemneid kasutatud hingamisteede haiguste, sh südant ja kopse kahjustavate haiguste raviks, lehti aga toonikuna ja soolehaiguste raviks [12,13]. Lisaks kasutatakse EU-d lihasrelaksandina, valuvaigistina, haavandivastase, diabeedivastase ja palavikuvastase ainena [14]. ELi koostisosadel on vähivastane [15], antioksüdant ja põletikuvastane toime [16] ning EL-i ekstrakt mõjutab naha valgendamist ja kortsude paranemist [17]. Siiski ei ole EL-i fraktsioonides okste ja lehtede poolt naha valgendamise mõju uuringuid veel läbi viidud. Seetõttu oli selle uuringu eesmärk jälgida in vitro okstest ja lehtedest pärinevate EL-i fraktsioonide antioksüdantset aktiivsust ja melanogeneesi inhibeerimist melaniini tootvatel hiire B16-F10 melanoomirakkudel ning kinnitada okste ja lehtede potentsiaali. tuletatud EU kosmeetilise nahavalgendajana.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Materjalid ja reaktiivid

2.2. EL ekstrakti ja fraktsioonide ning proovide ettevalmistamine

EL-i oksad ja lehed (1:1) andis Jeonbuki toiduainete biotööstuse instituut (Jeonju, Jeonbuk, Korea). EU (50 g) jahvatati segistiga ja EU pulbreid ekstraheeriti 70 protsendilise etanooliga 24 tundi toatemperatuuril. Lahusti filtriti steriilselt läbi standardsõela (Advantec MFS, Taipei, Taiwan) ja aurustati alandatud rõhul, kasutades rotaatoraurustit (EYELA, N-1110, Tokyo, Jaapan). Ekstrakt lüofiliseeriti, kasutades külmkuivatit (OPERON, FDU-8606, Gimpo, Korea), et eemaldada etanooli jääk ja saada 2,4 g (saagis 4,8 protsenti) EU 70-protsendilise etanooliekstrakti (EUEE) pulbrit. EUEE (2,4 g) suspendeeriti destilleeritud vees ja jaotati etüülatsetaadi (EUEA, 0,19 g) või butanooli (EUBu, 0,91 g) fraktsioonidega. Kõiki ekstrakte ja fraktsioone hoiti kuni kasutamiseni temperatuuril 4 °C.

2.3. Kõrgfektiivne vedelikkromatograafia (HPLC) analüüs

Kromatograafilised analüüsid viidi läbi Elite Lachrom HPLC-DAD süsteemiga, mis oli varustatud UV-detektoriga (Hitachi HighTechnologies Co., Tokyo, Jaapan). Sisestandardi meetodil põhinevaks kvantifitseerimiseks kasutati UV-detektorit lainepikkusel 260 nm ja analüütilist YMC ODS-AM (5 mM, 4,6 × 250 mM) kolonni (Kyoto, Jaapan). Kolonni temperatuur oli 35 °C ja liikuva faasi voolukiirus oli 1 ml/min. Eluendiks oli lahusti (A)=0,1 protsenti äädikhapet vees ja lahusti (B)=0,1 protsenti äädikhapet atsetonitriilis gradient. Tööaeg oli 35 minutit ja gradient oli järgmine: (A)/(B)=88/12 (0 min) → (A)/(B)=78/22 (0– 18 min) → (A)/(B)=72/28 (18–28 min) → (A)/(B)=62/38 (28–35 min). HPLC analüüs on näidatud joonisel 1.

2.4. Rakukultuur

Hiire melanoomi B16-F10 rakuliin (CRL-6475) osteti Ameerika tüüpkultuuride kollektsioonist (ATCC, VA, USA). Rakke kultiveeriti DMEM-is, millele oli lisatud 10 protsenti kuumaktiveeritud FBS-i ja 1 protsenti streptomütsiini (100 µg/ml)/penitsilliini (100 ühikut/ml). B16-F10 rakke inkubeeriti niisutatud 5% CO2-ga temperatuuril 37 ◦C.

2.5. Rakkude elujõulisuse test

Proovide tsütotoksilisust hinnati MTT testi abil. B16-F10 melanoomirakke (1 × 104 rakku süvendi kohta) kultiveeriti 96-süvendiga plaadil ja inkubeeriti erineva kontsentratsiooniga ekstrakti ja fraktsioonidega (12,5, 25, 50 ja 100 µg/mL) või arbutiin (100 µg/ml) 24 tundi temperatuuril 37 °C. Pärast inkubeerimist lisati süvenditesse 500 µg/ml MTT lahust ja plaati inkubeeriti veel 4 tundi 37 °C juures. Seejärel eemaldati igast süvendist sööde ja formasaani kristallide lahustamiseks lisati 200 ui dimetüülsulfoksiidi (DMSO). Plaadi neeldumine tuvastati 570 nm juures mikroplaadilugejaga (Synergy HTX Multi-Mode Reader, BioTek, Winooski, VT, USA).

2.6. DPPH radikaali eemaldamise aktiivsus

EL-i ekstrakti ja fraktsioonide DPPH-radikaalide eemaldamise aktiivsust kinnitati DPPH-radikaalide redutseerimisvõime mõõtmisega igas proovis. 2 ml 0,15 mM DPPH lahusele lisati erinevad kontsentratsioonid (12,5, 25 ja 50 µg/mL) EU ekstrakti ja fraktsioone või 20 µg/mL askorbiinhapet (positiivne kontroll) 500 µl juures. Lahust segati vorteksiga 10 sekundit, et tagada põhjalik segamine, ja inkubeeriti 30 minutit toatemperatuuril pimedas. Seejärel mõõdeti segu neeldumist lainepikkusel 517 nm, kasutades mikroplaadilugejat (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.7. ABTS radikaali eemaldamise test

ABTS-i radikaalide eemaldamise lahus valmistati, segades 7,4 mM ABTS-i lahust ja 2,6 mM kaaliumpersulfaati vahekorras 1:1 (pH 7,4) ning pannes lahusel reageerima toatemperatuuril 24 tundi. Seejärel reguleeriti ABTS lahuse neeldumine 732 nm juures väärtusele 0,70 ± 0,03. Iga 10 µl proov pandi reageerima 190 µl ABTS lahusega 10 minutit toatemperatuuril ja neeldumist mõõdeti 732 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Biotek, Winooski, VT, USA).

2.8. Seene türosinaasi inhibeerimise aktiivsus

Melanogeneesis üliolulist rolli mängiva türosinaasi inhibeeriva aktiivsuse analüüsimiseks kasutati seene türosinaasi ja L-DOPA substraati. Kõigepealt lisati järjestikku 150 µL 0,1 M fosfaatpuhvrit (pH 6,8), 20 µL 5 mM L-DOPA lahust ja 20 µL erineva kontsentratsiooniga EU ekstrakti ja fraktsioone ning 100 µL 250 Reaktsiooni käivitamiseks lisati U/ml seene türosinaasi. Segusid inkubeeriti temperatuuril 37 °C 10 minutit ja neeldumist mõõdeti 475 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Biotek, Winooski, VT, USA). Türosinaasi inhibeerimise aktiivsus arvutati järgmise valemi abil:

2.9. Raku türosinaasi aktiivsuse määramine

B16-F10 melanoma cells were seeded at a density of 1 × 105 cells/well in six-well plates containing 2 mL of DMEM. Six groups were established: control group, non-treated; -MSH group, 100 nM -MSH only; arbutin group, -MSH and arbutin (10 mM); EUEE group, -MSH and EUEE extract (12.5, 25, and 50 µg/mL); EUEA group, -MSH and EUEA fractions (12.5, 25, and 50 µg/mL); and EUBu group, -MSH and EUBu fractions (12.5, 25, and 50 µg/mL). Six-well plates were incubated overnight at 37 ◦C in a 5 percent CO2 incubator. Then, cells were exposed to -MSH (100 nM) for 48 h and treated with various concentrations of EUEE, EUEA, and EUBu or arbutin (10 mM) for 24 h. Cells were washed with phosphate-buffered saline (PBS) three times and lysed. The lysate was centrifuged at 16,000× g for 20 min. 

Järgmisena määrati iga lüsaadi valgusisaldus BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific, Vantaa, Soome) abil. Seejärel reguleeriti valgu tase kõigis proovides 20 µg-ni. Lüsaadid (100 µL), mis sisaldasid 2,5 mM L-DOPA-d 0,1 M fosfaatpuhvris, kanti 96-süvendiga plaadi süvenditesse ja inkubeeriti 1 tund 37 °C juures. Lüsaatide neeldumist mõõdeti 475 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Biotek, Winooski, VT, USA). Rakkudevaheline türosinaasi aktiivsus arvutati järgmise valemi abil:

OD-d tähistavad proovi neeldumist ja ODb tähistavad kontrolli neeldumist. Standardina kasutati arbutiini.

2.10. Melaniini sisalduse mõõtmine

Melaniini koguse määramiseks B16-F10 rakkudes külvati need 24-süvendiga plaadile tihedusega 2 × 104 rakku süvendi kohta ja inkubeeriti 24 tundi DMEM-is 10% FBS-iga. B16-F10 rakke töödeldi 1 tund erinevate kontsentratsioonidega EUEE, EUEA ja EUBu (12,5, 25 ja 50 µg/ml) ning positiivse kontrolli arbutiiniga (10 mM), seejärel pandi reageerima 100 nM MSH veel 72 tundi. Seejärel koguti rakud pärast pesemist PBS-iga. Tsentrifuugimisega saadud pellet (12,000 × g, 10 min) lüüsiti 1 N NaOH-s, mis sisaldas 10 protsenti DMSO-d, temperatuuril 90 °C 30 minutit. Iga süvendi melaniinisisaldust mõõdeti 405 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Biotek, Winooski, VT, USA). Melaniini koguse määramiseks loeti katse ajal toodetud üldkoguseid standardseks (100 protsenti) ja iga ekstrakti ja fraktsiooniga töötlemisrühma inhibeerimismäär määrati proportsionaalselt selle standardiga.

2.11. Western blot analüüs

B{{0}}F10 hiire melanoomirakke (1 × 106 rakku süvendi kohta) kultiveeriti 6 cm tassidel ja inkubeeriti üleöö temperatuuril 37 ◦C ning rakke töödeldi eelnevalt -MSH-ga (10 µM) 24 tundi. h. Seejärel töödeldi rakke erineva kontsentratsiooniga (12,5, 25 ja 50 µg/ml) EU ekstrakti ja fraktsioonidega või 100 µg/ml arbutiiniga 24 tundi. Rakud koguti PBS-iga ja seejärel tsentrifuugiti 12,000 × g juures 15 minutit temperatuuril 4 ◦C. Pärast supernatandi eemaldamist lüüsiti rakud jääkülma Pro-prep valgu lüüsipuhvriga, millele oli lisatud 1 protsenti proteaasi ja fosfataasi inhibiitoreid, ja hoiti jääl 40 minutit. Fraktsioneeritud valgud kvantifitseeriti, kasutades Bradfordi valguanalüüsi. Võrdsed kogused valke (25 µg) laaditi ja eraldati 8% või 10% naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga ja kanti üle polüvinülideenfluoriidi (PVDF) membraanile. PVDF-i membraanid blokeeriti 5-protsendilise kooritud piimaga Tris-puhverdatud soolalahuses (TBS) koos 0,1-protsendilise Tween 20 (TBS-T) puhvriga 1 tund toatemperatuuril ja inkubeeriti spetsiifiliste p-CREB, CREB, p-vastaste primaarsete antikehadega. -ERK, ERK, MITF, TRP-1, TRP-2, türosinaas ja -aktiin üleöö temperatuuril 4 ◦C.

Seejärel loputati membraane kolm korda TBS-T puhvriga 10 minutit ja reageeriti 2 tundi mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud sekundaarse antikehaga toatemperatuuril. Membraane loputati TBS-T puhvriga viis korda ja valgud tuvastati täiustatud kemoluminestsentslahusega. Bändi kujutised saadi Davinch-In vivo ja lääne pildisüsteemi (Davinch-K, Seoul, Korea) abil.

2.12. Statistiline analüüs

Kõik väärtused on esitatud vähemalt kolme sõltumatu katse keskmisena ± SEM (keskmise standardviga) ja statistilise analüüsi jaoks kasutati GraphPad Prism tarkvara 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA). Rühmadevaheliste statistiliste erinevuste võrdlemiseks kasutati ühesuunalist dispersioonanalüüsi, millele järgnes Bonferroni post hoc analüüs. Statistiliselt oluliseks peeti p-väärtust, mis oli väiksem kui 0.05 (p < 0,05).

3. Tulemused

3.1. EL-i HPLC analüüs

EUEE, EUEA ja EUBu lõplik saagis ( protsenti ) oli vastavalt 4,8 protsenti, 0,18 protsenti ja 1,82 protsenti värske massi põhjal. EL ekstrakti ja fraktsioonide indikaatorühendi luteoliini sisalduse analüüsimiseks kasutati HPLC-d. Võrreldes standardkomponendi piigiga kinnitati luteoliini piik EL ekstraktis ja fraktsioonides. Luteoliini kontsentratsioon EUEE-s, EUEA-s ja EUBu-s oli vastavalt 499,03, 1948,05 ja 994.{11}} mg/ml (joonis 1).

3.2. ELi mõju antioksüdantsele aktiivsusele ja türosinaasi inhibeerivale aktiivsusele

EUEE, EUEA ja EUBu erinevate kontsentratsioonide antioksüdantset aktiivsust mõõdeti DPPH/ABTS testi abil. EUEE, EUEA ja EUBu DPPH ja ABTS radikaalide eemaldamise aktiivsus suurenes annusest sõltuval viisil (joonis 2A, B), positiivse kontrollina askorbiinhape. DPPH ja ABTS radikaali eemaldamise aktiivsus 50 ug/ml EL ekstrakti ja fraktsioonide juures olid mõlemad kõrgemad, mis näitas positiivse kontrolli askorbiinhappega sarnaseid tulemusi. Melanogeneesi vahendatud ensüümide inhibeeriva toime mõõtmiseks EL ekstraktis ja fraktsioonides viidi läbi seente türosinaasi inhibeerimise test (joonis 2C), kasutades rakuvabades tingimustes substraadina L-DOPA-d. Tulemused näitasid, et EL-i ekstrakt ja fraktsioonid inhibeerisid türosinaasi aktiivsust annusest sõltuval viisil. Eelkõige näitas türosinaasi inhibeeriv aktiivsus 50 ug/ml EU ekstrakti ja fraktsioonides sarnaseid tulemusi arbutiiniga,

Seetõttu on EU türosinaasi inhibeeriv toime seotud L-DOPA oksüdeerumisega DOPA kinonooniks melanogeneesis. Üldiselt oli EU fraktsioonidel suurem antioksüdant ja türosinaasi inhibeeriv toime kui ekstraktil. Lisaks hakkasid EL-i fraktsioonid, eriti EUBu, avaldama positiivse kontrollrühmaga sarnaseid toimeid annuses 25 ug/ml.

Joonis 2. EL-i antioksüdantne aktiivsus ja seente türosinaasi inhibeerimise aktiivsus. EL ekstrakti ja fraktsioonide DPPH (A) ja ABTS (B) radikaalne eemaldamine. Positiivse kontrollina kasutati askorbiinhapet (2{5}} µg/mL). Türosinaasi inhibeeriv toime EU ekstrakti ja fraktsioonide (C) L-DOPA abil. Positiivse kontrollina kasutati arbutiini (10 mM). Kõik graafikud näitavad kontrolli protsente ja andmed on väljendatud keskmistena ± SEM (n=3). Statistiline olulisus määrati * p < 0,05, ** p < 0,01 ja *** p < 0,001, võrreldes askorbiinhappe või arbutiini rühmaga.

3.3. EU mõju B16-F10 rakkude elujõulisusele

EU raku tsütotoksilisuse hindamiseks töödeldi B16-F10 melanoomirakke EU ekstrakti ja fraktsioonidega erinevates kontsentratsioonides (12,5, 25, 50 ja 100 ug/ml) 24 tundi ning rakkude elujõulisust analüüsiti MTT analüüs. Tulemused on näidatud rakkude elujõulisuse protsendina võrreldes kontrolliga. EU ekstrakt ja fraktsioonid ei olnud tsütotoksilised testitud kontsentratsioonivahemikus 12.5 50 ug/mL kuni B16-F10 rakkudeni. Tsütotoksilisus kinnitati aga B16-F10 rakkudes EL-i fraktsioonide (EUEA ja EUBu) kontsentratsioonil 100 ug/ml (joonis 3). Seetõttu viidi läbi järgmised katsed, kasutades EL ekstrakti ja fraktsioone kontsentratsioonides 12,5, 25 ja 50 ug/ml.

3.4. EL mõju melaniini sünteesile

EL-i melanogeensevastase toime määramiseks uuriti EL-i ekstrakti ja fraktsioonide pärssivat toimet melaniini sünteesile B16-F10 rakkudes. R . Melaniini sisaldus suurenes -MSH-ga stimuleerimisel võrreldes kontrolliga 305,44 protsenti (joonis 4A). Siiski oli EL-ga ravitud rühmadel kontsentratsiooniga 50 µg/ml oluliselt vähenenud melaniinisisaldus võrreldes ainult -MSH-ga stimuleeritud rühmaga ja tulemused olid sarnased kontrollrühma omadega. Lisaks näitasid EL fraktsioonid kontsentratsioonis 50 µg/ml võrreldes arbutiini positiivse kontrolliga võrreldes madalamat melaniini tootmist. Kooskõlas nende tulemustega suurenes EL ekstrakti ja fraktsioonide kontsentratsioonide suurenedes melaniini sünteesi inhibeerimise määr B16-F10 rakkudes (joonis 4B).

Eelkõige oli melaniini sünteesi inhibeerimise määr EL-i fraktsioonides kontsentratsioonil 50 µg/ml oluliselt kõrgem kui arbutiinil. Seetõttu oli EL-i fraktsioonidel oluline annusest sõltuv inhibeeriv toime melaniini sünteesile B16-F10 melanoomirakkudes.

3.5. ELi mõju melaniini sünteesile ja raku türosinaasi aktiivsusele

Kinnitasime EU ekstrakti ja fraktsioonide mõju rakusisesele türosinaasi aktiivsusele, mis on seotud melanogeneesi mehhanismiga B16-F10 melanoomirakkudes. Kõiki rühmi, välja arvatud kontrollrühmad, stimuleeriti a-MSH-ga (100 nM) 48 tundi ja seejärel töödeldi erineva kontsentratsiooniga EU ekstrakti ja fraktsioone (12,5, 25 ja 50 ug/ml) või arbutiiniga ( 10 mM) 24 tunni jooksul. Selle tulemusena inhibeerisid EU ekstrakt ja fraktsioonid annusest sõltuval viisil märkimisväärselt MSH-indutseeritud türosinaasi aktiivsust B16-F10 rakkudes (joonis 4C). Intratsellulaarne türosinaasi aktiivsus suurenes 251,00 protsenti, kui seda stimuleeriti a-MSH-ga, võrreldes kontrolliga. Kuid EL-ga ravitud rühmad kontsentratsioonis 50 ug/ml vähendasid oluliselt türosinaasi aktiivsust võrreldes a-MSHonly stimuleeritud rühmaga.

Seega pärssis türosinaasi aktiivsus annusest sõltuval viisil EL-i raviga B16-F10 rakkudes ja mõju oli eriti tugev kon. kontsentratsiooniga 50 ug/ml. EUEE inhibeeris türosinaasi aktiivsust kontsentratsioonil 50 ug/ml madalam kui arbutiinil (85,13 protsenti), samas kui EL fraktsioonide (EUEA ja EUBu) türosinaasi aktiivsuse pärssimine oli suurem kui arbutiinil (121,99 ja 128,11 protsenti). vastavalt). Kooskõlas nende tulemustega suurenes EL ekstrakti ja fraktsioonide kontsentratsioonide suurenedes rakusisese türosinaasi aktiivsuse inhibeerimise määr B16-F10 rakkudes (joonis 4D).

Joonis 4. EL melaniini süntees ja raku türosinaasi aktiivsus. EU ekstrakti melaniinisisaldus ja fraktsioonid B16-F10 melanoomirakkudes (A). EU ekstrakti ja fraktsioonide melaniini sünteesi inhibeerimise kiirus B16-F10 melanoomirakkudes (B). EU ekstrakti ja fraktsioonide rakusisene türosinaasi aktiivsus B16-F10 melanoomirakkudes (C). EU ekstrakti ja fraktsioonide rakusisese türosinaasi aktiivsuse pärssimise kiirus B16-F10 melanoomirakkudes (D). Tulemused (A, C) on esitatud protsentides, mis põhinevad rühmal -MSH. Tulemused (B, D) on esitatud protsentides, mis põhinevad kontrollrühmal. Andmed on väljendatud keskmistena ± SEM (n=3). Statistiline olulisus määrati *** p < 0,001 võrreldes -MSH-stimuleeritud B16-F10 rakkudega ja # p < 0,05, ## p < 0,01 ja ### p < 0,001 võrreldes arbutiini rühm.

3.6. EU mõju melanogeneesiga seotud CREB ja ERK valkude ekspressioonile

Melanogenees kaitseb inimese nahka erinevate väliste stiimulite eest ning selles protsessis osalevad erinevad mehhanismid. -MSH, melanogeneesi esimeses etapis osalev hormoon, stimuleerib melanotsüüte fosforüülima CREB-d ja ERK-d, indutseerides melanogeneesiga seotud allasignaali valkude sünteesi [18]. Selles uuringus uurisime melanogeneesi reguleeritud valke, sealhulgas CREB ja ERK, et määrata EU melanogeneesi inhibeerivat mehhanismi -MSH-indutseeritud melaniini sünteesil B16-F10 melanoomirakkudes. Selle tulemusena kinnitasime, et CREB ja ERK fosforüülimine suurenes oluliselt, kui B16-F10 rakke stimuleeriti -MSH-ga. Kui aga rakke töödeldi EU ekstrakti ja fraktsioonidega, supresseeriti -MSH-indutseeritud fosforüülimine annusest sõltuval viisil. Eelkõige on näha, et EL ekstrakt ja fraktsioonid kontsentratsiooniga 50 µg/ml on erinevate ravikontsentratsioonide hulgast kõige tõhusamad (joonis 5A–D).

3.7. EU mõju melanogeneesiga seotud MITF-i, TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi valkude ekspressioonile

Et uurida, kas EU ekstrakt ja fraktsioonid mõjutavad -MSH poolt indutseeritud melanogeneesiga seotud valkude ekspressiooni, viidi läbi Western blot MITF, TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi valkude ekspressiooni hindamiseks. Kõigi melanogeneesiga seotud valkude taset tõstis märkimisväärselt -MSH stimulatsioon, kuid EU ekstrakt ja fraktsioonid surusid tõhusalt alla MITF-i, TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi valkude ekspressiooni -MSH-stimuleeritud korral. B16-F10 lahtrid (joonis 6). Kooskõlas varasemate tulemustega, eriti enamiku EL ekstraktide ja fraktsioonide puhul kontsentratsioonis 50 µg/ml, oli nende valkude ekspressioon rohkem pärsitud kui see, mis leiti pärast ravi positiivse kontrolli arbutiiniga. Lisaks põhjustas töötlemine EL-i fraktsioonidega samal kontsentratsioonil suurema toime kui EL-i ekstraktiga.

Joonis 6. EU inhibeeriv toime melanogeneesiga seotud MITF, TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi valkude ekspressioonile. EUEE (A), EUEA (B) ja EUBu (C) MITF-i, TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi tüüpiline Western blot-riba kujutis. GelQuantNET programmi kasutades on Western blot riba suhteline intensiivsus näidatud järgmise tulpdiagrammina; MITF/-aktiin, TRP-1/-aktiin, TRP-2/-aktiin ja türosinaas/-aktiin. -aktiini kasutati Western blot analüüsi sisekontrollina. Andmed on väljendatud keskmistena ± SEM (n=3). Statistiline olulisus määrati * p < 0.05, **p < 0,01 ja *** p < 0,001 võrreldes -MSH-stimuleeritud B{-ga {22}}F10 lahtrid.

4. Arutelu

Melanotsüüdid asuvad naha aluskihis ja melaniini sünteesi aste melanotsüütides määrab inimese naha värvuse [19]. Melaniin on naha pigment, mis kaitseb nahka, vähendades kahjulike ultraviolettkiirte tekitatud ROS-i hulka. Kui nahk puutub kokku UV-kiirgusega, aktiveerub melanotsüüte stimuleeriv a-MSH ja melanotsüüdid toodavad melaniini (20].Liigne melaniini tootmine võib aga põhjustada nahal pigmentatsiooni, põhjustades esteetilisi probleeme.

α-MSH seondumine melanotsüütide retseptori melanotsüütide spetsiifilise melanokortiini -1 retseptoriga (MC1R) aktiveerib signaalvalgu adenülaattsüklaasi ja suurendab cAMP 121 rakusisest taset. Kui cAMP tase melanotsüütides tõuseb, aktiveeruvad CREB ja ERK signaalirajad, mis soodustavad melanogeneesis osalevate valkude tootmist. 18,22]. See aktiveeritud CREB ja ERK signaalirada reguleerib üles MITF-i ekspressiooni ja soodustab seejärel TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi ekspressiooni (23MITF on türosinaasi reguleerimise transkriptsioonifaktor ja mängib keskset rolli melaniini sünteesi reguleerimisel, sealhulgas melanotsüütide proliferatsiooni, diferentseerumise ja ellujäämise reguleerimisel (24). See valk ei reguleeri mitte ainult melanogeneesi, reguleerides alamvalke, sealhulgas TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi, kuid osaleb ka rakutsükli progresseerumise reguleerimises (25]. Kokkuvõttes aktiveerib välisest stimulatsioonist, nagu UV-kiirgusest, põhjustatud a-MSH-MC1R seondumine peamiselt melanotsüütides CREB ja ERK signaaliülekandeteid, suurendades seeläbi MITF, TRP ekspressiooni -1, TRP-2 ja türosinaasvalgud, mis indutseerivad melaniini tootmist. Seetõttu võib selle protsessi pärssimine põhjustada melaniini sünteesi pärssimist melanotsüütides.

Praegu on mitmesugused kasutatavad nahka valgendavad ained, sealhulgas hüdrokinoon ja hüdrokortisoon, enamasti kahjulikud kemikaalid ning pikaajaline kasutamine võib põhjustada kõrvaltoimeid, sealhulgas nahaärritust ja sügelust [1,26–28]. Seetõttu on vaja keskenduda ohutute ja tõhusate looduslike nahka valgendavate ainete väljatöötamisele, millel on minimaalsed kõrvalmõjud, nagu EL [29].

Selles uuringus uurisime, kuidas EL-i fraktsioonid pärsivad melaniini sünteesi protsesse ja vähendavad melaniini tootmist, mille tulemuseks on nahka valgendav toime B16-F10 melanoomirakkudes.

Kuna UV-kiirgusest põhjustatud oksüdatiivne stress kutsub esile melaniini pigmentide ladestumist, on radikaale püüdev aktiivsus ja ROS-i aktiivsuse pärssimine tõhus melanogeneesi pärssimisel ning sellise antioksüdantse toimega looduslikel toodetel võib olla suurepärane valgendav toime [30,31]. Seetõttu uurisime esmalt EU ekstrakti ja fraktsioonide antioksüdantset aktiivsust B16/F10 melanoomirakkudes, kasutades DPPH ja ABTS teste, mis on tavalised ja lihtsad meetodid taimede antioksüdantse aktiivsuse analüüsimiseks in vitro. DPPH on stabiilne vaba radikaal ja seda kasutatakse hüdrofoobsete ühendite radikaale püüdva aktiivsuse analüüsimiseks, kasutades redutseerivaid aineid, nagu askorbiinhape ja tokoferool. ABTS-testiga saab mõõta hüdrofoobsete ja hüdrofiilsete ühendite, ahelat katkestavate antioksüdantide ja vesinikku loovutavate antioksüdantide radikaali püüdmise aktiivsust [24]. Kinnitasime EL ekstraktide ja fraktsioonide kõrge DPPH ja ABTS radikaali eemaldamise aktiivsust. Eelkõige oli toime kõige tugevam kontsentratsioonil 50 µg/ml ja EL-i fraktsioonidel oli ekstraktiga võrreldes parem antioksüdantne toime.

Türosinaas on peamine melanogeneesis osalev ensüüm ja paljud nahka valgendavad ained on peamiselt türosinaasi inhibiitorid. Seetõttu uurisime EL-i fraktsioonide mõju türosinaasi aktiivsusele, mis soodustab melanogeneesi. Kinnitasime L-DOPA inhibeerivat toimet raku türosinaasi aktiivsusele, et teha kindlaks, kas EL-i ekstrakt ja fraktsioonid inhibeerivad otseselt türosinaasi aktiivsust. Selle tulemusena suurenes EL ekstrakti ja fraktsioonide türosinaasi inhibeeriv toime annusest sõltuval viisil. Lisaks, kooskõlas ülaltoodud tulemustega, oli EL kõige tõhusam kontsentratsioonil 50 µg/ml ja EL-i fraktsioonidel oli suurem mõju kui ekstraktil. Eelkõige oli EUBu kontsentratsioonil (50 µg/ml) suurem mõju kui arbutiinil, positiivsel kontrollil.

Järgmisena uurisime EU ekstrakti ja fraktsioonide nahka valgendavat toimet melanogeneesile -MSH-indutseeritud B16-F10 melanoomirakkudes. Esmalt kasutasime MTT testi, et määrata kindlaks kontsentratsioonivahemik, mille juures EL ekstrakt ja fraktsioonid ei olnud B16-F10 rakkudele tsütotoksilised. Meie tulemused kinnitasid, et kontsentratsioonivahemikus 12,5 kuni 50 µg/ml tsütotoksilisust ei esinenud.

Pärast B16-F10 rakkude stimuleerimist -MSH-ga melaniini sünteesi indutseerimiseks tuvastati EU ekstrakti ja fraktsioonide nahka valgendav toime melaniini sisaldusele ja rakusisese türosinaasi aktiivsusele. ELi ekstrakti ja fraktsioonide mustrid melaniinisisalduse ja rakusisese türosinaasi aktiivsuse kohta näitasid sarnaseid tulemusi. Töötlemine kõigi EL-i ekstraktide ja fraktsioonidega näitas, et melaniinisisaldus ja rakusisene türosinaasi aktiivsus olid annusest sõltuvalt alla surutud. Täpsemalt, EL-i fraktsioonide kontsentratsioonil 50 µg/ml täheldati melaniinisisalduse ja rakusisese türosinaasi aktiivsuse vähenemist rohkem kui 50 protsenti võrreldes ainult -MSH-ga stimuleeritud rühmaga (joonis 4A, C).

CREB ja ERK signaalirajad on peamised signaalirajad, mis aktiveeritakse melanogeneesis -MSH stimuleerimisega. Seetõttu mängivad melaniini sünteesi protsessis võtmerolli CREB ja ERK, mis osalevad erinevates mehhanismides. -MSH stimuleerimine B16-F10 melanoomirakkudes suurendas MITF-i ja melanogeneesiga seotud türosinaasi geeniperekonna (TRP-1, TRP-2 ja türosinaas) ekspressiooni CREB-i aktiveerimise kaudu ja ERK. Selles uuringus pakume tõendeid selle kohta, et EL-i ekstrakt ja fraktsioonid inhibeerivad melaniini sünteesi, samuti sellega seotud ülesvoolu signalisatsiooniteid, CREB-i ja ERK-d.

Kui MITF-i ülesreguleeritud ekspressioon suurendas TRP-1 ja TRP-2 taset, soodustati türosinaasi ekspressiooni ja melanogeneesiga seotud ensüümid tootsid melaniini [18,32]. Melanogeneesi poolt vahendatud valkude ekspressiooni jälgiti Western blot analüüsi abil, et määrata EU ekstrakti ja fraktsioonide melanogeenne toime B16-F10 melanoomirakkudes. Meie tulemused kinnitasid, et MITF, TRP-1, TRP-2 ja türosinaasi valkude ekspressioon suurenes märkimisväärselt -MSH-stimuleeritud rühmas.

Kuid töötlemine EU ekstrakti ja fraktsioonidega vähendas nende melanogeneesiga seotud valkude ekspressiooni annusest sõltuval viisil. Eelkõige täheldati olulist ekspressiooni vähenemist EU fraktsioonide kontsentratsioonil 50 µg/ml. Meie tulemused näitavad, et 50 µg/ml EU fraktsioonid inhibeerisid olulise transkriptsioonifaktori MITF ekspressiooni, inhibeerides oluliselt türosinaasi ekspressiooni ja seeläbi melaniini tootmist.

Nende tulemuste põhjal avastasime, et 50 µg/ml EU fraktsioonid inhibeeris -MSH-stimuleeritud melaniini tootmist B16-F10 melanoomirakkudes, vähendades melanogeneesiga seotud signaaliülekannet, tuginedes suurepärasele antioksüdantsele toimele. Seetõttu näitavad meie tulemused, et EL-i fraktsioon võib olla potentsiaalne kandidaat valgendusraviks, mis kontrollib tõhusalt melanogeneesi.5. Kokkuvõtted

Selles uuringus hindasime antioksüdantset ja anti-melanogeenset toimet -MSH-indutseeritud melanogeneesile B16-F10 melanoomirakkudes, et kinnitada EL-i fraktsioonide funktsiooni nahka valgendavate ainetena. Kokkuvõtteks leidsime, et EL-i fraktsioonidel on tugev antioksüdantne toime ja need inhibeerivad melanogeneesiga seotud valke, nagu TRP-1, TRP-2 ja türosinaas, reguleerides MITF-i ja on seetõttu väärtuslikud looduslikud melanogeneesi inhibiitorid.

Eelkõige oli vaja EU ekstrakti ja fraktsioonide kontsentratsiooni (50 µg/ml), et inhibeerida melaniini sünteesi -MSH-stimuleeritud B16F10 rakkudes. Lisaks kinnitasime, et EL-i fraktsioonidel on parem antioksüdant ja inhibeeriv toime melaniini tootmisele. Järelikult võiks EL olla kasulik looduslike ainete puhul nahahaiguste raviks ja nahka valgendavate ainetena kosmeetikatööstuses.

Autori kaastööd:

Conceptualization, J.-HL ja D.-KK; Andmete kureerimine, BL; Formaalne analüüs, J.-HL; Rahastamise omandamine, Y.-ML; Investigation, J.-HL ja Y.-DJ; Metodoloogia, BL, H.-WS ja B.-JS; projektijuhtimine, Y.-ML ja D.-KK; Tarkvara, D.-KK; Supervision, Y.-ML ja D.-KK; Visualiseerimine, J.-HL; Kirjutamine – algne kavand, J.-HL; Kirjutamine – arvustus ja toimetamine, J.-HL ja Y.-DJ Kõik autorid on käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud.

Rahastamine:

Seda uurimistööd toetasid kaubandus-, tööstus- ja energeetikaministeerium (MOTIE) ja Korea Tehnoloogia Edendamise Instituut (KIAT) majanduskoostöö piirkonna tööstusharude julgustamisprogrammi (P0004749) kaudu.

Huvide konfliktid:

Autorid kinnitavad, et neil puuduvad konkureerivad huvid.

Näidiste saadavus:

Autoritelt pole ühendite näidiseid saadaval.

Lühendid

-MSH - melanotsüüte stimuleeriv hormoon

CREB cAMP vastuseelementi siduv valk

DOPA 3,4-dihüdroksüfenüülalaniin

EU Elaeagnus umbellata

EUEE EU 70 protsenti etanooli ekstrakt

EUEA EL etüülatsetaadi fraktsioon

EUBu EU butanooli fraktsioon

MC1R melanotsüütide spetsiifiline melanokortiini-1 retseptor

MITF mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktor

ROS Reaktiivsed hapniku liigid

TRP türosinaasiga seotud valk

Viited

1. Desmedt, B.; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogiers, V.; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Ülevaade nahka valgendavatest ainetest koos ülevaatega Euroopa ebaseaduslikust kosmeetikaturust. J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2016, 30, 943–950. [CrossRef] [PubMed]

2. Costin, GE; Kuulmine, VJ Inimese naha pigmentatsioon: Melanotsüüdid moduleerivad nahavärvi vastuseks stressile. Faseb J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef]

3. Lin, YS; Wu, WC; Lin, SY; Hou, WC Glütsiinhüdroksamaat inhibeerib türosinaasi aktiivsust ja melaniini sisaldust cAMP/PKA signaaliülekanderadade allareguleerimise kaudu. Aminohapped 2015, 47, 617–625. [CrossRef]

4. Fernandez-Garcia, E. Naha kaitse UV-valguse eest toidu antioksüdantidega. Toit. Funktsioon. 2014, 5, 1994–2003. [CrossRef]

5. Kowalska, J.; Banach, K.; Rok, J.; Beberok, A.; Rzepka, Z.; Wrze´sniok, D. Fluorokinoloonide indutseeritud fototoksilisuse molekulaarne ja biokeemiline alus – UV-A-kiirgusele avatud inimese melanotsüütide antioksüdantide süsteemi uurimine. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9714. [CrossRef] [PubMed]

6. MatÉs, JM; Pérez-Gómez, C.; Castro, IND Antioksüdantsed ensüümid ja inimeste haigused. Clin. Biochem. 1999, 32, 595–603. [CrossRef]

7. Bickers, DR; Athar, M. Oksüdatiivne stress nahahaiguste patogeneesis. J. Uurimine. Dermatol. 2006, 126, 2565–2575. [CrossRef]

8. Kim, YJ; Uyama, H. Türosinaasi inhibiitorid looduslikest ja sünteetilistest allikatest: struktuur, inhibeerimismehhanism ja tulevikuperspektiiv. Kamber. Mol. Life Sci. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef]

9. Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. Naha valgendavad ained: türosinaasi inhibiitorite meditsiiniline keemia perspektiiv. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

10. Smit, N.; Vilanova, J.; Pavel, S. Looduslike nahka valgendavate ainete jaht. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 5326–5349. [CrossRef]

11. Draelos, ZD Nahka kergendavad preparaadid ja hüdrokinoonide poleemika. Dermatol. Seal. 2007, 20, 308–313. [CrossRef]

12. Anna, MI; Chiara, G.; Marinella, DL; Deborah, P.; Fabiano, C.; Nunziatina, DT; Claudia, M.; Maria, LT; Alessandra, B. Elaeagnus umbellatast eraldatud ühendite antioksüdantne toime soodustab inimese igemefibroblastide heaolu. J. Nat. Prod. 2020, 83, 626–637.

13. Sabir, SM; Dilnawaz, S.; Imtiaz, A.; Hussain, M.; Kaleem, MT Pakistanist pärit ravimtaime Elaeagnus umbellata (Thunb.) antibakteriaalne toime. Saudi Araabia. Med. J. 2007, 28, 259–263.

14. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Khan, I.; Karim, N.; Abdel-Halim, H.; Ali, A. Elaeagnus umbellata (Thunb.) fütokeemiline analüüs ja diabeedivastane potentsiaal streptozototsiinist põhjustatud diabeetilistel rottidel: farmakoloogiline ja arvutuslik lähenemine. BMC täiendus. Altern. Med. 2018, 18, 332. [CrossRef]

15. Wang, SY; Bowman, L.; Ding, M. Vabade radikaalide eemaldamise võime ja proliferatsioonivastase aktiivsuse variatsioonid sügisoliivi (Elaeagnus umbellate) erinevate genotüüpide seas. Planta. Med. 2007, 73, 468–477. [CrossRef] [PubMed]

16. Nazir, N.; Zahoor, M.; Nisar, M.; Karim, N.; Latif, A.; Ahmad, S.; Uddin, Z. Elaeagnus umbellate Thunb neuroprotektiivsete ja anamnestiliste mõjude hindamine. Skopolamiinist põhjustatud mälukahjustuse kohta hiirtel. BMC täiendus. Altern. Med. 2020, 20, 143.

17. Park, SH; Jhee, KH; Yang, SA Elaeagnus umbellata lehtede etanooliekstrakti kaitsev toime -MSH-indutseeritud melaniini tootmisele B16-F0 rakkudes ja UVB-indutseeritud kahjustusele CCD-986sk rakkudes. J. Life Sci. 2019, 29, 555–563.

18. Qian, W.; Liu, W.; Zhu, D.; Cao, Y.; Tang, A.; Gong, G.; Su, H. Looduslikud nahka valgendavad ühendid melanogeneesi raviks (ülevaade). Exp. Seal. Med. 2020, 20, 173–185. [CrossRef]

19. Gillbro, JM; Olsson, MJ Nahka helendavate ainete melanogenees ja mehhanismid – olemasolevad ja uued lähenemisviisid. Int. J. Cosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef]

20. Saba, E.; Kim, SH; Lee, YY; Park, CK; Oh, JW; Kim, TH; Kim, HK; Roh, SS; Rhee, MH Korea punase ženšenni ekstrakt parandab melanogeneesi inimestel ja kutsub esile vananemisvastase toime ultraviolettkiirgusega karvututel hiirtel. J. Ženšenn. Res. 2020, 44, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

21. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmia geeniprodukt signaalimuundurina cAMP-indutseeritud melanotsüütide diferentseerumisel. J. Cell. Biol. 1998, 142, 827–835. [CrossRef]

22. Lee, HJ; Lee, WJ; Chang, SE; Lee, GY Hesperidiin, populaarne antioksüdant, inhibeerib melanogeneesi erk1/2 vahendatud MITF-i lagunemise kaudu. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 18384–18395. [CrossRef]

23. Hind, ER; Horstmann, MA; Wells, AG; Weilbaecher, KN; Takemoto, CM; Landis, MW; Fisher, DE alfa-melanotsüüte stimuleeriva hormooni signaalimine reguleerib Waardenburgi sündroomi korral puuduliku geeni mikroftalmia ekspressiooni. J. Biol. Chem. 1998, 273, 33042–33047. [CrossRef]

24. Vance, KW; Goding, CR Melanotsüütide arengut ja melanoomi reguleeriv transkriptsioonivõrk. Pigment. Kamber. Res. 2004, 17, 318–325. [CrossRef]

25. Bondurand, N.; Pingault, V.; Goerich, DE; Lemort, N.; Sokk, E.; Le Caignec, C.; Wegner, M.; Goossens, M. SOX10, PAX3 ja MITF interaktsioon, kolm Waardenburgi sündroomis muudetud geeni. Humm. Mol. Genet. 2000, 9, 1907–1917. [CrossRef]

26. McGregor, D. Hüdrokinoon: selle kantserogeensetest ja mutageensetest omadustest tulenevate inimeste riskide hindamine. Crit. Rev. Toxicol. 2007, 37, 887–914. [CrossRef]

27. Kolbe, L.; Kligman, AM; Schreiner, V.; Stoudemayer, T. Kortikosteroididest põhjustatud atroofia ja barjääri kahjustus, mida mõõdetakse mitteinvasiivsete meetoditega inimese nahas. Nahk. Res. Technol. 2001, 7, 73–77. [CrossRef] [PubMed]

28. Huang, HC; Chang, SJ; Wu, CY; Ke, HJ; Chang, TM [6]-Shogaol inhibeerib -MSH-indutseeritud melanogeneesi, kiirendades ERK-i ja PI3K/Akt-vahendatud MITF-i lagunemist. Biomed. Res. Int. 2014, 2014, 842569. [CrossRef]

29. Ozen, T.; Yenigun, S.; Altun, M.; Demirtas, I. Elaeagnus umbellata Thunb. fütokeemilised koostisosad, ChE ja ureaasi inhibeerimised, antiproliferatiivsed ja antioksüdantsed omadused. Kamm. Chem. Kõrge. Läbilaskevõime. Ekraan. 2017, 20, 559–578. [CrossRef]

30. Floegel, A.; Kim, DO; Chung, SJ; Koo, SI; Chun, OK ABTS/DPPH testide võrdlus antioksüdantide võime mõõtmiseks populaarsetes antioksüdantiderikastes USA toiduainetes. J. Food Compos. Anal. 2011, 24, 1043–1048. [CrossRef]

31. Hseu, YC; Chen, XZ; Gowrisankar, YV; Yen, HR; Chuang, JY; Yang, HL Ektoiini nahka valgendav toime MSH-stimuleeritud melanogeneesi pärssimise ja antioksüdantide Nrf2 radade aktiveerimise kaudu UVA-kiiritatud keratinotsüütides. Antioksüdandid 2020, 9, 63. [CrossRef] [PubMed]

32. Jang, EJ; Läikiv.; Park, HJ; Kim, D.; Jung, C.; Hong, JY; Kim, S.; Lee, SK Fütosfingosiini melanogeenne aktiivsus mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktori signaaliraja moduleerimise kaudu. J. Dermatol. Sci. 2017, 87, 19–28. [CrossRef] [PubMed]

Ji-Hyun Lee 1,†, Bori Lee 2,†, Yong-Deok Jeon 3, Hyun-Woo Song 2, Young-Mi Lee 2, Bong-Joon Song 4 ja Dae-Ki Kim 1,*

1 Department of Immunology and Institute of Medical Science, Jeonbuk National University Medical School, 20, Geonji-ro, Deokjin-gu, Jeonju-si 54907, Jeollabuk-do, Korea; jihyunsh1211@naver.com

2 Idamaade farmaatsia osakond, Farmaatsiakolledž ja Wonkwang-Oriental Medicines Research Institute, Wonkwangi ülikool, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; leebori1004@naver.com (BL); cristblack@naver.com (H.-WS); ymlee@wku.ac.kr (Y.-ML)

3 Woosuki ülikooli Korea farmaatsia osakond, 443 Samnye-ro, Samnye-up, Wanju-Gun 55338, Jeollabuk-do, Korea; ydjeon1211jh@woosuk.ac.kr

4 Department of Food Science and Biotechnology, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; twinf1@hanmail.net

Kirjavahetus: daekim@jbnu.ac.kr; Tel.: pluss 82-63-2703080

Need autorid panustasid sellesse töösse võrdselt.

For more information:1950477648nn@gmail.com