Mustika antotsüaniinide hüpoglükeemilised ja hüpolipideemilised toimed AMPK aktiveerimisega: in vitro ja in vivo uuringud, 1. osa

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

Abstraktne:Mustikad on rikkad bioaktiivsete antotsüaniinide poolest, millel on kõrge malvidiini sisaldus, mis on seotud antioksüdantse toimega, mis aitab vähendada diabeediriski. Selle uuringu eesmärk oli uurida mustika antotsüaniini ekstrakti (BAE) hüpoglükeemilist ja hüpolipideemilist toimet.malvidiin(Mv), malvidiin-3-glükosiid (Mv-3-GLC) ja malvidiin-3-galaktosiid (Mv-3-gal) nii inimese hepatokartsinoomi rakuliinis HepG2 kui ka kõrge rasvadieet, mis ühendab streptozototsiini poolt indutseeritud diabeetilised hiired. Kõrge glükoosisisaldusega ravi suurendas oluliselt maksa oksüdatiivset stressi kuni 6- korda ja vähendas HepG2 rakkude elujõulisust. Eeltöötlemine BAE, Mv, Mv{9}}glc ja Mlv-3-gal-ga leevendas neid kahjustusi märkimisväärselt, vähendades reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) sisaldust 87, 80, 76 ja 91 protsenti ning suurendades rakkude elujõulisust. vastavalt 88, 79, 73 ja 98 protsenti. Need eeltöötlused pärssisid tõhusalt ka hüperglükeemiat ja hüperlipideemiat, vähendades glükoneogeneesis ja lipogeneesis osalevate ensüümide ekspressioonitaset ning suurendades glükogenolüüsi ja lipolüüsiga seotud ensüüme adenosiinmonofosfaadiga aktiveeritud proteiinkinaasi (AMPK) signaaliraja kaudu HepG2 rakkudes. Määramaks AMPK rolli BAE-indutseeritud glükoosi ja lipiidide metabolismi reaktsioonis in vivo, annustes 100 mg/kg (mustika antotsüaniini ekstraktid – madal kontsentratsioon, BAE-L) ja 400 mg/kg (mustika antotsüaniini ekstraktid – kõrge kontsentratsioon , BAE-H) manustati diabeetikutele hiirtele päevas 5 nädala jooksul. BAE-ravil oli märkimisväärne (P<0.05) effect="" on="" body="" weight="" and="" increased="" the="" ampk="" activity,="" achieving="" the="" decrease="" of="" blood="" and="" urine-glucose,="" as="" well="" as="" triglyceride="" and="" total="" cholesterol.="" this="" research="" suggested="" that="">antotsüaniinidaitas kaasa mustikaekstrakti indutseerimiselehüpoglükeemiaja hüpolipideemiline toime diabeedi ja BAE korral võib olla paljutõotav funktsionaalne toit või ravim diabeedi raviks.

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

1. Sissejuhatus

Suhkurtõbi (DM) on hästi tuntud haigus, mida tavaliselt iseloomustab suutmatus säilitada normaalset veresuhkru taset. See krooniline ainevahetushäire põhjustab tõsist kahju inimeste tervisele ja paneb ülemaailmsetele tervishoiusüsteemidele suure rahalise koormuse [1]. See haigus jaguneb vere glükoosisisalduse düsregulatsiooni põhjuste põhjal kahte põhitüüpi. 1. tüüpi DM on põhjustatud beeta-rakkude autoimmuunsest hävimisest, mis põhjustab insuliini tootmise võimetust, samas kui 2. tüüpi diabeeti iseloomustavad insuliiniresistentsuse insuliiniretseptorid, millel on vähenenud funktsioon, mis ei võimalda rakkudel adekvaatselt reageerida vere glükoosisisalduse tõusule.

Cistanche võib parandada immuunsust

Lisaks hüperglükeemiale kipuvad diabeetikud olemahüperlipideemiaMõlemad seisundid võivad põhjustada elundite ja kudede kahjustusi suurenenud glükooksüdatiivse stressi tõttu [2]. Insuliini tootmine ja insuliiniretseptori kahjustused on ühed tegurid, mis põhjustavad diabeetikutel hüperglükeemiat. Maksas vabastab glükoneogeneesi ja glükogenolüüsi üleekspressioon glükoosi uuesti vereringesse [3], samas kui peensooles põhjustab glükoosi transporteri 2 (GLUT2) üleekspressioon glükoosi transpordi suurenemist [4]. Lipogeneesi üleekspressioonist rasvkoes põhjustatud hüperlipideemia [5] võib samuti põhjustada insuliini poolt stimuleeritud glükoosi omastamise ja glükogeeni sünteesi halvenemist, mis põhjustab insuliiniresistentsust ja aitab seega kaasa diabeedi progresseerumisele 6]. Diabeediga seotud pikaajalised tüsistused mõjutavad erinevaid organeid ja hõlmavad hüpertensiooni, ateroskleroosi, retinopaatiat, nefropaatiat, jalahaavandeid ja perifeerset neuropaatiat [7].

Praegu ei ole diabeedi raviks võimalik ravida, kuid selle mõju on võimalik leevendada [8]. I tüüpi diabeeti põdevate inimeste puhul on tavaline ravi dieedi reguleerimise ja sobiva insuliini tarbimise kombinatsioonina vastavalt tarbitud süsivesikutele. Praegused väljakutsed I tüüpi diabeetikutele hõlmavad suutmatust või raskusi süsivesikute üldkoguse ja sobiva insuliiniannuse hindamisel; siiski ideaalilähedaneglükeemilinetehnoloogilise arengu, sealhulgas insuliinipumpade tõttu [9]. II tüüpi diabeeti põdevate patsientide ravi võib olla keerulisem, sealhulgas dieedi reguleerimise, treeningu, insuliini ja teiste erinevate toimemehhanismidega ravimite kombinatsioonid, mis vähendavad vere glükoosisisaldust[10]. Üldine toitumissoovitus on järgida. madala süsivesikute sisaldusega dieet [11,12].

Mustikas on üks puuvilju, mida diabeediga patsiendid saavad tarbida ja mis võib vähendada II tüüpi suhkurtõve (T2DM) riski[13,14]. Mustikad on rikkad paljude inimeste tervisele kasulike ühendite, sealhulgas mineraalide, kiudainete orgaaniliste hapete, fenoolhapete ja flavonoidide, sealhulgas flavonoolide ja antotsüaniinide poolest [15,16]. Tüüpilised antotsüaniiniprofiilid hõlmavad aga delfinidiini, malvidiini, tsüanidiini, petunidiini ja peonidiini [17] galaktosiide, glükosiide ja arabinosiide, kusjuures malvidiin ja delfinidiinid on tavaliselt antotsüaniini kogusisalduse peamised tegurid [18, 19]. Meie eelmises uuringus [20] oli malvidiin koos delfinidiini, tsüanidiini, petunidiini ja peonidiiniga kõige rikkalikum antotsüanidiin, mida leiti küüliku silma mustika viljade ekstraktist, mis on kooskõlas teiste autoritega, kes leidsid, et malvidiin on oluline antotsüaniini kogusisalduse mõjutaja. erinevat tüüpi mustikatel [17,21].

Mustika antotsüaniinid võivad parandada insuliinitundlikkust antioksüdantse võime ja muude regulatiivsete koostoimete kaudu, kuna nende mõju ei saa esimesega täielikult seletada [13, 22]. Uuringud on leidnud ka mustika antotsüaniinide kasulikkust muude diabeediga seotud probleemide korral. In vitro uuringus Huang et al. [23] leidsid, et mustika antotsüaniinidel on kõrge glükoosisisaldusega tingimustes inimese võrkkesta rakkudele põletikuvastane ja antioksüdantne toime. Kõrge glükoosisisaldusega rakkude elujõulisus oli 64 protsenti, samas kui mustika antotsüaniini ekstrakti, malvidiini, malvidiin-glükosiidi või malvidiin-galaktosiidiga kokkupuutel oli nende elujõulisus 7-9 protsenti, 83 protsenti, 91- protsenti või { vastavalt {11}} protsenti. Teisest küljest on Song jt. [24] leidsid, et mustika antotsüaniinid vähendasid diabeetilise roti võrkkesta oksüdatiivset stressi ja põletikku. Diabeediga rottidele manustati 12 nädala jooksul suu kaudu 20, 40 ja 80 mg/kg mustika antotsüaniine. Mustika antotsüaniine suurte annustega rottidel oli madalam vere glükoosisisaldus, suurem antioksüdantide võime ja väiksem võrkkesta põletik ning vähem reaktiivseid hapniku liike võrreldes nendega, kellel mustika antotsüaniine ei olnud.

Kuigi mustika antotsüaniinid toovad kasu diabeetikute maksale ja teistele organitele, on mustika antotsüaniini ekstrakti (BAE) hüpoglükeemiline ja hüpolipideemiline toime inimese maksarakkudes ebaselge. Käesolevas uuringus spekuleeriti, et BAE, aga ka Mv, Mv{0}}glc ja Mv-3-gal omavad hüpoglükeemilist ja hüpolipideemilist toimet inimese hepatokartsinoomirakkudes (HepG2) ja hiirtes ning et nad võib säilitada glükolipiidide homöostaasi, leevendades seega diabeedi teket.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Kemikaalid ja reaktiivid

Brightwelli küülikusilmmustikad (Vaccinium ashei koguti ettevõttest Fujiabian Orchard Picking (Nanjing, Hiina)) ja nende antotsüaniiniekstraktid saadi ja neid säilitati pimedas temperatuuril {{0}}. Reagent 3- (4,5-dimetüültiasool-2-üül)-2,5-difenüül-2H-tetrasooliumbromiid (MTT) ja standardid malvidiin (Mv), malvidiin-3-glükoos (Mv{) {11}}glc) ja malvidiin-3-galaktoos (Mv-3-gal) hangiti firmalt Sigma Aldrich (Shanghai, Hiina). HepG2 primaarsed rakud, bitsinhoniinhappe (BCA) valgu analüüsikomplekt ja täiustatud kemoluminestsentsi (ECL) Western blot tuvastamise reaktiivid saadi ettevõttest CW Biotechnology (Peking, Hiina). Veise loote seerum (FBS), Dulbecco modifitseeritud Eagle sööde (DMEM) ja penitsilliin-streptomütsiin hangiti firmast Gibco (Auckland, Uus-Meremaa). BioFroxx streptozototsiin (STZ) osteti ettevõttelt Saiguo Biotech (Guangzhou, Hiina). Diklorodihüdrofluorestseiindiatsetaadi (DCFH-DA) tuvastuskomplekt osteti ettevõttest Beyo-time Institute of Technology (Shan). ghai, Hiina). Veise seerumi albumiin (BSA) saadi Shyuanye'st (Shanghai, Hiina). Rasva- ja suhkrurikas sööt (rasva 35,5 protsenti, valk 20 protsenti, süsivesikud 36,4 protsenti, tselluloos 0,1 protsenti) ja tavaline sööt (rasv 4,5 protsenti, valk 23 protsenti, süsivesikud 31,9 protsenti, 3,7 protsenti fruktoos ja 5 protsenti tselluloos) saadi ettevõttest Xietong Bioengineering Co., Ltd (Nanjing, Hiina). Insuliini, triglütseriidi (TG), üldkolesterooli (TCHD, glutatioonperoksidaasi (GSH-Px) ja superoksiiddismutaasi (SOD) testikomplektid osteti Jiancheng Bioengineering Research Institute'ist (Nanjing, Hiina). AndyGene human Forkhead Box O1(FOXO1) , glükoosi-6-fosfataas (G6Paas), glükogeeni süntaasi fosforüülimine (p-GS), glükogeeni süntaasi kinaas-3 beeta-fosforüülimine (p-GSK3), glükoosi transporter 2 (GLUT2), atsetüülkoensüüm A karboksüül (ACC), hormoonitundliku triglütseriidlipaasi (HSL), 3-hüdroksü-3-metüülglutarüülkoensüümi reduktaasi (HMGCR) ja hiire tühja kõhuga insuliini ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) komplektid osteti ettevõttelt Bluegene Biotech. (Shanghai, Hiina) Selles uuringus kasutatud kemikaalid ja reaktiivid olid kõik puhtad analüütilised.

2.2. Antikehad

Primaarsed antikehad GS-i, p-GS-i (Ser641), sterooli regulaatorelemente siduva valgu -1c (SREBP-1c) ja fosfoenoolpüruvaadi karboksükinaasi (PEPCK) vastu hangiti ettevõttelt Abcam (Cambridge, Ühendkuningriik) . Primaarsed antikehad adenosiinmonofosfaadiga aktiveeritud proteiinkinaasi alfa (AMPKa), p-AMPK a (Thr172), peroksisoomi proliferaatoriga aktiveeritud retseptor-y-koaktivaatori -1 (PGC-1), ACC, p- ACC (Ser79) ja mädarõika peroksidaasiga (HRP) konjugeeritud sekundaarsed antikehad osteti ettevõttest Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA). Antikeha glütseraldehüüdi 3-fosfaatdehüdrogenaasi (GAPDH) vastu osteti ettevõttelt Nanjing Beidi Biomed Technology (Nanjing, Hiina), samas kui -aktiini vastane antikeha osteti ettevõttelt Sigma Aldrich (St. Louis, MO, USA). Primaarseid antikehi kasutati lahjendustes 1:1000, samas kui sekundaarsete antikehade jaoks kasutati lahjendusi 1:4000.

2.3. Mustika antotsüaniini ekstrakti (BAE) valmistamine

Mustika antotsüaniinide ekstraheerimine viidi läbi, kasutades meie eelmist Huangi jt meetodit. [25]. Külmutatud rabbiteye mustikaid hoiti toatemperatuuril kuni sulatamiseni. Seejärel peksti neid kiirusel 10 000 pööret minutis 30 sekundit, kasutades T18 basic ULTRA-TURRAX homogenisaatorit (IKA Works Guangzhou, Hiina). Seejärel leotati 250 g mustikaid 24 tundi 1000 ml metanooli lahuses, mis sisaldas 1 protsenti HCl. Seejärel koguti ekstrakt pärast tsentrifuugimist 5000 x g juures 15 minutit. Pärast lahusti aurustamist 40 kraadi juures vaakumis ekstraheeriti jääki kolm korda 1:1 (maht/maht) etüülatsetaadiga. Antotsüaniine sisaldav veefaas koguti ja kontsentreeriti vaakumis aurustamisega, et saada antotsüaniini toorekstrakt. Ekstrakti puhastati täiendavalt AB{14}} makropoorse vaiguga (Sigma Aldrich, Shanghai, Hiina). Fruktoosi ja valgu eemaldamiseks allutati ekstraktile kolonnkromatograafia 1000 g AB-8 makropoorsel vaigul 24 tunni jooksul absorptsiooniga ja seejärel elueeriti topeltdestilleeritud veega. Antotsüaniini fraktsioon elueeriti 80% etanooliga, mis sisaldas 1% HCl lahust, kontsentreeriti vaakumis ja seejärel kuivatati Eyela FDU{20}} külmkuivatis (Tokyo Rikakikai, Jaapan), et saada mustika antotsüaniini ekstrakt (BAE). pulber.

2.4. Rakukultuur ja ravi

HepG2 rakuliinidel, mis on saadud spetsiifiliselt eristatud inimese hepatotsellulaarsest kartsinoomist, on suur osa maksaspetsiifilistest valkudest. Sel põhjusel kasutatakse neid tavaliselt inimese maksarakkude uuringute laborimudelitena [26]. HepG2 rakke kasvatati DMEM-is, mis sisaldas normaalset D-glükoosi (5,5 mM), millele oli lisatud 10% FBS-i ja 1% penitsilliini-streptomütsiini, ning hoiti inkubaatoris temperatuuril 37 °C ja 5% CO2 atmosfääris (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Pärast 70-80 protsendi konfluentsuse saavutamist subkultuuriti HepG2 rakud. Neli tundi enne katset viidi HepG2 rakud vähendatud seerumi söötmesse. Pärast 24-tunnist eeltöötlemist 5 ug/ml Mv, Mv-3-glc, Mv-3-gal või BAE-ga eksponeeriti rakud normaalsele (5,5 mM) või kõrgele (30 mM) glükoosikontsentratsioonile. jäljendavad normaalseid ja diabeetilisi seisundeid. Rakud valmistati ette Western Blot analüüsiks ja supernatandid koguti ELISA analüüsi jaoks.

2.5. Loomad ja eksperimentaalne disain

GemPharmatechi (Nanjing, Jiangsu, Hiina) terveid isaseid hiiri C57BL/6J (20 ± 2 g) peeti standardsetes laboritingimustes, sealhulgas konstantses temperatuuris 25 kraadi ja 12-h päevase ja öö vaheldumisi. Jiangsu Põllumajandusteaduste Akadeemia teadusuuringute loomade hooldamise ja kasutamise komitee oli eelnevalt heaks kiitnud kõik loomkatsete protseduurid. Loommudelites kasutati T2DM-i esilekutsumiseks rasvarikast dieeti ja streptozototsiini (STZ) vastavalt Islami ja Lootsi kasutatud meetodile [27]. Kõiki hiiri toideti kõrge rasva- ja suhkrusisaldusega dieediga, välja arvatud kontrollrühm, kes tarbis tavalist dieeti. 4 nädala pärast hoiti hiiri 12 tundi tühja kõhuga ja neile süstiti intraperitoneaalselt 100 mg/kg STZ-d, mis oli lahustatud naatriumtsitraadi puhverlahuses (pH 4.{15}},5). Nädal pärast STZ esilekutsumist võeti üleöö paastunud hiirte sabaveenist vereproovid. Hiired, kellel esinesid diabeedi sümptomid, sealhulgas polüuuria, polüdipsia ja hüperglükeemia (tühja kõhu veresuhkru tase > 11,1 mmol/L), tunnistati T2DM-iks ja neid kasutati tulevastes uuringutes. Mudeli T2DM stabiilsuse kontrollimiseks toideti kõiki hiiri ühe nädala jooksul normaalse dieediga. Kontrollrühmana kasutati tavalisi hiiri. Diabeediga hiired jagati seejärel juhuslikult kolme rühma: mudel, madala annusega BAE (100 mg/kg) ja suure annusega BAE (400 mg/kg). 6 järjestikuse päeva jooksul manustati kontrollrühmale, mudelrühmale, väikese annusega BAE-d ja suure annusega BAE-d maosiseselt kas sama mahuga lahustit (100 μL), 100 mg/kg või 400 mg/kg BAE-d. vastavalt. Seitsmendal päeval mõõdeti kehakaalu ja tühja kõhu veresuhkrut. Sama intragastriline manustamine jätkus 5 nädalat. Seejärel paastuti hiirtele üleöö ja alumisest õõnesveenist koguti seerumi valmistamiseks vereproovid ja neid säilitati -20 kraadi juures. Pärast vereproovide võtmist kõik hiired tuimastati ja surmati. Hiirte maksa-, põrna-, neeru- ja harknääre kuded eemaldati, kaaluti ja säilitati edasisteks katseteks -80 kraadi juures.

2.6. Rakkude elujõulisuse tuvastamine

Rakkude elujõulisus määrati MTT meetodil. Rakkude eeltöötlemiseks 24 tunni jooksul kasutati 5 ug/ml Mv, Mv{0}}glc, Mv-3-gal või BAE. Seejärel töödeldi rakke 5 mMor 30 mM glükoosiga 24 tundi ja rakkudele lisati 10 µl 0,5 protsenti (5 mg/mL) MTT-d, mida seejärel uuesti kultiveeriti. 4 tunni pärast eemaldati MTT lahus ja lisati 100 μL dimetüülsulfoksiidi (DMSO), enne kui segu loksutati aeglaselt 10 minutit rakukristallide lahustamiseks. Optilise tiheduse (OD) väärtuste saamiseks mõõdeti neeldumist lainepikkusel 490 nm mikroplaadilugejaga StatFax-2100 (Awareness Tech-nology Inc., Plam, FL, USA). Kontrollrühmana kasutati normaalse glükoositasemega (5,5 mmol/l) kultiveeritud rakke, tühja katsena aga rakkudeta süvendeid. Rakkude elujõulisuse määramiseks kasutati järgmist valemit: Rakkude elujõulisus( protsent )=(proovirühma OD väärtus-tühi rühma OD väärtus)/(kontrollrühma OD väärtus-tühi rühma OD väärtus)x 100 protsenti .

2.7. ROS fluorestsentsi visualiseerimine

Reaktiivseid hapniku liike (ROS) HepG2 rakkudes hinnati DCFH-DA tuvastamiskomplekti abil. Pärast 24-tunnist esmast töötlemist 5 ug/ml Mv, Mv-3-glc, Mv-3-gal või BAE-ga, millele järgnes hiljem 24-tunnine töötlemine 5 mM või 30 mM glükoosiga, rakke pesti PBS-ga ja seejärel lisati igasse süvendisse 10 µM DCFH-DA ja lasti 20 minutit 37 kraadi juures reageerida. Rakke pesti uuesti põhjalikult PBS-ga ja seejärel vaadeldi nende rakkude rühma kohe IX53 pöördfluorestsentsmikroskoobi all (Olympus, Tokyo, Jaapan) 530 nm emissiooni ja 485 nm ergastusfiltrite juures. Pildid on esitatud 200-kordse suurendusega. Pärast dissotsiatsiooni koguti veel üks rühm rakke ja nende fluorestsents registreeriti Synergy H4 mitmerežiimilise mikroplaadilugejaga (BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, USA). Märgiti igas süvendis rakkude kogu fluorestsentsi intensiivsus ja ROS-i teket mõõdeti kontrolli kordina.

2.8. ELISA

ELISA komplekte kasutati glükoneogeneesis (FOXO1, G6Pase, p-GS), glükogenolüüsis (p-GSK3), glükoosi transporteris (GLUT2), lipogeneesis (ACC ja HMGCR) ja lipolüüsis (HSL) osalevate valkude kvantifitseerimiseks HepG2 supernatantides. rakud. Määrati ka GLUT2 kogus hiirte maksades. Supernatandi kogu rakuvalgu kvantifitseerimiseks kasutati BCA valgu analüüsi komplekti. Valgutaseme määramiseks mõõdeti neeldumist 450 nm juures 37 kraadi juures StatFax{10}} mikroplaadilugejaga (Awareness Technology Inc., Plam, FL, USA).

2.9. Western blot analüüs

Western blotting viidi läbi HepG2 lüsaatidel, et mõõta AMPK, p-AMPK, glükoneogeneesi (PGCl, PEPCK, glükogenolüüsi (GS, p-GS) ja lipolüüsi (ACC, p-ACC, SREBP{{4}) valgu taset. }c) rakkudes. AMPK,p-AMPK koguste määramiseks diabeedist indutseeritud hiirte maksades viidi läbi ka Western blot. Laadimiskontrolliks kasutati kas GAPDH või -Actin. LAS-3000 kujutis Valguribade vaatlemiseks kasutati süsteemi (Fuji, Tokyo, Jaapan) ja nende tihedus kvantifitseeriti Bio Profile 1D plus plus (Vilbert Lour-mat, Marne La Vallee, Prantsusmaa) tarkvara abil. Kõik andmed väljendati korrutusega kontroll.

2.10. Tühja kõhu veresuhkru ja glükoositaluvuse analüüs

Tühja kõhu veresuhkru taset mõõdeti kord nädalas 5 nädala jooksul pärast 12-tunnist tühja kõhuga perioodi. Glükoositaluvuse testi jaoks jäeti hiiri tühjaks 16 tundi ja neile toideti maosiseselt (ig) 2 g/kg 20 protsenti glükoosi (200 µl), et määrata vere glükoosisisaldus temperatuuril 0 ,0,5,1,1,5 ja 2h. Veri koguti sabaveenist ja glükoosisisaldust mõõdeti glükomeetriga (Sinocare, Changsha, Hiina). Viie nädala jooksul mõõdeti ka glükoosi taset ig-d saanud hiirte uriinis.

2.11.Seerumi biokeemiliste indeksite ja ensüümi aktiivsuse hindamine hiirte maksas

Mõõdeti insuliini, triglütseriidide ja üldkolesterooli kogust seerumis ning SOD ja GSH-PX ensüümi aktiivsust hinnati kaubanduslike komplektide abil vastavalt tootja protokollile. Triglütseriidide (TG) ja üldkolesterooli (TCH) neeldumine lainepikkusel 500 nm ning ülejäänud (insuliin, SOD ja GSH-PX) 450 nm juures mõõdeti StatFax-2100 mikroplaadilugejaga (Awareness Technology) 37 kraadi juures. Inc., Plam, FL, USA).

2.12. Statistiline analüüs

Kõik andmed on esitatud kui vähemalt kolme sõltumatu katse keskmine väärtus ± standardhälve (SD). Arvud saadi kasutades GraphPad Prism Version 8 (GraphPad Software, Inc., CA, USA). Erinevate rühmade statistiliste erinevuste määramiseks viidi läbi ühesuunaline dispersioonanalüüs (ANOVA), t-testid või Sidaki mitme võrdluse test. Erinevusi peeti P-s olulisteks<>

See artikkel on välja võetud saidilt https://doi.org/10.1016/j.redox.2021.102100 Saabunud 21. juulil 2021; Saanud parandatud kujul 9. augustil 2021; Vastu võetud 11. augustil 2021