Inimese amnioni mesenhümaalsed tüvirakud leevendavad AGVHD-d pärast Allo-HSCT-d, reguleerides soolestiku mikrobiota ja soolestiku immuunsuse vahelisi koostoimeid

Abstraktne

Akuutne transplantaat-peremehe vastu haigus (aGVHD) pärast allogeenset vereloome tüvirakkude siirdamist kujutab endast ühe tüütumaid väljakutseid. Soolestiku mikrobiota düsbioos võib jätkuda aGVHD-ga ja mesenhümaalsetel tüvirakkudel (MSC) on aGVHD jaoks paljutõotav terapeutiline potentsiaal. Siiski pole teada, kas hAMSC-d mõjutavad soolestiku mikrobiotot aGVHD leevendamise ajal. Sellest lähtuvalt püüdsime määratleda inimese amnionimembraanist pärinevate MSC-de (hAMSC) mõju ja aluseks olevad mehhanismid, mis reguleerivad soolestiku mikrobiotat ja soolestiku immuunsust aGVHD-s. Luues humaniseeritud aGVHD hiiremudelid ja hAMSC-ravi, leidsime, et hAMSC-d leevendasid oluliselt aGVHD sümptomeid, muutsid T-rakkude alamhulkade ja tsütokiinide immuunsüsteemi tasakaalustamatuse ning taastasid soolebarjääri. Lisaks paranes hAMSC-dega ravimisel soolestiku mikrobiota mitmekesisus ja koostis. Spearmani korrelatsioonianalüüs näitas, et soolestiku mikrobiota ja tihedate ühendusvalkude, immuunrakkude ja tsütokiinide vahel oli korrelatsioon. Meie uuringud näitasid, et hAMSC-d leevendasid aGVHD-d, soodustades soolestiku mikrobiota normaliseerumist ja reguleerides soolestiku mikrobiota ja soolebarjääri, immuunsuse vahelisi koostoimeid.

Tistanche kasulikud omadused meestele - tugevdavad immuunsüsteemi

Märksõnad

Äge transplantaat-peremehe vastu haigus · Amnioni mesenhümaalsed tüvirakud · Soolestiku mikrobioota · Soolebarjäär · Soole immuunsus

Sissejuhatus

Allogeense vereloome tüvirakkude siirdamise (allo-HSCT) peamine eelis on võimas kasvajavastane reaktsioon, mis tuleneb transplantaat-leukeemia (GVL) efektist, mille käivitab peptiidide äratundmine, mis tulenevad erinevustest genoomsetes polümorfismides patsientide ja patsientide vahel. doonor. Äge transplantaat-peremehe-vastu haigus (aGVHD) keerleb aga alloreaktiivsete doonor-T-rakkude rünnaku tõttu retsipiendi koekahjustuse tekke ümber ja kujutab endast alloHSCT-s eluohtlikku suurt komplikatsiooni [1, 2]. On teatatud, et soolestiku mikroobne häire kutsub esile põletikulisi reaktsioone ja on korrelatsioonis põletikuga seotud haigustega [3, 4]. Arvukad uuringud on näidanud, et soolestiku mikrobiota häired on pärast allo-HSCT-d oluline tegur, mis käivitab aGVHD, ja neist saab uus ravi sihtmärk [5, 6]. Täpsemalt iseloomustab aGVHD soolestiku mikrobiota düsbioosi tavaliselt soolestiku bakteriaalse mitmekesisuse kadu ja oportunistlike patogeenide väljakasv [6]. Seedetrakti GVHD korral käivitab kahjustatud limaskesta barjäär peremeesantigeeni esitlevate rakkude ja doonor-T-rakkude aktivatsiooni, mis kulmineerub T-rakkude diferentseerumisega patogeense tüübi-1 ja tüübi-17 paradigmade järgi tolerogeensete regulatiivsete T-rakkude arvelt. raku mustrid [7]. Peamiselt 16S ribosomaalse RNA (16S rRNA) sekveneerimine näitas, et GVHD-ga on seostatud mitut liiki soolestiku mikrobiota ja näiteks butüraati tootvad klostriidid on seotud epiteeli barjääri funktsiooni säilimise ja ägeda GVHD nõrgenemisega [8 ]. Mesenhümaalsed tüvirakud (MSC) on viimasel kümnendil pälvinud suurt tähelepanu nende iseenesliku uuenemise ja mitmeliinilise diferentseerumispotentsiaali ning immunomoduleerivate omaduste tõttu [9]. Arvatakse, et MSC-d võimaldavad tugeva põletiku korral kahjustatud kudesid tasakaalustatud põletikulisest ja regeneratiivsest mikrokeskkonnast ning neid on laialdaselt kasutatud immuunpõhiste häirete raviks, mille puhul kõige edukam kliiniline rakendus on seotud GVHD-raviga [10]. Inimese amnioni mesenhümaalsed tüvirakud (hAMSC-d) on perinataalsed tüvirakud, millel on embrüonaalsete tüvirakkudetaoline diferentseerumisvõime ja täiskasvanud tüvirakkude sarnased immunomoduleerivad omadused. Tüüpiliste MSC-dega sarnaseid fenotüüpe jagavad hAMSC-d on muutunud paljulubavaks tüvirakkude allikaks tänu kudede omandamise lihtsusele, mitteinvasiivsele ja ohutusele, rohkele rakusaagile ning väga madalatele eetilistele ja moraalsetele vaidlustele võrreldes muudest allikatest pärit tüvirakkudega. Inimese AMSC-de eeliseks on madal immunogeensus ja kasvajate puudumine, mistõttu on need rakuteraapia jaoks ideaalsed rakuallikad [11, 12]. In vitro katsed on kinnitanud, et hAMSC-del oli suurem proliferatsioonivõime ja suurem pikaajaline kasvuvõime kui luuüdist pärinevatel MSC-del [13, 14]. Arvukad uuringud on näidanud, et hAMSC-del on potentsiaal leevendada paljusid põletikulisi haigusi, sealhulgas põletikulist soolehaigust, osteoartriiti ja autoimmuunhaigust [11]. Meie hiljutine uuring on näidanud, et hAMSC-d parandasid aGVHD-d, reguleerides T-efektor- ja Treg-rakkude tasakaalu [15]. Kuid hAMSC-de mõju ja mehhanism soolestiku mikroobsetele häiretele GVHD-s pole teada. Siin on meie eesmärk uurida hAMSC-de võimalikku mõju nii aGVHD-le kui ka soolestiku mikroökosüsteemile. See oleks esimene uuring, mis paljastaks soolestiku mikrobiota ja selle korrelatsiooni soole immuunsusega pärast hAMSC-ga aGVHD-ravi.

Materjalid ja meetodid

HAMSC-de isoleerimine, kultiveerimine ja identifitseerimine

HAMSC-d ekstraheeriti eelnevalt kirjeldatud viisil [15]. Kolmanda passaaži (P3) rakud koguti fenotüübi tuvastamisest CD34 (581, BD Pharmingen, USA), CD45 (HI30, BD Pharmingen, USA), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen) vastaste antikehadega värvimise teel. , USA), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, USA), CD90 (5E10, BD Pharmingen, USA), CD73 (AD2, BD Pharmingen, USA) ja CD105 (SN6, bioscience, USA) ning seejärel analüüsiti voolutsütomeetriga ( BD FACS Canto II). Rakke kontrolliti nende mitmeliinilise diferentseerumise suhtes, kasutades spetsiifilist induktsioonikeskkonda (BGscience, Hiina) ja värviti vastavalt adipogeneesi ja osteogeense diferentseerumise jaoks Oil Red-O ja Alizarin Rediga. Katsetes kasutati hAMSC-sid lõikudes 3 kuni 6.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

Inimese PBMC kollektsioon

Plasmaproovid hangiti tervetelt vabatahtlikelt kirjaliku teadliku nõusolekuga. Inimese perifeerse vere mononukleaarsed rakud (PBMC-d) eraldati perifeersest verest Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Hiina) tihedusega tsentrifuugimisega, pesti PBS-ga, suspendeeriti punase vere lüüsipuhvris (Solarbio, Hiina) 4 kraadi juures 15 minutit. Peske uuesti ja suspendeerige seejärel PBS-s NPG hiirtele sabaveeni süstimiseks.

Hiired

8–10 nädala vanused ja 25–30 g isased ja emased NPG hiired osteti ettevõttelt Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. ja neid kasvatati SPF tingimustes 12-tunnises valguse-pimeduse tsüklis konstantse temperatuuri ja niiskusega. Kõik loomkatsed kiitis heaks Lõuna Meditsiiniülikooli institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (nr L2019132) vastavalt Hiina riikliku tervise- ja meditsiiniuuringute nõukogu suunistele loomkatsete kohta.

Ägeda GVHD loomamudel ja ravi

AGVHD hiiremudel loodi nagu eelnevalt kirjeldatud [15]. Ravi jaoks süstiti kolmandal päeval pärast siirdamist igasse hiiresse sabaveeni kaudu 5 × 105 hAMSC-d hiire kohta (siin hAMSC-de rühm) ja PBS-i (siin aGVHD rühm). Kõigis hiiremudelites kontrolliti hiiri iga kahe päeva järel haigestumuse ja kehakaalu muutuste osas. Igal hiirel hinnati patoloogilisi tunnuseid, sealhulgas kaalulangus, küürus kehahoiak, turritatud karv, nahakahjustused, vähenenud liikuvus ja kõhulahtisus, ning seejärel hinnati aGVHD kliinilise hindamissüsteemi järgi, mis oli kohandatud Cooke'i algselt kirjeldatud süsteemist [16]. Mõnel juhul kannatasid aGVHD rühma hiired raske aGVHD all ja hAMSC rühma hiired ohverdati kolmandal päeval pärast ravi perifeerse vere ja sihtorganite, sealhulgas maksa, põrna, kopsude ja soolte kogumiseks. Nende hiirte väljaheited koguti enne surmamist.

GFP-märgisega hAMSC-d ja in vivo jälgimine

GFP-märgistatud hAMSC-d loodi ja identifitseeriti nagu eelnevalt kirjeldatud [15]. Lühidalt, me transfekteerisime rohelise fluorestsentsvalgu (GFP) geeni hAMSC-desse, kasutades vektorina lentiviirust. 5 × 105 GFP-ga märgistatud hAMSC-d, mis olid suspendeeritud 500 μL PBS-is, süstiti aGVHD hiirtele sabaveeni kaudu. 24 tunni ja 72 tunni pärast eutaniseeriti hiired soolte kogumiseks ja seejärel genereeriti külmutatud lõigud. Retsipientrakkude eristamiseks kasutati DAPI vastuvärvimist.

Histopatoloogiline hindamine

AGVHD sihtorganid koguti lahkamise ajal ja töödeldi seejärel parafiiniga manustatud plokkideks, et luua 5- μm paksused lõigud hematoksüliini ja eosiini värvimiseks (H&E). Histoloogilisi skoori hinnati koe struktuuri hävimise ja lümfotsüütide infiltratsiooni põhjal [17]. Immunohistokeemia jaoks lõigud deparafniseeriti, rehüdreeriti ja töödeldi endogeense peroksidaasi aktiivsuse inaktiveerimiseks 3% H2O2 metanoolis 20 minutit. Seejärel eraldati lõigud antigeeni ja töödeldi seerumi albumiiniga 1 tund. Seejärel inkubeeriti sektsioone küüliku anti-inimese CD45 antikehadega (EP322Y, Abcam, Inglismaa) või ZO-1 antikehadega ((EPR19945-296, Abcam, Inglismaa) 1 tund 37 kraadi juures. antikehad tuvastati HRP-ga konjugeeritud sekundaarse antikehaga (Genentech, USA) ja visualiseeriti DAB-ga. Positiivset ala analüüsiti Image J abil.

cistanche taime suurendav immuunsüsteem

Fekaalse mikrobiota 16S rRNA sekveneerimine

Väljaheite genoomne DNA ekstraheeriti 0,1 g külmutatud väljaheiteproovidest, kasutades EZNA® väljaheite DNA komplekti (Omega BioTek, Norcross, GA, USA) järgides tootja protokolli. Kasutades mallina genoomset DNA-d, kasutati spetsiifilisi praimereid (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′ ja 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) koos vöötkoodide ja PremixTaq) (ToKaRaampl, Hiina) bakteriaalse 16S rRNA geeni V3-V4 hüpervarieeruvad piirkonnad. Pärast amplifitseerimist ja puhastamist sekveneeriti kogu proovi genoom Illumina Hiseqi või Miseqi suure läbilaskevõimega sekveneerimisplatvormil Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, Hiina), et saada FASTQ-vormingus toorandmed. Järjestuste andmete analüüsid viidi läbi peamiselt Magichandi platvormi abil.

Voolutsütomeetriline analüüs

AGVHD sihtorganid ja hiirte perifeerne veri saadi ja valmistati üherakuliseks suspensiooniks. Rakud värviti monoklonaalsete antikehadega CD3 (UCHT1, Biolegend, USA), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, USA), CD8 (RPA-T8, Biolegend, USA), CD25 (BC96, Biolegend, USA) või sobitatud isotüübiga. kontrollige IgG-d (eBioscience, USA) 30 minutit toatemperatuuril pimedas. Seejärel töödeldi rakke lüüsimispuhvriga (BD Pharm Lyse™) 4 kraadi juures pimedas 15 minutit. Intratsellulaarne Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, USA) värvimine viidi läbi vastavalt tootja soovitustele (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Seejärel viidi läbi voolutsütomeetriga polükromaatilised voolutsütomeetrilised analüüsid.

Tsütokiinide kvantifitseerimine

Tsütokiinide tasemed hiirte seerumis ja koe supernatandis määrati vastavalt tootja juhistele inimese Th1/Th2/Th17 tsütokiini komplekti (BD Pharmingen, USA) abil Cytometric Bead Array (CBA) abil. Lühidalt, 50 μl igast supernatandi proovist inkubeeriti 50 μL segatud inimese Th1/Th2/Th17 tsütokiini püüdmise helmeste ja 50 μL inimese Th1/Th2/Th17 PE tuvastamisreagendiga toatemperatuuril pimedas, seejärel suspendeeriti. voolutsütomeetria analüüsiks 3 tundi hiljem.

Kvantitatiivne reaalajas PCR

Kogu RNA ekstraheeriti hiire käärsoolekoest pärast isoleerimist, kasutades Trizol Reagenti (TaKaRa, Hiina). Kogu RNA-d kasutati matriitsina cDNA pöördtranskribeerimiseks. -aktiini kasutati sisemise viitena. mRNA ekspressiooni mõõdeti qPCR-iga, kasutades järgmisi praimereid: ZO-1-F, 5'-ACCCACCAACCCGAGAAGAC-3' ja ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' ja OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -aktiin-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' ja -aktiin-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. RNA ekspressioonitaseme mõõtmiseks kasutati 2-ct meetodit.

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA)

D-LA ja DAO tasemeid plasmas mõõdeti ELISA komplektidega (Jingmei, Hiina) vastavalt tootja juhistele. Lühidalt, kogutud plasma supernatandid pandi vastavalt 96-spetsiifiliste antikehadega kaetud plaatidele. Neelduvus registreeriti 450 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

Statistiline analüüs

Andmed esitati kui keskmine ± SD. Sõltumatute proovide t-test viidi läbi ja visualiseeriti GraphPad Prism8 abil.0. 16S rRNA sekveneerimise andmete analüüsid viidi läbi Magichandi platvormi abil (http://cloud.magigenecom/). Korrelatsioonimaatriksi kuvamiseks viidi läbi soolestiku mikrobiota ja immuunsuse vaheline korrelatsioonianalüüs R-pakettidega (v3.6.3). P väärtused<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Tulemused

HAMSC-de tuvastamine

HAMSC-d näitasid kultuuris polügoon- või fibroblastitaolist morfoloogiat (joonis 1A) ja olid tugevalt positiivsed MSC-spetsiifiliste markerite CD90, CD105 ja CD73 pinnaekspressiooni suhtes, kuid negatiivsed CD34, CD45, HLA-DR ja CD11b suhtes (joonis 1A) 1C). Mis puudutab mitmeliinilist diferentseerumist, siis meie tulemused näitasid, et hAMSC-d näitasid adipotsüütilist ja osteoblastilist diferentseerumist (joonis 1B).

hAMSC-d leevendasid hiirtel märkimisväärselt aGVHD sümptomeid

Esmalt hindasime hAMSC-de terapeutilist toimet aGVHD-le. Võrreldes aGVHD rühmaga, parandasid hAMSC-d märkimisväärselt aGVHD-d, mida tõendab märgatavalt vähenenud kaalukaotus (joonis 2B) ja aGVHD kliiniline skoor (joonis 2C). Lisaks oli hAMSC-de rühmal aGVHD hiirtega võrreldes oluliselt kõrgem elulemus (joonis 2D). Patoloogiline histoloogia analüüs näitas, et aGVHD põhjustas tõsiseid koekahjustusi ja leukotsüütide infiltratsiooni. hAMSC-d, nagu näitas H&E, nõrgendasid kudede katkemist ja eksogeensete T-rakkude infiltratsiooni aGVHD sihtorganites (joonis 2E). Järjekindlalt kinnitasid IHC tulemused ka seda, et hAMSC-d parandasid ebanormaalseid patoloogilisi ilminguid (joonis 2F). Need tulemused näitasid, et hAMSC-d võisid aGVHD hiirtel aGVHD sümptomeid leevendada.

hAMSC-d mõjutasid aGVHD hiirte peremeesorganismi immuunsust

Et mõista aluseks olevaid immunomoduleerivaid mehhanisme, mille abil hAMSC-d vähendavad aGVHD-d, mõõtsime T-rakkude aktiveerimist ja laienemist perifeerses veres ja sihtorganites. Voolutsütomeetria test näitas, et hAMSC-d inhibeerisid märkimisväärselt CD3+CD4+T ja CD3+CD8+T-rakkude arvu veres ja sihtorganites (joonis 3A, B). Veelgi enam, CD4+CD25+Foxp3+Tregi osakaal hAMSC-rühma hiirte veres ja sihtorganites oli oluliselt suurem kui aGVHD rühmas (joonis 3C). . Järgmisena uurisime hAMSC-de mõju tsütokiini profiilile (joonis 4). hAMSC-de manustamine põhjustas IL-17A, IFN-, TNF, IL-6 ja IL-2 taseme ilmse languse sihtorganites ja veres võrreldes aGVHD rühmaga, välja arvatud TNF tase põrnas. Vahepeal näitasid hAMSC-ga ravitud hiirtel lisaks IL-10 tasemele maksas oluliselt IL-10 ja IL-4 tase sihtorganites ja veres. Kokkuvõttes mängisid hAMSC-d aGVHD-s kaitsvat rolli, muutes T-rakkude alamhulkade ja tsütokiinide tormi immuunsüsteemi tasakaalustamatuse.

Cistanche tubulosa eelised- tugevdada immuunsüsteemi

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSC-d leevendasid aGVHD hiirte soolebarjääri kahjustusi

Et uurida, kas hAMSC-d võivad aGVHD-s parandada soolebarjääri, jälgisime kõigepealt, kas hAMSC-d võivad soolestikku migreeruda. Nagu on näidatud joonisel 5A, tuvastati GFP-märgistatud hAMSC-d soolestikus pärast hAMSC-desse süstimist ja need võivad soolestikku siirduda ja sinna infiltreeruda. Seejärel koostasime peensoolekoe histopatoloogilise hindamise. AGVHD rühmas oli sool erodeeritud ja nekrootiline, soolestiku villid olid ilmselgelt hävinud, villid olid katki ja massiivsed leukotsüüdid imbusid soole limaskesta, submukoosse ja lamina propria. Soolevillid olid korrapäraselt paigutatud ning pärast hAMSC-ravi ei esinenud soolepõletiku purunemist ega koore epiteeli eraldumist (joonis 5B). Inimese lümfotsüütide infiltratsiooni täheldati ka immunohistokeemia abil sooltes aGVHD rühmas, samas kui hAMSC-ravi võis vähendada nende infiltratsiooni (joonis 5C). HAMSC-de kaitsva toime hindamiseks soole limaskesta terviklikkusele viisime läbi immunohistokeemia, et tuvastada mõju ZO-1-le. HAMSC-ravi saanud rühmas oli tiheda ühendusvalgu ZO-1 ekspressioonitase oluliselt suurenenud võrreldes aGVHD rühmaga (joonis 5D). Uurisime ka soolestiku tihedate ühendusvalkude (TJ) mRNA ekspressioonitasemeid ning D-piimhappe (D-LA) ja diamiini oksüdaasi (DAO) plasmatasemeid, et määrata soole barjääri funktsiooni ja soole läbilaskvust. Intravenoossel manustamisel võivad hMASC-d märkimisväärselt tõsta TJ-de võtmevalkude ZO-1 ja Occludini mRNA ekspressioonitaset (joonis 5E, F), vähendades samal ajal D-LA ja DAO taset (joonis 5G, H). Seega, kui aGVHD ilmnes, kahjustas soolebarjääri soolestiku tihedate ühendusvalkude vähenemise ja soolestiku läbilaskvuse suurenemise tõttu. Samal ajal võivad hAMCS-id soolebarjääri häireid märkimisväärselt muuta.

Joonis 1 HAMSC-de fenotüübiline ja funktsionaalne iseloomustus. (A) Tüüpilised hAMSC-de mikropildid passaažist 0 kuni 3. (värvimata, 100 ×). (B) HAM SC-de mitmeliiniline diferentseerumisvõime. HAMSC-de adipogeenne diferentseerumine (vasakul) värviti Oil Red-O-ga ja hAMSC-de osteoblastiline diferentseerumine (paremal) värviti Alizarin Rediga (värvimine, 100 ×). (C) Voolutsütomeetriline analüüs, mis näitab, et hAMSC-d on CD90, CD105 ja CD73 suhtes positiivsed, samas kui CD34, CD45, CD11b ja HLA-DR suhtes negatiivsed

Joonis fig 2 hAMSC-d leevendasid NPG hiirtel aGVHD-d. (A) Skemaatiline diagramm, mis illustreerib hAMSC-de manustamise ajakava aGVHD hiiremudelites. (B) Kehakaalu muutused erinevates rühmades (n=10). (C) aGVHD kliiniline skoor (põhineb kaalulangusel, küürus kehaasendil, karusnahal, nahakahjustustel, liikumispuudel ja kõhulahtisusel) erinevates rühmades (n =10). (D) Ellujäämine erinevate rühmade vahel (n=10). (E) Tüüpilised mikroskoopilised pildid H&E värvimisest (400×) ja histoloogilisest skoorist (koe struktuuri hävimise ja lümfotsüütide inflatsiooni põhjal) (n=4). (F) Tüüpilised mikroskoopilised pildid immunohistokeemiast (400 ×) ja CD45 positiivse ala osakaal (n =4). Väärtused esitati kui keskmine ± SD

Joonis fig 3 hAMSC-d inhibeerisid doonori T-rakkude ekspansiooni, suurendades samal ajal Tregide teket või laienemist in vivo. (A) CD3+CD4+T-rakkude (n=6) voolutsütomeetria analüüs, (B) CD3+CD8+ voolutsütomeetria analüüs T-rakud(n=6), (C) CD4+CD25+Foxp3+Tregide (n=6) voolutsütomeetria analüüs. Väärtused esitati kui keskmine ± SD

Joonis fig 4 hAMSC-d vähendasid põletikueelseid tsütokiine IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 ja ülesreguleerisid põletikuvastaseid tsütokiine IL-10 ja IL -4 in vivo (n=5). Väärtused esitati kui keskmine ± SD

Soolestiku mikrobiota vaheldumised pärast hAMSC-ravi aGVHD hiirtel

16S rRNA sekveneerimine viidi läbi erinevatest hiirte rühmadest eraldatud fekaalse bakteri DNA-s. Mitmekesisusindeksid, sealhulgas OUT, Chao1 ja Shannoni indeksid, näitasid sarnaseid tendentse ja hAMSC-ravi hiirtel oli mikrobiota, mille mitmekesisus oli oluliselt suurem kui aGVHD rühmas (joonis 6A). Peamine koordinaatide analüüs (PCoA), mis põhineb Un kaalutud unifrac-kaugusel, Manhattani kaugusel ja Bray-Curtise meetrilisel kaugusel, andis kahe rühma graafikutel hajutatud andmepunkte, kuigi erinevus ei olnud oluline (joonis 6B). Seejärel hindasime soolestiku mikrobiota maastikku, et täiendavalt uurida võimalikku koostise erinevust kahe rühma vahel. Arvutati kokku 773 OTU-d ja hAMSC-de rühmal olid kõrgemad OTU-d võrreldes aGVHD rühmaga (joonis 6C). Arvestades bakterite koostist varjupaiga tasandil, olid Firmicutes ja Bacteroidetes kaks kõige domineerivamat rühma (joonis 6D). Samuti korraldasime kahe rühma soolestiku mikrobiota analüüsimiseks võrdluse soojuskaardi (joonis 6E). Perekonda Odoribacter ja Ruminococcus{11}} esines suhteliselt palju hAMSC-de rühmas, mis on olulised mikroobid soolestiku homöostaasi säilitamiseks (joonis 6F, G). Kinnitamaks, millist bakterit hAMSC-ravi muutis ja mis omakorda mõjutas haiguse progresseerumist aGVHD vastu, viisime läbi suure mõõtmetega klasside võrdlused, kasutades efekti suuruse lineaarset diskriminantanalüüsi (LEfSe), mis tuvastas märkimisväärsed erinevused bakterikoosluste ülekaalus kaks rühma. Nagu on näidatud (joonis 6H, I), olid Streptococcaceae (perekond ja perekond Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 ja Delftia peamised bakteritüübid, mis soodustasid soolestiku mikrobiota düsbioosi aGVHD rühmas. Sellegipoolest näitasid kasulikud bakterid Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter ja Clostridia (klass ja järjekord Clostridiales) hAMSC-de rühmas suhtelist rikastumist, mis võib olla seotud hAMSC-de vahendatud aGVHD leevendamisega. Kokkuvõttes paranes soolestiku mikrobiota mitmekesisus ja koostis pärast hAMSC-de manustamist ning see liikus üldises suundumuses, mis oli kehale kasulik.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

hAMSC-d reguleerisid soolestiku mikrobiota ja soolestiku immuunsuse vahelisi koostoimeid

Soolestiku mikrobiota ja soole limaskesta barjääri võimaliku seose mõistmiseks analüüsiti Spearmani korrelatsioonianalüüsiga TJ-de ja soolestiku mikrobiota vahelisi seoseid perekonna tasandil. Nagu on näidatud joonisel 7, oli ZO-1 ja kasulike bakterite Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 ja Ruminiclostridium_9 vahel positiivne seos. Kasulike bakterite Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 ja Ruminococcaceae_UCG.014 suhteline arvukus näitas dramaatiliselt positiivset korrelatsiooni Occludiniga. Järgmisena viisime läbi korrelatsioonianalüüsi soolestiku mikrobiota ja soolestiku immuunbarjääri vahel Spearmani järjestuskorrelatsioonimeetodi abil (joonis 7). Märkasime, et Roseburia, Muribaculum ja Ruminococcus _1 suurenemine oli negatiivses korrelatsioonis CD3 +CD4+T-rakkude protsendiga. Lisaks oli kasulike bakterite Ruminococcus_1 ja Ruminiclostridium _9 suurenemine positiivses korrelatsioonis Tregide protsendiga, samas kui negatiivses korrelatsioonis IL-17. Lactobacillus'e ja Candidatus{16}}Arthromituse arvukus oli negatiivses korrelatsioonis IFN-ga. Muribaculumi arvukuse ja IL-i vahel oli negatiivne korrelatsioon-2. Candidatus{19}}Saccharimonas'e arvukuse suurenemine ja Escherichia vähenemine. Shigella arvukus oli positiivses korrelatsioonis IL-10 tasemega (joonis 7). Korrelatsioonianalüüsi tulemused näitasid, et hAMSC-d parandasid peremeesorganismi põletikulist keskkonda ja reguleerisid soolestiku homöostaasi, mis võib olla seotud soolestiku mikrobiota modulatsiooniga, ning takistasid seega aGVHD-d.

Joonis fig 5 hAMSC-d leevendasid aGVHD hiirte soolebarjääri düsfunktsiooni. (A) GFP-märgistatud hAMSC-d infiltreerusid soolestikku. (B) Tüüpilised mikroskoopilised pildid soolte H&E värvimisest (400 ×) ja histoloogilisest skoorist (koe struktuuri hävimise ja lümfotsüütide infiltratsiooni põhjal) (n=4). (C) Tüüpilised mikroskoopilised pildid soolte immunohistokeemiast (400 ×) ja CD45 positiivse ala osakaal (n =4). (D) Tüüpilised mikroskoopilised pildid soolte immunohistokeemiast (400 ×) ja ZO-1 positiivse ala osakaal (n=4). (E) ZO-1 ja Occludin (n=3) mRNA ekspressioonitasemed. (F) D-LA ja DAO tase plasmas (n=4).Väärtused esitati kui keskmine ± SD

Arutelu

Täiustatud mikroobianalüüs on andnud uue ülevaate peremeesorganismi ja soolestiku mikrobiota vahelisest keerukast koostoimest [18]. Soolestiku mikrobiota võib pärast allo-HSCT-d muutuda ja see on tihedalt seotud aGVHD-ga, mis viitab sellele, et soolestiku mikrobiota võib olla aGVHD-ravi uus sihtmärk [5]. Arvukad uuringud, sealhulgas meie hiljutine uuring, on uurinud ja kinnitanud MSC-de terapeutilist toimet aGVHD-le [15, 19, 20]. Mõju soolestiku mikrobiotale sel perioodil jääb aga ebaselgeks. Selles uuringus uurisime hAMSC-de mõju aGVHD-le ja selle võimalikke mehhanisme in vivo. Kooskõlas varasemate uuringutega [15, 21–23] näitasid meie tulemused, et hAMSC-del on hiirtel aGVHD-le soodne kaitsev toime, mida tõendavad nõrgenenud aGVHD sümptomid ja pikem elulemus. Samuti näitasime, et hAMSC-del oli immunosupressiivne toime, vähendades doonori T-rakkude laienemist, suurendades samal ajal Tregide teket aGVHD-s. Samal ajal võivad hAMSC-d põletikueelseid tsütokiine alla reguleerida ja põletikuvastaseid tsütokiine in vivo üles reguleerida, et pärssida põletikulisi reaktsioone. Soolebarjäär, tihe struktuur, mis koosneb ühekihilisest sooleepiteelirakkudest, säilitab oma terviklikkuse ja takistab luminaalse mikrobiota ümberpaigutamist terves olekus [24]. Allo-HSCT ajal kahjustavad konditsioneerimisrežiimid soolebarjääri, mis on aGVHD väljatöötamise esimene samm, kuna see võimaldab bakteritel üle barjääri liikuda ja põhjustab soole immuunhomöostaasi häirimist [24, 25]. Kogunev tõendusmaterjal näitab, et MSC-del on võime kudesid parandada, mis tõestas, et see parandab soolebarjääri terviklikkust koliidihiirtel [26]. Tihedatel ühendusvalkudel, sealhulgas ZO-1 ja Occludinil, on soolebarjääri funktsioonis oluline roll ning soolestiku mikrobiota translokatsioon üle kahjustatud soolebarjääri kutsub esile põletiku [27]. D-LA pärineb soolebakteritest ja DAO kontsentreerub peamiselt soole limaskestale. Seega võivad plasma D-LA ja DAO kõrged kontsentratsioonid osaliselt kajastada muutusi soole läbilaskvuses ja soolebarjääri funktsioonis [28]. Praegu leidsime, et TJ-de ekspressioonitasemed tõusid pärast hAMSC-de manustamist dramaatiliselt, samas kui D-LA ja DAO plasmatasemed vähenesid oluliselt, mis näitab, et hAMSC-d võivad parandada soolebarjääri düsfunktsiooni ja taastada soole läbilaskvust. Soolestik on üks organeid, mida aGVHD kõige rängemalt mõjutab, ja uuringud on näidanud, et bakter, eriti soolestiku mikrobiota, mängib aGVHD patogeneesis ja arengus keskset rolli [5, 6]. Nagu varasemates uuringutes teatati, seostati allo HSCT patsientide bakteriaalse mitmekesisuse vähenemist aGVHD suurenenud suremusega [29, 30]. Oportunistlike patogeenide Enterococcus ja Proteobacteria väljaheidete domineerimist on seostatud ka suurenenud GVHD-ga [6, 31]. Viimastel aastakümnetel on suurenenud tähelepanu pööratud soolestiku mikrobiota ja MSC-ravi vahelisele korrelatsioonile põletikuliste haiguste korral. On tõestatud, et MSC-d leevendavad reumatoidartriidi, sepsise ja põletikulise soolehaiguse soolestiku mikrobiota düsbioosi [32–34]. Mehhanismi edasiseks uurimiseks, mille abil hAMSC-d aGVHD-d leevendavad, uurisime hAMSC-de mõju soolestiku mikrobiotale. Käesolevas uuringus näitas hAMSC-de manustamine märkimisväärset mõju mikroobikoosluste mitmekesisusele võrreldes siirdamise puudumisega, mis näitab, et pärast hAMSC-ravi võib soolestiku mikrobiota arvukust muuta. Siiski ei olnud mitmekesisuse mõõtmistes olulist erinevust, võib-olla mõlema rühma väikese valimi suuruse või hAMSC-de ebapiisava ravitsükli tõttu. Analüüs, milles kasutati perekonna tasemete võrdlussoojuskaarti, näitas, et hAMSC-de manustamine suurendas kasulike bakterite Odoribacter ja Ruminococcus_1 arvukust sooleflooras, mis on põletikuvastaste omadustega lühikese ahelaga rasvhapete (SCFA) tootjad [35]. , 36]. HAMSC-de siirdamise kaudu vahendatud domineerivate bakterite tuvastamiseks viidi kahe rühma vahel läbi LEfSe analüüs. Võrreldes aGVHD rühmaga suurendas hAMSC-ravi märkimisväärselt mõnede põletikuvastase toimega seotud kasulike mikroobide, nagu Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, arvukust, mis kõik olid kasulikud soolestiku mikrobiota tootmiseks [metaboliit SCFA-d 37–42]. Seetõttu näitasid meie tähelepanekud, et pärast hAMSC manustamist paranes soolestiku mikrobiota düsbioos, mis väljendub kasulike bakterite paranenud mitmekesisuses ja suurenenud suhtelises arvukuses.

Joonis 6 Soolestiku mikrobiota muutused aGVHD hiirtel. (A) mitmekesisuse võrdlus. (B) mitmekesisuse võrdlus. (C) OTUde Venni diagramm. (D) Suhteline bakterite arvukus varjupaiga tasemel. (E) Liikide arvukuse soojuskaart perekonna tasandil. (F) Odoribakterite suhteline arvukus perekonna tasandil. (G) Ruminococcus_1 suhteline arvukus perekonna tasandil. (H) LEfSe analüüsil põhinev kladogramm. (I) LDA skoor, mis on arvutatud aGVHD ja hAMSC rühmade vahel erinevalt esinevate tunnuste põhjal. (AI) n=3 hiirt rühma kohta. Väärtused esitati kui keskmine ± SD

aGVHD on keeruline põletikuline protsess, mille käivitab soolebarjääri terviklikkuse hävitamine, millele järgneb soolestiku mikrobiota ja nende komponentide translokatsioon. Kahjustusega seotud molekulaarmustrite ja patogeenidega seotud molekulaarmustrite tuvastamine antigeeni esitlevate rakkude poolt kutsub esile põletikueelse reaktsiooni, sealhulgas T-rakkude aktiveerimise ja tsütokiinide tormi, et süvendada soolebarjääri kahjustusi ja soodustada aGVHD arengut [24, 43]. Teisest küljest mängivad soolestiku mikrobiota ja mikrobiotast pärinevad metaboliidid, nagu SCFA-d, olulist rolli soolebarjääri terviklikkuse ja soolestiku homöostaasi säilitamisel, samuti limaskesta immuunsüsteemi kujundamisel ning peremeesorganismi kaitse tasakaalustamisel mikroobsete komponentide ja metaboliitidega [24, 44]. . Omavaheline suhtlus peremeesorganismi ja soolestiku mikrobiota vahel soolebarjääris reguleerib limaskesta ja süsteemseid immuunvastuseid ning võib patoloogilistes seisundites põhjustada GVHD-d [6, 45, 46]. See viitas sellele, et soolestiku mikrobiota on tihedalt seotud tihedate ühendusvalkude ekspressiooniga [47]. Käesolev uuring näitas, et TJ-de ZO-1 ja Occludin mRNA ekspressioon oli negatiivses korrelatsioonis kahjulike bakterite suhtelise arvukusega, samas kui sellel oli positiivne korrelatsioon kasulike bakteritega, mis näitab, et soolestiku mikrobioota oli oluline, et säilitada soolestiku terviklikkus. soolebarjäär. Lisaks on soolestiku mikrobiota väga oluline ka soolestiku immuunbarjääri säilitamisel [47]. Märkasime, et mõned kasulikud bakterid olid negatiivses korrelatsioonis CD3+CD4+T-rakkude protsendiga, kuid positiivses korrelatsioonis Tregide protsendiga. Siin selgus, et kasulikud bakterid, enamasti SCFA tootjad, olid negatiivses korrelatsioonis põletikueelsete tsütokiinidega, kuid positiivselt korrelatsioonis põletikuvastaste tsütokiinidega, samas kui kahjulikud bakterid on vastupidiselt korrelatsioonis. Kokkuvõtlikult võib öelda, et soolestiku mikrobiota märkimisväärne erinevus ravimeetodite vahel näitas täielikku pilti soolestiku mikrobiota ja soolebarjääri, immuunsuse vastastikmõjudest. Meie katsetes oli veel mitmeid piiranguid, mida tasub arutada. Esiteks, kuigi meie uuringus uuriti hAMSC-de mõju immuunsusele, soolebarjäärile ja soolestiku mikrobiotale aGVHD-s, tuleb selle aluseks olevat mehhanismi edasises uuringus veel kontrollida. Teiseks, soolestiku mikrobiota, soolebarjääri ja immuunsuse põhjuslike seoste käsitlemiseks on vaja soolestiku mikrobiota ammendumist ja väljaheite mikrobiota siirdamist. Kolmandaks on õigustatud edasised uuringud, mis uurivad hAMSC-de mõju mikrobiotast pärinevatele SCFA-dele ja teistele metaboliitidele. Kokkuvõtteks võib öelda, et meie uuringud näitasid, et hAMSC-d leevendasid aGVHD-d, soodustades soolestiku mikrobiota normaliseerumist ja reguleerides soolestiku mikrobiota ja soolebarjääri, immuunsuse vahelisi koostoimeid. Meie uuring on esimene süstemaatiliselt määratletud hAMSC-de mõjud ja aluseks olevad mehhanismid, mis reguleerivad soolestiku mikrobiotat ja soolestiku immuunsust aGVHD-s.

Joonis 7 Soolestiku mikrobiota ja soolestiku immuunsuse vaheline korrelatsioonianalüüs. Spearmani korrelatsioonianalüüs viidi läbi 15 erineva soolestiku mikrobiota suhtelise arvukuse (perekonna tasemel) ja TJ-de mRNA ekspressioonitaseme, immuunrakkude protsendi ja tsütokiinide kontsentratsiooni vahel soolestikus kahe rühma vahel. Spearmani r väärtused jäävad vahemikku -0,5 (sinine) kuni 0,5 (punane)

Viited

1. Schmid, C. (2021). Samm lähemale GVL-ile ilma GVHD-ta. Blood, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X. ja Huang, X. (2018). Leukeemiavastase toime tugevdamise ja säilitamise strateegiad transplantaat versus peremeesorganismi haigust süvendamata. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Soolestiku mikrobiota täpne redigeerimine leevendab koliiti. Loodus, 553 (7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). Kiudainete poolt selektiivselt soodustatud soolestiku bakterid leevendavad II tüüpi diabeeti. Science (New York, NY), 359 (6380), 1151–1156. https:// doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y. ja van den Brink, MRM (2018). Soolestiku mikrobiota vigastus allogeense vereloome tüvirakkude siirdamisel. Looduse ülevaated. Cancer, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M. ja van den Brink, MRM (2017). Soolestiku mikrobiota allogeensete vereloomerakkude siirdamise ja transplantaat-peremehe-haiguse korral. Blood, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood{10}}

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H. ., & Chen, T. (2020). Soolestiku mikroobne metaboliit trimetüülamiin N-oksiid süvendab GVHD-d, indutseerides hiirtel M1 makrofaagide polarisatsiooni. Blood, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Soolestiku mikrobioomist pärinevad metaboliidid moduleerivad sooleepiteelirakkude kahjustusi ja leevendavad transplantaat-peremehe vastu haigust. Nature Immunology, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK ja Tomar, GB (2022). Inimese igemete mesenhümaalsed tüvirakud säilitavad oma kasvu ja immunomoduleerivad omadused sõltumata doonori vanusest. Science Advances, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K. ja Liu, Q. (2016). Mesenhümaalsete stroomarakkude kliiniline kasutamine vereloome tüvirakkude siirdamisel. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K. ja Xin, H. (2021). Inimese amnionist pärinevate tüvirakkude omadused ja terapeutiline potentsiaal. International Journal of Molecular Sciences, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F. ja Xia, Y. (2020). Inimese amnioni mesenhümaalsed tüvirakud soodustavad endogeense luu regeneratsiooni. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https://doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Inimese amnionimembraan kui alternatiivne tüvirakkude allikas regeneratiivse meditsiini jaoks. Diferentseerimine; Research in Biological Diversity, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H. ja Ping, B. (2016). Inimese amnioni mesenhümaalsete tüvirakkude ja inimese luuüdi mesenhümaalsete tüvirakkude bioloogiliste omaduste ja immunosupressiivse aktiivsuse võrdlus. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.{8}}.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q. ja Ping, B. (2021). Inimese amnioni mesenhümaalsed tüvirakud inhibeerivad aGVHD-d, reguleerides Treg- ja T-efektorrakkude tasakaalu. Journal of Inflammation Research, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM ja Ferrara, JL (1996). Idiopaatilise kopsupõletiku sündroomi eksperimentaalne mudel pärast luuüdi siirdamist: I. Väikeste H-antigeenide ja endotoksiini rollid. Blood, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M. ja Bueren, JA (2006). Rasvkoest pärinevatel mesenhümaalsetel tüvirakkudel on in vivo immunosupressiivsed omadused, mida saab kasutada transplantaat-peremeesorganismi haiguse tõrjeks. Tüvirakud (Dayton, Ohio), 24 (11), 2582–2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR ja Macpherson, AJ (2012). Mikrobioota ja immuunsüsteemi koostoimed. Science (New York, NY), 336 (6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490

19. Kelly, K. ja Rasko, JEJ (2021). Mesenhümaalsed stroomarakud transplantaadi vastu peremeesorganismi haiguse raviks. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022) ). Mesenhümaalsed stroomarakud steroidiresistentsete ägeda ja kroonilise siiriku vastu peremeeshaiguse raviks: mitmekeskuseline kaastundliku kasutamise kogemus. Stem Cells Translational Medicine, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Inimese amnionist pärinevad mesenhümaalsed tüvirakud nõrgendavad ksenogeenset transplantaat-peremehe vastu haigust, takistades T-rakkude aktivatsiooni ja proliferatsiooni. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s{10}}a

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). Inimese amnionist ja koorionist pärinevate mesenhümaalsete tüvirakkude angiogeensete, tsütoprotektiivsete ja immunosupressiivsete omaduste võrdlus. PLoS One, 9 (2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y (2019). Amnionist pärinevate mesenhümaalsete tüvirakkude (AM01) ohutus ja efektiivsus patsientidel, kellel on steroidresistentne akuutne transplantaat-peremeesorganismi haigus pärast allogeenset vereloome tüvirakkude siirdamist: I / II faasi Jaapani uuringu uuringuprotokoll. BMJ Open, 9 (7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop et-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y. ja Wu, D. (2021). Soole mikrobiota ja mikroobsete metaboliitide rollid ägedas GVHD-s. Experimental Hematology & Oncology, 10(1), 49. https://doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM ja Holler, E. (2017). GvHD ja teiste HSCT-ga seotud suurte tüsistuste patofüsioloogia. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y. ja Zhi, F. (2020). Embrüonaalsetest tüvirakkudest pärinevad mesenhümaalsed tüvirakud soodustavad käärsoole epiteeli terviklikkust ja regeneratsiooni, tõstes koliidi hiirtel ringlevat IGF-i -1. Theranostics, 10(26), 12204–12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C. ja Wang, L. (2022). Berberiin parandab aGVHD-d soolestiku mikrobiota ümberkujundamise, TLR4 signaalide pärssimise ja käärsoole barjääri parandamise kaudu NLRP3 põletiku inhibeerimiseks. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X. ja Song, H. (2022). Soolestiku mikrobiota osaleb HO-1/BMMSC-de kaitsvas toimes maksa siirdamisel steatootiliste maksatransplantaatidega rottidel. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M. ja Pamer, EG (2014). Sooletrakti bakterite mitmekesisuse mõju suremusele pärast allogeenset vereloome tüvirakkude siirdamist. Blood, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ blood-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Soole Blautiat seostatakse transplantaat-peremeesorganismi haigusest tingitud suremuse vähenemisega. Vere ja luuüdi siirdamise bioloogia: Ameerika vere- ja luuüdi siirdamise ühingu ajakiri, 21(8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P. ja Montassier, E. (2021). Soolestiku mikrobioom allogeense vereloome tüvirakkude siirdamisel ja ägeda siiriku ja peremeesorganismi haigusega seotud spetsiifilised muutused. World Journal of Gastroenterology, 27(45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H ., & Xiao, C. (2020). Inimese naba mesenhümaalsetel tüvirakkudel on reumatoidartriidi korral terapeutiline potentsiaal, reguleerides immuunsuse ja soolestiku mikrobiota vahelisi koostoimeid arüüli süsivesinike retseptori kaudu. Piirid raku- ja arengubioloogias, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H. ja Sun, T. (2020). Rasvast pärinevad mesenhümaalsed tüvirakud nõrgendavad ägedat kopsukahjustust ja parandavad soolestiku mikrobiotat septilistel rottidel. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D. ja Dow, S. (2018). Mesenhümaalsed tüvirakud (MSC), mis on tuletatud indutseeritud pluripotentsetest tüvirakkudest (iPSC), mis on samaväärsed rasvkoest pärineva MSC-ga, soodustades soolestiku paranemist ja mikrobioomi normaliseerumist hiire põletikulise soolehaiguse mudelis. Stem Cells Translational Medicine, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.{9}}

35. Li, J., Zou, C. ja Liu, Y. (2022). Oalbumiinist põhjustatud toiduallergia leevendamine hiirtel tsüanidiin-3-O-glükosiidi sihipärase rektaalse ja käärsoole manustamisega. Foods (Basel, Šveits), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). Düslipideemia esinemise klassifikatsioon odra tarbimisega seotud soolebakterite põhjal. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H. ja Lee, SJ ( 2022). Suures annuses intramuskulaarne D3-vitamiini lisamine mõjutab klostridioides difcile infektsiooniga patsientide soolestiku mikrobiotat. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D. ja Duca, FA (2022). Oligofruktoos taastab söögijärgse lühikese ahelaga rasvhapete taseme kõrge rasvasisaldusega toitmise ajal. Rasvumine (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Inimeste ja ahviliste soolestiku mikrobiota mitmekesisuse lähenev ja erinev vanuseline muster. M-Systems: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.{6}}

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C. ja Liu, B. (2022). 2. tüüpi diabeedi leevendamine uudse 6, 8-guanidüülluteoliinkinooni ja kroomi koordinatsiooni abil biokeemiliste mehhanismide ja soolestiku mikrobiota koostoime kaudu. Journal of Advanced Research, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 leevendab kroonilist alkoholist põhjustatud maksa steatoosi ja maksakahjustust hiirtel, taastades soolestiku homöostaasi. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH ja Quraishi, MN (2022). Haavandilise koliidiga patsientide fekaalse mikrobiota siirdamise vastuse doonori ja retsipiendi ennustavate biomarkerite süstemaatiline ülevaade. EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y. ja Zhang, Y. (2020). Uued arusaamad ägeda transplantaat-peremehe-vastase haiguse põhibioloogiast. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.{12}}. Kayama, H., Okumura, R. ja Takeda, K. (2020). Koostoime mikrobiota, epiteeli ja immuunrakkude vahel soolestikus. Annual Review of Immunology, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Soolestiku mikrobiota on inimestel seotud immuunrakkude dünaamikaga. Loodus, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Kolmikinteraktsioonid soolestiku mikrobiota, mükobioota ja peremeesorganismi immuunsuse vahel. Toiduteaduse ja toitumise kriitilised ülevaated: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J. ja Chen, J. (2022). Soole limaskesta barjääri roll autoimmuunhaiguste korral: potentsiaalne sihtmärk. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713