Peremeesorganismi immuunreaktsioon Clostridioides Difficile pinna S-kihi valkudele (SLP-dele)

Abstraktne:

Clostridioides difficile, haiglapatogeen, on esilekerkiv soolepatobiont, mis põhjustab antibiootikumidega seotud kõhulahtisust. C. difficile nakkus hõlmab soolestiku koloniseerimist ja sooleepiteeli barjääri katkemist, mis põhjustab põletikuliste/immuunsete reaktsioonide esilekutsumist. Kahe peamise eksotoksiini, TcdA ja TcdB, ekspressioon on C. difficile patogeensuse peamine põhjus. Bakterite rohkete rakuseina valkude või pinna S-kihi valkude (SLP-de), nagu SlpA, sidumine peremeesepiteelirakkudega on virulentsuse jaoks kriitiline. Lisaks toksiinidele on need pinnakomponendid osutunud väga immunogeenseks. Hiljutised uuringud näitavad, et C. difficile SLP-d mängivad olulist rolli bakterite adhesioonis sooleepiteelirakkudega, tihedate ühenduste katkestamisel ja peremeesrakkude immuunvastuse moduleerimisel. Need valgud võivad olla vaktsiinide ja uute raviainete jaoks uued sihtmärgid. See ülevaade võtab kokku meie praeguse arusaama SLP-de immunoloogilisest rollist peremeesorganismi immuunsuse esilekutsumisel ja nende kasutamisest vaktsiinide ja uudsete ravimite väljatöötamisel, et võidelda C. difficile infektsiooni vastu.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Märksõnad:

antibiootikumidega seotud kõhulahtisus; rakuseina valgud; raviained; S-kihi valgud; vaktsiin

1. Sissejuhatus

Clostridioides difficile, toksiine produtseeriv anaeroobne bakter, on soolestikus oluline oportunistlik ja haiglapatobiont, mis põhjustab haigussümptomeid terve mikrobioomi häirete tagajärjel, mis on tingitud paljudest teguritest, sealhulgas antibiootikumide kasutamisest, geneetilisest, eksponeerivast, mikroobsest, ja muud peremeestegurid [1]. C. difficile selektsioon ja vohamine kutsub esile eluohtliku pseudomembranoosse koliidi seisundi [2,3]. Haiguste tõrje ja ennetamise keskuste 2019. aasta aruande viimaste hinnangute kohaselt põhjustas C. difficile 2017. aastal 223 900 nakatumist ja 12 800 surma ning ainuüksi Ameerika Ühendriikides oli kahju 1 miljard dollarit [4]. C. difficile infektsiooni (CDI) esimese episoodi ravi saavutatakse antibiootikumidega. Siiski on haigusel kõrge kordumise tase – 20–30% pärast esmase CDI esimest ravi ja üle 50% pärast esimest kordumist [5]. Seetõttu on kogu maailmas CDI vastu võitlemiseks vaja kiiret terapeutilist sekkumist. Üks peamisi C. difficile patogeneesi molekulaarseid tegureid on kahe peamise toksiini, TcdA ja TcdB, ekspressioon ja sekretsioon, mida kodeerivad geenid, mis asuvad C. difficile 196-kb patogeensuse lookuses (PaLoc). genoom [6]. Toksiini tootmise reguleerimist ja erinevaid toksiini tootmisega seotud transkriptsioonifaktoreid on põhjalikult läbi vaadanud Chandra et al. mujal [6].

CDI patogenees algab C. difficile eoste allaneelamisest/idanemisest vegetatiivsetesse rakkudesse, mis idanevad soolestikus, kus nad vohavad ja koloniseerivad soole limaskesta [1,6]. Soole limaskesta barjäär (IMB) on esimene kaasasündinud kaitseliin patobiontide vastu. Peremees-IMB koosneb erinevat tüüpi epiteelirakkudest, mis on üksteisega tihedalt ühendatud ja kaetud paksu kaitsva limakihiga, mida eritavad pokaalrakud [1]. IMB katkemine võimaldab C. difficile kinnituda epiteelirakkude pinnale, kus selle virulentsusfaktorite väljatöötamine põhjustab C difficile patogeensuse kahjustusi ja avaldumist [1,6]. Paljude grampositiivsete ja negatiivsete liikide, sealhulgas C. difficile, bakteriraku sein on seotud valgu molekulide rohke pinnakihiga, mida nimetatakse pinnakihi valkudeks (S-kihi valgud või SLP-d), mis koosnevad valdavalt rikkalikust molekulist. valk SlpA, mis koosneb madala ja suure molekulmassiga domeenist, mis on elektronmikroskoopia abil paigutatud parakristallilise korrapärase kahemõõtmelise massiivina [7]. Teised SLP-kihi rakuseina valgu (Cwp) komponendid on vähem rikkalikud ja halvasti iseloomustatud, kuid neil on ka oluline roll CD patogeensuses. Viimastel aastatel on SLP-de uuringud pälvinud suuremat tähelepanu, kuna on näidatud, et need valgud mängivad lisaks oma immuunvastuse osana võtmerolli pinna adhesioonis, Toll-sarnaste retseptorite aktiveerimises, tsütokiinide tootmise indutseerimises ja põletikulises aktivatsioonis. roll bakteri kasvus ja ellujäämises [7–9].

Selles ülevaates käsitleme peremeesorganismi immuunvastust peamistele SlpA komponentidele ja teistele vähemrohketele Cwps-dele, pidades silmas hiljutisi teadmisi C. difficile SLP-de kohta, ning rõhutame nende potentsiaali kasutada uudse vaktsiinina ja terapeutilise sihtmärgina, mis on CDI patogeneesis väga olulised.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

2. Kaasasündinud immuunreaktsioonid CDI vastu

On näidatud, et mittetoksigeensed C. difficile (NTCD) tüved pakuvad loommudelites koloniseerimisel kaitset C. difficile patogeensete tüvede eest. 1980. aastate alguses teatasid Wilson ja Sheagren, et NTCD tüve poolt koloniseeritud hamstrid pärast antibiootikumi tsefoksitiiniga steriliseerimist olid kaitstud, kui neid nakatatakse toksigeense C. difficile (TCD) tüvega [10]. Kuid töötlemine teiste liikidega, nagu C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes ja kuumtapnud mittetoksigeenne C. difficile NTCD tüvega, ei andnud kaitset CDI eest. Lisaks kadus kaitse, kui koloniseeriv NTCD steriliseeriti vankomütsiinraviga enne nakatamist [11]. Nendest leidudest julgustatuna on NTCD-M1 tüve eoseid kasutatud piiratud arvul korduva CDI (rCDI) all kannatavatel kliinilistel patsientidel märkimisväärse eduga (umbes 50%) [12]. Praegu on CDI-ravi võimalused piiratud ja sõltuvad suuresti antibiootikumide, näiteks vankomütsiini, fidaksomitsiini ja metronidasooli kasutamisest [13,14]. Antibiootikumide liigne kasutamine põhjustab terve mikrobioomi düsbioosi ja aitab veelgi kaasa selliste patobiontide nagu C. difficile väljavalimisele, mis võib hiljem taastuda [1,15]. Nendest probleemidest tõhusalt mööda hiilimiseks tuleb kohe tähelepanu pöörata alternatiivsetele ravimeetoditele. Mõned neist ravivõimalustest hõlmavad C. difficile toksiinide neutraliseerimist, kasutades TcdB-vastaseid monoklonaalseid antikehi, nagu bezlotoksumabi infusioon, mis hoiab ära toksiinide poolt põhjustatud sooleepiteeli kahjustused [16]. Veel üks põnev meetod on terve mikrobioomi taastamine, kasutades fekaalse mikrobiota siirdamist (FMT) tervelt doonorilt lähimate pereliikmete seas. FMT on näidanud paljulubavaid tulemusi korduva CDI vastu, edukuse määraga kuni 90% [17,18]. Kahjuks ei käsitlenud need uuringud peremeesorganismi immuunvastuse rolli nende patsientide kaitses. Seetõttu võib väita, et elus NTCD sekreteerib mõningaid antigeene / rakuseina komponente, mis kutsuvad esile tugeva immuunvastuse toksikogeense TCD vastu. Samamoodi on FMT kaitse halvasti määratletud. Seetõttu võib mõistmine, kuidas FMT sissetoomine kutsub esile peremeesreaktsioonid, aidata tuvastada peamisi antigeene, mis omakorda võib aidata paremini mõista immuunvastust ja uudsete vaktsiinide väljatöötamist CDI vastu.

Soolestikus on peremeesorganismi kaasasündinud immuunsüsteem esimene kaitseliin sissetungiva patogeeni vastu, mis mängib otsustavat rolli peremeesorganismi tugeva adaptiivse immuunvastuse kujundamisel ja loomisel [1]. Kaasasündinud reaktsioon koosneb peamiselt kolmest osast: (i) sooleepiteel ja limaskesta kiht (füüsiline barjäär), (ii) antimikroobsed peptiidid, mis on epiteelirakkude, Panethi rakkude ja mõnede soolestiku mikrobiota liikmete eritusproduktid (keemiline). barjäär) ja (iii) rakulised vastused kaasasündinud immuunrakkude, nagu neutrofiilid, eosinofiilid, makrofaagid, kaasasündinud lümfoidrakud (ILC) ja dendriitrakud (DC) värbamise kaudu, mida korraldavad mitmed kaasasündinud signaalirajad, et võidelda sissetungiva patogeeniga [ 1]. Peremeesrakud kannavad oma pinnal mustrite tuvastamise retseptoreid (PRR), nagu TLR-id, mis tunnevad ära mikroobidel teatud konserveerunud bakterite signatuure, mida nimetatakse patogeeniga seotud molekulaarseteks mustriteks (PAMP). Neid PRR-e tuntakse ka tasuliste retseptorite (TLR) nime all. Nende ohusignaalide (PAMP) tuvastamisel TLR-ide poolt käivitab peremeesrakk immuunvastuse. Sellega seoses on näidatud, et Toll-like Receptor 4 (TLR4) tunneb ära C. difficile ohusignaalid, mis osaleb peremeesorganismi põletikulise reaktsiooni algatamises. Selles kontekstis on näidatud, et C. difficile SLP-d interakteeruvad peremeesorganismi TLR-ga-4, samas kui C. difficile flagella interakteerub TLR5 kaudu [19,20].

Tistanche kasulikud omadused meestele - tugevdavad immuunsüsteemi

3. S-kihi valgud (SLP-d) C. difficile's

Viimasel kümnendil on C. difficile pinnakihi (S-kihi) valgud pälvinud märkimisväärset tähelepanu. SLP-d tuvastasid esmakordselt Kawata jt. 1984. aastal ja moodustavad umbes 15% kogu raku massist [21,22]. SLP-sid leidub paljudes erinevates prokarüootsetes liikides. Enamik SLP-sid on paigutatud rakkude välimisele pinnale ühe valguna kahemõõtmelises parakristallilises massiivis [7]. C. difficile puhul koosneb S-kiht peamiselt heterodimeersetest SlpA valkudest. SlpA on heterodimeer, mis koosneb suure molekulmassiga (HMW) valgust ja madala molekulmassiga (LMW) valgust, mida kodeerib üks slpA geen; LMW SLP moodustab paljastatud ülemise kihi, samas kui HMW SLP moodustab alumise kihi. LMW SLP on C. difficile ainulaadne. C. difficile 630 tüves on slpA lookus 36,6 kb piirkond, mis sisaldab 11 slpA paraloogi. Lisaks on genoomis hajutatud veel 17 paraloogi [23,24]. Neid paralooggeene nimetatakse nüüd klostriidide rakuseina valkudeks (CwpX), kus X tähistab tuvastatud paraloogi numbrit (X=1–29) ja neid on kirjeldatud tabelis 1. Siiski on neli varem iseloomustatud Cwp-d, mida tuntakse kui SlpA, Cwp66, Cwp84 ja CwpV nimetati enne selle uue nimetamistava vastuvõtmist [23]. Kõik Cwps on tüüpilised valgud, mis sisaldavad N-terminaalset signaalpeptiidi ja kolme oletatavat rakuseina siduvat domeeni, mis on olulisel määral sarnased HMW SLP-ga [25, 26]. Erinevad C. difficile tüved on näidanud varieeruvust slpA lookuses ja dokumenteeritud on umbes 12 erinevat S-kihi kassetitüüpi. Ülejäänud 28 Cwps-d toimivad lisakomponentidena, mis on ankurdatud polümeriseeritud parakristallilisesse kihti, mis moodustab ~ 5–20% S-kihist [7].

Tabel 1. Clostridium difficile 630 genoomis leitud 29 tassi geeni oletatavad funktsioonid.

Tabel 1. Jätk.

4. Rakuseina valkude ekspressioon ja tüvede varieerumine

On teatatud, et C. difficile tüves 630 ekspresseeritakse umbes üheksa Cwps kodeerivat geeni [25]. Kui normaalsetes kasvutingimustes ekspresseeritakse raku pinnal geene cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 ja cwp25 [44], siis cwp66 ja cwp5 geene ekspresseeriti, kuid neid ei leitud rakupinna ekstraktides. Eraldi uuringus on Biazzo et al. analüüsitud tassid, mis on hajutatud kogu C. difficile genoomis. Nad täheldasid, et cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 ja cwp25 geenid on ekspresseeritud ja neil on hästi konserveerunud järjestused, samas kui cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 ja cwp29 geenide ekspressioonitasemed varieerusid oluliselt. ribotüübid ja olid vähem konserveerunud [45]. Paljud slpA lookuse geenid näitavad olulist erinevust tüvede vahel, eriti pinnaga eksponeeritud piirkondades. Näiteks on näidatud, et slpA, cwp66, secA2 ja cwp2 varieeruvus on suur slpA lookuses (mis moodustab 10-kb kasseti); siiani on erinevate genotüüpide vahelise homoloogse rekombinatsiooni tulemusena leitud selle kasseti 12 erinevat varianti [46]. Karjalaineni jt sõnul näitab cwp66 tüvede vahel vaid 33% identsust [26]. Cwp2 variant on asendatud 23,8 kb prognoositud S-kihi glükosüülimise geeniklastriga slpA lookuses [46]. SlpA on C. difficile rakupinna ekstraktides kõige rohkem leitud SLP ja see on C. difficile SLP peamine koostisosa. Küps valk lõhustatakse pärast sekretsiooni HMW-ks ja LMW-valgu vormideks proteaasi Cwp84 toimel, moodustades heterodimeerse kompleksi H/L kompleksi, mis polümeriseerub, moodustades S-kihi [47] (joonis 1). Cwp84 geeni inaktiveerimine C. difficile 630∆ermis andis tulemuseks S-kihi, mis koosnes ainult ebaküpsest üheahelalisest SlpA-st, mille koloonia morfoloogia on muutunud, mis viitab Cwp84 olulisele rollile küpse S-kihi moodustamisel [32]. Geeni secA2 olemasolu slpA lookuses on oluline SlpA ja teiste Cwp-de transportimiseks läbi tsütoplasmaatilise membraani [48].

Joonis 1. C. difficile SLP-d vahendavad immuunrakkude adhesiooni ja aktivatsiooni. Tekkiv SlpA peptiid lõikab proteaas Cwp84 LMW ja HMW subühikuks, mis moodustab rakuseina SLP kihi küpse SlpA kompleksi [31–33]. SLP-d vahendavad adhesiooni TLR4 kaudu häirivad sooleepiteelirakkude tihedat ühendust ja aktiveerivad veelgi dendriitrakke/makrofaage, mis omakorda toodavad erinevaid tsütokiine ja kemokiine, mis põhjustavad Th1/Th2 ja humoraalse vastuse indutseerimist [9,27]. Interleukiin (IL), dendriitrakud (DC), madala molekulmassiga (LMW), kõrge molekulmassiga (HMW), toll-like retseptor 4 (TLR4).

5. S-kihi valkude funktsioonid

SLP-d osalevad C. difficile bioloogias mitmesugustes funktsioonides (vt tabel 1), nagu rakkude terviklikkus, transport, pooride ja ankrute moodustumine, lagunemine, peremeesrakkude adhesioon/invasioon, immuunsüsteemi kõrvalehoidmine ja kaitse konkureerivate mikroorganismide eest [22]. . Pechineet al. tuvastas Clostridium difficile'ga seotud haigusega (CDAD) patsientide seerumis antikehi Cwp66 antigeeni N-terminaalse ja C-terminaalse domeeni vastu [49]. Teises uuringus Wright et al. eraldas Cwps-d 2D-PAGE abil ja tuvastas mitu Cwp-d (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), mis reageerisid C. difficile ribotüüp 017 tüvega nakatunud patsientide seerumitega, mis viitab tugeva immuunvastuse esilekutsumisele SLP-de vastu [50]. Hiljuti on Kirk jt. tuvastas kaks C. difficile tüve, millel puudus S-kiht ja mis ei olnud vastuvõtlikud bakteriotsiini suhtes, mis moodustab poorid ja depolariseerib konkureerivaid bakterirakke. Kuid need C. difficile tüved näitasid märkimisväärselt suurenenud tundlikkust lüsosüümi ja antimikroobse peptiidi LL-37 suhtes ning ei tekitanud hamstri nakkusmudelis CDI haigussümptomeid [51]. Hiljutises uuringus uuriti kolmest toksikogeensest tüvest (RT126, RT001, RT084) eraldatud SlpA mõju tihedate ühendusvalkude (TJ) ekspressioonile ja põletikueelsete tsütokiinide indutseerimisele inimese käärsoole kartsinoomi rakuliinis HT-29 . SlpA-ravi vähendas oluliselt claudiinide perekonna ja JAM-A tiheda ühendusvalkude ekspressioonitasemeid (joonis 1) [9]. Lisaks suurendas SlpA valk TLR-4 ekspressioonitaset ja indutseeris TNF-, IL-1 ja IL-8 sekretsiooni. Need tulemused näitavad, et SlpA valgu poolt vahendatud patogenees ja indutseeritud põletikulised reaktsioonid soolestikus [9]. Seetõttu on mõistlik väita, et SLP-d on C. difficile patogeensuse ja immuunvastuste jaoks hädavajalikud.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

6. Immuunvastus SLP-dele

Hiljutised uuringud on osutanud SlpA olulisele rollile mitte ainult bakterite ellujäämises ja kasvus, vaid ka peremeesorganismi immuunvastuse kujundamisel. Immunoproteoomil põhinevad lähenemisviisid on näidanud SLP-vastaste antikehade olemasolu kuue C. difficile ribotüübiga 017 nakatunud patsiendi seerumis, mis viitab sellele, et SLP valgud on immunodominantsed ja ekspresseeruvad nakatumise ajal [50]. Bruxelles jt ​​juhitud uuring. näitas CDI-ga patsientidel SlpA-vastaste antikehade kõrgemat taset võrreldes tervete patsientidega [52]. Teises uuringus on Negm et al. tuvastas IgG antikehi seerumis kokku 327 indiviidilt, kellel oli CDI erinevate C. difficile tüvede SLP ekstraktide vastu [53]. Lisaks SlpA-le on suuruselt teise valgu Cwp66 eksponeeritud C-terminaalne domeen väga varieeruv, samas kui N-terminaalne domeen on hästi konserveerunud. On näidatud, et Cwp66 ja Cwp84 varieeruvad C-terminaalsed domeenid on inimestel immunogeensed [49, 54]. Lisaks olid CDI-ga patsientidel Cwp66-vastased ja Cwp84-vastased keskmised üldtasemed madalamad kui tervel kontrollrühmal, mis viitab antikehade kaitsvale olemusele. Seetõttu on SLP-del, täpsemalt SlpA-l ja teistel komponentidel oluline roll immuunkaitses ning need on potentsiaalsed sihtmärgid immunoterapeutilise ja vaktsiini väljatöötamisel, nagu on kirjeldatud järgmistes osades.

7. SLP-d vahendavad C. difficile adhesiooni

C. difficile algatab nakkuse, kleepudes sooleepiteelirakkudele, mis viib kolonisatsioonini. Sellega seoses mängivad bakteriaalsed SLP-d nagu SlpA ja Cwp66 adhesioonis kriitilist rolli. On teatatud, et SLP-de, spetsiifiliselt SlpA varieerumine isoleeritud C. difficile tüvedes, näitas muutusi kleepumises [55]. On näidatud, et SLP-d seovad erinevaid rakuliine, näiteks inimese seedetrakti Hep-2 ja Vero rakuliinid ning paljusid rakuvälise maatriksi valke. Lisaks inhibeeris ravi HMW-SLP-vastaste antikehadega C. difficile kleepumist. Lisaks hoidis peremeesrakkude eeltöötlemine kas puhastatud SlpA subühikute või anti-SlpA antikehadega ära ka C. difficile kleepumise [55]. SlpA valkude perekonna suurim homoloog on CwpV valk, mida ekspresseeritakse faasimuutusel. Eraldi uuringus näidati, et CwpV valgu C-terminaalne korduv domeen vahendab C. difficile agregatsiooni. Lisaks on see domeen tüvede lõikes erinev ja tuvastatud on viis antigeenselt erinevat kordustüüpi [40].

On näidatud, et teisel immunogeensel valgul nimega Cwp66 on adhesiooniomadused. Puhastatud Cwp66 ja N-terminaalsete ja C-terminaalsete domeenide vastased antikehad inhibeerisid C. difficile kleepumist kultiveeritud Vero rakkudele, mis viitab Cwp66 adhesiooniomadustele [29].

8. Põletikuliste reaktsioonide esilekutsumine

Bianco et al. näitasid SLP-de rolli põletikuprotsessis. Selles uuringus puhastati hüpervirulentsete ja epideemiliste (H/E) või mitte-H/E C. difficile tüvede SLP-sid ning neid uuriti inimese monotsüütides ja monotsüütidest pärinevates dendriitrakkudes (MDDC) immunomoduleerivate tsütokiinide [interleukiin] indutseerimise seisukohalt. (IL)-1, IL-6 ja IL- 10] [56]. Uuring näitas, et SLP-d mitte ainult ei indutseerinud MDDC-de küpsemist, suurendades antigeeni esitlevat aktiivsust, vaid kutsusid esile ka kõrge IL-i -10 taseme sekretsiooni. Siiski ei leitud olulisi erinevusi monotsüütide ja MDDC-de aktiveerimisel H/E ja mitte-H/E tüvede SLP preparaatidega, mis viitab sellele, et SLP-d ei aita kaasa haiguse suurenenud raskusastmele [56]. Teises uuringus on Ausiello et al. ekstraheerisid kliinilisest isolaadist C253 SLP-d ja näitasid, et SLP-d kutsusid esile IL-1 ja IL-6 põletikueelsete tsütokiinide suurenenud taseme sekretsiooni puhkeolekus olevates monotsüütides ning indutseerisid inimese MDDC-de küpsemist ja T-rakkude suurenenud proliferatsiooni. rakud [57]. Lisaks vabastasid need töödeldud MDDC-d ka suuremas koguses IL-10 ja IL-12p70 ning kutsusid esile segatud Th1/Th2 immuunvastuse. TLR-4 mängis olulist rolli DC-de SLP-vahendatud aktiveerimisel. Näidati, et SLP-d ei suutnud aktiveerida TLR4-mutantsetest C3H/HeJ hiirtest eraldatud DC-sid ega suutnud esile kutsuda järgnevat Th-immuunvastust, mis viitab sellele, et SLP-d aktiveerivad kaasasündinud ja adaptiivset immuunsust, mida vahendab TLR4 retseptor [19]. Teises uuringus demonstreeriti makrofaagide puhul, et C. difficile'i SLP-d kutsusid esile kliirensi reaktsiooni põletikueelsete tsütokiinide ja kemokiinide sekretsiooni osas, millel on suurenenud makrofaagide migratsioon ja fagotsütootiline aktiivsus [58]. Ravi p38 inhibiitoriga muutis need vastused ümber, mis viitab signaalimolekulide rollile SLP-vahendatud vastustes [58]. Väga hiljutises uuringus kirjeldati C. difficile SLP-de põhjustatud põletikulist aktiveerimist annusest sõltuval viisil. Lisaks näidati, et kolesteroolirikkad mikrodomeenid (lipiidiparved) rakumembraanidel aitasid SLP-de seondumisel rakumembraaniga. See põhines fluorestsentsmikroskoopial, kus näidati, et metüül- -tsüklodekstriin (M CD), mis kahandab membraani kolesterooli, vähendas SLP seondumist, mis viitab sellele, et SLP-d värbavad lipiidiparve, mis on C. difficile kolonisatsiooni ja põletikulise aktivatsiooni jaoks üliolulised [59]. ]. Need uuringud väidavad, et C. difficile SLP-d võivad aktiveerida kaasasündinud ja adaptiivseid immuunvastuseid, mida vahendab osaliselt TLR4, mis viitab SLP-de olulisele rollile immuunvastuse esilekutsumisel. Seetõttu viitavad need tulemused ka SLP-de potentsiaalile vaktsiinikandidaatidena CDI vastu.

9. Antikehade vastused CDI vastu

Mitmed immunoloogilised uuringud näitavad, et C. difficile nakkus ja tulemus sõltuvad peremeesorganismi immuunvastuse intensiivsusest, mis on CDI patogeensuse võtmetegur. Seega võib võimetus välja arendada tugevat antikehavastust olla haiguse tõsiduse ja kordumise prognoos [60]. Sellega seoses on peamiste toksiinide vastaste antikehade taset korrelatsioonis haiguse kordumise ja raskusastmega [61,62]. C. difficile pinnakomponentide vastastest antikehadest on teatatud ka varasemates uuringutes CDI patsientide seerumis [63]. Drudy et al. hindas humoraalset immuunvastust C. difficile SLP ekstraktidele 146 patsiendist koosnevas kohordis, kuhu kuulus 55 C. difficile-ga seotud kõhulahtisusega (CDAD), 34 asümptomaatilise kandjaga patsienti ja 57 kontrollsubjekti [64]. Uuringus eraldati SLP-de kõrge ja madala molekulmassiga fraktsioonide ekstraheerimine, mis sisaldasid peamiselt rohket valku SlpA. Nad mõõtsid seerumi antikehi, kasutades ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) selles kohordis ja ei leidnud olulisi erinevusi seerumi IgM, IgA või IgG antikehade tasemetes. Huvitaval kombel oli CDAD korduvate episoodidega patsientidel oluliselt madalam IgM-anti-SLP tase kui üksikute episoodidega patsientidel. Uuringus jõuti järeldusele, et spetsiifiliste SLP-vastaste antikehade vastuste määramiseks tuleks teha täiendavaid uuringuid ja kaitseuuringuid, kasutades C. difficile SLP-sid [64].

Passiivne ja aktiivne immuniseerimine, kasutades isoleeritud HMW ja LMW SLP-de ekstrakte, on näidanud julgustavaid tulemusi, suurendades elulemust surmava hamstri väljakutse mudelites. O'Brien et al. demonstreeris SLP-vastaste antikehade kaitsvat vastust C. difficile infektsiooni vastu hamstritel, kus elulemus oli SLP-vastase ravi rühmades kontrollrühmadega võrreldes oluliselt pikem [65]. Näidati, et antiseerumi kaitsev toime avaldub C. difficile fagotsütoosi tugevdamise kaudu [65]. Eidhin et al., kasutades aktiivset immuniseerimist, testisid SLP toorekstrakti, mis sisaldas ekvimolaarsetes kogustes SlpA komponente LMW ja HMW peptiide, vaktsiinina koos erinevate süsteemsete ja limaskestade adjuvantidega kuldsete Süüria hamstrite ja BALB/c hiiremudelites. Uuringus teatati mõõdukast kuni halvast antikehade stimulatsioonist erinevates režiimides ja hiiremudelid näitasid SLP-dele tugevamat antikehavastust võrreldes hamstritega [66]. Teises uuringus on Brunet al. uuris kahe peptiidi, mis koosnesid toksiini A retseptorit siduvast domeenist (TxA (C314)) ja C. difficile tüvest C253 pärinevast SLP-36 kDa fragmendist, in vivo adjuvantset aktiivsust fibronektiini siduva valgu A (FnbpA) vastu. ), kaitsev vaktsiini antigeen Staphylococcus aureuse vastu [67]. Nad hindasid vastust intranasaalse ja subkutaanse manustamise teel ning leidsid, et mõlemad fragmendid suurendasid tsirkuleeriva anti-FnbpA IgG ja IgA tootmist. Nad jõudsid järeldusele, et need fragmendid, kui neid kasutatakse adjuvantidena, mõjutavad ja polariseerivad immuunsüsteemi erinevalt [67]. Teises uuringus on Shirvan et al. genereeris ja ekspresseeris spetsiifilisi rekombinantseid antikehi SLP-de, nagu Cwp66 ja SlpA vastu C. difficile 630 valkudest, kasutades faagidisplei, ning näitas, et need rekombinantsed antikehad reageerisid SLP-dele ja nende komponentidele tüvespetsiifiliselt ja kõrge spetsiifilisusega [68].

Immuunvastust ja kaitset hamstri mudelil, kasutades antigeenina Cwp84 proteaasi, on hinnatud mitme immuniseerimisviisi abil [69]. Uuringus leiti immuniseerimisviiside põhjal erinevad antikehade tiitrid. Parimat kaitset täheldati rektaalse immuniseerimise teel. Peale selle põhjustasid immuniseeritud hamstrirühmad 26% nõrgema ja aeglasema C. difficile soolestiku kolonisatsiooni pärast C. difficile nakatumist ning oluliselt kõrgema ellujäämismääraga (33% kõrgem) kui immuniseerimata rühmadel [69].

cistanche taime suurendav immuunsüsteem

10. SLP-põhised anti-C. difficile Therapeutics

Spetsiifilised antikehapõhised ravimid C. difficile neutraliseerimiseks võivad olla tõhusad strateegiad. Kandalaft et al. kasutas SLP-de sihtimiseks ühedomeenilisi antikehi [70]. Rühm valmistas ette SLP-spetsiifiliste ühedomeeniliste antikehade (VHH) paneeli C. difficile hüpervirulentsest tüvest QCD-32g58 (ribotüüp 027). Nende tulemused näitasid, et mitmed VHH-d on seotud kõrge afiinsusega QCD-32g58 epitoopidega, mis paiknesid SLP LMW alaühikus. Lisaks teatasid nad, et neil VHH-del oli seondumisspetsiifilisus ribotüüpide 001 ja 027 suhtes ning nende VHH-antikehade alamhulk oli üldiselt ristreaktiivne ribotüüpide 012, 017, 023 ja 078 suhtes. Need VHH-d inhibeerivad ka C. difficile QCD{17}}g58 liikuvust in vitro [70].

Teise täppis-antibakteriaalse aine Av-CD291.2 väljatöötamine Kirk et al. on teatatud, et see tapab spetsiifiliselt C. difficile ja hoiab ära kolonisatsiooni hiirtel [51]. On näidatud, et Av-CD291.2 tapab erinevaid C. difficile isolaate, tuginedes SLP järjestuste olemasolule C. difficile tüvedes. Autorid väidavad, et on tuvastanud slpA geenis punktmutatsiooni sisaldavad SLP nullmutandid, mis on resistentsed Av-CD291.2 ainete suhtes. Nendel mutantidel oli ka sporulatsiooni defekte, kuid nad suutsid koloniseerida soolestikku, hoolimata virulentsuse nõrgenemisest hamstri mudelis [51]. Lisaks koostasid nad Avidocin-CD-de paneeli, mis tapab SLP järjestusest sõltuval viisil erinevaid C. difficile tüvesid, mis viitab nende SLP-del põhinevate antibakteriaalsete ainete olulisele rollile CDI ennetamisel [51].

11. Lõppmärkused ja kriitilised vastamata küsimused

Peremeesorganismil tekib tugev spetsiifiline immuunvastus C. difficile toksiinide ja pinnakomponentide vastu. On näidatud, et SLP-d omavad rolli rakkude adhesioonis, erinevate tsütokiinide indutseerimises TLR4 aktiveerimise kaudu ja nii kaasasündinud kui ka humoraalse immuunvastuse aktiveerimises. Kuid CD4 ja CD8 rakkude rolli edasiseks uurimiseks on vaja uuringuid T-raku vastuste aktiveerimise kohta SLP-de poolt. Tuginedes humoraalse vastuse aktiveerimisele, võivad need toksiinide ja pinnakomponentide vastased neutraliseerivad antikehad ära hoida CDI kliinilisi tunnuseid. Uuringud, milles kasutati aktiivset või passiivset immuniseerimist SLP-de vastu, on näidanud paljutõotavaid tulemusi, mis näitavad, et strateegiat saab edasi arendada uuteks CDI patogeensuse vastasteks ravimiteks. Palju tähelepanu on pööratud SlpA-le kui vaktsiinikandidaadile; kuid SlpA järjestuse suure varieeruvuse tõttu tüvede vahel ei pruugi vaktsiin olla efektiivne kõigi ribottüüpide vastu. Seetõttu võib sellest probleemist mööda hiilimiseks vaja minna epitoobipõhiseid vaktsiine. Sellega seoses on SLP-de vastased ühedomeenilised antikehad (VHH) elujõulised võimalused, mis seovad kõrge spetsiifilisusega C. difficile'i LMW-SLP subühikut ja on näidanud, et need pärsivad C. difficile tüvede liikuvust. Praegu on SLP-de ja nende paraloogide mehaanilise rolli mõistmine CDI patogeneesis, adhesioonis ja T-rakkude vastuses alles algstaadiumis ja jääb suures osas uurimata. SLP-de molekulaarsete funktsioonide ja spetsiifiliste immuunvastuste lahkamiseks on vaja täiendavaid uuringuid, et aidata kaasa uudsete vaktsiinide/ravimite sihtmärkide ja C. difficile infektsioonide vastu võitlemise ravimite kiirele väljatöötamisele.

Viited

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, OH; Päike, X.; Shukla, P. Pathobionts: ellujäämise, laienemise ja peremeesorganismiga suhtlemise mehhanismid, keskendudes Clostridioides difficile'le. Gut Microbes 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; sidrun, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Clostridium difficile ümberklassifitseerimine Clostridioides difficile (Hall ja O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, GM Teatis varem väljaspool IJSEM-i avaldatud taksonoomilise arvamuse muudatustest. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Haiguste tõrje ja ennetamise keskused. Antibiootikumiresistentsuse ohud Ameerika Ühendriikides, 2019. 2019. Veebis saadaval: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (vaadatud 8. septembril 2022).

5. Kilbid, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Korduv Clostridium difficile infektsioon: koloniseerimisest ravini. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hassett, DJ; Sun, X. Clostridioides difficile patogeneesi reguleerivad transkriptsioonifaktorid, keskendudes toksiinide reguleerimisele. Crit. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; et al. C. difficile S-kihi struktuur ja kokkupanek. Nat. Commun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Clostridium difficile pinnakihi valkude omadused ja immunoloogilised rollid. Ann. Lab. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Pinnakihi valk A hüpervirulentsetest Clostridioides difficile ribotüüpidest indutseerib olulisi muutusi tihedate ühenduste geeniekspressioonis ja põletikulises vastuses inimese sooleepiteelirakkudes. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN Toksigeense Clostridium difficile antagonism mittetoksigeense C. difficile poolt. J. Infect. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Hamstri kaitse Clostridium difficile ileokoliidi vastu eelneva koloniseerimise teel mittepatogeensete tüvedega. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Seal, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Korduva Clostridium difficile kõhulahtisuse ravi mittetoksigeense tüve manustamisega. Eur. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, MH Ameerika nakkushaiguste ühingu (IDSA) ja Ameerika tervishoiu epidemioloogia ühingu (SHEA) kliinilise praktika juhised: 2021. aasta keskendunud ajakohastatud juhised Clostridioides difficile nakkuse juhtimise kohta täiskasvanutel. Clin. Nakata. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Norén, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; et al. Euroopa Kliinilise Mikrobioloogia ja Nakkushaiguste Ühing: 2021. aasta värskendus täiskasvanute Clostridioides difficile infektsiooni ravijuhendi dokumendi kohta. Clin. Microbiol. Nakata. 2021, 27 (lisa 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Ravi ebaõnnestumine ja Clostridium difficile infektsiooni kordumine pärast ravi vankomütsiini või metronidasooliga: tõendite süstemaatiline ülevaade. Int. J. Antimicrob. Agendid 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: esilekerkiv monoklonaalsete antikehade ravi korduva Clostridium difficile infektsiooni ennetamiseks. Bioloogia 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Süstemaatiline ülevaade metaanalüüsiga: fekaalse mikrobiota siirdamise pikaajalised tulemused Clostridium difficile infektsiooni korral. Aliment. Pharmacol. Seal. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Quraishi, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Hind, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Süstemaatiline ülevaade metaanalüüsiga: fekaalse mikrobiota siirdamise efektiivsus korduva ja refraktaarse Clostridium difficile infektsiooni ravis. Aliment. Pharmacol. Seal. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smith, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; et al. TLR4 roll Clostridium difficile infektsioonis ja pinnakihi valkude äratundmises. PLoS patog. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagellad aktiveerivad valdavalt TLR5-seotud NF-κB rada epiteelirakkudes. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Clostridium difficile rakuseina korrapärase massiivi demonstreerimine ja esialgne iseloomustus. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, UB S-kihi valgud. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF Pakutud nomenklatuur Clostridium difficile rakuseina valkude jaoks. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Clostridium difficile tüve 630 genoomijärjestuse reannotatsioon. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Clostridium difficile pinnakihi valkude molekulaarne iseloomustus. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Clostridium difficile pinna-ankurdatud valke kodeerivate geenide molekulaarne ja genoomne analüüs. Nakata. Immun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Willing, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile pinnavalgud ankurdatakse rakuseina külge, kasutades CWB2 motiive, mis tunnevad ära anioonse polümeeri PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Shine, CC; Acharya, KR Cwp2, mis pärineb Clostridium difficile'ist, näitab in vitro pikendatud kolme domeenivolti ja raku adhesiooni. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Clostridium difficile adhesiivsete omadustega rakupinna valgu iseloomustus. Nakata. Immun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; Tema, Y.; Yu, W.; Cui, G.; et al. Cwp66 geen mõjutab Clostridioides difficile rakkude adhesiooni, stressitaluvust ja antibiootikumiresistentsust. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, RP; Storck, EM; Ravi, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Clostridium difficile pinnakihi biogeneesi keemilised sondid. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, pinnaga seotud tsüsteiini proteaas, mängib rolli Clostridium difficile pinnakihi küpsemisel. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, pinnaga seotud Clostridium difficile valk, on tsüsteiinproteaas, millel on rakuvälise maatriksi valke lagundav toime. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Miheliˇc, M.; Lindiˇc, N.; Borišek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. CWB2 rakuseina ankurdusmooduli paljastavad Clostridium difficile rakuseina valkude Cwp8 ja Cwp6 kristallstruktuurid. Struktuur 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Lokaalse järjestuse joondamise tõenäosusmudel, mis lihtsustab statistilise olulisuse hindamist. PLoS-arvuti. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, peadirektoraat; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Enteropatogeense Escherichia coli intimin-retseptori kompleksi kristallstruktuur. Loodus 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Willing, SE; Tate, EW; Fairweather, NF Tsüsteiinproteaaside Cwp84 ja Cwp13 rollid Clostridium difficile rakuseina biogeneesis. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domeenid: mõõdukas keerukus. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. SH2 ja SH3 domeenide uudsed rollid lipiidide sidumisel. Cells 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emerson, JE; de la Riva, L.; Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile rakuseina valk CwpV on tüvede vahel antigeenselt varieeruv, kuid sellel on säilinud agregatsiooni soodustav funktsioon. PLoS patog. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Shine, CC; Acharya, KR Clostridium difficile pärineva Cwp19 glükosiidhüdrolaasi domeeni molekulaarstruktuur. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Zhu, D.; Bullock, J.; Tema, Y.; Sun, X. Cwp22, uudne peptidoglükaani ristsiduv ensüüm, mängib Clostridioides difficile'is pleiotroopset rolli. Keskkond. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, SR; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; et al. Pfami valguperekondade andmebaas: jätkusuutlikuma tuleviku poole. Nucleic Acids Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Oota, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Clostridium difficile rakupinna valkude proteoomiline analüüs. Proteomics 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pitsa, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Cwp lookuste mitmekesisus Clostridium difficile kliinilistes isolaatides. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubchik, T.; Bowden, R.; et al. Clostridium difficile S-kihi ja uudse glükosüülimise geeniklastri rekombinatsiooniline ümberlülitamine, mis ilmnes suuremahulise kogu genoomi järjestamisega. J. Infect. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, KA; Fairweather, NF Struktuursed ülevaated Clostridium difficile S-kihi molekulaarsest korraldusest. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile'il on kaks paralleelset ja olulist Sec sekretsioonisüsteemi. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmee, M.; Collignon, A. Clostridium difficile pinnavalkude immunoloogilised omadused. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF Inimese seerumi abil tuvastatud Clostridium difficile immunoreaktiivsed rakuseina valgud. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Uus täpsete antimikroobikumide klass määratleb uuesti Clostridium difficile S-kihi rolli virulentsuses ja elujõulisuses. Sci. Tõlk. Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hoys, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Clostridium difficile pinnakihi prekursori immunogeensed omadused ja vaktsineerimisanalüüsid loommudelites. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamed, MR; Dilnot, EM; Shine, CC; Marszalowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwards, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; et al. Humoraalse immuunvastuse profileerimine Clostridium difficile spetsiifilistele antigeenidele valgu mikrokiibi analüüsi abil. Clin. Vaktsiin Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Clostridium difficile'i pinnavalkude varieeruvus ja seerumi spetsiifiline antikehavastus Clostridium difficile'ga seotud haigusega patsientidel. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Pinnakihi valk A (SlpA) on peamine Clostridium difficile peremeesraku kleepumise põhjustaja. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Epideemiatest ja hüpervirulentsetest Clostridium difficile tüvedest saadud pinnakihi valkude immunomoduleeriv toime. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Clostridium difficile pinnakihi valgud indutseerivad inimese monotsüütides ja dendriitrakkudes põletikulisi ja reguleerivaid tsütokiine. Mikroobid nakatavad. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszalowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Clostridium difficile'st eraldatud pinnakihi valgud kutsuvad esile makrofaagides kliirensi vastuseid. Mikroobid nakatavad. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ Membraankolesterool on Clostridium difficile pinnakihi valgu sidumise ja põletikulise aktivatsiooni vallandamiseks ülioluline. Esiosa. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Kas suudame tuvastada patsiente, kellel on kõrge korduva Clostridium difficile infektsiooni risk? Clin. Microbiol. Nakata. 2012, 18 (lisa 6), 21–27. [CrossRef]

61. Wullt, M.; Norén, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. IgG antikeha vastus toksiinidele A ja B Clostridium difficile infektsiooniga patsientidel. Clin. Vaktsiin Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katchar, K.; Baxter, R.; et al. Seerumi toksiini B vastane antikeha korreleerub kaitsega korduva Clostridium difficile infektsiooni (CDI) eest. Vaktsiin 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Seerumi immunoglobuliini G vastuse immunoblotanalüüs Clostridium difficile pinnavalkudele antibiootikumidega seotud kõhulahtisusega patsientidel. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Inimese antikeha vastus pinnakihi valkudele Clostridium difficile infektsiooni korral. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Hamstri passiivne immuniseerimine Clostridium difficile infektsiooni vastu, kasutades pinnakihi valkude vastaseid antikehi. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Hamstri aktiivne immuniseerimine Clostridium difficile infektsiooni vastu, kasutades pinnakihi valku. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brun, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 ja SLP-36kDa suurendavad immuunvastust samaaegselt manustatud antigeeni suhtes. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Clostridium difficile pinnavalkude vastu suunatud rekombinantsete antikehade eraldamine. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoys, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Hamstri immuniseerimine Clostridium difficile infektsiooni vastu, kasutades antigeenina Cwp84 proteaasi. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Pinnakihi valkude sihtimine ühedomeeniliste antikehadega: potentsiaalne terapeutiline lähenemine Clostridium difficile'ga seotud haiguse vastu. Rakendus Microbiol. Biotehnoloogia. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]