Herba Cistanche ekstrakt suurendab mitokondriaalset ATP teket roti südametes ja H9c2 rakkudes
Mar 04, 2022
Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung ja Kam Ming Ko
Selle artikli tsiteerimiseks: Hoi Yan Leung ja Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche ekstrakt suurendab mitokondriaalset ATP teket roti südametes ja H9c2 rakkudes, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/13882020088
Abstraktne
Herbal Cistanche [Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae) kuivatatud terve taim] "Yangi turgutava" toime farmakoloogilist alust Hiina meditsiinis uuriti Herba Cistanche metanooliekstrakti mõju mitokondriaalse ATP genereerimise võimele. uuriti ex vivo roti südamemudeli ja in situ H9c2 rakuanalüüsi abil. Ravi Herba Cistanche ekstraktiga suurendas müokardi mitokondriaalset ATP genereerimisvõimet annusest sõltuval viisil rottidel, mida hinnati in vitro mõõtmisega. ATP genereerimisvõime stimuleerimine oli seotud mitokondriaalse elektronide transpordi paralleelse suurenemisega, mida toetas püruvaat, kuid mitte suktsinaat. Ravi Herba Cistanche'iga suurendas ka müokardi mitokondriaalse kompleksi I ja kompleksi III aktiivsust, kusjuures kompleksi I aktiivsuse stimuleerimise ulatus oli suurem. Herba Cistanche ravi põhjustas annusest ja ajast sõltuva mitokondriaalse ATP genereerimisvõime suurenemise H9c2 rakkudes. Tulemused näitavad, et Herba Cistanche ravi võib suurendada mitokondriaalset ATP teket roti südametes ex vivo ja H9c2 rakkudes in situ, võib-olla oksüdatiivse fosforüülimise tõhustamise kaudu.
Märksõnad:ATP, Cistanche deserticola, H9c2 rakud, süda, mitokondrid.
Sissejuhatus
"Yangi elavdamine", mis kehastab keha funktsioonide üldist tõhustamist Hiina meditsiinis, hõlmab energia kasutamist erinevate biokeemiliste protsesside juhtimisel. Sellega seoses tekib ATP, mis on universaalne energiavaluuta rakufunktsiooni toitmisel, peamiselt mitokondrites oksüdatiivse fosforüülimise kaudu. Oleme oletanud, et "Yangi kosutavad" maitsetaimed omavad võimet suurendada mitokondriaalset ATP genereerimisvõimet (Ko et al., 2004). Seda toetab meie hiljutine avastus, et "Yangi turgutavad", kuid mitte "Yin-toitvad" Hiina toniseerivad ürdid võivad suurendada müokardi ATP genereerimise võimet hiire südametes ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae) kuivatatud terve parasiitaim (v.a õis), on traditsioonilises hiina meditsiinis klassifitseeritud "Yangi ergutavaks" toniseerivaks ürdiks (Chen, 1998) ja see on kõige populaarsem. koostisosa paljudes Hiina patentidega koostistes, mida kasutatakse Yangi turgutamiseks”. Hiinas ja Jaapanis kasutatakse Herba Cistanche'i laialdaselt paljude Yangi puudulikkuse sümptomite raviks. Farmakoloogilised uuringud näitasid, et Herba Cistanche võib eemaldada vabu radikaale (Xiong et al., 1996), anda rahustit (Lu, 1998), vananemisvastast (Lee et al., 1990), antinotsitseptiivset ja põletikuvastast toimet (Lin et al., 2002). ) ja tugevdavad immuunfunktsiooni (Wu et al., 2005). Herba Cistanche peamine toimeaine on fenüületanoidglükosiidid (Ouyang et al., 2003), millel on leitud olevat antibakteriaalsed, stressivastased ja antioksüdatiivsed omadused (Xiong et al., 1998), samuti anti-apoptootiline toime kultiveeritud taimedele. neuronid (Tian & Pu, 2005). Käesolevas uuringus uuriti Herba Cistanche Yangi ergutava toime farmakoloogilise aluse uurimiseks Herba Cistanche ravi mõju ATP genereerimise võimele mitokondrites, mis on eraldatud roti südametest ex vivo ja kultiveeritud H9c2 kardiomüotsüütidest in situ. ATP teket suurendava toime aluseks oleva biokeemilise mehhanismi uurimiseks uuriti ka Herba Cistanche'i ravi mõju mitokondriaalsele elektronide transpordile ja komplekssetele I–IV aktiivsustele roti südametes.
Cistanche deserticola ekstrakt
Materjalid ja meetodid
Kemikaalid, rakukultuur ja taimsed materjalid ATP, ADP ja 3-[4,5-dimetüültiosool-2-üül]-2,5-difenüültetrasooliumbromiid ( MTT) osteti firmalt Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Lutsiferaasi lahus (ATPlite) saadi firmalt PerkinElmer (Boston, MA, USA). Dulbecco modifitseeritud Eagle'i sööde (DMEM) ja veiseloote seerum (FBS) osteti ettevõttelt GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). H9c2 rakuliin osteti ettevõttest ATTC (Rockville, MD, USA). Herba Cistanche tarnis kohalik ravimtaimemüüja (Lee Hoong Kee). Tarnija kinnitas ravimtaime autentsuse ja kviitungi näidis (HKUSTY00301) deponeeriti Hongkongi teadus- ja tehnoloogiaülikooli (HKUST) biokeemia osakonda.
Maitsetaimede ekstraheerimine
Herba Cistanche (100 g) lõigati väikesteks tükkideks ja ekstraheeriti seejärel tagasijooksul kuumutades 300 ml metanoolis.
temperatuuril 65 °C 2 tundi. Protseduuri korrati kaks korda. Ühendatud ekstrakt kuivatati, aurustades lahusti alandatud rõhul ja saadi Herba Cistanche metanooliekstrakt saagisega 39 protsenti (mass/mass). Keemiline analüüs näitas, et Herba Cistanche metanooliekstrakt sisaldas saponiine, flavonoide, lignaane ja polüsahhariide kokku kontsentratsioonis 1,62% (w/w), 0.08% , 0,15 protsenti ja 75,6 protsenti.
Loomade eest hoolitsemine
Täiskasvanud isaseid Sprague-Dawley rotte (8–10 nädalat; 250–300 g) hoiti 12--tunnise pimeduse/valguse tsükli all õhu/niiskuse reguleeritavas ruumis temperatuuril umbes 22 °C ning neile lubati süüa ja vett ad libitum. loomahooldusasutustes
HKUSTis. Katseprotokollid kiitis heaks HKUSTi uurimispraktika komitee.
Narkootikumide ravi
Loomad jagati juhuslikult rühmadesse, igaühes viis kuni kuus looma. Ravirühmades manustati rottidele 3 päeva jooksul intragastraalselt Herba Cistanche metanooliekstrakti (lahustatuna/suspendeerituna vees) päevaannustes ({{0}},031–0,5 g/kg). Kontrollloomad said ainult vett. Kakskümmend neli tundi pärast viimast annust võeti fenobarbitaaliga tuimestatud loomadelt süda ja viidi läbi biokeemiline analüüs.
Mitokondriaalsete fraktsioonide valmistamine ja ATP genereerimisvõime (ATP-GC) mõõtmine ex vivo
Südame vasaku vatsakese koeproovid lõigati välja ja loputati jääkülma isotoonilise puhvriga (0,32 M sahharoosi, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7,4). Südame mitokondriaalsed fraktsioonid valmistati diferentsiaalse tsentrifuugimisega isotoonilises puhvris temperatuuril 4 °C. 10-protsendiline (mass/maht) südamehomogenaat valmistati hakitud ventrikulaarse koe homogeniseerimisel teflonklaasist homogenisaatoriga kiirusel 4000 p/min 20–30 täieliku löögi jooksul. Homogenaati tsentrifuugiti 600 g juures 10 minutit, et eemaldada tuumad ja rakujäägid. Seejärel tsentrifuugiti supernatanti 8000 g juures 30 minutit, et settida mitokondrid (Evan, 1992). Pelletid resuspendeeriti 1 ml isotoonilises puhvris ja taastati mitokondriaalsed fraktsioonid. Ravimata loomade mitokondriaalset ATP-GC-d mõõdeti Leung et al. (2005).
Mitokondriaalse elektronide transpordi mõõtmine
Elektronide transpordi mõõtmine isoleeritud mitokondrites, mis põhineb MTT redutseerimisel, viidi läbi nii, nagu on kirjeldanud Cohen et al. (1997). Mitokondrid valmistati valgukontsentratsioonil 1 mg/ml inkubatsioonipuhvriga (250 mM sahharoosi, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7,4). . Mitokondrite alikvoot (40 ui) segati 100 ui 15 mM püruvaadi või 0,5 mM suktsinaadi ja 0,42 mg/ml MTT-ga. Reaktsioonisegu inkubeeriti 37 °C juures 10 minutit õrnalt loksutades. Pärast inkubeerimist lõpetati reaktsioonisegu 100 ui lüüsipuhvri lisamisega (10%, w/v, naatriumdodetsüülsulfaat ja 45% dimetüülformamiid, pH reguleeriti jää-äädikhappega 4,7-ni). Pärast 5-minutilist seismist võeti reaktsioonisegu neeldumisnäidud mikrotiiterplaadi lugejaga (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ja esitati erinevusena 570 nm ja 630 nm vahel. Andmed väljendati protsendina kontrollrühma (st Herba Cistanche-ravimata) rühma keskmisest väärtusest.
Rakukultuur
H9c2 rakke, mis on südame müoblastidest tuletatud püsiv rakuliin (Hescheler et al., 1991), kultiveeriti monokihtidena DMEM-is, millele oli lisatud 10% (maht/maht) FBS-i. Sööde sisaldas glükoosi (4,5 g/l) ja glutamiini (4,5 mM), millele oli lisatud NaHC03 (17 mM), penitsilliini (100 IU/ml) ja streptomütsiini (100 ug/ml). Kõiki rakke kasvatati 5% (maht/maht) CO2 atmosfääris õhus temperatuuril 37 °C. Sööde asendati värske söötmega iga 2 või 3 päeva järel. Rakkude varu kasvatati 75 cm2 kultiveerimiskolvis ja jagati enne liitumist subkultiveerimissuhtega 1:10. ATP-GC testi jaoks külvati H9c2 rakud tihedusega 25 104 rakku süvendi kohta 24-süvendiplaadile. Pärast rakkude kinnitamist kanti söötmesse Herba Cistanche ekstrakti (lahustatuna fosfaatpuhverdatud soolalahuses; PBS) ja rakke inkubeeriti pikema aja jooksul (2–16 tundi). Kontrollrakkudele (töötlemata) anti ainult PBS-i.
ATP-GC mõõtmine in situ
Pärast näidatud inkubatsiooniperioode Herba Cistanche ekstraktiga kasvavate kontsentratsioonide juures (5{{10}}–300 µg/mL) viidi läbi ATP-GC test. Sööde aspireeriti ja rakke töödeldi digitoniiniga (50 µg/ml) inkubatsioonipuhvris (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 protsenti BSA, pH 7,4). min 37°C juures. Pärast digitoniini aspireerimist lisati rakkudele mitokondriaalse ATP genereerimiseks glutamaat (5 mM), malaat (5 mM) ja ADP (60 uM), mida jälgiti kasvavate ajavahemike järel vahemikus 0 kuni 15 minutit. Reaktsioon lõpetati 60 µl perkloorhappe (30 massiprotsenti) lisamisega ja seejärel tsentrifuugiti reaktsioonisegusid 600 g juures 10 minutit temperatuuril 4 °C. Supernatandi alikvoot (120 µL) segati neutraliseerimiseks 90 µl 1,4 M KHC03-ga. Segusid tsentrifuugiti uuesti 600 g juures 4 °C juures ja supernatantides mõõdeti ATP sisaldust, nagu varem kirjeldatud. Töötlemata rakkude ATP-GC hinnati graafiku kõveraaluse pindala (AUC1) arvutamise teel, joonistades genereeritud ATP (nmol / mg valku) aja (0–15 min) suhtes ja väljendatud suvalistes ühikutes. Herba Cistanche'iga töödeldud rakkude puhul normaliseeriti inkubatsiooniaja suurenemise (3, 5, 7, 10 ja 15 min) AUC1 väärtused töötlemata proovide vastavaks keskmiseks kontrollväärtuseks ja väljendati kontrollprotsendina. Seejärel arvutati graafiku kõveraalune pindala (AUC2), mis kujutas protsentides kontrollväärtusi inkubatsiooniaja (3–15 min) suhtes ja väljendati suvalistes ühikutes. Herba Cistanche'iga töödeldud rühmade andmed väljendati protsendina võrrandist:
[AUC2 (HerbaCistanche – töödeldud)/AUC2 (töötlemata)] × 100 protsenti .
Kompleksi I–IV ja tsitraadi süntaasi aktiivsuse mõõtmine
Mitokondriaalse elektronide transpordiahela (ETC) kompleksi I–III aktiivsust mõõdeti spektrofotomeetriliste meetoditega, kasutades kompleksispetsiifilisi substraate (kompleksi I jaoks NADH, kompleksi II jaoks suktsinaat ja kompleksi III jaoks detsüülubikinool), nagu on kirjeldatud (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al., 2005; Mark et al., 2001). Kompleksi IV aktiivsust mõõdeti Sigma tsütokroom c oksüdaasi testikomplekti abil. Mitokondriaalse tsitraadi süntaasi aktiivsust mõõdeti Srere (1969) meetodil.
Valgu analüüs
Mitokondriaalsete fraktsioonide ja rakulüsaatide valgukontsentratsioonid määrati BioRad valguanalüüsi komplekti kasutades, kasutades standardina veise seerumi albumiini ({{0}},038–0,600 mg/ml).
Statistiline analüüs
Kõik andmed väljendati keskmise standardveana (SEM). Neid analüüsiti ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil. LSD-ga tehti post hoc mitu võrdlust. P väärtused<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Tulemused
Herba Cistanche ravi mõju müokardi mitokondriaalsele ATP-GC-le rottidel
Nagu on näidatud joonisel 1, suurendas ravi Herba Cistanche ekstraktiga annustes kuni 0,5 g/kg rottidel annusest sõltuval viisil müokardi mitokondriaalset ATP-GC-d, kusjuures stimulatsiooni aste oli 89 protsenti. annuses 0,5 g/kg.
Herba Cistanche ravi mõju mitokondriaalsele elektronide transpordile roti südametes
Elektronide transpordi ulatust isoleeritud mitokondrites mõõdeti MTT vähenemise jälgimisega. Analüüsis kasutatud substraat oli kas püruvaat või suktsinaat. Nagu on näidatud joonisel fig 2a, suurendas Herba Cistanche ravi annusest sõltuvalt püruvaadi poolt toetatud mitokondriaalse elektrontranspordi ulatust roti südames, optimaalset stimulatsiooni täheldati annuste 0,5 g/kg juures. Siiski ei tuvastatud Herba Cistanchega töödeldud roti südametes olulisi muutusi suktsinaadi poolt toetatud mitokondriaalse elektronide transpordi ulatuses (joonis 2b).
Herba Cistanche ravi mõju mitokondriaalse hingamiskompleksi aktiivsusele roti südametes
Nagu on näidatud joonisel 3, suurendas Herba Cistanche töötlemine optimaalse annusega 0,5 g/kg märkimisväärselt kompleksi I (34 protsenti) ja kompleksi III (22 protsenti) aktiivsust roti südametes. Tsitraadi süntaasi, trikarboksüülhappe tsükli võtmeensüümi aktiivsust Herba Cistanche töötlemine ei mõjutanud (joonis 3). Western blot analüüs näitas, et Herba Cistanche töötlemine ei mõjutanud kompleksi I ja III valgu taset (andmeid pole näidatud).
Herba Cistanche poolt indutseeritud muutuste ajaline kulg mitokondriaalses ATP-GC-s H9c2 rakkudes
ATP-GC muutusi uuriti Herba Cistanche-ga töödeldud rakkudes (50 ja 150 µg/ml) pärast 2–16-tunnist inkubeerimist. Nagu on näidatud joonisel 4, suurendas ravi Herba Cistanche'iga ATP-GC-d ajast sõltuval ja kahefaasilisel viisil H9c2 rakkudes, kusjuures maksimaalne stimulatsioon (vastavalt 44 protsenti ja 89 protsenti) oli täheldatav pärast 8-tunnist inkubeerimist mõlema ravimi kontsentratsiooni puhul. Seejärel naasis ATP-GC töötlemata kontrollväärtustele, kui inkubatsiooniaega pikendati 16 tunnini. Stimulatsioon algas varem, kui rakke töödeldi suurema kontsentratsiooniga (150 µg/ml) Herba Cistanche ekstraktiga.
Herba kontsentratsioonist sõltuvus
Cistanche poolt indutseeritud ATP-GC suurenemine H9c2 rakkudes
H9c2 rakke töödeldi kasvavate kontsentratsioonidega (50–300 µg/ml) Herba Cistanche ekstraktiga 4 tundi. Joonis 5 näitab, et ravi Herba Cistanche'iga suurendas ATP-GC kontsentratsioonist sõltuval viisil, kusjuures maksimaalne stimulatsioon (82 protsenti) oli täheldatav kontsentratsioonil 300 µg/ml.
Cistanche ekstrakti ATP tootmise suurenemine
Arutelu
Rakkude aktiivsuse ülesreguleerimine keha funktsioonide parandamiseks, nagu lihaste kokkutõmbumine ja immuunvastused Yangi elavdamise abil, nõuab ATP tarbimise suurendamist, mida omakorda toetab mitokondriaalne oksüdatiivne fosforüülimine. Käesolevas uuringus leiti, et Herba Cistanche ravi suurendab annusest sõltuvalt mitokondriaalset ATP genereerimisvõimet ex vivo roti südametes. See tähelepanek on kooskõlas meie varasema järeldusega, et Yangi ergutavate Hiina toniseerivate ürtide hulgas andis Herba Cistanche ravi suhteliselt suurema stimulatsiooni mitokondriaalsele ATP tekkele hiire südametes (Ko et al., 2006). Mitokondriaalse ATP tekke suurenemisega kaasnes püruvaadi, kuid mitte suktsinaadi poolt juhitud mitokondriaalsete elektronide transpordi suurenemine, mida hinnati MTT vähenemisega. Mitokondriaalse kompleksi I–IV kineetilise mõõtmise tulemused näitasid, et nii kompleksi I kui ka III aktiivsus suurenes Herba Cistanchega töödeldud südametes, kusjuures kompleksi I aktiivsuse stimulatsiooni ulatus oli suurem kui kompleksi III aktiivsus. Kuna trikarboksüülhappe tsükli võtmeensüümi tsitraadi süntaasi aktiivsust ei mõjutanud, võib mitokondriaalse ATP genereerimisvõime suurendamise Herba Cistanche raviga seostada peamiselt kompleksi I ja/või III aktiivsuste stimuleerimisega. Enamiku südame ATP-vajadustest täidavad mitokondrid, mis sõltuvad peaaegu täielikult rasvhapete ja glükoosi komplekssest I (NADH)-seotud oksüdatsioonist (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Kompleksi I, millel on madalam aktiivsus kui teistel hingamisteede kompleksidel, peetakse oluliseks teguriks oksüdatiivse fosforüülimise reguleerimisel. Seega võib kompleksi I aktiivsuse stimuleerimisel või pärssimisel olla suur mõju südame energeetikale. Kuigi Western blot analüüs ei näidanud nende kahe kompleksi valgutaseme muutusi (andmeid pole näidatud), võib suurenenud ensüümi aktiivsus tuleneda valgu tiooli staatuse ja/või lipiidide keskkonna muutustest (Davey et al., 1998; Paradies et al., 2004).
Herba Cistanche ekstraktvõib in situ tekitada kultiveeritud H9c2 rakkudes ATP teket suurendavat toimet. Herba Cistanche ravi poolt tekitatud stimuleeriva toime suhteliselt varajane algus, eriti suurte annuste korral, on kooskõlas ex vivo uuringute tähelepanekutega, mis näitasid, et komplekssete I ja III valkude süntees ei ole tõenäoliselt seotud ATP tekke suurendamisega. tegevust. Herba Cistanche poolt indutseeritud ATP tekke in situ seisundi paranemise demonstreerimine toetab arvamust, et mitokondriaalse ATP tekkevõime suurenemine, mida hinnati ex vivo mõõtmisega, võib peegeldada pelgalt paralleelset toimet, mis tekib ravimiravi in vivo tingimustes. ATP tekke mõõtmine isoleeritud mitokondrites ja kultiveeritud rakkudes, kasutades substraatidena malaati ja glutamaati, on oleku 3 mitokondriaalse hingamise kaudne mõõt (Chen et al., 2003). Sama bioluminestsents-ATP testi kasutades oli mitokondriaalse ATP tekke kiirus ravimata rottide erinevates kudedes, nagu meie laboris varem teatati (Leung et al., 2005), hästi kooskõlas hiljuti avaldatud andmetega (Drew & Leeuwenburgh, 2003). ). ATP genereerimisvõimet hinnati ajast sõltuvate ATP taseme muutuste kaheastmelise integreerimisega nii ex vivo kui ka in situ testides. Seetõttu suurendati võrdluse huvides täheldatud ravimi poolt indutseeritud stimuleerivat toimet. ATP tekkevõime suurendamine Herba Cistanche'i raviga roti südame mitokondrites ex vivo oli paralleelne ATP tekke stimuleerimisega H9c2 rakkudes in situ. Arvestades ATP teket suurendava toime olemasolu Yangi ergutavates Hiina toniseerivates ürtides, sealhulgas Herba Cistanche, hiire südametes ex vivo (Ko et al., 2006), näitavad tulemused, et ATP genereerimise võime mõõtmine H9c2 rakkudes situ võib kasutada Yangi ergutavate hiina toniseerivate ürtide või ravimtaimede koostise farmakoloogilise testina.
Kokkuvõtteks võib öelda, et ravi Herba Cistanche ekstraktiga võib suurendada mitokondriaalse ATP genereerimise võimet roti südametes ex vivo ja H9c2 rakkudes in situ. Leiud toetavad meie oletust, et Yang-invigoratsiooni farmakoloogiline alus hõlmab keha funktsioonide parandamist mitokondriaalse ATP tootmise stimuleerimise kaudu.
Herba Cistanche ekstrakt suurendab mitokondriaalset ATP tootmisvõimet
Viited
Chen P (1998): Toniseerivad ürdid. Täiustatud TCM-seeria. Peking, Hiina, Science Press, lk 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Reaktiivsete hapnikuliikide tootmine mitokondrite poolt: kompleksi III keskne roll. J Biol. Chem. 278: 36027-36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Parkinsoni tõbi: uus seos monoamiini oksüdaasi ja mitokondriaalse elektronide voolu vahel. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Energialäved aju mitokondrites. Võimalik osalus neurodegeneratsioonis. J Biol. Chem. 273: 12753-12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): ATP produktsiooni mõõtmise meetod isoleeritud mitokondrites: ATP tootmine Fischer{1}} rottide aju ja maksa mitokondrites vanuse ja kaloripiiranguga. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Membraanide ja rakuorganellide isoleerimine ja iseloomustamine. In: Rickwood D, toim. Ettevalmistav tsentrifuugimine: praktiline lähenemine. New York, Oxford University Press, lk 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Caenorhabditis elegansi mitokondriaalse kompleksi I mutatsioonid põhjustavad tsütokroom c oksüdaasi puudulikkust, oksüdatiivset stressi ja vitamiinidele reageerivat laktatsidoosi. Human Mol Genetics 13: 303–314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Morphological, biochemical ja elektrofüsioloogiline iseloomustus kloonraku (H9c2) liini roti südamest.Circ Res 69: 1476–1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Glutatiooni vähenemine, mille tulemuseks on mitokondriaalse kompleksi I selektiivne inhibeerimine dopamiinergilistes rakkudes, toimub NO-vahendatud raja kaudu, mis ei hõlma peroksünitriiti: mõju Parkinsoni tõvele. J Neurochem 92: 1091-1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): "Yang-invigorating" Hiina toniseerivate ürtide iseloomulik farmakoloogiline toime: Müokardi ATP genereerimisvõime suurendamine. Phytomedicine 13: 636–642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): "Yang-invigoration" farmakoloogiline alus Hiina meditsiinis. Trends Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Uuring Cistanche deserticola Ma vananemisvastase toime kohta. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): fenüületanoidglükosiidide metaboolne regulatsioon Herba cistanches koerte seedetraktis. Yao Xue Xue Bao 36: 432–435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Yangi kosutav Hiina taimne valem suurendab mitokondriaalset funktsionaalset võimet ja antioksüdantide võimet isaste ja emaste rottide erinevates kudedes. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Cistanche deserticola põhjustatud antinotsitseptiivne ja põletikuvastane toime närilistel. J. Etnopharmacol. 83: 177–182.
Lu MC (1998): Cistanche deserticola rahustava toime uuringud. J. Etnopharmacol. 59: 161–165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Mitokondriaalse hingamiskompleksi aktiivsuse määramine inimese rakkudest ja kudedest eraldatud mitokondrites. Meth Cell Biol. 65: 97-117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Haruldaste muldmetallide elementide mõju Cistanche deserticola rakkude kasvule ja fenüületanoidglükosiidide tootmisele. J Biotech 102: 129–134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Mitokondriaalse kompleksi I aktiivsuse vähenemine isheemilise / reperfusiooniga roti südames: reaktiivsete hapnikuliikide ja kardiolipiini kaasamine. Circ Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Tsitraadi süntaas. Sidrunhappe tsükkel. Meth Enzymol, 13:3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Müokardi süsivesikute metabolismi reguleerimine normaalsetes ja isheemilistes tingimustes. Farmakoloogiliste sekkumiste potentsiaal. Cardiovasc Res 33: 243-257.
Taegtmeyer H (1998): Energiasubstraadi metabolism kui isheemilise ja reperfusiooniga südamelihase farmakoteraapia sihtmärk. Heart Metab 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Cistanches salsa fenüületanoidglükosiidid inhibeerivad neuronites 1-metüül-4- fenüülpüridiiniumiooni poolt indutseeritud apoptoosi. J Ethnopharmacol 97: 59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Cistanche deserticola vartest eraldatud arabinogalaktaan kutsub esile kultiveeritud lümfotsüütide proliferatsiooni. Int. J. Biol. Macromol. 37: 278-282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Cistanche deserticola fenüületanoidide hepatoprotektiivne aktiivsus. Planta Med 64: 120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Cistanche deserticola fenüületanoidide antioksüdatiivne toime. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.
