Rehmannia Glutinosa viie komponendi määramine ja HPLC sõrmejälje määramine

Abstraktne:Viie komponendi sisalduse määramise meetodRehmannia glutinosa, nimeltrehmannosiid D, leonuriin,ehhinakosiid,tsistantsiid Ajaverbascoside, loodi ja Rehmannia glutinosa kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) sõrmejälg loodi, et luua teaduslik alus Rehmannia glutinosa kvaliteedikontrolliks. Kasutati Shiseido CAPCELL PAK C18 kolonni, kus liikuva faasina oli atsetonitriil-0,1% sipelghappe lahus, gradientelueerimine, kolonni temperatuur 30 kraadi, muutuva lainepikkuse määramine ja voolukiirus 1,0 ml/min. Rehmannia glutinosa HPLC sõrmejälge analüüsitiHiina meditsiini kromatograafilise sõrmejälgede sarnasuse hindamise süsteem (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), oli täpsustesti, korratavustesti ja stabiilsustesti RSD 0,12%~1,58% ja keskmine proovi taastamise määr oli 96,5%. ~98,6%; kindlaks tehtud Rehmannia glutinosa HPLC sõrmejälg tuvastas 23 ühist piiki ning Rehmannia glutinosa proovi ja kontrollsõrmejälje sarnasus oli 0,904~0,950. Tulemused viitavad sellele, et kehtestatud sisalduse määramise meetod ja HPLC sõrmejälg sobivad suure täpsuse ja hea reprodutseeritavusega Rehmannia glutinosa kvaliteedi hindamiseks ning toore Rehmannia glutinosa ja keedetud Rehmannia glutinosa tuvastamiseks ning võivad pakkuda tehnilist tuge Rehmannia glutinosa ravimmaterjalid.

Märksõnad:Rehmannia glutinosa; sisu määramine; sõrmejälg; kvaliteedi hindamine

UUS ÜRDTASTANŠE KOOSEHHINAKOOSID,TSISTANSSIID AJAVERBASKOSIDE

Rehmannia glutinosaon Scrophulariaceae taime Rehmannia glutinosa Libosch värske või kuivatatud juuremugulas. Erinevate töötlemisviiside tõttu jaguneb see peamiselt värskeks rehmanniaks, toores rehmanniaks ja keedetud rehmanniaks [1-2]. Peamised tootmispiirkonnad on Henani, Shanxi, Shaanxi jne maa. Nende hulgas on toores rehmannia glutinosa mõju soojuse eemaldamiseks ja verd jahutamiseks, yini toitmiseks ja vedeliku tootmise soodustamiseks ning seda kasutatakse peamiselt vere kuumuse, soojade toksiinide ja laikude jne raviks; keedetud rehmannia glutinosa on verd ja yini toitev, essentsi ja luuüdi täiendav toime ning seda kasutatakse peamiselt verepuuduse, kloroosi jms raviks. Südamepekslemine, rahutus jne.[1-2]. Neil kahel on erinevad omadused ja maitsed, kuid mõlemad kuuluvad maksa- ja neerumeridiaanidesse. Rehmannia glutinosa sisaldab keerulisi keemilisi komponente, sealhulgas iridoide, ionoone, fenüületanoolglükosiide, flavonoide jne [3-5].

Pärast seda, kui Rehmannia glutinosa on töödeldud erinevate töötlemismeetoditega, on iga töödeldud toote keemiliste komponentide tüübid, sisaldused ja proportsioonid väga erinevad, mille tulemuseks on märkimisväärsed erinevused selle farmakoloogilises aktiivsuses [6-10]. järgi

Seotud uuringud[11-12] näitavad, et Rehmannia glutinosa muutumisel "toorest" "keedetud" keemiliste komponentide, nagu katalpol, emajuur, stahhüoos ja aminohapped, sisaldus vähenes oluliselt ning nende sisaldus vähenes. fruktoosi, 5-hüdroksümetüülfurfuraali jne sisaldus. Isorebaskosiidi jne sisaldus suurenes oluliselt. Praegu kasutatakse toor- ja keedetud rehmannia glutinosa kvaliteedikontrollis hindamisindikaatoritena peamiselt katalpoli ja rehmanniasiid D sisaldust. Hindamissüsteemi näitajad on suhteliselt üksikud, mistõttu on raske rehmannia glutinosa kvaliteedi igakülgset kontrollimist. Lisaks on uuringud näidanud, et rehmannia glutinosa D sisaldus muutub enne ja pärast töötlemist. See on väike ja selle spetsiifilisus töötlemisjärgsete koostise muutuste ja töötlemisastme iseloomustamisel on nõrk [12-13].

Seetõttu tuvastas see uuring Rehmannia glutinosa kvaliteedi põhjalikumaks hindamiseks seose rehmanniasiid D ja Yimu vahel Rehmannia glutinosa puhul.

Viie ühise komponendi, sealhulgas glükosiid, ehhiaatsiid, tsistanheosiid A ja verbaskosiid, sisalduse määramise meetodid ning Rehmannia glutinosa HPLC-sõrmejälje loomine, et analüüsida erinevatest tootmispiirkondadest pärit Rehmannia glutinosa põhikomponentide sisaldust ning enne ja pärast töötlemist, et anda teavet Rehmannia glutinosa kvaliteedikontrolliks. Tehniline tugi.

Instrumendid, reaktiivid ja testravimid

Agilent 1260 kõrgjõudlusega vedelikkromatograaf (detektor on dioodide massiiv); muutuva ulatusega elektroonilised analüütilised kaalud (METTLER TOLEDO); digitaalne ultrahelipuhasti (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). Metanool (Sinopharm Group) on analüütiliselt puhas; atsetonitriil (Merck) on kromatograafiliselt puhas; vesi on Watsoni pudelivesi. Rehmannia glutinosa D võrdlusaine (partii number RFSD8401909016, puhtus 98,0%), leonuruse glükosiidi võrdlusaine (partii number RFS-Y22002208010, puhtus 98,0%) ja tsistanthesiid A võrdlusaine (partii number RFS-R05002009014, puhtus 96,0%), kõik osteti ettevõttelt Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; ehhinakosiidi võrdlusaine (partii number 111670-201907, puhtus 91,8%) ja verbaskosiidi võrdlusaine (partii number 11530-201914, puhtus 95,2%) osteti Hiina toidu- ja ravimiinspektsiooniinstituutidest. Rehmannia proovid (SX1 ~ SX4, HN1 ja HN2) koguti erinevatest tootmispiirkondadest (vt tabel 1), millest SX4 ja HN2 aurutati vastavalt SX1 ja HN1 abil ning SX2 ja SX3 koguti samast tootmispiirkonnast. Gansu provintsi uimastikontrolli instituudi hiina meditsiini peaarst Song Pingshun tuvastas kõik proovid autentsetena.

Tabel 1 Semen Rehmanniae proovide teave

2.1 Kromatograafilised tingimused

Kasutati Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm × 4,6 mm, 5 μm) kolonni, liikuva faasina A kasutati atsetonitriili ja liikuva faasina B kasutati 0,1% sipelghappe lahust. Gradiendi elueerimise tingimused olid: 0-3 min, 1%A; 3-9 min, 1%A→5%A; 9-24 min, 5%A→35%A; 24-35 min, 35%A→65%A; 35-40 min, 65%A→90%A. Muutuva lainepikkusega tuvastamine (0-24 min, 203 nm; 24-40 min, 330 nm). Süstimismaht oli 15 μL võrdluslahust ja 20 μL proovilahust.

2.2 Lahuse valmistamine

2.2.1 Võrdluslahuse valmistamine

Võtke sobivad kogused ülaltoodud viit võrdlusainet, lisage 70% metanooli, et valmistada segatud võrdluslahus massikontsentratsiooniga 0,4 mg/ml.

2.2.2 Testlahuse valmistamine

Kaaluge umbes 1.0 g Rehmannia pulbrit (läbi sõela nr 2), kaaluge täpselt, asetage korgiga koonilisse kolbi, lisage täpselt 25 ml 70% metanooli, sulgege, kaaluge, töödelge ultraheliga (võimsus 300). W, sagedus 50 kHz) 30 minutit, lasta jahtuda toatemperatuurini, kaaluda uuesti, kaotatud mass täiendada 70% metanooliga, filtreerida ja saadud filtraat võtta.

2.3 Metodoloogiline uurimine

2.3.1 Spetsiifilisuse uurimine

Segatud võrdluslahus võetakse punkti 2.2.1 alla ja uuritav lahus (proov SX1) punkti 2.2.2 alla ning süstitakse ja mõõdetakse vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis 2.1. Tulemused näitavad, et Rehmannia proovi kromatogrammil on sama retentsiooniajaga kromatograafiline piik kui Rehmannia glutinosa D, Leonurini, Echinacoside, Cistanche deserticola A ja Verbascoside võrdlusstandarditel (vt joonis 1), mis näitab, et sellel meetodil on tugev. spetsiifilisus.

2.3.2 Lineaarse seose uurimine

Segatud võrdluslahusele lisada 70% metanooli, lahjendada vastavalt 5 korda, 10 korda, 25 korda, 50 korda, 100 korda ja 250 korda ning süstida ja mõõta vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis 2.1. Standardkõverad joonistati nii, et horisontaalteljeks (x) on iga võrdlusaine massikontsentratsioon ja vertikaalteljeks (y) vastav kromatograafilise piigi pindala. Tulemused on toodud tabelis 2, mis näitab, et igal komponendil on hea lineaarne seos vastavas massikontsentratsioonivahemikus.

1.rehmanniosiid D; 2. leonuriid; 3. ehhinakosiid; 4. kastanosiid A;5. akteosiid

Joonis 1 Spetsiifilisuse uurimise kromatogrammid

Tabel 2 Semen Rehmanniae 5 komponendi lineaarne seos

2.3.3 Täppisuurimine

Võetakse katselahus (proov SX1) punkti "2.2.2" alla ja sooritatakse süstimiskatse vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis "2.1". Süstige proov pidevalt 6 korda, registreerige iga komponendi piigi pindala ja arvutage rehmannia glutinosa D, emajuurglükosiidi, ehhiaatsia glükosiidi, tsistanche glükosiidi A ja verbaskosiidi piigi pindala RSD väärtuseks 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48% ja 0.82%, mis näitab, et instrumendil on hea täpsus.

2.3.4 Korratavuse uuring

Kuus proovi samast Rehmannia juureproovist (SX1) valmistati paralleelselt vastavalt punktis "2.2.2" toodud meetodile ning süstiti ja määrati vastavalt punktis "2.1" toodud kromatograafilistele tingimustele. Rehmannia juure glükosiidi D, emajuurglükosiidi, ehhiaatsia glükosiidi, tsistanšglükosiidi A ja verbaskosiidi RSD-d kuues proovis olid 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}},48% ja 1,58% vastavalt, mis näitab, et meetodil on hea korratavus.

2.3.5 Stabiilsusuuring

Võtke uuritav lahus (proov SX1) punkti "2.2.2" alla ning süstige ja mõõtke vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis "2.1" 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ vastavalt 15}} h, 12 h, 18 h ja 24 h. Rehmannia glutinosa D, emajuurglükosiidi, ehhinakosiidi, tsistanšglükosiidi A ja verbaskosiidi tippalade RSD oli 0,94%, 1.04%, 0,73%. , 0,83% ja 0,71%, mis näitab, et testlahuse stabiilsus on 24 tunni jooksul hea.

2.3.6 Proovi taastamise määr

Korgiga koonilisse kolbi kaaluti täpselt {{0}},5 g Rehmannia juureproovi (SX1) teadaoleva 5 komponendi sisaldusega, lisati 6 paralleelset portsjonit ja 5 teatud kontsentratsiooniga võrdluslahust. vastavalt. Proovid valmistati vastavalt punktis "2.2.2" toodud meetodile ning proovid süstiti ja mõõdeti vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis "2.1". Taastumismäär arvutati ja tulemused on näidatud tabelis 3. Iga komponendi keskmine proovi taaskasutamise määr oli 96,5% ~ 98,6% ja RSD oli 0,73% ~ 1,52%, mis näitab, et meetod on hea täpsusega.