Viie ühendi sisalduse määramine spermas Rehmanniae ja selle HPLC sõrmejälje määramine

Tabel 3 Taastetesti tulemused (n=6)

2.4 Proovi määramine

Kogutud kuus Rehmannia partiid valmistati vastavalt punktis "2.2.2" toodud meetodile ja võeti proovid ning määrati kromatograafiliste tingimuste kohaselt punktis "2.1". Sisalduse määramise tulemused on toodud tabelis 4. Tulemused näitavad, et viiest komponendist on rehmannia glükosiidi D sisaldus kõrgeim, jäädes vahemikku 0,460% kuni {{1 0}},730%; leonuri glükosiidi sisaldus on teisel kohal, jäädes vahemikku 0,100% kuni 0,270%, ja kahe komponendi sisaldus erinevatest tootmispiirkondadest pärit proovides ei erine oluliselt. Proovis SX1, välja arvatud ehhinakosiidi puhul, on ülejäänud nelja komponendi sisaldus oluliselt suurem kui teiste proovipartiide puhul; ehhinakosiidi, tsistanheesi A ja verbaskosiidi sisaldus erinevatest tootmispiirkondadest pärit Rehmannia glutinosa puhul on üsna erinev ja ebakorrapärane.

CISTANHEÜRD KOOSHEA KVALITEETNE JÄRJESTUS

2.5 Rehmannia glutinosa HPLC sõrmejälje tuvastamine ja sarnasuse hindamine

Rehmannia glutinosa mitmekomponendilise sisalduse määramise kromatogrammid ja andmed imporditi "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Sarnasuse hindamise süsteemi (2012 Edition)" tarkvarasse ning valiti SX1 testproovi kromatogramm. võrdlusspektrina. Ajaakna laiuseks määrati 0,10 min ning kattuvate spektrite ja võrdlusspektrite genereerimiseks kasutati mediaanmeetodit. Kokku tuvastati 23 ühist piiki (vt joonis 3). Rehmannia glutinosa proovi ja võrdlusaluse sõrmejälgede sarnasus oli 0,904 ~ 0,950, mis näitab, et Rehmannia glutinosa proovid erinevatest tootmispiirkondadest ning toore Rehmannia glutinosa ja keedetud Rehmannia glutinosa vahel olid sarnased ja hea kvaliteediga.

Tabel 4 Semen Rehmanniae 5 komponendi sisalduse määramise tulemused/%

13. rehmanniosiid D; 17. leonuriid; 19. ehhinakosiid; 20. kastanosiid A; 21. akteosiid

Joonis 3 Semen Rehmanniae 6 partii (SX1-SX4, HN1, HN2) ja võrdlusmaterjali (R) katvad HPLC kromatogrammid

3 Arutelu

3.1 Kromatograafiliste tingimuste valik

Selles uuringus uuriti nelja liikuva faasi süsteemi: atsetonitriil-vesi, atsetonitriil-0,1% sipelghappe lahus, metanool-vesi ja metanool-0,1% sipelghappe lahus. Tulemused näitasid, et viiel komponendil oli atsetonitriilisüsteemis hea eraldusefekt; atsetonitriil-vesi liikuva faasi süsteemiga võrreldes olid rehmannia glutinosa ja emajuurglükosiidide piigid atsetonitriili-0.1% sipelghappelahuse liikuvas faasis kitsamad ja hea piikide sümmeetriaga. Samas on viie komponendi erineva ultraviolettkiirguse neeldumise tõttu komponentide sisaldus väga erinev. Iga komponendi sisalduse täpsemaks määramiseks ja viie komponendi neeldumise intensiivsuse ühtlaseks jaotumiseks samas kromatogrammis tuleb määrata ultraviolettkiirguse neeldumine.rehmannia glükosiid D, analüüsiti emajuurglükosiidi, ehhinakosiidi, tsistanhesiidi A ja verbaskosiidi ning valiti muutuva lainepikkuse määramine, st 0-24 min, esimene eraldatud rehmannia glükosiid määrati 203 nm juures ja 24-40 min, eraldatud ehhinakosiid, tsistantsiid A ja verbaskosiid määrati 330 nm juures. Lisaks uuriti selles uuringus ka ekstraheerimislahustena metanooli, 70% metanoolilahuse, 50% metanoolilahuse ja 50% atsetonitriili lahuse ekstraheerimisefekte. Tulemused näitasid, et 70% metanoolilahus ekstraheerimislahustina suudab testitavaid komponente paremini lahustada ja ekstraheeritud proovis on vähem lisandeid. Seetõttu valiti selles uuringus ekstraheerimislahustiks 70% metanool, liikuva faasi süsteemiks atsetonitriil-0,1% sipelghappe lahus ja Rehmannia viie komponendi sisalduse määramiseks kasutati muutuvat lainepikkust.

3.2 Proovide määramise tulemuste analüüs

Määramistulemustest on näha, et pärast aurutamist, välja arvatud ehhinakosiidi sisalduse mõningane suurenemine, vähenes oluliselt ülejäänud nelja komponendi sisaldus, eriti leonuriidi ja tsistanheesi A sisaldus; samast tootmispiirkonnast pärit Rehmannia glutinosa rehmannia glükosiidi D ja tsistanheesi A sisaldus oli veidi erinev ning oluliselt erinev leonuriidi, ehhinakosiidi ja verbaskosiidi sisaldus; ehhinakosiidi sisaldus Henani tootmispiirkonnast pärit Rehmannia glutinosa puhul oli oluliselt kõrgem kui Shanxi tootmispiirkonna proovides ning ülejäänud nelja komponendi sisaldus oli veidi erinev. Samal ajal oli selles uuringus kindlaks tehtud HPLC sõrmejälje järgi sarnasus 6 Rehmannia proovipartii ja kontrollsõrmejälje vahel 0,904~0,950, mis näitab, et peamine kemikaal 6 Rehmannia proovipartii komponendid enne ja pärast töötlemist olid väga ühtlased.

Kokkuvõttes on selles uuringus loodud sisu määramise meetod ja HPLC sõrmejälg täpsed, usaldusväärsed ja hea spetsiifilisusega. Nende abil saab iseloomustada Rehmannia glutinosa komponentide ja töötlusastme muutusi enne ja pärast töötlemist ning pakkuda tehnilist tuge Rehmannia glutinosa kvaliteedikontrolliks. Selle uuringu puuduseks on aga väikesed proovipartiid ja tootmispiirkondade mittetäielik katvus, mis nõuab täiendavat analüüsi ja kontrollimist.

Viited

[1] Hiina farmakopöa komitee. Hiina Rahvavabariigi farmakopöa: 1. köide [S]. Peking: Hiina meditsiiniteaduse ja tehnoloogia ajakirjandus, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Töödeldud Rehmannia glutinosa nimetuste ajaloolise evolutsiooni ja selle efektiivsuse uurimine [J]. Hiina patendimeditsiin, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe jt. Rehmannia glutinosa uurimistöö ja selle kvaliteedimarkerite prognoosianalüüs [J]. Hiina patendimeditsiin, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi jt. Rehmannia glutinosa [J] keemilise koostise ja farmakoloogiliste mõjude uurimine. Hiina ravimtaimed, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Rehmannia glutinosa［J］ keemiliste komponentide ja farmakoloogiliste mõjude uurimine.

Ravim hindamine uuringud, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei jt. Värske Rehmannia glutinosa, toore Rehmannia glutinosa ja keedetud Rehmannia glutinosa keemiliste komponentide analüüs UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］ abil. Hiina patendimeditsiin, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei jt. Erinevate töödeldud Rehmannia glutinosa toodete ［J］ sõrmejälgede mustrituvastus ja mitmekomponendiline sisu määramine. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi jt. Rehmannia glutinosa［J］ keemiliste komponentide ja farmakoloogiliste mõjude uurimine. Hiina ravimtaimed, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian jt. Rehmannia glutinosa keemiliste komponentide võrdlev uuring enne ja pärast töötlemist UHPLC-Q-TOF/MS［J］. New Chinese Medicines and Clinical Pharmacology, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan jt. Nukleosiidide ja aminohapete komponentide dünaamiline akumulatsioon Rehmannia glutinosa's UPLC-TQ-MS［J］ põhjal. Hiina ravimtaimed, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Uuring Rehmannia glutinosa［D］ "üheksa aurutamise ja üheksa kokkupuute" töötlemistehnoloogia ja mehhanismi kohta. Jinan: Shandongi ülikool, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan jt. HPLC Rehmannia glutinosa ja selle erinevate töödeldud toodete kaheksa komponendi sisalduse samaaegne määramine UPLC sõrmejälgede analüüsi ja mitme indeksiga komponentide sisalduse määramisega [J]. Hiina meditsiinimaterjalid, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Rehmannia glutinosa kvaliteedi hindamine UPLC sõrmejälje ja mitme indeksi komponentide sisalduse määramise põhjal [J]. Hiina meditsiinimaterjalid, 2021, 44 (4): 917-923.