Ehhinakosiidi määramine Cistanche Herba veeekstraktis HPLC abil

Abstraktne:

Eesmärk HPLC meetod loodiehhinakosiidi määramineaastalCistanche veeekstraktherba.

Meetodid Ehhinakosiid määrati HPLC abil. Eraldamine viidi läbi Inertsil ODS-SP C18 kolonnis liikuva faasiga, mis koosnes atsetonitriilist (A) ja 0,4% fosforhappe lahusest (B), gradientelueerimise teel. Tuvastuslainepikkuseks määrati 333 nm ja kolonni temperatuur oli 30 kraadi. Voolukiirus oli 1,0 ml·min-1 ja süstimismaht 10 μL. Tulemused Ehhinakosiidi lineaarne seos kontsentratsioonivahemikus 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 oli hea (r=0.999 8). Taastumine oli 94,59%-105,31% (RSD= 2,93%,n=9). Ehhinakosiidi sisaldus Cistanche herba vesiekstraktides oli 15,527,7,347,12,267 mg·g-1. Järeldus Hea korratavusega HPLC meetod on täpne, lihtne ja teostatav. See sobib ehhinakosiidi määramiseks Cistanche herba veeekstraktis.

Märksõnad:HPLC;Cistanche herba veeekstrakt; ehhinakosiid; sisu määramine

Cistanche deserticola on toniseeriv traditsiooniline hiina meditsiin, mida tavaliselt kasutatakse kliinilises praktikas ja mida tuntakse kui "kõrbe ženšenn" [1]. Hiina farmakopöa 2015. aasta väljaandes registreeritud Cistanche deserticola on Cistanche deserticola YC Ma või Cistanche tubulosa (Schenk) Wighti kuivatatud lihakas vars koos ketendavate lehtedega. See on soe, magus ja soolane ning naaseb neerude ja jämesoole meridiaanidesse. Sellel on neeru yangi toitev, essentsi ja verd täiendav toime ning soolestikku niisutav ja lahtistid [2]. "Shen Nongi Materia Medica," ütleb, et see võib "toniseerida keskosa, toita viit siseorganit, tugevdada yini ja toita essentsi". Cistanche deserticola sisaldab peamiselt fenüületanoidglükosiide, iridoide ja nende glükosiide, lignaane ja nende glükosiide, polüsahhariide, esterühendeid ja alkaloide [3]. Fenüületanoolglükosiidid on Cistanche deserticola peamised toimeained. Nende hulgas on ehhinakosiid ja verbaskosiid loetletud Hiina farmakopöa Cistanche deserticolas.

Indikatiivsed komponendid tuvastamiseks ja sisu määramiseks. Farmakoloogilised uuringud [4] näitavad, et Cistanche deserticolal on erinevad farmakoloogilised toimed, nagu lahtistav, maksakaitse, osteoporoosivastane, antioksüdant, vananemisvastane ja väsimusevastane toime. Cistanche deserticola vesiekstrakt võib soodustada luu morfogeneetilise valgu 2 geeni ekspressiooni roti osteoblastides, tartraadiresistentse happelise fosfataasi, osteokaltsiini ekspressiooni munasarjade eemaldatud hiirte seerumis ja Smad1, mad5 geenide, transformeerivate kasvufaktori- jne ekspressiooni luuüdis. , millel on osteoporoosivastane toime [5-6].

Echinacea võib soodustada osteoblastide vohamist ja soodustada in vitro kultiveeritud luuüdi mesenhümaalsete tüvirakkude diferentseerumist osteoblastideks [7-9]. Viimastel aastatel on avaldatud palju uuringuaruandeid ehhinakosiidi ja verbaskosiidi sisalduse määramise kohta Cistanche deserticola etanooliekstraktis ja selle liitpreparaatides [10-12], kuid Cistanche deserticola indeksikomponentide sisalduse määramise kohta on vähe teateid. vesiekstrakt. Selles uuringus kasutati ehhiaatseasiidi sisalduse määramiseks Cistanche deserticola vesiekstraktis kõrgsurvevedelikkromatograafiat (HPLC).

1 materjal

1.1 Instrumendid

LC-20AT kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia, SPD-20A detektor, SIL-20automaatne proovivõttur, CTO-10ASvp kolonn-ahi, LC-lahuse vedelikkromatograafia tööjaam, Shimadzu Corporation of Jaapan; MES125P-OCE-DU elektrooniline analüütiline kaal, Sartorius Company, Saksamaa; SHZ-D (Ⅲ) tsirkuleeriva vee mitmeotstarbeline vaakumpump, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 rootoraurusti jahutussüsteem, RV 10 D S96 rootoraurusti, IKA Company, Saksamaa; DK-S26

Elektriline konstantse temperatuuriga veevann, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR-seeria ülipuhta vee masin, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Ravimaterjalid ja reaktiivid

Cistanche deserticola ravimmaterjal osteti ettevõttelt Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., partii number: 1801001, 1806001, 181001. Guangzhou Hiina Meditsiini Ülikooli kolmanda sidushaigla traditsioonilise hiina peaproviisor Tu Xingming tuvastas selle. kui Cistanche deserticola YCMa kuivatatud lihakas vars koos ketendavate lehtedega. Proovi hoitakse Guangzhou Hiina Meditsiiniülikooli kolmanda sidushaigla uimastitestide ruumis; Echinacea Glycoside võrdlusaine, sisaldus 89,7%, Hiina Toidu- ja Ravimikontrolli Instituut, partii number: 111670-

201706; atsetonitriil on kromatograafiliselt puhas (Merck, Saksamaa); metanool ja fosforhape on analüütiliselt puhtad (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); vesi on ülipuhas vesi.

2 Meetodid ja tulemused

2.1 Cistanche deserticola vesiekstrakti valmistamine

Võtke Cistanche deserticola ravimmaterjali jäme pulber, lisage 10-kordne kogus destilleeritud vett, kuumutage ja püstjahutil ekstraheerimiseks kaks korda, iga kord 1 tund, filtreerige, ühendage filtraat ja kontsentreerige filtraat pöördaurustiga. kuni toorravimisisalduseni 0,100 g·mL-1 ja hoidke seda 4 kraadi juures hilisemaks kasutamiseks.

2.2 Kromatograafilised tingimused ja süsteemi sobivus

Kromatograafiline kolonn: Inertsil ODS SP C18 kolonn (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); liikuv faas: atsetonitriil (A)-0,4% fosforhappe lahus (B), gradientelueerimine: 0 ~ 5 min, 17%

A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; tuvastamise lainepikkus: 333 nm; kolonni temperatuur: 30 kraadi; voolukiirus: 1,0 ml·min{10}};

Süstimismaht: 10 μL. Nendes kromatograafilistes tingimustes on ehhinakosiidi ja külgnevate komponentide piikide vaheline eraldus suurem kui 1,5 ning ehhiaatseasiidi piigil põhinevate teoreetiliste plaatide arv ei tohiks olla väiksem kui 4, 000. Kromatogramm on näidatud joonisel 1.

2.3 Lahuse valmistamine

2.3.1 Võrdlusaine lahus Kaaluge sobiv kogus ehhinakosiidi võrdlusainet, kaaluge see täpselt, asetage see 10 ml mõõtekolbi, lisage lahustamiseks metanool ja valmistage võrdlusaine lahus, mis sisaldab 898,794 ug ehhinatsasiidi ml kohta, 4 kraadi. Salvestage hilisemaks kasutamiseks.

2.3.2 Testlahus

Mõõtke täpselt 2.0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, aurustage veevannis kuivaks, lisage lahustumiseks metanool, lahjendage 10 ml mõõtekolvis mahuni, loksutage korralikult ja filtreerige saamiseks 0,22 μm mikropoorset membraani.

2.4 Lineaarse seose uurimine

Mõõtke täpselt {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 ml võrdluslahust punktis 2.3.1, asetage see 5 ml mõõtekolbi, lisage metanool, et lahus oleks kuni märgini, ja loksutage korralikult, et saada gradiendi kontsentratsiooniks 44.{17} }, 89.{19}}. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 võrdluslahus, filtreeritud läbi 0,22 μm mikropoorse membraani. Mõõtke vastavalt punkti 2.2 kromatograafilistele tingimustele ja registreerige piigi pindala. Tehke lineaarne regressioon, kasutades võrdlusaine massikontsentratsiooni abstsissil (X, ug·mL-1) ja piigi pindala ordinaatteljena (Y), ning saadakse regressioonivõrrand: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Tulemused näitavad, et ehhinatseal on hea lineaarne seos kontsentratsioonivahemikus 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Täpsuskatse

Võtke 539.276 4 ug ·mL- 1 võrdluslahus, süstige ja mõõtke 6 korda pidevalt vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis 2.2 ning registreerige piigi pindala. Tulemused näitasid, et ehhinakosiidi piigi pindala RSD oli 1, 81%, mis viitab heale instrumendi täpsusele.

2.6 Stabiilsuskatse

Mõõtke täpselt 2.0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, aurustage veevannis kuivaks, lisage lahustumiseks metanool, lahjendage 10 ml mõõtekolbi, loksutage korralikult, filtreerige {{ 7}},22 μm mikropoorset membraani, järgige punktis 2.2 toodud kromatograafilisi tingimusi ja asetage vastavalt 0 ja 2 peale. , 4, 8, 12, 24 h süstimise mõõtmine, registreerige piigi pindala. Tulemused näitasid, et ehhinakosiidi piigi pindala RSD oli 1,16%, mis näitab, et katselahuse stabiilsus oli 24 tunni jooksul hea.

2.7 Korratavuse test

Mõõtke täpselt 2.0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti ja valmistage paralleelselt 6 katselahust vastavalt punktis 2.3.2 kirjeldatud meetodile. Süstige proovid mõõtmiseks vastavalt punktis 2.2 toodud kromatograafilistele tingimustele ja registreerige piigi pindala. Tulemused näitasid, et RSD of theehhinakosiidmassikontsentratsioon oli 1,28%, mis näitab meetodi head korratavust.

2.8 Proovi taastamise test

Mõõtke täpselt 9 portsjonit 1.0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, lisage 0,8, 1.0 ja 1,2 ml võrdluslahust (1,552 mg·mL{{11). }}) aurutage veevannis kuivaks, lisage lahustumiseks metanool ja viige 10 ml mõõtekolbi; Loksutage korralikult ja filtreerige läbi 0,22 μm mikropoorse membraani, et valmistada kõrge, keskmise ja madala kontsentratsiooniga katselahuseid. Valmistage igast kontsentratsioonist paralleelselt 3 koopiat. Mõõtke vastavalt punkti 2.2 kromatograafilistele tingimustele. Registreerige piigi pindala ja arvutage proovi saagis. Hinda. Tulemused on toodud tabelis 1.

2.9 Proovi sisalduse määramine

Mõõtke täpselt 3 portsjonit 20 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, aurustage veevannis kuivaks, lisage lahustumiseks metanool, lahjendage 10 ml mõõtekolbi, loksutage korralikult, filtreerige 0,22 μm mikropoorset membraani ja mõõta vastavalt kromatograafilistele tingimustele vastavalt punktile 2.2. Registreerige piigi pindala ja arvutage ehhiaatsia sisaldus. Tulemused on toodud tabelis 2.

Tabel 1 Ehhinakosiidi taastumiskatsete tulemused

Tabel 2 Ehhinakosiidi sisalduse määramise tulemused taime Cistanche herba vesiekstraktis