Cistanche polüsahhariidide mõju kopsuvähiraku A549 bioloogilisele käitumisele

Kokkuvõte: Eesmärk Uurida mõjuCistanche polüsahhariidkopsuvähiraku A549 bioloogilise käitumise kohta. Meetodid Kopsuvähirakud A549 jagati kontrollrühma,Cistanche polüsahhariid100, 200, 400 ng/ml rühm, si-NC rühm, si-LINC01410 rühm,Cistanche polüsahhariid400 ng/ml pluss pcDNA,Cistanche polüsahhariid400 ng/mL pluss pcDNA-LINC01410 rühm. A549 rakkude proliferatsioonikiirus tuvastati MTT meetodil, A549 rakkude kloonimisvõime tuvastati kolooniate moodustumise testiga ja 549 rakku tuvastati voolutsütomeetria abil.

Rakkude apoptoosi kiirus, A549 rakkude migratsiooni- ja invasioonivõime tuvastamiseks kasutati Transwelli meetodit ning LINC01410 mRNA ekspressiooni tuvastamiseks A549 rakkudes kasutati RT-qPCR meetodit.

Tulemused:Cistanche polüsahhariidvõib pärssida A549 rakkude proliferatsiooni, kolooniate moodustumist, migratsiooni ja invasioonivõimet, LINC01410 mRNA ekspressiooni (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistanche polüsahhariidA549 rakkude proliferatsiooni, apoptoosi, migratsiooni ja invasiooni kohta. Järeldus:Cistanche polüsahhariidvõib pärssida kopsuvähirakkude aktiivsust, kloonide moodustumist, migratsiooni ja invasioonivõimet ning soodustada rakkude apoptoosi, vähendades LINC01410 ekspressiooni.

Märksõnad:Cistanche polüsahhariid; kopsuvähi rakk A549; LINC01410; levik; apoptoos

Cistanche'i tasuta näidise hankimiseks klõpsake siin

Maksakahjustuste vähendamine

Kopsuvähk on pahaloomuline kasvaja, mille haigestumuse ja suremuse määr on minu riigis esimene. Kopsuvähi ravimeetodid hõlmavad immuniseerimist, kirurgiat ja keemiaravi [1].

Uuringud on näidanud, et traditsioonilisel hiina meditsiinil ja selle komponentidel on kopsuvähi ravis suured eelised ja need võivad parandada kopsuvähi efektiivsust [2-3].Cistancheon minu kodumaal väärtuslik ravimmaterjal ja selle põhikomponentide hulka kuuluvad fenetüülalkoholi üldglükosiidid, polüsahhariidid, iridoidid, alkaloidid ja lignaanid. Uuringud on leidnud, et kokkuCistanche'i fenüületüülglükosiididsaabvähendada maksakahjustusi H22 kasvajaga hiirtel ja pärssida kasvaja kasvu[4]. Cistanche toimeaine ergosterosiid võib pärssida tuumori kasvu ja kolorektaalse vähi rakkude proliferatsiooni karvutute hiirte ksenotransplantaadi mudelis ning indutseerida apoptoosi [5].

Cistanche polüsahhariididvõib pärssida Lewise kopsuvähi ja S180 sarkoomirakke, suurendades looduslike tapjarakkude ja interleukiin 2 (IL-2) aktiivsust.

Siiski on võimalikud funktsioonid, biogeneesi protsessid ja aluseks olevad mehhanismidCistanche polüsahhariididkopsuvähi puhul jääb ebaselgeks. Uuringud on näidanud, et lncRNA-d on kopsuvähi korral sageli dereguleeritud ja neil on oluline roll kopsuvähi esinemises, arengus ja ravis [7]. LINC01410 ekspresseerub tugevalt endomeetriumi vähi korral ja mõjutab endomeetriumi vähiga patsientide prognoosi [8]; LINC01410 üleekspressioon soodustab maovähi angiogeneesi ja metastaase, inhibeerides miR-532-5p [9]; Papillaarsed kilpnäärmevähirakud vohavad, migreeruvad ja tungivad sisse [10-11], samas kui LINC01410 roll kopsuvähi puhul on ebaselge. Selle katse eesmärk oli uurida selle mõjuCistanche polüsahhariididja LINC01410 kopsuvähirakkude pahaloomulise fenotüübi kohta ning kas LINC01410 osalesCistanche polüsahhariididkopsuvähirakkude pahaloomulise bioloogilise käitumise kohta, et anda alus edasistele uuringuteleCistanche polüsahhariidid.

Cistanche polüsahhariidid

Cistanche polüsahhariidide materjal vähiravi uuringus

Kopsuvähirakud A549 osteti Ameerika tüübikultuuride kollektsioonist (ATCC).Cistanche polüsahhariid(puhtus 98 protsenti või suurem, tootenumber D3281) osteti ettevõtteltWecistanche Bio-Tech Biotechnology Co., Ltd. Veise loote seerum osteti ettevõttelt Guangzhou Shuoheng Biotechnology Co., Ltd.;

RPMI-1640 sööde osteti ettevõttelt Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co., Ltd.; MTT komplekt osteti ettevõttelt Shanghai Meixuan Biotechnology Co., Ltd.; Transwelli kamber ja Matrigel osteti ettevõttelt Beijing Unicon Biotechnology Co., Ltd.; Apoptoosikomplekt osteti firmalt PromoCell, Germany Company; SYBRremix ExTaqTM komplekt osteti ettevõttelt Shanghai Shanran Biotechnology Co., Ltd.

2 Cistanche polüsahhariidide meetodit vähiravi uuringus

2.1 Rakukultuur ja rühmitamine

A549 rakke kultiveeriti RPMI-1640 söötmes, mis sisaldas 10% veise loote seerumit, 37-kraadises 5% CO2 inkubaatoris. Logaritmilise kasvufaasi rakke töödeldiCistanche polüsahhariidmassikontsentratsioonidel vastavalt 100, 200 ja 400 ng/mL ning registreeritakse kuiCistanche polüsahhariid100, 200 ja 400 ng/ml rühmad; A549 rakud, mida ei töödeldud Cistanche polüsahhariidiga, olid kontrollrühm. A549 rakud transfekteeriti vastavalt si-NC või si-LINC0141-ga, mida tähistati kui si-NC rühma, si-LINC01410 rühma; si-NC ja si-LINC01410 transfekteeriti A549 rakkudesse ja töödeldi 400 ng/mlCistanche polüsahhariid, tähistatud kuiCistanche polüsahhariid400 ng/ml pluss pcDNA rühm,Cistanche polüsahhariid400 ng/ml pluss pcDNA-LINC01410 rühm.

2.2 MTT meetodi tuvastamine

A549 rakkude proliferatsiooni kiirus A549 rakke töödeldiCistanche polüsahhariidmassikontsentratsioonidel vastavalt 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350 ja 400 ng/ml. Koguge igas rühmas A549 rakud ja asetage need 96-süvendiga plaadile, lisage igasse süvendisse 20 μL MTT-d, jätkake inkubaatoris kultiveerimist 4 tundi, visake supernatant ära, lisage igasse süvendisse 150 μL DMSO-d. ja tuvastada iga rakurühma valgus lainepikkusel 490 nm. Rakkude proliferatsiooni kiiruse arvutamiseks kasutati tiheduse (OD) väärtusi.

Cistanche kasvatamine

2.3 Kolooniate moodustumise test

A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 rakku) registreeriti.

2.4 Voolutsütomeetria tuvastamine

A549 rakkude apoptoosi määr Iga rühma A549 rakud koguti ja resuspendeeriti 100 μl fosfaatpuhverdatud soolalahuses (1 × 106 /mL) ning katseklaasi lisati 1 ml rakususpensiooni, 10 μL anneksiin V-FITC ja 5 μLPI. , valguse eest kaitstud. Pärast 30-minutilist inkubeerimist koguti rakud ja analüüsiti voolutsütomeetria abil.

apoptoos.

2.5 Tuvastamine Transwelli meetodil

A549 rakkude migratsiooni- ja invasioonivõime Iga rühma A549 rakususpensioonid (2 × 104/200 μL, seerumivaba sööde) jaotati ühtlaselt Transwelli kambri ülemisse kambrisse ja 500 μL RPMI{{ Alumisse kambrisse lisati 7}} söödet, mis sisaldas 10 protsenti FBS-i. Ülemises kambris olevad rakud eemaldati ja alumises kambris olevad rakud fikseeriti 4% paraformaldehüüdiga ja värviti 0,1% kristallvioletiga. Rakke vaadeldi valgusmikroskoobi all ja loendamiseks valiti juhuslikult 5 vaatevälja. Rakkude sissetungi katses kaeti Matrigel eelnevalt Transwelli kambri ülemisele kambrile ja ülejäänud sammud olid samad, mis migratsioonikatses.

2.6 RT-qPCR tuvastamine

LINC01410 mRNA ekspressioon A549 rakkudes Kogu RNA ekstraheeriti rakkudest, kasutades TRIzol reagenti, ja cDNA sünteesiti vastavalt pöördtranskriptsioonikomplekti juhistele. Reaktsioonisüsteemiks oli 2 μL pöördtranskriptsiooni produkti, 10 μL SYBR Green Mix, 0,5 μL päri- ja tagurpidi praimereid ja 7 μL steriilset vett. Reaktsioonitingimused olid 95 kraadi 30 sekundit, 60 kraadi 30 sekundit ja 72 kraadi 30 sekundit, kokku 40 tsüklit; LINC01410mRNA suhteline ekspressioon arvutati 2-ΔΔCT meetodil, kasutades sisemise võrdlusalusena GAPDH-d. Praimeri järjestused on LINC01410 päri-5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3', pöörd-5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA-3'; sisemine viide GAPDH edasi 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3', vastupidine 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'.

2.7 Statistiline analüüs

Töötlemiseks kasutati SPSS 20.0 tarkvara, mõõteandmed väljendati (x±s), kahe rühma võrdlemiseks kasutati sõltumatute valimite t testi, mitme grupi võrdlemiseks kasutati ühesuunalist dispersioonanalüüsi. rühmades ja rühmade paaripõhiseks võrdlemiseks kasutati LSD-t testi. P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

Cistanche ekstrakti pulber

3 tulemust Cistanche polüsahhariidide kohta vähiravi uuringus

3.1 MõjuCistanche polüsahhariidA549 rakkude proliferatsiooni ja apoptoosi kohta Võrreldes kontrollrühmaga on A549 rakkude proliferatsiooni kiirus igas annuserühmasCistanche polüsahhariidsuurenenud (P<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">

3.2 MõjuCistanche polüsahhariidA549 rakkude migratsiooni- ja invasioonivõime kohta Võrreldes kontrollrühmaga on A549 rakkude arv igas annuserühmasCistanche polüsahhariidvähenenud (P<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">

3.3 MõjuCistanche polüsahhariidLINC01410 mRNA ekspressiooni kohta A549 rakkudes Võrreldes kontrollrühmaga on LINC01410 mRNA ekspressioon A549 rakkudes igas annuserühmasCistanche polüsahhariidvähenes (P＜{0}},05) annusest sõltuval viisil.