Anastatica Hierochuntica etanool- ja vesiekstraktide antioksüdantne aktiivsus, fenoolprofiil ja nefroprotektiivne potentsiaal CCl{0}}indutseeritud nefrotoksilisuse vastu rottidel

Kontakt:ali.ma@wecistanche.com

Tariq I. Almundarij et al

Abstraktne:Kaff-e-Maryam (Anastatica hierochuntica L.) kasutatakse laialdaselt mitmesuguste terviseprobleemide raviks, eelkõige sünnituse hõlbustamiseks ja reproduktiivsüsteemiga seotud häirete leevendamiseks. Selle uuringu eesmärk oli hinnata A. hierofhantic etanoolse (KEE) ja vesilahuse (KAE) ekstraheerimine CCl4-indutseeris oksüdatiivse stressi ja nefrotoksilisuse rottidel, kasutades selleks biokeemilisi markereid.neeru-funktsioonidja antioksüdantide staatus ning neerukoe histopatoloogilised uuringud.A. hierofantikum sisaldas 67,49 mg GAE g-1 üldfenoolühendeid (TPC), 3,51 µg g-1 kogu karotenoide (TC) ning 49,78 ja 17,45 mg QE g-1 kogu flavonoide (TF) ja üldflavonoole (TFL), vastavalt. Tulemuseks oli DPPH-RSA TE g-1 128,71 µmol ja ABTS-RSA TE g-1 141,92 µmol. A. hierophhantic esitles ülemustantioksüdantne aktiivsusinhibeerides linoolhappe radikaale ja kelaatides oksüdeerivaid metalle. HPLC analüüs andis tulemuseks 9 ja 21 fenoolhapet ning 6 ja 2 flavonoidiKEEja KAE, mille ülekaalus on vastavalt sinapiinhape ja süringiinhape. Intramuskulaarne süstimine vit. E plus Se ja KEE, KAE ja KEE plus KAE suukaudne manustamine 250 mg kg-1 kehakaaluga taastas märkimisväärselt seerumi kreatiniini, uurea, K, üldvalgu ja albumiini taseme. Lisaks vähendasid nad malondialdehüüdi (MOD), taastasid redutseeritud glutatiooni (GSH) ja suurendasid superoksiidi dismutaasi (SOD) taset. KEE, KAE ja KEE pluss KAE kaitsesidneerudCCl4-nefrotoksilisusest, kuna need peamiselt nõrgendasid indutseeritud oksüdatiivset stressi. Summanefronosa oli KEE, KAE ja KEE pluss KAE puhul vastavalt umbes 83,27 protsenti, 97,62 protsenti ja 78,85 protsenti. Mõlemad vit. E pluss Se ja A. hierofantsed ekstraktid nõrgendasid histopatoloogilisi muutusi CCl4--ga töödeldud rottidel. Kokkuvõtteks võib öelda, et A. hierophantikul, eriti KAE-l, on potentsiaalne võime taastada oksüdatiivset stabiilsust ja parandadaneerudfunktsioon pärast CCl4äge neerukahjustusparem kui KEE. Seetõttu võib A. hierophantic olla kasulik raviaine ravimist põhjustatud nefrotoksilisuse ravis.

Märksõnad:Kaff-e-Maryam; polüfenoolid; bioaktiivsus; sekundaarsed metaboliidid;neeru markerid; antioksüdantsed ensüümid;neeru-düsfunktsioon

Cistanche NZ ennetab neeruhaigust, proovi saamiseks klõpsake siin

1. Sissejuhatus

Neeruhaiguson 9. peamine surmapõhjus, rohkem kui üks seitsmest, st 15 protsendil USA täiskasvanutest ehk 37 miljonil inimesel on hinnanguliseltkrooniline neeruhaigus(CKD) [1]. Märkimisväärselt on 2015. aastal registreeritud kroonilise neeruhaiguse kõige levinum põhjus suhkurtõbi, millele järgneb kõrge vererõhk ja glomerulonefriit [2]. Muud kroonilise neeruhaiguse põhjused on idiopaatilised (neeru ultraheliuuringul sageli seotud väikeste neerudega) [3]. Varem kasutati CCl4 metallide rasvaärastuse, keemilise puhastuse, kanga määrimise, tulekustutivedelike ja terade fumigatsiooni jaoks [4]. See põhjustab aktiivseid vabu radikaale tekitades tõsiseid häireid maksas, kopsudes ja munandites ning veres [5]. Vastavalt Ogeturki et al. [6], kokkupuude selle lahustiga põhjustab ägedat ja kroonilist neerukahjustust. Arvatakse, et vabade radikaalide poolt indutseeritud lipiidide peroksüdatsioon on rakumembraani kahjustuste üks peamisi põhjuseid, mis põhjustab mitmesuguseid patoloogilisi seisundeid [7]. Reaktiivsete radikaalide teket on seostatud CCl{10}}indutseeritud nefrotoksilisusega, mis on seotud lipiidide peroksüdatsiooni ja düsfunktsionaalsete valkude akumuleerumisega, mis põhjustab neerude vigastusi [8]. Viimastel aastatel on kasvanud hämmastavad traditsioonilised ravimtaimede kasutusviisid ning arvukad uuringud on kinnitanud nende terapeutilist rolli mitmete haiguste vastu [9–12].

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Proovi ettevalmistamine

Taime Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) proov osteti Saudi Araabia Qassimi piirkonna Buraydah linna kohalikult turult. Taimse materjali autentsust kinnitas Saudi Araabia Qassimi ülikooli põllumajandus- ja veterinaarmeditsiini kolledži taimekasvatuse ja -kaitse osakond. Proove pesti puhta kraaniveega, et eemaldada lehtedelt liiv ja mustus, seejärel õhu käes kuivatatud taimne materjal (28 ± 1 °C juures 48 tundi) pulbristati mehaaniliselt ja hoiti läbipaistmatutes polüetüleenkottides temperatuuril 4 ± 1 °C. kuni kasutamiseni.

2.2. Etanooli- ja vesiekstraktide valmistamine

Ligikaudu 200 g kuivatatud A. hierophanticut ekstraheeriti 300 ml 70% etanooliga Soxhleti ekstraktoris, et valmistada etanoolekstraktsioon (KEE). Ekstrakt kontsentreeriti rootoraurustis temperatuuril 40 °C, et aurustada järelejäänud lahusti, seejärel kuivatati N2 voolu all. Vesiekstraktsioon (KAE) viidi läbi nii, nagu on kirjeldanud Asuzu [23], väikeste muudatustega. Kakssada grammi kuivatatud taimset materjali lisati 500 ml kuumale steriilsele destilleeritud veele. Seejärel loksutati segu korralikult ja lasti seista 1 tund. Seejärel kinnitati kolvi külge püstjahuti ja kuumutati seejärel õrnalt keemiseni 10 minutit, jahutati, loksutati korralikult ja filtriti läbi Whatmani nr 1 filterpaberi. Filtraat aurustati rootoraurustis ja seejärel N2 voolu all kuivaks. Alkoholi- ja vesiekstraktid (250 mg ml-1) valmistati värskelt destilleeritud vees kasutamiseks suukaudseks manustamiseks.

2.3. Fenooli kogusisaldus (TPC)

A. hierophanticu TPC sisaldus määrati vastavalt kohandatud meetodile, mille on koostanud Bettaieb et al. [24]. Tulemusi võrreldi joonistatud gallushappe (GA) standardkõveraga vahemikus 50–500 mg ml-1 (R2=0.99) ja TPC arvutati gallushappe ekvivalendi (GAE) mg-des. ) ühe grammi A. hierophanticu kohta (mg GAE g−1 ).

2.4. Kokku karotenoidid (TC), kogu flavonoidid (TF) ja kogu flavonoolid (TFL)

Nagu teatasid Al-Qabba jt. [10], 5 g A. hierophanticut ekstraheeriti korduvalt atsetooni ja petrooleetri seguga (1:1, maht/maht). Karotenoidide (TC) üldsisaldus määrati spektrofotomeetriliselt 451 nm juures. TC väljendati mg g-1 DW. A. hierophanticu TF sisaldust analüüsiti vastavalt Mohdaly et al. kirjeldatud protokollile. [25]. TF sisaldus arvutati mg kvertsetiini ekvivalendina (QE) 100 g-1 DW kohta. Samas kontekstis viidi läbi TFL-i sisu [26]. Neelduvus 440 nm juures registreeriti ja TFL arvutati mg kvertsetiini ekvivalendina (QE) 100 g-1 DW kohta.

2.5. Antioksüdantide mahu määramine

DPPH radikaali eemaldamise test: RSA-d testiti spektrofotomeetriliselt sõltuvalt DPPH lillavärvilise lahuse pleegitamisest vastavalt Lu et al. muudetud tehnikale. [27]. Antiradikaalne võime esitati kui µmol Troloxi ekvivalente (TE) ühe grammi A. hierophantic (µmoL TE g-1) kohta. ABTS-i radikaale püüdev aktiivsus: A. hierophanticu RSA-d ABTS-i radikaalide vastu testiti Lu et al. kohandatud meetodiga. [27]. Tulemused väljendati kui µmoL TE g-1. -karoteen-linoolhappe pleegitamise test: A. hierophanticu antioksüdantide protsenti hinnati karoteeni pleegitamise järgi võrreldes butüülitud hüdroksüanisooliga (BHA), kasutades kohandatud spektrofotomeetrilist protokolli, mille on määranud Koleva jt. [28]; tulemused esitati BHA-ga seotud protsendina. A. hierophanticu kelaativ toime raua ioonidele: A. hierophanticu kelaatimise aktiivsust mõõdeti Zhao et al. [29]. Kui positiivse kontrollina kasutati etüleendiamiintetraäädikhapet (EDTA), mõõdeti metalli kelaativa toimena ferrosiin-Fe2 pluss kompleksi moodustumise inhibeerimise protsent ja esitati mg ml-1-na.

2.6. A. hierofhantic vesi- ja etanooliekstraktide polüfenoolühendite fraktsioneerimine

Polüfenoolide määramine etanool- ja vesiekstraktidest viidi läbi HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) HPLC-süsteemiga, mis oli varustatud automaatse proovivõtturi, kvaternaarpumba ja dioodirea detektoriga (Hewlett Packard 1050), kasutades kolonni (Altima). C18 150 × 4,6 mm, 5 µm) 5 mm Altima C18 kaitsekolonniga (Alltech, Nettetal, Saksamaa) vastavalt Goupy et al. [30]. Kasutatud lahustisüsteem oli A (äädikhape 2,5 protsenti), B (äädikhape 8 protsenti) ja C (atsetonitriil) gradient. Lahusti kaaskiirus oli 1 ml min-1 ja eraldamine viidi läbi temperatuuril 35 °C. Süstitud maht oli 10 µL. Fenoolseid ühendeid analüüsiti välise standardse kalibreerimisega ja väljendati mg g-1 DW ekvivalentidena (pluss)-katehiinina flavan{19}}oolide ja ekvivalentse kumariinina polaarsete aromaatsete ühendite jaoks. Samast proovist viiel fenoolide ekstraktsioonil määrati varieeruvus 8 protsenti. Kõik väärtused olid kahekordsete süstide keskmised. Polüfenoolid ja nende derivaadid identifitseeriti ja kvantifitseeriti lainepikkustel 280 ja 320 nm, flavonoidid aga 360 nm juures.

2.7. Eksperimentaalne disain

Kõik katsed kiitis heaks KSA QU (nr {{0}}) institutsionaalne loomaeetika komitee (IAEC), mida reguleerib loomkatsete kontrolli ja järelevalve eesmärk (CPCSEA). Riikliku bioeetikakomitee (NCBE) alluvuses olev komitee, elusolendite uurimise eetika seaduse rakendusmäärused. Käesolevas uuringus kasutati kokku 36 isast albiinorotti, kes jagati kuueks rühmaks, millest igaühes oli 6 looma ning neid raviti järgmiselt: I rühma (kontroll) süstiti intraperitoneaalselt (ip) oliiviõli (1.0 ml kg-1 kaks korda nädalas) ja 0,5 ml destilleeritud vett suu kaudu/päevas 21 järjestikuse päeva jooksul. II rühmale süstiti intraperitoneaalselt värske segu, mis sisaldas võrdsetes kogustes CCl4 ja oliiviõli (annuses 1.0 ml kg-1 kaks korda nädalas) ja 0,5 ml destilleeritud vett suukaudselt/ iga päev vastavalt Al-Qabba jt. [10] väikeste muudatustega. III rühm (referentsrühm) sai intramuskulaarse süsti (im) 50 mg kg-1 vit. Asuka jt andmetel on E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Prantsusmaa) kaks korda nädalas. [31] ja El-Desoky et al. [32] ja 0,5 ml destilleeritud vett suu kaudu/päevas. IV rühm toimis testina ja sai 250 mg kg-1 KEE-d suu kaudu / päevas koos CCl4 ip kaks korda nädalas. V rühm sai 250 mg kg-1 KAE suukaudselt / päevas koos CCl4 ip kaks korda nädalas. VI rühm sai 250 mg kg-1 KEE pluss KAE (1:1) suu kaudu/päevas koos CCl4-ga ip kaks korda nädalas. 24 tundi pärast viimast ravi (päev 21) tuimastati rotid seguga (alkohol:kloroform:eeter, 1:2:3). Kõigilt loomadelt koguti südame punktsioonist võetud vereproovid ja seerum eraldati tsentrifuugimisega kiirusel 4000 p/min 10 minutit ja hoiti temperatuuril –20 ◦C biokeemiliseks uurimiseks.

2.7.1. Neerude biokeemiline analüüs

Seerumi kreatiniini, uurea, üldvalgu ja albumiini kontsentratsioonid määrati automaatsete spektrofotomeetriliste meetoditega (BM/Hitachi autoanalyzer-911; Boehringer Mannheim, Saksamaa) vastavalt tootja juhistele. Kaaliumisisaldus määrati leekfotomeetria abil 766 nm juures.

2.7.2. Neerude antioksüdantide aktiivsuse hindamine

Pärast vereproovide võtmist surmati kõigi rühmade loomad; õigeneeruderaldati kiiresti ja loputati jääkülma soolalahusega. Seejärel kude lõigati, loputati külmas soolalahuses, kuivatati ja asetati kohe jääle. Elektrilise koehomogenisaatori abil kaaluti osa koest (10 g) ja homogeniseeriti 9 mahuosa jääkülma 0,05 M fosfaatpuhvriga pH väärtusel 7,4. Rakujäänused eemaldati tsentrifuugimisega kiirusel 12, 000 p/min (4 ◦C) 20 minutit, et koguda supernatandid malondialdehüüdi (MDA) kontsentratsiooni [33], superoksiiddismutaasi (SOD) aktiivsuse [34] määramiseks ja vähendada. glutatiooni (GSH) sisaldus [35]. Valgu kontsentratsioon sisseneerudhomogenaat määrati Bradfordi meetodil [36].

2.7.3. Nefroprotektsiooni protsent

Nefroprotektsiooni (F) protsendid vit. E pluss Se, KEE, KAE ja KEE pluss KAE arvutati iga biokeemilise parameetri jaoks eraldi vastavalt Wakchaure et al. [37] kasutades järgmist võrrandit:

kus T=ravirühma keskmine väärtus, C=positiivse kontrollrühma keskmine väärtus ja N= negatiivse kontrollrühma keskmine väärtus. Lisaks võrreldi kogu nefroprotektsiooni protsenti (TFP protsenti) vit. E plus Seas järgmine:

2.7.4. Histopatoloogilised uuringud

Lahkamise proovid koguti vasakultneeruderaldi rottide rühmadest ja fikseeriti 10% formaliini soolalahuses 24 tundi. Kraaniveega pesemisele järgnes dehüdratsioon alkoholi (metüül-, etüül- ja absoluutne etüül) seerialahjendustega. Proovid puhastati ksüleenis ja sisestati parafiini 24 tunniks temperatuuril 56 ◦C kuumaõhuahjus. Mesilaste parafiinvahast koeplokid valmistati kelgu mikrotoomi abil 4-mikroni paksusega lõikamiseks. Koelõigud koguti alusklaasidele, deparafineeriti ja värviti hematoksüliini ja eosiiniga korrapäraseks kontrollimiseks valguse elektrimikroskoobi all [38].

2.8. Statistiline analüüs

Tulemused on näidatud kui keskmine ± standardviga (SE). Keskmiste erinevuste olulisust erinevates rühmades uuriti ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Duncani test ja keskmiste p-väärtus anti tasemel p < 0,05="" [39].="">

3. Tulemused

3.1. A. hierophaticu fütokemikaalid ja antioksüdantide võime

Viidi läbi A. hierofantsete fütokemikaalide ja nendega seotud antioksüdantide aktiivsuse kvantitatiivne analüüs, kasutades DPPH ja ABTS radikaali püüdmist, -karoteen-linoolhappe pleegitamisaktiivsust ja kelaatimise võimet (CA). Nagu on selgelt näha tabelist 1, oli TPC sisaldus 67,49 mg GAE g-1. TC sisaldus oli 3,51 µg g-1. TF ja TL sisaldus olid vastavalt 49,78 ja 17,45 mg QE g-1. Lisaks kasutati antioksüdantide aktiivsuse progresseerumise mõõtmiseks DPPH-RSA ja ABTS-RSA. Tulemused näitasid DPPH-RSA ja ABTS-RSA puhul vastavalt 128,71 µmol TE g-1 ja 141,92 µmol TE g-1. Lisaks onantioksüdantne aktiivsusA. hierophanticu (AOA) on esitatud tabelis 1. Linoolhappe radikaalide inhibeerimise protsent arvutati BHA-ga võrreldes 45,74 protsenti, kasutades karotiini pleegitamise (-CB) testi. Lisaks näitas metalli kelaatimise aktiivsuse hindamine 42, 89 mg g-1, mis näib olevat võimeline segama Fe2 pluss-ferrosiini kompleksi moodustumist, mis näitab selle võimet kelaatida oksüdatsioonimetalle.

3.2. A. hierofantsete fenoolsete ühendite kvantifitseerimine

KEE ja KAE fenoolsete ühendite kvantitatiivne analüüs HPLC analüüsiga viidi läbi ja andmed on esitatud tabelis 2. A. hierophanticu KEE-st tuvastati tuvastatavates kogustes üheksa eraldatud fenoolhapet ja kuus flavonoidi. Kõige levinumad fenoolhapped olid hüdroksükaneelhapped, nagu sinaaphape (28,704 mg 100 g−1), millele järgnes kohvhape (6,621 mg 10{). {61}} g-1), rosmariinhape (2,884 mg 100 g-1), feruulhape (1,854 mg 100 g-1) ja kaneelhape (0,094 mg 100 g-1); ja hüdroksübensoehapped, nagu p-hüdroksübensoehape (3,440 mg 100 g-1), protokatehhhape (1,811 mg 100 g-1), vanillhape (3,326 mg 100 g-1) ja süstoolhape (1,083 mg 100 g-1) −1). Flavonoidid nagu müritsetiin (16,269 mg 100 g-1), D-katehiin (2,410 mg 100 g-1), kaempferool (0,434 mg 100 g-1), rutiin (0,539 mg 100 g-1), apigeniin{{56} }glükosiidi (0,192 mg 100 g-1) ja kvertsetiini (0,184 mg 100 g-1) tuvastati hindamatutes kogustes. Samuti määrati A. hierophanticu KAE fenoolsed ühendid ja andmed on esitatud tabelis 2. Süringiinhape registreeriti kõrgeima fenoolhappena 21 tuvastatud fenooli hulgas. Katehhool ja pürogallool olid vastavalt 2,526 ja 1,589 mg 100 g-1. Andmed

näitas, et mõningaid fenoolhappeid, nagu kofeiin-, katehhiin-, klorogeen-, epikatehiin-, e-vanilliin-, p-hüdroksübensoe- ja protokatehhhape, tuvastati mõõdukates kogustes 0.725, 0.256, { {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 ja 0.454 mg 100 g−1. Samas kontekstis kasutatakse väikeses koguses 3,4-5--etoksü-, 4--aminobensoe-, bensoe-, kaneeli-, kumariini-, ellag-, feruli-, galli-, isoferuli-, -kumaar-, p-kumaarhapet. ja salitsüülhape kvantifitseeriti pärast tuvastamist. Epikatehhiin ja D-katehhiin flavonoididena kvantifitseeriti ka A. hierophanticu KAE-s.

3.3. Seerumi kreatiniini, uurea, K, üldvalgu ja albumiini tase

CCl4 süstimine tõstis oluliselt seerumi kreatiniini, uurea ja k taset GII rottidel võrreldes kontrollrottidega (GI). Vastupidiselt vähenes CCl4-ravi saanud rottidel üldvalgu ja albumiini tase oluliselt (tabel 3). Vit. E pluss Se ja A. hierofantilised ekstraktid (G III, IV, V ja VI) vähendasid oluliselt kreatiniini ja uurea sisalduse muutusi, mis olid põhjustatud CCl4 süstimisest, samas kui need suurendasid albumiini ja üldvalkude sisaldust GI-s normaalsete väärtuste lähedale (tabel 3 ). Seerumi k tase tõusis märkimisväärselt CCl{5}}ravitud rottidel (GII) võrreldes GI-ga (tabel 3). Süstimine vit. E pluss ja A. hierofhantic alkohoolsete ja vesiekstraktide (G IV, V ja VI) manustamine parandasid samuti positiivselt k taset võrreldes GI-ga (tabel 3).

3.4. Neerude antioksüdantide biomarkerid

Nagu on näidatud tabelis 4, vähendas CCl4 manustamine oluliselt SOD ja GSH taset ning suurendas MDA taset GII-sneerudhomogeniseerida kude. Kui aga võrrelda GI-ga, said rotid nii vit. E pluss Se ja A. hierofantsete ekstraktide (GIII, VI, V ja VI) puhul ilmnes antioksüdantsete ensüümide SOD ja GSH aktiivsuse oluline paranemine, samuti MDA taseme langus (tabel 4). A. hierofhantic alkohoolne ekstrakt (GIV) ületas A. hierofhantic vesiekstrakti (GV) ja kombineeris A. hierofhantic alkohoolseid ja vesiseid ekstrakte antioksüdantide taseme nõrgendamisel ning autooksüdatsiooniprotsessiga võitlemine andis tulemuseks madala MDA taseme võrreldes GI-ga.

3.5. Nefroprotektsiooni protsent

Nefroprotektsiooni protsent (negatiivse kontrolli (GI) ja positiivse (GII) rühma suhtes).neerudfunktsioonid nagu kreatiniin, uurea, k, TP ja albumiin, samuti antioksüdantne aktiivsus neeruhomogenaadis (MDA, SOD, GSH) on illustreeritud tabelis 5. Nefrokaitse protsent registreeris kõrgeima väärtuse kreatiniini, uurea, k GIII-s, TP ja albumiin GV-s, MDA ja GSH GIII-s ja SOD GV-s (tabel 5). Nefroprotektsiooni koguprotsent võrreldes vit. E plus Se ravis registreeriti maksimaalsed tasemed KAE-ga ravitud rühmas (GV, 97,62 protsenti), seejärel KEE (GIV, 83,27 protsenti) ja seejärel KEE pluss KAE (GVI, 78,85 protsenti), nagu on näidatud tabelis 5.

3.6. A. hierofantiliste ekstraktide mõju neerude ajalooarhitektuurile

Biokeemiliste uuringute tulemusi toetas histopatoloogiline uuring. Tabel 6 ja joonis 1 näitavad histoloogiliste muutuste määra rottide alusstruktuurisneeruderinevates katserühmades, mida töödeldi A. hierophantsete ekstraktidega. Praeguses uurimises onneerudkontrollrühmast (GI) leiti olevat normaalne histoloogiline struktuur (joonis 1 (I.1)). CCl4--ga ravitud rottide (GII) histoarhitektuur näitas põletikuliste rakkude fokaalset infiltratsiooni (pluss pluss) tuubulite vahel ajukoores, veresoonte ummistumist (pluss ) tuubulite vahel (joonis 1 (II.2)). ), mitmed eosinofiilsed kipsised (pluss pluss) moodustised mõne tuubuli luumenis ja fokaalne hemorraagia (pluss pluss) degenereerunud tuubulite vahel kortikomedullaarses osas (joonis 1 (II.3), tabel 6). GIII-s süstitakse vit. E plus Se, A. hierophanticu alkoholiekstrakti (GIV), A. hierophanticu (GV) vesiekstrakti ja A. hierophantic ekstraktide (GVI) kombinatsiooni manustamine nõrgendas CCl4 tsütotoksilist toimet ja registreeris kerge (pluss) kuni mõõdukas (pluss) ummikud veresoontes ajukoore tuubulite hulgas (joonis 1(III.4–VI.8), tabel 6) koos hästiarenenud Bowmani kapsliga, mille glomerulused ja keerdunud torukesed on laienenud. Lisaks registreeris A. hierophanticu (GV) vesiekstrakt põletikuliste rakkude fokaalse infiltratsiooni (pluss pluss) kortikomedullaarses osas (joonis 1 (V.7), tabel 6).

4. Arutelu

Fütokemikaalid on enamasti tõhusad vabade radikaalide püüdjad ja neid peetakse taimepõhisteks parimateks antioksüdantideks. Arvatakse, et polüfenoolsetel ainetel on inimestel kantserogeensed ja mutageensed omadused [40]. Väärtuslik TPC sisaldus A. hierophanticus oli veidi kõrgem kui Mohamedi jt. [21] 51,97 mg GAE g × 1 A. hierofhantic herb ja AlGamdi et al. [41], kes leidis A. hierofantilistes seemnetes 4 mmol L × 1 GAE. Hiljuti avaldasid Zin et al. [42] osutasid tanniinide olemasolule A. hierophanticus kui bioaktiivses ühendis ja soovitasid selle bioaktiivsust, mis vajas põhjalikku uurimist. Karoteeni sisaldus karotenoidide koguarvus oli 2,27 µg g × 1, nagu mainisid Mohamed et al. [21] ja isegi praegused tulemused näitasid karotenoidide üldsisaldusena 3,51 µg g × 1 . Mohamed et al. [21]. Esineb bioloogiliselt aktiivseid komponente, nagu fenoolsed ühendidantioksüdantne aktiivsuslipiidide oksüdatsiooni ahelreaktsioonide lagunemisena, andes vesinikku aktiivsetele vabadele radikaalidele. Seda fenoolide eemaldamispotentsiaali radikaalide inhibeerimiseks selgitati nende fenoolsete hüdroksüülrühmadega [8, 10, 22]. Seda fenoolhapet on kirjeldatud kui tõhusat antioksüdantset komponenti, sealhulgas vesinikperoksiidi, hüdroksüülradikaali ja superoksiidi aniooni [43]. A. hierofantne metallide kelaatimise aktiivsus näib olevat võimeline segama "Fe2 pluss-ferrosiini" kompleksi ehitust, mis viitab selle võimele püüda "raud" ioone enne "ferrosiini". Positiivset seost nende fenoolsete ühendite sisalduse suurenemise vahel näitab otseselt nende antioksüdantne võime [42]. Andjelkovi´c et al. [44] tegi kindlaks paljude fenoolhapete aktiivsuse metallidega komplekside moodustamisel. Väärtuslik TPC ja asjakohane antioksüdantne aktiivsus, kasutades erinevaid mõõtmismeetodeid, annavad selge plaadi ja kinnitavad A. hierophanticu bioaktiivsust ravimtaimena toidus või joogis.

Tõhusad antioksüdandid, sealhulgas vesinikperoksiid, hüdroksüülradikaal ja superoksiidi anioon [43,45,47]. HPLC abil tuvastatud ja kvantifitseeritud ühendid A. hierophanticu KAE-s olid suuremad kui KEE-s tuvastatud ühendid, kuid A. hierophanticu KEE-s tuvastatud ühendeid esitati suuremates kogustes [22]. Tulemused näitavad, et tarbiv A. hierophantic võib esitada palju komponente nii polaarses kui ka mittepolaarses vormis. Neid tulemusi esitavad sarnaselt AlGamdi jt. [41] kuna nad tuvastasid ja kvantifitseerisid A. hirerochuntica seemnetes 20 polüfenoolühendit. Ekstrakt sisaldas klorogeenhappeid ja hüdroksübensoehappeid, kuid põhikomponendid olid flavoon-C-glükosiidid, C-diglükosiidid, O-glükosiidid ja O-glükosiid-C-glükosiidid, mis esinesid valdavalt luteoliini konjugaatidena. Lisaks eksponeeriti 14 A. hierophatic ekstrakti 20 ühendistantioksüdantne aktiivsuskasutades HPLC-on-line antioksüdantide tuvastamise süsteemi [41]. Huvitaval kombel kinnitasid praegused andmed, et A. hierophantic on rikas fütokeemiliste ühendite poolest ja on hea looduslike antioksüdantide allikas, millel on võimalik tervisele kasu, nagu on seemnete puhul varem vähe esile tõstetud [41]. Seetõttu on terve taime pulbrist valmistatud tee traditsiooniline tarbimisviis; andmed illustreerisid uusi tuvastatud bioaktiivseid ühendeid A. hirerochuntica KEE-s ja KAE-s, mis erinesid AlGamdi et al. [41]

Paljudes uuringutes on CCl4-indutseeritud nefrotoksilisust kasutatud mudelsüsteemina taimeekstraktide/ravimite nefroprotektiivse toime testimiseks [48,49]. Käesolevas uuringus vaadeldi A. hierofhantic ekstraktide mõju CCl4-indutseeritudneerudkahjustusi, samuti selle nefrokaitset ja antioksüdantset potentsiaali rottidel. Käesolevas uuringus suurendas CCl4-ravi (GII) rühm oluliselt kreatiniini, uurea ja k taset ning vähendas valgu ja albumiini üldkontsentratsiooni võrreldes GI-ga. Selle põhjuseks võib olla asjaolu, et CCl4 mürgistus on vabade radikaalide tootmise peamine allikas paljudes elundites, sealhulgas maksas, neerudes, kopsudes, ajus ja veres [50]. Samuti on täheldatud, et pärast CCl4 süstimist rottidele jaotub CCl4 kontsentratsioon neerudes ühtlasemalt kui maksas [51], kunaneerudon kõrge afiinsusega CCl4 suhtes ja sisaldab tsütokroom P450, peamiselt ajukoores. Kõige tavalisemad CCl4 vabad radikaalid on triklorometüülradikaal (CCl3• ) ja triklorometüülperoksüülradikaal (CCl3O2• ) [52]. Need radikaalid kinnituvad intratsellulaarse valgu, rakumembraani lipiidide ja DNA külge, põhjustades valkude denaturatsiooni, lipiidide peroksüdatsiooni ja oksüdatiivset DNA kahjustust, mis põhjustab rakusurma [53]. Seevastu CCl4-rottide ravi vit. E plus Se (GIII) ja A. hierofantilised ekstraktid (GVI: VI) vähendasid tõhusalt kreatiniini ja uurea taseme tõusu, samuti suurendasid seerumi albumiini ja üldvalkude taset, et olla väga lähedal nende tasemele GI-s. Selle põhjuseks võivad olla A. hierofantiliste ekstraktide antioksüdantsed omadused ja rikkalik fenoolisisaldus ning vit. E pluss Se, mis eemaldab vabad radikaalid, pärssides seeläbi neerukahjustusi. Fütokemikaalid on kõige tõhusamad vabade radikaalide püüdjad ja neid peetakse parimateks taimede antioksüdantideks [54]. Kõige levinumad fenoolsed ühendid olid KEE-s üheksa tuvastatud fenoolühendi hulgas hüdroksükaneelhapped, näiteks sinaphape, samas kui süringiinhape oli KAE 21 tuvastatud fenoolhappe hulgas kõrgeim fenoolhape. HPLC analüüsi abil tuvastati kuus flavonoidi KEE-s ja kaks KAE-s [55]. Lisaks on antioksüdandina vit. Arvatakse, et E kaitseb kudesid reaktiivsete hapniku metaboliitide põhjustatud kahjustuste eest. Seleeni peetakse ka inimeste tervise jaoks oluliseks mineraalaineks, mis kaitseb rakke vabade radikaalide kahjuliku mõju eest [22].

Käesolevas uuringus vähendas CCl4 manustamine märkimisväärselt GSH-d ja SOD-d ning suurendas MDA tasetneerudhomogeneerub GI suhtes. Vit. E plus Se ja A. hierofhantic ekstraktid leevendasid CCl4 erinevaid toimeid, taastades antioksüdantide, nagu SOD ja GSH, muutunud aktiivsuse ning võivad deaktiveerida MDA tootmisprotsessi, nagu hiljuti teatati [15,21,40,41]. . GSH on mitteensümaatiline antioksüdant, mida leidub kõigis imetajarakkudes. Oma oksüdeeritud vormiga GSSG toimib GSH paljude detoksifitseerivate ensüümide (GPx, GST jt) kofaktorina oksüdatiivse stressi vastu ja säilitab rakkude redoks-tasakaalu [47]. See leid järgib Khani ja Siddique'i [56] ning Makni et al. [57], kes teatasid, et CCl4 vähendas GSH taset roti neerudes. Ravi vit. E plus Se ja A. hierofhantic ekstraktid näitasid kaitset GSH taseme languse eest, mille käivitas CCl4. Samas kontekstis katalüüsib SOD kahe superoksiidi aniooni (*O2) molekuli dismutatsiooni vesinikperoksiidiks (H2O2) ja molekulaarseks hapnikuks (O2), muutes potentsiaalselt kahjuliku superoksiidi aniooni vähem ohtlikuks [58, 59]. CCl4 mürgistus muudab geeniekspressiooni taset, vähendades neerude SOD-d [60]. SOD aktiivsuse vähenemine on rakukahjustuse tundlik indeks. Meie testitud A. hierophatic ekstraktid leevendasid neerutoksilisust, vähendades SOD taset. See osaleb erinevates ensümaatilistes protsessides, et vähendada võõrutusreaktsioonide kontsentratsiooni [61]. MDA on lipiidide peroksüdatsiooni esimene produkt ja üks olulisi oksüdatiivse stressi markereid. A. hierofantsed ekstraktid vähendasid MDA taseme tõusu ja taastasid CCl{20}}töödeldud roti neerudes antioksüdantide koguvõimsuse. Need kaitsvad toimed võivad olla tingitud A. hierophatic ekstraktide tugevast antioksüdatiivsest toimest [15,21,40,41]. Need tulemused viitavad ka sellele, et A. hierofhantic ekstraktid võivad nõrgendada oksüdatiivset stressi, vähendades lipiidperoksiidi taset CCl4-eksponeeritud roti neerudes ja hoides ära neerukahjustusi. Need tulemused langesid kokku Zn-i antioksüdatiivse toimega CCl4-indutseeritud ägeda nefrotoksilisuse suhtes [62,63].

A. hirerochuntica ekstraktid näitasid väärtuslikku nefroprotektsioonivõimetneerudfunktsioonitestid (kreatiniin, uurea, K, TP ja albumiin) ja neerud homogeneerivad antioksüdantide aktiivsust (GSH, SOD, MDA) vastavalt GIV-s, V-s ja IV-s. Nefroprotektsiooni koguprotsent võrreldes vit. E plus Se ravis registreeriti maksimaalsed tasemed KAE-ga ravitud rühmas (GV, 97,62 protsenti), seejärel KEE (GIV, 83,27 protsenti) ja seejärel KEE pluss KAE (GVI, 78,85 protsenti) kahanevas järjekorras. Selle põhjuseks võivad olla erinevused A. hirerochuntica ekstraktide fenooli- ja antioksüdantide sisalduse kvantiteedis ja kvaliteedis, mis on seotud antioksüdantse võimega [15,19,22,40,42].

Histopatoloogilised leiud aastalneerudon kooskõlas uuritud katserühmade biokeemiliste hinnangutega. CCl4 manustamine (GII) põhjustas glomerulaarse ja tubulaarse kahjustuse koos vasokongesiooniga neerudes. Dogukan et al. [64] avastasid vastusena pikaajalisele CCl4-ravile roti neerukoes sarnase histoloogilise mustri. Samuti leitakse, et histoloogilised muutused on põhjustatud nefronite funktsionaalsest ülekoormusest, mis põhjustab neerufunktsiooni häireid [65] ja/või on tingitud koe hävimisest, mis on põhjustatud vabade radikaalide tekkest CCl4 metabolismi kaudu [56, 66]. . Vit. Märkimisväärsed olid CCl4 neere hävitava toimega E plus Se ja A. hierofantne ekstrakt. See võib olla tingitud sellest, et vit. E pluss Se (tugeva antioksüdandina) toimib CCl4 poolt indutseeritud ROS-ile [67]. A. hierofantilised ekstraktid pärsivad CCl4-indutseeritud ägedat nefrotoksilisust tänu A. hirerochuntica ekstraktides sisalduvate fenoolsete ühendite antioksüdatiivsele rollile ja vabu radikaale püüdvatele omadustele [22]. Meie tulemused on kooskõlas teiste teadlaste tulemustega, kes on näidanud, et erinevatel taimsetel derivaatidel on farmakoloogiline toime, kõrvaldades CCl4 kuritarvitamise ja normaliseerides [6].

5. Kokkuvõtted

Selle uuringu tulemused näitasid selgelt, et A. hierofhantic taim on rikas polaarsete ja mittepolaarsete fenoolsete ühendite poolest, millel on suurepärane antioksüdantne võime, mis on otseselt seotud fütokeemilise sisaldusega. A. hierofantne (eriti vesiekstrakt) kaitseb rotte CCl4-indutseeritud oksüdatiivse stressi ja ägedaneerudvigastus, mida tõendab MDA taseme märkimisväärne langus ning GSH ja SOD aktiivsuse suurenemine, samuti biokeemiliste ja histoloogiliste muutuste peatumine neerudes. Kaitsetõhusus võib tuleneda A. hierofantilistes ekstraktides sisalduvate fenoolsete ühendite antioksüdantsetest ja vabu radikaale püüdvatest omadustest. Need omadused aitavad selgitada taime meditsiinilist efektiivsust taimse ravimina. A. hierophanticu aktiivsete põhimõtete täielikuks kirjeldamiseks on vaja rohkem uuringuid ja selle uuringu eesmärk on stimuleerida põhjalikumaid seotud uuringuid, et pakkuda piisavalt andmeid ja soovitusi selle mehhanismide ja ohutute annuste määratlemiseks.

Autori kaastööd:Kontseptualiseerimine, TIA, YMA ja HB; metoodika, uurimine, HB ja HAA-R.; andmete kureerimine, TIA ja YMA; kirjutamine – algse mustandi ettevalmistamine, läbivaatamine ja toimetamine; HB ja HAA-R. Kõik autorid on käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud.

Rahastamine:Teadlased soovivad tänada Qassimi ülikooli teadusuuringute dekaanitust selle projekti avaldamise rahastamise eest.

Andmete kättesaadavuse avaldus:Selles uuringus esitatud andmed on vastava autori nõudmisel kättesaadavad.

LühendidABTS:2,2'-asino-bis(3-etüülbenseentiasoliin-6-sulfoonhape); AOA:antioksüdantne aktiivsus; BHA: butüülitud hüdroksüanisool; BHA: butüülitud hüdroksüanisool; DPPH: 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasiin; DW: kuivkaal; GA: gallushape; GAE: gallushappe ekvivalent; GSH: redutseeritud glutatioon; HPLC-DAD: kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia dioodide massiivi tuvastamine; KAE: A. hierofantne vesiekstrakt; KEE: A. hierofantne etanooliekstrakt; MDA: malonaldehüüd; QE: kvertsetiini ekvivalent; RAA: suhteline antioksüdantne aktiivsus; ROS: reaktiivsed hapniku liigid; RSA: radikaalide eemaldamise aktiivsus; Se: seleen; SE: standardviga; SOD: superoksiiddismutaas; TC: karotenoidid kokku; TC: karotenoidid kokku; TF: kokku flavonoidid; TE: Troloxi ekvivalendid; TFL: flavonoolid kokku; TPC: fenoolsete ühendite üldsisaldus.

References

1. Statistika, KD krooniline neeruhaigus Ameerika Ühendriikides. 2021. Internetis saadaval:(kasutatud 20. juulil 2021).

2. Ku, E.; Glidden, DV; Johansen, KL; Sarnak, M.; Tighiouart, H.; Grimes, B.; Hsu, CY Seos range vererõhu kontrolli vahel kroonilise neeruhaiguse ajal ja madalama suremuse vahel pärast lõppstaadiumis neeruhaiguse algust. Kidney Int. 2015, 87, 1055–1060.

3. Tumlin, JA; Madaio, parlamendiliige; Hennigar, R. Idiopaatiline IgA nefropaatia: patogenees, histopatoloogia ja ravivõimalused. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 2007, 2, 1054–1061.

4. Olah, G.; Reddy, asepresident; Prakash, GS; Reaktsioonid, FC Kirk-Othmeri keemiatehnoloogia entsüklopeedia. Kontaktläätsed 1978, 720–742.

5. Ozturk, F.; Ucar, M.; Ozturk, IC; Vardi, N.; Batcioglu, K. Süsiniktetrakloriidist põhjustatud nefrotoksilisus ja betaiini kaitsev toime Sprague-Dawley rottidel. Urology 2003, 62, 353–356.

6. Ogeturk, M.; Kus, I.; Colakoglu, N.; Zararsiz, I.; Ilhan, N.; Sarsilmaz, M. Kofeiinhappe fenetüülester kaitseb neere süsiniktetrakloriidi toksilisuse eest rottidel. J. Ethnopharmacol. 2005, 97, 273–280.

7. Slater, TF Vabade radikaalide mehhanismid koekahjustuses. Rakkude funktsioonide ja haiguste korral; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., toim.; Springer: Boston, MA, USA, 1988; lk 209–218.

8. Khan, MR; Rizvi, W.; Khan, GN; Khan, RA; Shaheen, S. Süsiniktetrakloriidist põhjustatud nefrotoksilisus rottidel: Digerati muricata kaitsev roll. J. Ethnopharmacol. 2009, 122, 91–99.

9. Afsar, T.; Khan, MR; Razak, S.; Ullah, S.; Mirza, B. Acacia hydaspica R. Parkeri palavikuvastane, põletikuvastane ja analgeetiline toime ja selle fütokeemiline analüüs. BMC täiendus. Altern. Med. 2015, 15, 1–12.

10. Al-Qabba, MM; El-Mowafy, MA; Althwab, SA; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. Chenopodium quinoa võrsete fenoolne profiil, antioksüdantne aktiivsus ja parandav toime CCl4 indutseeritud oksüdatiivse stressi vastu rottidel. Toitained 2020, 12, 2904.

11. Al Zhrani, MM; Althwab, SA; Aljutaily, T.; Alfheeaid, HA; Ashish, IS; Barakat, H. Moringapõhiste jookide kaitsev toime hüperlipideemia ja hüperglükeemia vastu II tüüpi diabeedist põhjustatud rottidel. Food Res. 2021, 5, 279–289.

12. Khalifa, I.; Navaz, A.; Sobhy, R.; Althwab, SA; Barakat, H. Polüatsüülitud antotsüaniinid ühenduvad konstruktiivselt 2019-nCoV 3CLpro katalüütiliste diaadijääkidega kui monomeersed antotsüaniinid: struktuurse seose aktiivsuse uuring 10 antotsüaniiniga, kasutades in-silico lähenemisviise. J. Mol. Graafik. Mudel. 2020, 100, 107690.

13. Yusof, J.; Mahdy, ZA; Noor, RM Täiendava ja alternatiivse meditsiini kasutamine raseduse ajal ja selle mõju sünnitusabi tulemustele. Täiendage. Seal. Clin. Harjuta. 2016, 25, 155–163.

14. Salah, SH; Abdou, HS; Abd El-Azeem, A.; Abdel-Rahim, E. Mõnede ravimtaimede kui hüpoglükeemiliste ainete antioksüdatiivne toime kromosoomaberratsioonile ja diabeedistressist põhjustatud ebanormaalsele nukleiinhapete metabolismile isastel täiskasvanud albiinorottidel. J. Diabeet Mellit. 2011, 1, 6–14.

15. Daur, I. Ravimtaime Kaff Maryam (Anastatica hierochuntica L.) keemilised omadused ja seos rahvameditsiini kasutamisega. Afr. J. Microbiol. Res. 2012, 6, 5048–5051.