Tõhus meetod neerufibroosi raviks
Mar 17, 2022
lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com
Ⅰ osa: endoplasmaatiline retiikulumi valk TXNDC5 soodustab neerufibroosi, tugevdades neerufibroblastides TGF-signaali
Yen-Ting Chen, Pei-Yu Jhao jt.
Sissejuhatus
Neerufibroos, mida iseloomustab tubulointerstitsiaalnefibroosja glomerulaarskleroos, on enamiku, kui mitte kõigi, tüüpide tavaline patoloogiline ilmingkroonilineneerudhaigused(CKD)(1). Edenemineneeru-fibrooskroonilise neeruhaigusega patsientidel põhjustab see järkjärgulist kaotustneerudfunktsiooni, mille tagajärjeks võib olla lõppstaadiumis neeruhaigus (ESRD), mis vajab dialüüsi võineerudsiirdamine (2). Kuigi on näidatud, et mitmed molekulaarsed determinandid ja rajad aitavad protsessi kaasaneerufibroos, transformeerivat kasvufaktor-beetat (TGF-) peetakse üldiselt neerufibrogeneesi peamiseks regulaatoriks (3). Pärast vigastustneerud, kahjustatud tubulaarsed epiteelirakud (TEC) peatatakse G2/M faasis ja eritavad suures koguses TGF- , käivitades külgnevate neerufibroblastide aktivatsiooni ja transformatsiooni müofibroblastideks (4-6). Aktiveeritud müofibroblastid, mida iseloomustab a-silelihase aktiini (SMA) ekspressioon, on väga proliferatiivsed ja toodavad ekstratsellulaarsete maatriksite (ECM) valke nagu fibrillaarne kollageen, elastiin, fibronektiin ja CCN2 (üldtuntud kui sidekoe kasvufaktor, CTGF)(7,8). Neerukahjustuse varases staadiumisfibroosalgatati adaptiivse ja isepiiratud füsioloogilise reaktsioonina, mis aitab kudesid parandada ja säilitada struktuurset terviklikkust (9). Kuid pärast kroonilist korduvat neerukahjustust jätkub müofibroblastide aktivatsioon ja proliferatsioon, mille tulemuseks on ülemäärane ECM-i tootmine ja kuhjumine, mis viib funktsionaalse neeruparenhüümi kadumiseni ja lõpuks neerupuudulikkuseni (1O, 11).
Klõpsake Cistanche para que sirve neeruhaiguse kohta
Vaatamata kaasaegse meditsiini edusammudele on vähesed kliinilised ravimeetodid osutunud tõhusaksneerufibroos. Näiteks on näidatud, et angiotensiini konverteeriva ensüümi inhibiitorid (AKE-d) ja angiotensiini retseptori blokaatorid (ARB-d) vähendavad proteinuuriat ja leevendavad.neeru-fibroosja aeglustada kroonilise neeruhaiguse progresseerumist (12,13). Teisest küljest on näidatud, et pentoksüfülliin, mittespetsiifiline fosfodiesteraasi inhibiitor, inhibeerib TGF- 1--indutseeritud ECM-i ja CCN2 ekspressiooni, põhjustades nõrgenenud tubulointerstitsiaalsetfibroos(14). ACEI-de ja ARB-de kasutamist piiravad aga nende hüpotensiivne toime ja võimalikud kõrvaltoimed, nagu hüperkaleemia. Lisaks ei saa ACE-de/ARB-d ega pentoksifülliinravi peatada haiguse progresseerumist.neeru-fibroosja CKD(15,16). Seetõttu on hädavajalik tuvastada uudsed vahendajad või rajad, mis on patogeneesi jaoks kriitilisedneeru-fibroostöötada välja tõhusad ravimid kroonilise neeruhaiguse vastukroonilised neeruhaigused).
Hiljuti tuvastasime südame kriitilise vahendajana tioredoksiini domeeni, mis sisaldab 5 (TXNDC5), ER-residenti, fibroblastidega rikastatud valku, millel on valgu disulfiidisomeraasi (PDI) ensüümi aktiivsus.fibroos(17). Näitasime, et liigne TXNDC5 soodustab südame arengutfibroosredoks-sõltuva südame fibroblastide aktiveerimise ja ECM-i tootmise kaudu. Txndc5 geneetiline deletsioon parandab südame töödfibroosja agonisti poolt indutseeritud kontraktiilne düsfunktsioon hiirtel (17). Tuginedes TXNDC5 täheldatud olulisele rollile müokardi fibrogeneesis, oletasime, et TXNDC5 võib samuti kriitiliselt kaasa aidata koe arengulefibroosmittekardiaalsetes organites, eritineerufibroos.
Käesolevas uuringus näitasime, et TXNDC5 oli kõrgelt reguleeritud nii inimese kui ka hiire fibrootilistes neerudes, eriti kollageeni sekreteerivates neerufibroblastides. Txndc5 globaalne kustutamine vähendas märkimisväärselt selle ulatustneeru-fibroosmitmes neerukahjustuse hiiremudelis. Mehhaaniliselt näitasime, et TGF- 1 poolt ATF6-sõltuva ER stressiraja kaudu indutseeritud liigne TXNDC5 suurendabneeru-fibroossoodustades neerufibroblastide aktivatsiooni/proliferatsiooni ja ECM tootmist I tüüpi TGF-retseptori (TGFBR1) translatsioonijärgse stabiliseerimise ja ülesreguleerimise kaudu. Oluline on see, et näitasime, et Txndc5 fibroblastispetsiifilise deletsiooni esilekutsumine parandas tõhusalt selle arengut ja progresseerumist.neerufibroospõhjustatud hiirte erinevat tüüpi vigastustest, mis viitab sellele, et TXNDC5 sihtimine võib olla uudne ja võimas ravimeetodneeru-fibroosja säilitadaneerudfunktsiooni.
Joonis 1. TXNDC5 oli märkimisväärselt ülesreguleeritud hiirte fibrootilistes neerudes ja kroonilise neeruhaigusega patsientide neeruproovides( kroonilised neeruhaigused).
(A) IHC värvimine (n=3) ja (B) immunoblotid (n=6) näitasid, et TXNDC5 valgu ekspressioon oli UUO või uIRI poolt indutseeritud hiire fibrootilistes neerudes ülesreguleeritud võrreldes kontralateraalsete neerudega (CL) . Skaalariba: 50 μm.
(C) Kvantitatiivne RT-PCR näitas, et Txndc5 transkript oli UUO ja uIRI poolt indutseeritud hiire fibrootilistes neerudes ülesreguleeritud (n=4–7).
(D) Kroonilise neeruhaigusega patsientide (GSE66494) inimese neeruproovide mikrokiibi andmete uuesti analüüs näitas, et TXNDC5, COL3A1 ja FN1 olid kroonilise neeruhaigusega patsientide neerukudedes oluliselt ülesreguleeritud (tervislik kontroll n=8, CKD n {{ 6}}). A–C puhul esindavad andmed 3 või enama sõltumatut katsekorda.
Kõikide paneelide andmed on esitatud kui keskmine ± SEM. *P < {0}}.05,="" **p="">< 0,01,="" ***p="">< 0,001="" 2-poolse="" t-testi="" (a–c)="" või="" manni-="" whitney="" test="">
Tulemused
TXNDC5 oli inimese ja hiire fibrootilistes neerudes oluliselt ülesreguleeritud. TXNDC5 võimaliku osaluse uurimiseks patogeneesisneerufibroos, määrasime esmalt selle valgu ekspressioonitasemed fibrootilistes hiire neerukudedes, mis olid põhjustatud ühepoolsest kusejuha obstruktsioonist (UUO), ühepoolsest isheemia-reperfusioonikahjustusest (uIRI) või foolhappe (FA) manustamisest. Immunohistokeemia uuringud näitasid TXNDC5 värvumise intensiivsuse märkimisväärset suurenemist neeruosades kõigist kolmest hiiremudelist.neeru-fibroos(Joonis 1A ja täiendav joonis 1A; selle artikliga on veebis saadaval lisamaterjal; https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). Immunoblotanalüüs ja kvantitatiivne pöördtranskriptsioon PCR (RT-PCR) näitasid ka TXNDC5 valgu (joonis 1B) ja transkripti (joonis 1C ja täiendav joonis 1B) ekspressioonitasemete olulist ülesreguleerimist fibrootilistes hiire neerudes. Kooskõlas nende tulemustega näitas kroonilise neeruhaigusega (GSE66494) (18) patsientide neerubiopsiaproovidest saadud mikrokiibi andmete uuesti analüüs, et TXNDC5 ekspressioonitasemed (2,24 korda, P<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">neerufibroosnagu COL3A1 ja FN, suurenesid oluliselt ka kroonilise neeruhaigusega patsientide neeruproovides võrreldes tervete kontrollide omadega (joonis 1D ja täiendav joonis 1C). Kokkuvõttes viitab TXNDC5 / Txndc5 ekspressiooni täheldatud ülesreguleerimine fibrootilistes inimese / hiire neerudes ja selle positiivne korrelatsioon fibrogeensete ECM-valgu geenidega TXNDC5 potentsiaalsele rollile patogeneesis.neerufibroos.
Joonis 2. TXNDC5 oli kõrgelt reguleeritud neeru fibroblastides, kuid mitte fibrootiliste neerude TEC-des, endoteelirakkudes ega podotsüütides.
(A ja C) TXNDC5 (punane) värvimine fibrootiliste neerude lõikudel, mis olid indutseeritud UUO poolt Col1a1-GFPTg hiirtel, näitasid, et TXNDC5 ekspresseeriti peamiselt kollageeni sekreteerivates neerufibroblastides (roheline) nii neerukoores kui medullas. (n=6). Rakkude tuumad värviti DAPI-ga (sinine). Skaalariba: 100 μm.
(B) IF värvimine TXNDC5-ga (roheline) UUO poolt indutseeritud fibrootiliste neerude lõigul Cdh16-Cre, NPHS2-Cre ja Tie2-Cre/ERT2 tdTomato hiirtel. Rakkude tuumad värviti DAPI-ga (sinine). Skaalariba: 100 μm.
(D) Sektordiagramm, mis illustreerib TXNDC5 pluss rakkude osakaalu erinevat tüüpi neerurakkudes UUO-indutseeritud fibrootilistes neerudes.
Andmed esindavad 3 või enamat sõltumatut eksperimentaalset kordust. Andmed C-s on esitatud kui keskmine ± SEM.
TXNDC5 oli fibrootilistes neerudes väga rikastatud kollageeni sekreteerivate neerufibroblastidega. Neeru fibrogeneesi protsessis on kaasatud mitut tüüpi neerurakke. Pärast neerukahjustusi näidati, et residendid (19) ja perivaskulaarsed (20) neerufibroblastid diferentseeruvad aktiivseteks müofibroblastideks ja põhjustavad ECM-i kuhjumist. Samuti teatati, et TEC-d ja endoteelirakud aitavad kaasa selle arenguleneerufibroosvastavalt epiteeli- ja endoteeli-mesenhümaalsele ülemineku kaudu (10, 21). Määrata rakutüübid, kus TXNDC5 ekspresseeriti neerude protsessisfibroos, mitu reporterhiireliini, mis võimaldavad neerufibroblastide fluorestsentsmärgistamist (Colla1-GFP', Collali võimendaja/promootori juhitud GFP, viide 22), TEC-id (Cdh16-Cre ROSA26- tdTomato), endoteelirakud (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato) ja podotsüüdid (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) allutati UUO, uIRI või FA-ravi esilekutsumiseksneerufibroos. Nende loomade neeruosade immunofluorestsents (IF) värvimine näitas, et TXNDC5 oli märkimisväärselt ülesreguleeritud ja kolokaliseerunud GFP-positiivsete, kollageeni sekreteerivate neerufibroblastidega UUO poolt (81 protsenti) indutseeritud fibrootilistes hiirte neerudes (joonis 2, A ja C). , uIRI (76,8 protsenti ) ja FA-ravi (73,4 protsenti) (täiendav joonis 2, A ja B). UUO-indutseeritud fibrootilistes neerudes ekspresseeriti TXNDC5 ainult juhuslikult TEC-des (5,94 protsenti), podotsüütides (0.63). protsenti ) ja endoteelirakke (2,05 protsenti) (joonis 2, B ja D). UUO-le allutatud hiire neerudest eraldatud fibroblastide voolutsütomeetriline analüüs näitas TXNDC5* neerufibroblastide märkimisväärset suurenemist, samuti TXNDC5 olulist ülesreguleerimist nendes rakkudes, võrreldes kontralateraalsete kontrollneerudega (täiendav joonis 2C). Täheldatud tugev TXNDC5 rikastumine fibrootilistes neerufibroblastides viitab sellele, et TXNDC5 võib kaasa aidataneerufibroosreguleerides nende kollageeni sekreteerivate fibrogeensete rakkude aktiivsust/käitumist.
TXNDC5 oli nii oluline kui ka piisav neerufibroblastide aktiveerimise, proliferatsiooni ja ECM-i tootmise esilekutsumiseks. Järgmisena määrasime TXNDC5 funktsionaalse rolli neerufibroblastides. Inimese primaarsed neerufibroblastid (HKF), mida stimuleeriti TGF- 1-ga (10 ng/mL), näitasid TXNDC5 valgu (joonis 3A) ja transkripti (joonis 3B) ekspressioonitaseme tugevat ülesreguleerimist, samuti fibroblastide aktivatsioonimarkeri periostiini ja ECM valgud (COL1Al, fibronektiin ja CCN2). TXNDC5 hävitamine shRNA-ga nõrgendas märkimisväärselt TGF{10}}-indutseeritud valgu/mRNA ülesreguleerimist periostiini ja mitme ECM-i valgu osas HKF-ides (joonis 3, A ja B). Lisaks suurendas TGF1-ravi HKF-de proliferatiivset aktiivsust, mis tühistati täielikult TXNDC5 knockdowniga (joonis 3D). Need tulemused viitavad sellele, et TXNDC5 on oluline TGF{16}}indutseeritud HKF-i aktiveerimiseks, proliferatsiooniks ja ECM-i tootmiseks. TXNDC5 üleekspressioon seevastu põhjustas periostiini, COL1A1 ja fibronektiini märgatava ülesreguleerimise (joonis 3C), samuti suurenenud proliferatiivse aktiivsuse (joonis 3E) HKF-des. Need tulemused näitavad ühiselt, et TGF- 1-st allavoolu asuv TXNDC5 on nii oluline kui ka piisav, et soodustada neerufibroblastide aktiveerimist, proliferatsiooni ja ECM-i tootmist.
Joonis 3. TXNDC5 nõrgestatud TGF- 1-indutseeritud HKF aktiveerimise ja ECM-i tootmise katkestamine; TXNDC5 üleekspressioon oli piisav HKF-i aktiveerimise ja ECM-i tootmise käivitamiseks.
(A) Fibroblastide aktivatsioonimarkeri (periostiini) ja ECM-valkude (COL1A1, fibronektiin ja CCN2) valgu ja (B) transkriptsiooni ekspressioonitasemed tõusid kontroll- (Scramble) HKF-ides pärast TGF- 1 (10 ng/mL) ravi. TXNDC5 pärssimine nõrgendas nende fibrogeensete markerite ülesreguleerimist, mille indutseeris TGF- 1 HKF-ides (n=5–10).
(C) TXNDC5 üleekspressioon oli piisav, et kutsuda esile fibroblastide aktivatsioonimarkeri (periostiin) ja ECM-valkude (COL1A1, fibronektiin) ülesreguleerimine HKF-ides (n=3–10).
(D) TGF- 1 (10 ng/mL) töötlemine suurendas HKF-de rakkude proliferatsiooni aktiivsust, mis tühistati TXNDC5 knockdowniga.
(E) TXNDC5 üleekspressioon suurendas HKF-de rakkude proliferatsiooni aktiivsust. In D ja E, n=10. Andmed esindavad 3 või enamat sõltumatut eksperimentaalset kordust.
Kõikide paneelide andmed on esitatud kui keskmine ± SEM. Kahe rühma erinevuste statistiline olulisus määrati 2-poolse t-testiga ja 3 või enama rühma puhul määrati see 1-viisi ANOVA abil, millele järgnesid Sidaki post hoc testid. *P < 0.05,="" **p="">< 0,01,="" ***p=""><>
Neeru eest kaitstud Txndc5 globaalne kustutamine b. Määrata kindlaks TXNDC5 nõue selle väljatöötamiselneerufibroosin vivo allutati WT ja Tndc5-/hiirtele UUO, uIRI ja FA ravi. Picrosirius red ja Massoni trikroomne värvumine neerulõikudel näitas ulatuslikkuneeru-fibroosWT hiirtel pärast UUO (joonis 4A), uIRI (joonis 5A) ja FA (täiendav joonis 3A) manustamist. Txndc5 globaalne kustutamine vähendas oluliselt selle ulatustneeru-fibrooskõigis kolmes neerukahjustuse mudelis (joonis 4A, joonis 5A ja täiendav joonis 3A).
Joonis 4. UUO poolt indutseeritud Txndc5 nõrgestatud neerufibroosi deletsioon.
(A) WT ja Txndc5-7 hiirte neerulõikude värvimine Picrosiriuse punasega (2 ülemist paneeli) ja Massoni trikroomvärvimine (2 alumist paneeli) 10 päeva pärast UUO-d. Paremal on Picrosirius punase ja Massoni trikroomse värvimise alade kvantitatiivsete tulemuste tulpdiagrammid (n=5-10). Skaalariba∶ 100 μm.
(B) SHG-kujutised neerulõikudest WT-st ja Txndc5-/hiirtest 10 päeva pärast UUO-d. SHG-positiivsete piirkondade kvantitatiivsed tulemused näitasid fibrillaarse kollageeni (rohelise) suurenenud akumuleerumist WT-s, kuid mitte Txndc5 hiirte neerudes pärast vigastust.
Iga SHG jaoks pildistatud neerulõike jaoks saadi TPEF-kujutis, et näidata skannitud koe profiili (punane värv alumistel paneelidel) (n=3). Skaalariba: 50 um. (C) Immunoblotid näitasid fibroblastide aktivatsioonimarkeri (periostiin) ja ECM (COL1A1) valgu ekspressioonitasemeid WT ja Txndc5-/hiirte kogu neeru ekstraktis 10 päeva pärast UUO-d (n{7}}). Andmed esindavad kolme või enama sõltumatut katsekorda.
Kõikide paneelide andmed on esitatud keskmisena ± SEM. Kolme või enama rühma erinevuste statistiline olulisus määrati 1-meetodi ANOVA abil, millele järgnesid Sidaki post hoc testid.**P<><>
Patogeense fibrillaarse kollageeni (tüüp I ja II) spetsiifiliseks kvantifitseerimiseks ja fibrootiliste piirkondade ülehindamise vältimiseks traditsiooniliste värvimismeetoditega, teise harmoonilise põlvkonna (SHG) mikroskoopiaga, uudse optilise koe kujutise süsteemiga, mis võimaldab visualiseerida fibrillaarset, kuid mitte fibrillaarset, Selle ulatuse hindamiseks kasutati kollageeni fibrootilistes organites (23, 24).fibroosWT ja Tndc5 pluss hiire neerudes pärast vigastust. Kooskõlas ülalnimetatud tulemustega näitas SHG mikroskoopia fibrillaarse kollageeni ladestumise märgatavat suurenemist WT-neerudes pärast UUO (joonis 4B), uIRI (joonis 5B) ja FA-ravi (täiendav joonis 3B), mille ulatus vähenes oluliselt Txndc{{ 4}} / hiired (joonis 4B, joonis 5B ja täiendav joonis 3B).
Kooskõlas nõrgenenud vigastusjärgse fibrootilise vastusega Txndc5 hiire neerudes, mida täheldati pildiuuringutes, leevendas Tendc5 kustutamine ka ECM valgu geenide, sealhulgas Collar, Eln, Fnl ja Ccn2 ülesreguleerimist hiire neerudes pärast vigastust (täiendav joonis 3, CE). Terve neerukoe lüsaatide immunoblotid näitasid ka ECM (COLIA1) ja fibroblastide aktivatsioonimarkeri (periostiini) valgu taseme langust Txndc5-/hiirtel võrreldes WT hiirtega pärast UUO ja uIRI määramist (joonis 4C ja joonis 5C).
Joonis 5. Txndc5 deletsioon leevendas ulRI poolt indutseeritud neerufibroosi.
(A) WT ja Txndc5-7 hiirte neerulõikude värvimine Picrosiriuse punasega (2 ülemist paneeli) ja Massoni trikroomvärvimine (2 alumist paneeli) 28 päeva pärast ulRI-d. Picrosirius punase ja Massoni trikroomi kvantitatiivsete tulemuste tulpdiagrammid värvimisalad on näidatud paremal (n=6). Skaalariba∶ 100 μm.
(B) WT- ja Txndc{0}}hiirte neerulõikude SHG-kujutised 28 päeva pärast ulRI-d. SHG-positiivsete piirkondade kvantitatiivsed tulemused näitasid fibrillaarse kollageeni (rohelise) suurenenud akumuleerumist WT-s, kuid mitte Txndc5 hiirte neerudes pärast vigastust. Iga SHG jaoks pildistatud neeruosa puhul tehti TPEF-kujutis, et näidata skannitud koe profiili (punane värv alumistel paneelidel) (n=3). Skaalariba ~50 μm.
(C) Immunoblotid näitasid fibroblastide aktivatsioonimarkeri (periostiin) ja ECM (COL1A1) valgu ekspressioonitasemeid WT ja Txndc5/hiirte kogu neeru ekstraktis 28 päeva pärast ulRI (n=5-9). Andmed esindavad 3 või enamat sõltumatut eksperimentaalset kordust.
Kõikide paneelide andmed on esitatud kui keskmine ± SEM. Kolme või enama rühma erinevuste statistiline olulisus määrati 1-meetodi ANOVA abil, millele järgnesid Sidaki post hoc testid.*P<><><>
Välistada võimalus, et teistes neerurakkude tüüpides, nagu TEC-des, podotsüütides ja endoteelirakkudes ekspresseeritud TXNDC5 võib siiski kaasa aidataneeru-fibroos, lõime Txndc5 tingimuslikud knockout hiired, mis on spetsiifilised TEC-dele (Cdh16-cre*Txcndc5i või Txndc5Epeko), podotsüütidele (NPHS2-cre*Txndc5/n või Tendc5Podxko) ja endoteelirakkudele (Tie{{). 7}}cre/ERT2*Tendc5/ või Txndc5Endo.eko). Txndc5Pieko ja Txndc5 Poio-cko hiiri kasutavates katsetes kasutati kontrollidena Txndc5Whiiri; katsetes Txndc5EMio-eko hiirtega indutseeriti Txndc5 deletsioon tamoksifeeni abil, nagu on kirjeldatud joonisel 9A, kus kontrollidena kasutati tamoksifeeniga töödeldud Tie2-Cre/ERT2 hiiri. Txndc5 sihipärane deletsioon TEC-des, podotsüütides või endoteelirakkudes ei mõjutanud siiskineerufibroosUUO või FA poolt indutseeritud (täiendav joonis 6, BE). Need tulemused viitavad sellele, et TEC-des, podotsüütides ja endoteelirakkudes ekspresseeritud TXNDC5 aitab vähe kaasa patogeneesile, kui üldse.neerudfibroos.
Txndc5 kustutamine neeru fibroblastides kaitseb TEC apoptoosi eest vastusena neerukahjustusele. Selle protsessi käigusneeru-fibroos, vigastatud TEC-d kaotavad mitokondriaalse funktsiooni ja apikobasaalse polaarsuse, millele järgneb apoptoos ja rakusurm (30). Et uurida, kas Txndc5 deletsioon mõjutab TEC-de apoptoosi vastuseks vigastusele, teostasime WT ja Txndc5-hiire neerude TUNEL-i värvimise. lõigud 10 päeva pärast UUO-d. Apoptootiliste TEC-de arv suurenes märkimisväärselt WT hiirte UUO-indutseeritud fibrootilistes neerudes, samas kui Txndc5 deletsioon nõrgendas TECapoptoosi ulatust. On teatatud, et aktiveeritud neerufibroblastid võivad parakriinsete mõjude kaudu esile kutsuda TEC apoptoosi (31). Kuna Tendc5 ekspresseerub vaevu TEC-des, on tõenäoline, et Txndc{8}}hiirtel pärast UUO-d täheldatud vähenenud TEC apoptoos ei olnud raku autonoomne toime, vaid pigem sekundaarne interstitsiaalse vähenemise tõttu.fibroosja seega vähem proapoptootilisi signaale ümbritsevatelt neerufibroblastidelt. Kooskõlas selle hüpoteesiga nõrgendas Txndc5 (Tendc5kO) fibroblastispetsiifiline deletsioon TEC apoptoosi määral, mida täheldati Txndc5-/hiirte puhul 10 päeva pärast UUO-d (täiendav). Vastupidiselt TECapoptoosi täheldatud vähenemisele, F4/80-positiivsete makrofaagide ja CD31-positiivsete endoteelirakkude arv oli WT ja Txndc5-hiire neerudes võrreldav, UUO-ga või ilma, mis viitab sellele, et Txndc5 deletsioon ei mõjuta makrofaagide infiltratsiooni või peritubulaarsete kapillaaride tihedus hiire neerudes. Kokkuvõttes näitavad need andmed, et Txndc5 deletsiooni reno-kaitsvad toimed tulenevad vähenenud torukujulisest interstitsiaalsestfibroosja TEC apoptoos, mõjutamata neerukapillaaride tihedust või makrofaage.
Tendc5 indutseeritud deletsioon neerufibroblastides vähendas väljakujunenud progresseerumistneerufibroos. Et teha kindlaks, kas Txndc5 sihtimine neerudesse võib olla kasulikneeru-fibroos, Txndc5 deletsioon neerufibroblastides indutseeriti Txndc5eko hiirtel 10 päeva pärast UUO-d, mis on ulatuslik ajahetkneeru-fibroossaab jälgida. Nendes katsetes kasutati kontrollina tamoksifeeniga töödeldud Colla{1}}Cre hiiri. Nagu näidatud, olid Colla2-Cre ja Tcndc5eko hiirtel sarnasedneeru-fibroos10 päeva pärast UUO-d enne tamoksifeenravi. Üksteist päeva pärast tamoksifeeni süstimist jätkas neerufibroosi ulatus kontrollhiirtel (fibroosi pindala suurenes 5,1 protsendilt 10,6 protsendini), samas kuineerudfibroosoli Txndc5eko hiirtel peaaegu peatatud (fibrootiline pindala muutus 5,3 protsendilt 6,9 protsendile). Immunoblotanalüüs näitas ka CCN2, periostiini ja TGFBR1 märkimisväärselt nõrgenenud ülesreguleerimist Txndc5eko hiirtel võrreldes kontrollhiirtega vahemikus D10 kuni D21 pärast UUO-d. Need tulemused näitavad, et Txndc5 sekkumine neerufibroblastides vähendab oluliselt haiguse progresseerumist.neerufibroos, mis viitab sellele, et TXNDC5 in vivo sihtimine võib olla uudne ja võimas terapeutiline lähenemisviis selle leevendamiseks.neerudfibroosja aeglustada kroonilise neeruhaiguse progresseerumist.
