Cistanche Deserticola glükosiidide koguhulk soodustab neuroloogiliste funktsioonide taastumist, indutseerides neurovaskulaarset regeneratsiooni nrf{0}}/Keap-1 raja kaudu MCAO/R rottidel

Taust:

Traditsiooniline Hiina meditsiin Cistanche deserticola on teadaolevalt kehtiv südame- ja ajuveresoonkonna haiguste puhul. Selle isheemilise insuldi kaitseks mõeldud aktiivsed komponendid pole aga selged. Meie eesmärk oli uurida C. deserticola aktiivseid komponente isheemilise insuldi vastu ja selle potentsiaalseid mehhanisme.

Meetodid:

Uurisime C. deserticola ekstraktide, üldglükosiidide (TG), polüsahhariidide (PS) ja oligosahhariidide (OS) aju kaitsvat toimet keskmise ajuarteri oklusioon-reperfusiooni (MCAO/R) rotimudelis. 2, 3, 5-Trifenüültetrasooliumkloriidi (TTC) värvimist kasutati ajuinfarkti mahu hindamiseks ja hematoentsefaalbarjääri (BBB) ​​läbilaskvuse hindamiseks kasutati Evansi sinise analüüsi. Seejärel avaldised CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1 ja Nrf{{ 13}} analüüsiti Western blot analüüsi või immunofluorestsentsi abil ning MDA, SOD, CAT ja GSH-Px aktiivsusi analüüsiti komplektide abil.

Tulemused:

TG-ravi vähendas märkimisväärselt neuroloogilise puudujäägi skoori ja infarkti mahtu, soodustas angiogeneesi ja närvide remodelleerumist ning säilitas tõhusalt vere-aju barjääri terviklikkuse võrreldes mudelrühmaga. Lisaks vähendasid TG-d oluliselt MDA taset ja suurendasid antioksüdantide aktiivsust (SOD, CAT ja GSH-Px) ajus. Samal ajal vähendasid TG-d Keap-1 ekspressiooni märkimisväärselt alla ja hõlbustasid Nrf-2 tuuma translokatsiooni. Vastupidi, PS-i ja OS-i rühmade puhul ei täheldatud kaitsvat toimet.

Järeldus:

TG-d on C. deserticola peamised aktiivsed komponendid MCAO/indutseeritud ajukahjustuse vastu ja kaitse toimub peamiselt Nrf{0}}/Keap-1 raja kaudu.

KlõpsakeLooduslik Cistanche Deserticola ekstrakti toode

SISSEJUHATUS

Insulti peetakse maailmas peamiseks surma- ja puude põhjuseks (Donnan et al., 2008). Peaaegu 87 protsenti kõigist insuldijuhtudest on põhjustatud isheemilisest insuldist (Ovbiagele ja Nguyen-Huynh, 2011). Praegu on isheemilise insuldi raviks kasutatav kõige tõhusam aine ja ainus FDA poolt heaks kiidetud ravim rekombinantne koeplasminogeeni aktivaator. Kuid suur osa insuldipatsiente ei reageeri sellele ravimile selle kitsa raviaja ja tõsise hemorraagiliste tüsistuste ohu tõttu (Lee et al., 2012; Schellinger ja Kohrmann, 2014). Trombolüütilise ravi peamine väljakutse on isheemia/reperfusiooni (I/R) vigastus, mida peetakse peamiseks ajukahjustuse ja funktsioonide hävimise põhjuseks. Reperfusioon pärast ajuisheemiat suurendab aju hemorraagia riski, põhjustades samal ajal neurovaskulaarseid vigastusi ja tekitades liigseid reaktiivseid hapniku liike (ROS), mis kahjustavad hematoentsefaalbarjääri (Alluri et al., 2015). Mitmed uuringud on kinnitanud, et BBB häire on isheemilise insuldi patogeneesi peamine põhjus (Cao et al., 2016b).

BBB koosneb peamiselt endoteelirakkudest, peritsüütidest, astrotsüütidest, neuronitest ja basaalmembraanidest. BBB põhikomponendid on aju mikrovaskulaarsed endoteelirakud, mis on ühendatud tihedate ühendustega, piirates seega eksogeensete molekulide sattumist ajju. Tiheda ristmiku patoloogilised muutused – eriti okludiin, claudin-5 ja zonula occludens-1 (ZO-1) – mõjutavad märkimisväärselt BBB funktsiooni isheemilise insuldi ajal, eriti barjääri läbilaskvust (Liu et al., 2014; Hu jt, 2018; Liu jt, 2019). I/R perioodidel on liigne ROS üks peamisi tegureid, mis põhjustab aju neuronite otsest kahjustumist (Ding et al., 2014). ROS-i ületootmine viib teatud ristmike lagunemiseni ja BBB katkemiseni, mille tulemusena sisenevad BBB kaudu ajju eksogeensed molekulid, mis põhjustab ajukahjustuse süvenemist (Cheon et al., 2016; Zhang QY et al., 2017). Seetõttu on BBB kaitsmist antioksüdantidega peetud potentsiaalseks viisiks reperfusioonikahjustuste vältimiseks.

Lisaks BBB lagunemisele võib I/R põhjustada neurovaskulaarseid vigastusi ja neuronite surma (Jung et al., 2010). Insuldi ajal võib suurenenud neuronaalsete rakkude surm tuleneda oksüdatiivsest stressist (Chi et al., 2018) ning arvukad uuringud on näidanud, et ROS süvendab insuldi raskust ja neuroloogilisi kahjustusi (Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; Crack et al., 2006). Kuigi kliinilised uuringud ei ole andnud rahuldavaid tulemusi, on neuroprotektsioon endiselt paljulubav strateegia ägeda isheemilise insuldi raviks (Moretti et al., 2015). Seega on insuldi raviks tõhusate neuroprotektsiooni ravimite leidmine kasulik insuldihaigetele.

Traditsiooniline hiina meditsiin (TCM) võtab meetmeid, et sekkuda keha sisemise tasakaalustamatuse vastu (Gaire, 2018). Isheemiliste insultide keerulise patogeneesi tõttu mängib TCM-i ja selle aktiivsete koostisosade multifaktoriaalne toime insuldi ravis kriitilist rolli. Mongoolias ja Loode-Hiinas kuivades või poolkuivades piirkondades laialt levinud Cistanche deserticola YC Ma on olnud Hiinas enam kui 1,000 aastat laialdaselt kasutatav TCM-i rohi mitmesuguste haiguste, nagu unustamine ja depressioon, raviks. . Kaasaegsed farmakoloogilised uuringud näitasid, et C. deserticola toorekstraktidel oli mitmeid farmakoloogilisi toimeid, nagu õppimis- ja mälufunktsiooni parandamine, neuroprotektsioon, immuunsuse tugevdamine, antioksüdantne, vananemisvastane ja väsimusevastane toime (Ko ja Leung, 2007; Wang et al. , 2012; Li et al., 2015). C. deserticola keemiline analüüs näitas, et selle peamiste koostisosade hulka kuuluvad fenüületanoidglükosiidid, iridoidglükosiidid, polüsahhariidid ja oligosahhariidid (Jiang ja Tu, 2009). C. deserticola aktiivsed komponendid ajukaitseks pole aga kuigi selged.

C. deserticola neuroprotektiivne omadus viitab selle terapeutilisele potentsiaalile kognitiivsete funktsioonidega seotud haiguste, nagu insult ja depressioon, aga ka Alzheimeri tõve puhul (Wang et al., 2017). Siiski on uuringud C. deserticola mõju kohta insultidele, sealhulgas selle aktiivsetele komponentidele ja toimemehhanismidele väga piiratud.

Käesolevas töös uurisime kolme C. deserticola ekstrakti, üldglükosiidide (TG-d, fenüületanoidglükosiidid ja muud glükosiidid), polüsahhariidid (PS) ja oligosahhariidid (OS) kaitsvat toimet aju I/R vigastustele. Meie leiud võivad aidata kaasa C. deserticola täpsele kliinilisele kasutamisele ja pakkuda kandidaatainet isheemilise insuldi raviks.

MATERJALID JA MEETODID

Kemikaalid ja reaktiivid

Cistanche deserticola varred osteti Sise-Mongooliast Alashanist ja need tuvastas üks autoritest (P.-F. Tu). TG-d, PS-id ja OS-id valmistati vastavalt meie varem teatatud meetodile (Gao et al., 2015). TG-de kvantitatiivne analüüs viidi läbi kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) abil, nagu eelnevalt kirjeldatud (Li et al, 2019), ja selle kromatogramm on näidatud joonisel 1. TG-de põhikomponendid on ehhinakosiid, tubulosiid A, akteosiid, isoakteosiid, ja 2'-atsetüüllakteosiid; nende sisaldus on vastavalt 163,05 mg/g, 4,125 mg/g, 41,66 mg/g, 22,655 mg/g ja 12,045 mg/g. PS-de ja OS-de sisaldus on vastavalt 69,42 protsenti ja 65,24 protsenti, mis on määratud vastavalt HPLC ja fenool-väävelhappe analüüsiga (Zhang A. et al., 2018; Shi et al., 2019).

Ehhinakosiidi (A0282), tubulosiidi A (A0942), akteosiidi (A0280), isoakteosiidi (A0281) ja 2'-atsetüüllakteosiidi (A0943) standardviited osteti ettevõttelt Chengdu Must Biotechnology (Sichuan, Hiina). Kõigi standardite puhtusaste on üle 98 protsendi. Nissli plekkide H&E komplektid osteti firmast Boster (Wuhan, Hiina). Edaravone (T0407-1) ​​osteti ettevõttelt Target Mol (Shanghai, Hiina). Osteti küüliku rotivastane MAP-2 (ab32454), Nrf-2 (ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620) ja hiire anti-roti CD31 (ab24590). firmalt Abcam Inc (Cambridge, MA, USA). Küüliku anti-roti Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M) ja Occludin (BS72035) osteti ettevõttelt Bioworld Technology (Nanjing, Hiina). Cell Signaling Technology Inc. (Boston, MA, USA) oli küüliku rotivastase Synapsin-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actin (a-SMA,19245T) allikas. GAPDH (HRP-60004) osteti ettevõttelt Proteintech Group, Inc. (Chicago, USA).

Sekundaarsed antikehad tarnis Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Peking, Hiina). Hoechst 33258 saadi firmast Beyotime (Jiangsu, Hiina).

Loomad

Sprague-Dawley rotid (isased, kaaluga 250–300 g) saadi ettevõttest Vital River Laboratory Animal Technology (Peking, Hiina) ja neid hoiti konditsioneeritud ruumis, mida hoiti 12-tunnise valguse/pimeduse tsüklis. Kõik loomkatsed viidi läbi loomuuringute ARRIVE juhiste järgi (Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010) ja heaks kiidetud Pekingi ülikooli terviseteaduste keskuse institutsionaalse loomade hooldamise ja kasutamise komitee (LA2019123) poolt.

Loomkatsete protokollid

Rotid allutati MCAO/R-le, nagu eelnevalt kirjeldatud (Wang et al., 2018). Lühidalt paljastati vasak ühine unearter (CCA), väline unearter (ECA) ja sisemine unearter (ICA) ning 3-0 nailonist monofilamentõmblus sisestati ECA-st ICA-sse, kuni jõudis keskmesse. ajuarter (MCA). Pärast 1,5-tunnist MCA oklusiooni simuleeriti reperfusiooni, eemaldades hõõgniidi. Kirurgilise protseduuri ajal hoiti kõigi rottide kehatemperatuuri 37,0 kraadi juures.

Ravimiamet

Rotid jaotati juhuslikult kuueks rühmaks, kasutades SPSS-i tarkvara versiooni 22.0 nagu kirjeldatud (Jiang et al., 2014): normaalne rühm (NOR); mudelirühm (MOD); edaravooni rühm (positiivne ravim, 6 ml/kg, EDI); TG-de rühm (280 mg/kg, TG-d); PS-de rühm (280 mg/kg, PS-d) ja OS-de rühm (280 mg/kg, OS-d). TG-sid, PS-sid ja OS-sid manustati üks kord päevas pärast MCAO/R-i 14 päeva jooksul. NOR- ja MOD-rühmi töödeldi tavalise soolalahusega. Loomade arv on näidatud tabelis 1.

Kaalu ja modifitseeritud neuroloogilise defitsiidi skoori (NSS) mõõtmine

Kehakaalu jälgiti 14. päeval, kasutades ADVENTURE™ digitaalset kaalu (OHAUS, New Jersey, USA). Massi hinnati FJ Wangi kirjeldatud meetodil (Wang et al., 2018) väikeste muudatustega.

2, 3, 5-trifenüültetrasooliumkloriidi (TTC) värvimine

Infarkti mahtu mõõdeti nii, nagu eelnevalt kirjeldatud (Wang et al., 2015). Lühidalt öeldes jagati ajud seitsmeks võrdsete vahedega koronaalplokiks (2 mm). Neid sektsioone värviti 2% TTC-ga (Coolaber, Peking, Hiina) 37 kraadi juures 15 minutit. Infarkti maht ( protsenti )=(ipsilateraalne isheemilise poolkera maht − kontralateraalne isheemilise poolkera maht) / kontralateraalse isheemilise poolkera maht × 100.

Nissl ja H&E värvimine

Rotid anesteseeriti sügavalt ja kogu aju eemaldati seejärel kiiresti koljust ja fikseeriti 4% paraformaldehüüdiga ning sisestati parafiinvahasse ning lõigati 7 µm paksusteks viiludeks. Sektsioonid värviti Nissli ja H&E värvidega. Selles uuringus jäädvustati valgusmikroskoobiga igas koeproovis kuus juhuslikku 200 × 200 µm välja. Nissli surnukehade arv loendati IPP tarkvara versiooniga 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, USA).

Evansi sinine analüüs

Rottidele süstiti pärast MCAO/R-i 2 protsenti EB-d (Coolaber Science & Technology Co., LTD). Kaks tundi hiljem rotid tuimastati ja kogu aju eemaldati seejärel kiiresti ja homogeniseeriti atsetoonis. Supernatante analüüsiti 620 nm juures 800 TS neeldumislugejaga (BioTek, USA).

Katalaasi (CAT), superoksiiddismutaasi (SOD), malondialdehüüdi (MDA) ja glutatioonperoksidaasi (GSH-Px) aktiivsuse mõõtmine

Kõiki seerumiproove tsentrifuugiti kiirusel 4,000 × rpm 15 minutit 4 kraadi juures ja seejärel analüüsiti MDA, CAT, SOD ja GSH-Px aktiivsuse tuvastamiseks, järgides tootja juhiseid (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Hiina).

Western blot analüüs

Igalt rotilt kogutud ajukoed (100 mg) homogeniseeriti ja lüüsiti RIPA lüüsipuhvris ning seejärel analüüsiti valgu kontsentratsiooni tuvastamiseks, kasutades BCA komplekti (Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.). Koe üldvalgud kanti 10% SDS-PAGE geelidele ja kanti nitrotselluloosmembraanile. Membraan blokeeriti 5-protsendilise kooritud piimaga, seejärel inkubeeriti üleöö primaarsete antikehadega 4 kraadi juures. Seejärel inkubeeriti membraani sekundaarse antikehaga. Western blot analüüsi analüüsiti Kodak Digital Imaging Systemiga (5200 Multi, Tanon, Hiina).

Immunofluorestsentsanalüüs

Viidi läbi immunofluorestsentsvärvimine CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, okludiini, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 ja Keap-1 jaoks. Primaarsed antikehad Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2 ja Keap{15}} vastu lahjendati 1-ni :200 ja 1:100 vastavalt. Alexa Flur 488 hiire küülikuvastase IgG ja rodamiini (TRITC) kitse küülikuvastase IgG sekundaarsed antikehad lahjendati mõlemad suhtega 1:200. Tuumad värviti Hoechst 33258-ga. Pildid jäädvustati Vectra® Polaris™ automatiseeritud kvantitatiivse patoloogia kujutise süsteemi abil (PerkinElmer, USA). Valgu ekspressiooni analüüsiti IPP tarkvara versiooni 6.0 abil.

Statistiline analüüs

Kõiki andmeid kirjeldati kui keskmisi ± SD. Statistilise analüüsi jaoks viidi läbi SPSS-i tarkvara versioon 22.{1}}. Erinevate rühmade võrdlemisel kasutati ühesuunalist ANOVA-d. Statistiliseks erinevuseks loeti P < 0,05.

TULEMUSED

TG-d suurendavad MCAO/R rottide kehakaalu ja vähendavad ajukahjustusi

Pärast 14-päevast ravi TG-de, PS-de, Oss-i ja EDI-ga hinnati I/R-rottide kehakaalu, neuroloogilisi puudujääke ja infarkti mahtusid. Tulemused näitasid, et MOD-rühma kehakaal vähenes oluliselt, samas kui vähenenud kaal TG-de, PS-de ja EDI-rühmades suurenes (joonis 2A). Neuroloogilise puudujäägi skoori alandasid oluliselt EDI ja TG-d (joonis 2B). NOR-rühma rottide ajulõigud olid sügavpunased ja infarkte ei esinenud, samas kui MOD rühma rottidel ilmnes suur ipsilateraalne ajuinfarkt. Pärast TG-ravi vähenesid infarkti mahud oluliselt (joonised 2C, D). PS-i ja OS-i ravi ei näidanud ülaltoodud indeksitele ilmset mõju. Ülaltoodud andmed näitasid, et TG-d võivad märkimisväärselt leevendada I / R-indutseeritud ajukahjustust, kuid PS-d ja OS-d ei suutnud seda.

TG-d leevendavad MCAO/R rottide histopatoloogilisi kahjustusi

TG-de, PS-de ja OS-de ravi mõjude kindlakstegemiseks histopatoloogilistele kahjustustele tehti patoloogiliste kahjustuste paljastamiseks H&E värvimine. NOR-rühma ajude histomorfoloogilised struktuurid korraldati regulaarselt. Morfoloogilised muutused TG-rühmades olid väiksemad kui MOD-rühmas. Kuid PS-i ja OS-i ravirühmad ei näidanud morfoloogiliste muutuste olulist paranemist (joonis 3).

TG-d nõrgendavad neuronaalseid vigastusi pärast I/RI-indutseeritud rotte

Nissli värvimine näitas isheemilise piirkonna poolvarraste neuronite histopatoloogilisi muutusi. Nagu on näidatud joonisel 4, oli normaalsetel neuronitel selge tuum ja terve struktuur. MOD rühmas olid neuronitel rakkudevahelised ruumid laienenud. Kenad kehad kadusid, kahanesid ja olid sügavalt määrdunud. Neid muutusi täheldati aga harva EDI, TG-de ja PS-de rühmades. Need tulemused näitasid, et TG-d ja PS-d võivad oluliselt nõrgendada isheemiast / reperfusioonist põhjustatud neuronite kahjustusi.

TG-d nõrgendavad BBB häireid pärast I/RT-ravi saanud rotte

Evansi sinine test on klassikaline meetod BBB läbilaskvuse muutuste uurimiseks. Katsetulemused näitasid, et MOD-rühmas täheldati Evansi sinise suurenemist, samas kui TG-de ja EDI-ga töödeldud rottidel oli Evansi sinine märkimisväärselt vähenenud. Lisaks ei olnud olulist erinevust PS-i ja OS-i ravirühmade vahel (joonis 5). Need tulemused näitasid, et TG-d võivad BBB häireid märkimisväärselt nõrgendada.

TG-d soodustavad angiogeneesi I/R-vigastatud rottidel

Hiljutised uuringud näitavad, et angiogenees mängib kriitilist rolli neuroloogilises funktsionaalses taastumises ja prognostilistes tulemustes pärast ägedat isheemilist insuldi (Yuen et al., 2015). Et hinnata TG-de, PS-de ja OS-de mõju angiogeneesile, kasutati kapillaaride arvu määramiseks CD31 ja a-SMA. Immunofluorestsentsvärvimine näitas, et MOD rühm põhjustas CD31 (joonised 6A, B) ja aSMA (joonised 6C, D) ekspressioonide märkimisväärse vähenemise I / R rottide isheemiliste piirkondade poolvarras, võrreldes normaalsete rottidega. See tulemus näitas, et I / R võib põhjustada isheemiliste poolkerade ajukoore penumbras veresoonte kahjustusi. Kuid TG-de ja EDI-ravi suurendas märkimisväärselt kapillaaride tihedust, angiogeneesi ja arteriogeneesi, mida näitavad CD31 ja a-SMA suurenenud ekspressioonid. Need tulemused viitavad sellele, et TG-d võivad soodustada angiogeneesi I / R rottide isheemilises penumbras, kuid PS-d ja OS-d ei saa seda teha.

TG-d suurendavad tihedate ühenduste valkude ekspressiooni I/R-vigastatud rottidel

BBB häire võib tõsta aju veesisaldust ja kudede turset, mis põhjustab ajukahjustusi. Tihedad ühendusvalgud on BBB olulised struktuurikomponendid (Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018). Et testida, kas TG-de, PS-de ja OS-de ravi pärast insulti võib mõjutada BBB terviklikkust, viidi ZO-1, claudin-5 ja okludiini ekspressioonid läbi immunofluorestsentsanalüüsiga. Tulemused näitasid, et claudin -5, ocludin ja ZO-1 ekspressioonid olid MOD rühmas nähtavalt vähenenud. Kuid need suurenesid oluliselt pärast 14-päevast manustamist. PS-i ja OS-i rühmad ei näidanud nendes valguekspressioonides olulisi muutusi (joonis 7). Need andmed näitasid, et TG-d võivad reguleerida tihedaid ristmikvalgu ekspressioone ja säilitada BBB terviklikkuse pärast I / R vigastust.

TG-d suurendavad peritsüütide katvust kapillaaridel I/R-vigastatud rottidel

Peritsüütide katvus kapillaaridel mängib kriitilist rolli BBB terviklikkuse säilitamisel (Armulik et al., 2010; Daneman et al., 2010). Seega testisime, kas peritsüütide katvust saab suurendada TG-de, PS-de ja OS-i raviga. Immunofluorestsentsi intensiivsuse analüüsi tulemused näitasid, et nii PDGFRb kui ka CD31 ekspressioonid vähenesid MOD rühmas dramaatiliselt. TG-de manustamine I/R-rottidele taastas märkimisväärselt või isegi suurendas PDGFRb ja CD31 ekspressiooniintensiivsust, kuid PS-de ja OS-de ravirühmades erinevusi ei täheldatud (joonis 8). Seega võib TG-de ravi oluliselt suurendada peritsüütide katvust. Need leiud kinnitasid veelgi, et TG-d suudavad säilitada BBB terviklikkuse pärast I / R-i.

TG-d soodustavad I/R vigastatud rottide närvide ümberkujunemist

Paljude uuringute kohaselt võib neurogenees pärast insulti oluliselt parandada funktsionaalset taastumist (Grefkes ja Ward, 2014; Zhang et al., 2019). Sünaptofüsiini (SYN), postsünaptilise tiheduse 95 (PSD-95) valke ja mikrotuubulitega seotud valku 2 (MAP-2) kasutati markeritena, et uurida neuronaalset plastilisust ajukoore isheemilises penumbras. Et hinnata TG-de, PS-de ja OS-de ravi mõju neurogeneesile I/R vigastatud rottidel, viidi läbi immunofluorestsents ja Western blot SYN, PSD95 ja MAP{8}} ekspressioonide jaoks. Nagu on näidatud joonistel 9 ja 10, vähenesid SYN, PSD95 ja MAP{12}} ekspressioonitasemed I/R rottidel pärast 14-päevast reperfusiooni võrreldes NOR rottidega, samas kui TG-de ja PS-de paranemine võis oluliselt tõusta. reguleerida nende ekspressioonitaset. OS-i rühmal ei olnud MOD-rühmaga võrreldes olulisi muutusi. Andmed näitasid, et TG-de ja PS-de ravi suutis dramaatiliselt soodustada närvide remodelleerumist pärast I / R vigastust.

TGd muudavad nrf{0}} ja Keap-1 väljendeid I/R vigastatud rottides

Oksüdatiivne stress on I/R vigastuse peamine patogeenne mehhanism (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018). Uuringud kinnitasid, et Nrf-2 on antioksüdatiivsete reaktsioonide peamine regulaator (Thompson et al., 2015). Et uurida Nrf-2 ja Keap-1 vahendatud oksüdatiivseid reaktsioone pärast I/R vigastust, hindasime Keap-1 tsütoplasmaatilist ekspressiooni ja tuuma translokatsiooni. Samal ajal analüüsiti ka Nrf{7}} ekspressiooni I/R vigastatud rottide ajukoes (joonised 10 ja 11). Immunofluorestsentsanalüüsi kohaselt leiti, et Nrf{10}} paikneb peamiselt NOR-rühma tsütoplasmas. TG-de rühmas oli Nrf-2 ekspressioon tsütoplasmaatilises lokalisatsioonis alareguleeritud, kuid tuumas ülesreguleeritud ning samuti täheldati Keap-1 ekspressiooni vähenemist. Andmed näitasid, et TG-de ajukaitse võib olla seotud Nrf-2 ja Keap-1 modulatsiooniga.

TG-d nõrgendavad ajukudede oksüdatiivset stressi I/R vigastatud rottidel

TG-de antioksüdatiivse toime kinnitamiseks hinnati SOD, CAT, GSH-Px ja MDA aktiivsust I/R vigastatud rottidel. Joonisel 12 oli MDA sisaldus märgatavalt suurenenud MOD rühmas ja samal ajal vähenesid SOD, CAT ja GSH-Px aktiivsused võrreldes normaalsete rottidega. Seevastu TG-ravi põhjustas MDA sisalduse olulise vähenemise ja SOD, CAT ja GSH-Px aktiivsuse suurenemise. Need tulemused kinnitasid veelgi TG-de antioksüdatsiooni aktiivsust.

ARUTELU

Paljud uuringud viitavad sellele, et TCM C. deserticolal on ulatuslik bioloogiline toime, nt parandab õppimisvõimet, mälu ja immuunsust (Dong et al., 2007; Jiang ja Tu, 2009; Wang et al., 2017; Xia jt, 2017). 2018). C. deserticola aktiivsed komponendid neuroprotektsiooniks jäävad siiski ebaselgeks. Käesoleva töö eesmärk on skriinida C. deserticola aktiivseid komponente isheemilise insuldi vastu MCAO/R mudelil. Nende mõju MCAO/R rottidele ja ka võimalike mehhanismide hindamiseks kasutati kolme C. deserticola ekstrakti (TG-d, PS-id ja OS-id). Insult on tavaline äge tserebrovaskulaarne haigus. Epidemioloogilised uuringud näitavad, et meestel esineb insult sagedamini kui naistel (Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik ja Bushnell, 2017).

Seega võeti meie katses katseteks isased rotid. Meie tulemused näitasid, et I / R induktsioon kiirendas oksüdatiivset stressi ja infarkti mahtu, lõhkudes BBB ja põhjustades närvi- ja tserebrovaskulaarseid vigastusi. Pärast sõeluuringut leiti, et TG-d vähendavad infarkti mahtu ja soodustavad närvide remodelleerumist ja angiogeneesi. Lisaks täheldati, et TG-d säilitasid BBB terviklikkuse pärast I / R vigastust. Vastupidi, PS-d ja OS-d ei leevenda oluliselt I/R-vigastusi. Seega peetakse TG-sid C. deserticola peamiseks aktiivseks fraktsiooniks neuroprotektsioonis, mis võib potentsiaalselt soodustada närvide remodelleerumist, angiogeneesi ja BBB terviklikkust Nrf2/Keap{1}} raja aktiveerimise kaudu.

Üha suurenevad tõendid näitavad, et tõhusa tagatisringluse loomine on infarkti ja isheemilise penumbra moodustumise vältimiseks märkimisväärselt oluline ning isheemilise insuldi varases staadiumis kriitiline ravi (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016). Veresoonte endoteelirakkude ja silelihasrakkude proliferatsioon pärast isheemilist infarkti määrab kollateraalse tsirkulatsiooni tekkimise.

Siiski on isheemiamudelitel tavaline nähtus - see tähendab, et aju mikroveresoonkonnas eksisteeris laialdaselt oksüdatiivne stress. Uuringuandmed on näidanud, et suur hulk antioksüdante võib häirida BBB funktsiooni ja angiogeneesi omadusi (Mentor ja Fisher, 2017). CD31 ja a-SMA on vastavalt vaskulaarsete endoteelirakkude ja silelihasrakkude markerid (Saboor et al., 2016). Et uurida ülalmainitud C. deserticola ekstraktide rakkude proliferatsiooni mõju, uurisime CD31 ja a-SMA ekspressioone ajuisheemia penumbra homogenaadis. Meie andmed näitasid, et TG-d suurendasid märkimisväärselt CD31 ja a-SMA ekspressioone. Siiski ei olnud olulisi erinevusi PS-i ja OS-i rühmade vahel. Seetõttu järeldasime, et TG-d võivad vähendada ajukahjustusi, soodustades angiogeneesi, suurendades CD31 ja a-SMA ekspressioone, samas kui PS-id ja OS-id ei taganud sellist kaitset ajukahjustuste eest. Need tulemused kinnitasid veelgi, et ainult TG-d võivad vältida aju I / R vigastusi.

Isheemilist insuldi võib pidada ajuisheemia tulemuseks, mis on põhjustatud neuronaalse plastilisuse kahjustusest või ajupiirkondade ümberkujundamisest. Enamikul insuldihaigetel on neuroloogilised häired. Neurogeneesi aktiveerimine on insuldihaigete jaoks paljutõotav strateegia nende neuroloogiliste funktsioonide parandamiseks (Cramer ja Chopp, 2000). Neurogenees osaleb otseselt neuroloogilise funktsiooni taastumises pärast aju I/R vigastust (Zhang et al., 2019). Varasemad uuringud näitavad, et TG-d võivad parandada hipokampuse püramiidrakkude ellujäämise määra ja indutseerida neurogeneesi (Lian et al., 2017). Oksüdatiivne stress põhjustab neuronite kadu paljude haiguste, näiteks Parkinsoni tõve, insuldi jms ajal (Duan ja Si, 2019; Singh et al., 2019). Nrf-2 transkribeerib oma promootorpiirkonnas palju neurokaitsega seotud geene, sealhulgas peamiselt SOD, MDA, CAT ja glutamüültsüsteiini ligaase jne (Satoh et al., 2006). SYN, PSD-95 ja MAP-2 valke, mis on tihedalt seotud sünaptilise moodustumise ja neurotransmissiooniga, võib pidada isheemilise penumbra piirkonna uuritavate neuronaalsete plastilisuse markeriteks. Pärast uurimist avastasime, et ravi TG-dega võib märkimisväärselt suurendada PSD95, SYN-i ja MAP-i -2 ekspressioone, mis näitab, et TG-de ajukaitse oli korrelatsioonis suurenenud neuronaalse plastilisusega I/R ajal. Siiski on kahju, et PS-de ja OS-i gruppide vahel pole ilmset erinevust. Need tulemused näitasid, et TG-d võivad pärast aju I / R vigastust suurendada neuroplastilisust.

Insuldihaigete pildiuuringud näitasid, et BBB düsfunktsiooni võib pidada isheemilise aju silmatorkavaks tunnuseks (Bang et al., 2007). TJ-d, mis koosnevad tsütoplasma valkudest, transmembraansetest valkudest ja kapillaaride endoteelirakkude vahelisest adhesioonimolekulidest, on BBB terviklikkuse säilitamisel väga olulised (Ye et al., 2019). Nende hulgas on TJ-de kõige olulisemad valgud ZO-1, claudin-5 ja okludiin. Suuremad tõendid näitavad, et isheemiast põhjustatud BBB suurenenud läbilaskvus on üldiselt korrelatsioonis ZO-1, claudiini-5 ja okludiini muutustega (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu jt, 2017; Liu et al., 2018).

Selle töö tulemused näitasid, et kuigi TG-d võivad oluliselt suurendada ZO-1, claudin-5 ja okludiini valkude ekspressiooni MCAO-indutseeritud ajukoes, ei teinud seda ei PS-d ega OS-d. BBB koosneb aju endoteelirakkudest ja on tihedalt seotud peritsüütidega (Nyul-Toth et al., 2016). Peritsüüdid on BBB terviklikkuse jaoks üliolulised (Bell et al., 2010). Isheemiline insult põhjustab ägedas faasis peritsüütide surma ja eraldumise aju endoteelirakkudest, destabiliseerides seega mikroveresoonkonna ja muutes BBB omadusi (Zechariah et al., 2013). Meie andmed näitasid, et TG-d võivad suurendada peritsüütide katvust kapillaaridel ja suurendada ZO-1, claudin-5 ja okludiini ekspressioonitaset. Need nähtused tõestasid, et TG-d võivad pärast aju I / R vigastust tõhusalt kaitsta BBB terviklikkust. Kokkuvõttes võivad TG-d ajukahjustusi nõrgendada mitmel viisil, näiteks soodustades angiogeneesi, parandades neuronite plastilisust ja säilitades BBB terviklikkust.

Seejärel uurisime signaaliülekande rada, et uurida TG ajukaitse aluseks olevat mehhanismi. I/R vigastuse protsess on multifaktoriaalne ja seega on patogeneesis palju mehhanisme. Oksüdatiivne stress on põhiline riskitegur, mis soodustab I/R-indutseeritud ajukahjustust (Suda et al., 2013), nagu BBB struktuuri kahjustused, veresoonte endoteeli düsfunktsioon ja isheemilise neuronikahjustuse süvenemine (Xiong et al., 2015; Caglayan). et al., 2019; Priestley jt, 2019).

Seega on oksüdatiivne stress muutunud atraktiivseks terapeutiliseks sihtmärgiks I / R-indutseeritud ajukahjustuse korral. 2. faasi ensüüme, mida vahendab tuumafaktor E2-seotud faktor-2 (Nrf-2), on peetud oluliseks vahendiks, mille abil neuronid end oksüdatiivse stressi eest kaitsevad (Suzuki ja Yamamoto , 2015; Ya et al., 2018). Tõendid näitavad, et Nrf-2 aktiveerimine I/R ajal on neuroprotektsiooni potentsiaalne terapeutiline sihtmärk (Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017). Nrf-2, mis on endogeense antioksüdantse kaitse oluline regulaator, vahendab heemi oksügenaas 1 (HO-1) ja teiste antioksüdantsete ensüümide, nagu NAD(P)H kinoonoksidoreduktaas 1 (NQO1), taset. SOD, CAT, GSH ja MDA (Siow et al., 2007; Ding et al., 2014). Peale selle mängib Nrf{17}} angiogeneesis olulist regulaatori rolli. Käesolev uuring näitab, et Nrf-2 saab veresoonte arengu protsessis oluliselt suurendada ja aktiveerida (Wei et al., 2013).

Nagu eelnevalt kirjeldatud (Jiang ja Tu, 2009), sisaldavad TG-d palju bioaktiivseid ühendeid, näiteks ehhinakosiidi, tubulosiidi A, akteosiidi, isoakteosiidi ja 2'-atsetüüllakteosiidi ning mõned neist näitasid pärast aju I/R vigastust neuroprotektiivseid funktsioone. Peng jt, 2016). Ehhinakosiidil on palju farmakoloogilisi toimeid, nagu antioksüdatsioon, vananemisvastane toime, neuroprotektsioon, põletikuvastane toime, kihistumise soodustamine, hepatoprotektsioon, luukoe moodustumise soodustamine ja kasvajavastased toimed (Yu et al., 2016; Li et al., 2018; Zhang Y. et al., 2018; Ji jt, 2019; Xu jt, 2019).

Hiljuti on ehhinakosiid tuvastatud kui tugev kesknärvisüsteemi antioksüdant (Lu et al., 2016). Ehhinakosiid võib vähendada MDA sisaldust ning parandada SOD ja GSHPx aktiivsust isheemia ajukahjustuse korral ning molekulaarne dokkimisanalüüs näitas, et ehhinakosiid võib seostuda Keapiga-1, mis viib Nrf-2 tuuma translokatsioonini (Li et al., 2018). Uuring Xia näitas, et akteosiid võib vähendada infarkti mahtu ja ajuvee sisaldust, et parandada MCAO/R rottide neuroloogilist puudujääki, leevendades oksüdatiivset stressi (Xia et al., 2018). Teised uuringud on näidanud, et isoakteosiid võib suurendada raku antioksüdantsete ensüümide, SOD ja CAT aktiivsust H2O2-töödeldud V79-4 rakkudes (Chae et al., 2005). Tuginedes ülaltoodud aruannetele TG-des sisalduvate aktiivsete ühendite kohta, on võimalik järeldada, et TG-d võivad antioksüdatsiooniradade kaudu kaitsta isheemilise insuldi eest.

Andsin teada fenüületanoidglükosiidide (PhG) neuroprotektiivsest mõjust H2O2-indutseeritud apoptoosile PC12 rakkudel Nrf2/ARE raja kaudu (Li et al., 2018). Need PhG-d pärssisid märkimisväärselt, käivitades Nrf2 tuuma translokatsiooni ja suurendades HO-1, NQO1, glutamaat-tsüsteiini ligaasi katalüütilise subühiku (GCLC) ja glutamaat-tsüsteiini ligaasi modifikaatori subühiku (GCLM) ekspressiooni (Li et al., 2018). Gong et al., 2019).

Seetõttu viitavad need leiud sellele, et Nrf{0}}/ARE rada mängib ülitähtsat rolli PhG-de vahendatud kaitsvates mõjudes neuronaalsetele rakkudele. Sarnaselt leidsime selles uuringus, et TG-d võivad vähendada MDA taset ja suurendada SOD, CAT ja GSH-Px taset I / R rottidel. Samal ajal võivad TG-d ülesreguleerida Nrf2 ekspressiooni tuumas, alareguleerida vastavat ekspressiooni tsütoplasmas ja oluliselt vähendada Keap-1 ekspressiooni. Seetõttu võib rada Nrf-2/Keap-1 olla seotud TG-vahendatud neuroprotektiivse toimega. Selle raja edasine valideerimine viiakse tulevikus läbi in vitro rakukultuuris hapniku-glükoosi puuduse / reoksüdatsiooni vigastuste mudelitega. Lisaks manustati meie uuringus C. deserticola ekstrakte 14 päeva järjest. Kuna täiskasvanute neurogenees mõjutaks neuroprotektiivsete mõjude tõlgendamist 14-päevase reperfusiooni ajal, ei saa neurogeneesi meie praegusest katseplaanist välistada CT-de neuroprotektiivse toime uurimisel. See on meie uurimistöö piirang.

Kokkuvõtteks võib öelda, et C. deserticola TG-d võivad tugevdada angiogeneesi ja neurogeneesi ning säilitada BBB terviklikkust I/R vigastusrottidel, kuid mitte PS-d ja OS-d. Mõju võib vahendada raja Nrf-2/Keap-1 aktiveerimine.

ANDMETE KÄTTESAADAVUSE AVALDUS

Selle artikli järeldusi toetavad algandmed teevad autorid ilma liigsete reservatsioonideta kättesaadavaks igale kvalifitseeritud teadlasele.

EETIKAAVALDUS

See töö viidi läbi vastavalt Pekingi ülikooli loomkatsete juhistele. Uuringuprotokollid kiitis heaks Pekingi ülikooli terviseteaduste keskuse institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (LA2019123).

AUTORI KAASALAD

YJ, KZ ja PT kavandasid uuringu. FW viis läbi uuringu. FW ja RL analüüsisid andmeid. FW, RL ja JC kirjutasid käsikirja ja HPLC analüüsi. JC, KZ, YJ ja PT muutsid käsikirja.

RAHASTAMINE

Seda uuringut toetasid riiklik võtmetähtsusega uurimis- ja arendusprojekt (2017YFC1702400, 2019YFC1711000), Hiina riiklik loodusteaduste sihtasutus (81773932) ja Hiina riiklik võtmetehnoloogia uurimis- ja arendusprogramm "New Drug Innovation" (2018ZX09711001-008-003 ).

VIITED

Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, ML ja Tharakan, B. (2015). Hapniku glükoosipuudus ja reoksüdeerimine kui in vitro isheemia-reperfusioonikahjustuse mudel hematoentsefaalbarjääri düsfunktsiooni uurimiseks. J. Vis. Exp. 99, e52699. doi: 10.3791/52699

Armulik, A., Genove, G., Mae, M., Nisancioglu, MH, Wallgard, E., Niaudet, C. jt. (2010). Peritsüüdid reguleerivad hematoentsefaalbarjääri. Loodus 468 (7323), 557–561. doi: 10.1038/nature09522

Bang, OY, Buck, BH, Saver, JL, Alger, JR, Yoon, SR, Starkman, S. jt. (2007). Hemorraagilise transformatsiooni ennustamine pärast rekanalisatsiooniteraapiat T2*-läbilaskvuse magnetresonantstomograafia abil. Ann. Neurol. 62 (2), 170–176. doi: 10.1002/ana.21174

Bell, RD, Winkler, EA, Sagare, AP, Singh, I., LaRue, B., Deane, R. jt. (2010). Peritsüüdid kontrollivad peamisi neurovaskulaarseid funktsioone ja neuronaalseid fenotüüpe täiskasvanu ajus ja aju vananemise ajal. Neuron 68 (3), 409–427. doi: 10.1016/j.neuron.2010.09.043

Caglayan, B., Kilic, E., Dalay, A., Altunay, S., Tuzcu, M., Erten, F. jt. (2019). Allüülisotiotsüanaat nõrgendab oksüdatiivset stressi ja põletikku, moduleerides hiirte traumaatilise ajukahjustuse korral Nrf2/HO-1 ja NF-kappaB radu. Mol. Biol. Rep 46 (1), 241–250. doi: 10,1007/s{10}}

Cao, G., Jiang, N., Hu, Y., Zhang, Y., Wang, G., Yin, M. jt. (2016a). Ruskogeniin nõrgendab ajuisheemiast põhjustatud hematoentsefaalbarjääri düsfunktsiooni, pärssides TXNIP / NLRP3 põletikulist aktivatsiooni ja MAPK rada. Int. J. Mol. Sci. 17 (9), 1.–17. doi: 10.3390/ijms17091418

Cao, G., Ye, X., Xu, Y., Yin, M., Chen, H., Kou, J. jt. (2016b). YiQiFuMai pulbri süstimine parandab hematoentsefaalbarjääri düsfunktsiooni ja ajuturset pärast fokaalset ajuisheemia-reperfusioonikahjustust hiirtel. Drug Des. Dev. Seal. 10, 315–325. doi: 10.2147/dddt.S96818

Chae, S., Kim, JS, Kang, KA, Bu, HD, Lee, Y., Seo, YR jt. (2005). Clerodendron trichotomumi isoakteosiidi antioksüdantne toime. J. Toxicol. Keskkond. Tervis A 68 (5), 389–400. doi: 10.1080/15287390590900750

Cheon, SY, Cho, KJ, Kim, SY, Kam, EH, Lee, JE ja Koo, BN (2016). Apoptoosi signaali reguleeriva kinaasi 1 blokeerimine nõrgendab maatriksi metalloproteinaas 9 aktiivsust aju endoteelirakkudes ja sellele järgnevat apoptoosi neuronites pärast isheemilist kahjustust. Esiosa. Raku neuroosci. 10, 213. doi: 10.3389/fncel.2016.00213

Chi, H., Chang, HY ja Sang, TK (2018). Neuronaalsete rakkude surma mehhanismid peamiste neurodegeneratiivsete haiguste korral. Int. J. Mol. Sci. 19 (10), 1.–18. doi: 10.3390/ ijms19103082

Crack, PJ, Taylor, JM, Flentjar, NJ, de Haan, J., Hertzog, P., Iannello, RC jt. (2001). Suurenenud infarkti suurus ja ägenenud apoptoos glutatioonperoksüdaasi-1 (Gpx-1) väljalülitatud hiire ajus vastuseks isheemia-/reperfusioonikahjustusele. J. Neurochem. 78 (6), 1389–1399. doi: 10.1046/j.{9}}.2001.00535.x

Crack, PJ, Taylor, JM, Ali, U., Mansell, A. ja Hertzog, PJ (2006). NF-kappaB potentsiaalne panus närvirakkude surmasse glutatioonperoksüdaasi -1 knockout hiirel vastusena isheemia-reperfusioonikahjustusele. Stroke 37 (6), 1533–1538. doi: 10.1161/01.Str.0000221708.17159.64

Cramer, SC ja Chopp, M. (2000). Taastumine võtab kokku ontogeneesi. Trends Neurosci. 23 (6), 265–271. doi: 10,1016/s0166-2236(00)01562-9

Daneman, R., Zhou, L., Kebede, AA ja Barres, BA (2010). Peritsüüdid on embrüogeneesi ajal vajalikud hematoentsefaalbarjääri terviklikkuse tagamiseks. Loodus 468 (7323), 562–566. doi: 10.1038/nature09513

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Wang, M., Zhang, T., Park, J. jt. (2014). Neuroprotektsioon atsetüül-11-keto-beeta-Boswellic happega isheemilise ajukahjustuse korral hõlmab Nrf2/HO-1 kaitserada. Sci. Rep. 4, 7002. doi: 10.1038/srep07002

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Li, Y. ja Wen, A. (2015). Järelravi 11- keto-beeta-boswelliinhappega leevendab ajuisheemia-reperfusioonikahjustust: Nrf2/HO-1 rada kui võimalik mehhanism. Mol. Neurobiol. 52 (3), 1430–1439. doi: 10,1007/s12035-014-8929-9

Dong, Q., Yao, J., Fang, JN ja Ding, K. (2007). Cistanche deserticola YC Ma kahe külma veega ekstraheeritava polüsahhariidi struktuuriline iseloomustus ja immunoloogiline aktiivsus. Süsivesikud. Res. 342 (10), 1343–1349. doi: 10.1016/j.carres.2007.03.017

Donnan, GA, Fisher, M., Macleod, M. ja Davis, SM (2008). Insult. Lancet 371 (9624), 1612–1623. doi: 10,1016/s0140-6736(08)60694-7

Duan, Q. ja Si, E. (2019). MicroRNA-25 süvendab Abeta1-42-indutseeritud hipokampuse neuronikahjustust Alzheimeri tõve korral, vähendades hiiremudelis KLF2 signaaliülekanderaja Nrf2 kaudu. J. Cell Biochem. 120 (9), 15891–15905. doi: 10.1002/jcb.28861

ElAli, A. (2016). Neurovaskulaarse üksuse signaalimise mõju vigastuse ja paranemise vahelise peene tasakaalu kontrollimisel pärast isheemilist insuldi. Neuraalne regenereerija. Res. 11 (6), 914–915. doi: 10.4103/1673-5374.184485

Gaire, BP (2018). Taimne ravim isheemilise insuldi korral: väljakutsed ja väljavaated. Lõug. J. Integr. Med. 24 (4), 243–246. doi: 10,1007/s11655-018-2828-2

Gao, Y., Jiang, Y., Dai, F., Han, Z., Liu, H., Bao, Z. jt. (2015). Cistanche deserticola YC Ma lahtistavate koostisosade uuring. Mod. Lõug. Med. 17 (04), 19–22 pluss 26. doi: 10.13313/j.issn.{8}}.2015.4.003

Gong, X., Xu, Y., Ren, K., Bai, X., Zhang, C. ja Li, M. (2019). Paraboea martini fenüületanoidglükosiidid kaitsevad roti feokromotsütoomi (PC12) rakke vesinikperoksiidist põhjustatud rakukahjustuste eest. Biosci. Biotehnoloogia. Biochem. 83 (12), 2202–2212. doi: 10.1080/09168451.2019.1654359

Grefkes, C. ja Ward, NS (2014). Kortikaalne ümberkorraldamine pärast insulti: kui palju ja kui funktsionaalne? Neuroteadlane 20 (1), 56–70. doi: 10.1177/ 1073858413491147

Guzik, A. ja Bushnell, C. (2017). Insuldi epidemioloogia ja riskitegurite juhtimine. Continuum (Minneap Minn) 23 (1, tserebrovaskulaarne dis), 15–39. doi: 10.1212/con.0000000000000416

Hu, S., Wu, Y., Zhao, B., Hu, H., Zhu, B., Sun, Z. jt. (2018). Panax notoginseng Saponiinid kaitsevad aju mikrovaskulaarseid endoteelirakke hapniku-glükoosi deprivatsiooni/reperfusioonist põhjustatud barjääri düsfunktsiooni eest, aktiveerides PI3K/Akt/Nrf2 antioksüdantide signaaliraja. Molekulid 23 (11), 1-17. doi: 10,3390/molekulid23112781

Iwasawa, E., Ichijo, M., Ishibashi, S. ja Yokota, T. (2016). Kollateraalse vereringe äge areng ja terapeutilised väljavaated isheemilise insuldi korral. Neuraalne regenereerija. Res. 11 (3), 368–371. doi: 10.4103/1673-5374.179033

Ji, S., Li, S., Zhao, X., Kang, N., Cao, K., Zhu, Y. jt. (2019). Fenüületanoidglükosiidide, Torenoside B ja Savatiside A kaitsev roll Alzheimeri tõve korral. Exp. Seal. Med. 17 (5), 3755–3767. doi: 10.3892/üks.2019.7355

Jiang, Y. ja Tu, PF (2009). Cistanche liikide keemiliste koostisosade analüüs. J. Chromatogr. 1216 (11), 1970–1979. doi: 10.1016/ j.chroma.2008.07.031

Jiang, T., Yu, JT, Zhu, XC, Wang, HF, Tan, MS, Cao, L. jt. (2014). Äge metformiini eelkonditsioneerimine annab neuroprotektsiooni fokaalse ajuisheemia vastu AMPK-sõltuva autofagia eelaktiveerimisega. Br. J. Pharmacol. 171 (13), 3146–3157. doi: 10.1111/bph.12655

Jiang, X., Andjelkovic, AV, Zhu, L., Yang, T., Bennett, MVL, Chen, J. jt. (2018). Vere-aju barjääri düsfunktsioon ja taastumine pärast isheemilist insulti. Prog. Neurobiol. 163-164, 144–171. doi: 10.1016/j.pneurobio.2017.10.001

Jung, JE, Kim, GS, Chen, H., Maier, CM, Narasimhan, P., Song, YS jt. (2010). Reperfusioon ja neurovaskulaarne düsfunktsioon insuldi korral: põhimehhanismidest kuni neuroprotektsiooni potentsiaalsete strateegiateni. Mol. Neurobiol. 41 (2-3), 172–179. doi: 10,1007/s12035-010-8102-z

Kilkenny, C., Browne, WJ, Cuthill, IC, Emerson, M. ja Altman, DG (2010). Bioteaduslike uuringute aruandluse täiustamine: ARRIVE'i juhised loomuuringutest aruandluseks. PLoS Biol. 8 (6), e1000412. doi: 10.1371/ajakiri. bio.1000412

Ko, KM ja Leung, HY (2007). Hiina Yangi ja Yini toniseerivate ürtide ATP tekkevõime, antioksüdantse aktiivsuse ja immunomoduleeriva toime suurendamine. Lõug. Med. 2, 3. doi: 10,1186/1749-8546-2-3

Kondo, T., Reaume, AG, Huang, TT, Carlson, E., Murakami, K., Chen, SF jt. (1997). CuZn-superoksiidi dismutaasi aktiivsuse vähendamine süvendab neuronaalsete rakkude vigastusi ja turse teket pärast mööduvat fokaalset ajuisheemiat. J. Neurosci. 17 (11), 4180–4189. doi: 10.1523/JNEUROSCI.{8}}

Lee, M., Saver, JL, Alger, JR, Hao, Q., Starkman, S., Ali, LK jt. (2012). Vere-aju barjääri läbilaskvuse häired tagumise vereringe isheemilise insuldi korral: sagedus ja seos hemorraagilise transformatsiooniga. J. Neurol. Sci. 313 (1-2), 142–146. doi: 10.1016/j.jns.2011.08.048

Li, N., Wang, J., Ma, J., Gu, Z., Jiang, C., Yu, L. jt. (2015). Kaugrohuravi neuroprotektiivne toime mõõduka Alzheimeri tõvega patsientidele. Evid-Based Complement Altern. Med. 2015, 103985. doi: 10,1155/2015/103985

Li, M., Xu, T., Zhou, F., Wang, M., Song, H., Xiao, X. jt. (2018). Nelja fenüületanoidglükosiidi neuroprotektiivne toime H (2) O (2)-indutseeritud apoptoosile PC12 rakkudel Nrf2 / ARE raja kaudu. Int. J. Mol. Sci. 19 (4), 1–17. doi: 10.3390/ijms19041135

Li, R., Zhao, M., Tu, P. ja Jiang, Y. (2019). Viie fenüületanoidglükosiidi samaaegne määramine Cistanches Herbas, kasutades mitme komponendi kvantitatiivset analüüsi ühe markeri abil. J. Chin. Pharm. Sci. 28 (08), 537–546. doi: 10.5246/jcps.2019.08.051

Lian, J., Wang, L., Zhao, F., Lin, S., Yan, X., Jia, J. jt. (2017). Tistanche glükosiidide mõju sünaptilisele morfoloogilisele plastilisusele vananemisega kiirendatud hiirtel. J. Baotou Medl Coll. 33 (08), 78–80. doi: 10.16833/j.cnki.jbmc.2017.08.036

Liu, Y., Wang, D., Wang, H., Qu, Y., Xiao, X. ja Zhu, Y. (2014). HET0016 kaitsev toime ajutursele ja hematoentsefaalbarjääri düsfunktsioonile pärast ajuisheemiat / reperfusiooni. Brain Res. 1544, 45–53. doi: 10.1016/ j.brainres.2013.11.031

Liu, P., Zhang, R., Liu, D., Wang, J., Yuan, C., Zhao, X. jt. (2018). Hematoentsefaalbarjääri läbilaskvuse ja tihedate ühendusvalkude muutuste ajaline uurimine püsiva fokaalse isheemia rotimudelis. J. Physiol. Sci. 68 (2), 121–127. doi: 10,1007/s12576-016-0516-6

Liu, S., Chang, L. ja Wei, C. (2019). Sonic hedgehog rada vahendab Tongxinluo kapslist põhjustatud kaitset hematoentsefaalbarjääri katkemise eest pärast isheemilist insulti hiirtel. Basic Clin. Pharmacol. Toksikool. 124 (6), 660–669. doi: 10.1111/bcpt.13186

Lu, CW, Lin, TY, Huang, SK ja Wang, SJ (2016). Ehhinakosiid pärsib glutamaadi vabanemist, pärssides pingest sõltuvat Ca(2 pluss) sisenemist ja proteiinkinaasi C roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmedes. Int. J. Mol. Sci. 17 (7), 1–13. doi: 10.3390/ijms17071006

McGrath, JC, Drummond, GB, McLachlan, EM, Kilkenny, C. ja Wainwright, CL (2010). Juhised loomadega tehtud katsetest teatamiseks: ARRIVE juhised. Br. J. Pharmacol. 160 (7), 1573–1576. doi: 10.1111/j.{7}}.2010.00873.x

Mentor, S. ja Fisher, D. (2017). Agressiivne antioksüdantne redutseeriv stress kahjustab aju endoteelirakkude angiogeneesi ja vere-aju barjääri funktsiooni. Curr. Neurovasc Res. 14 (1), 71–81. doi: 10,2174/1567202613666161129113950

Moretti, A., Ferrari, F. ja Villa, RF (2015). Isheemilise insuldi neuroprotektsioon: praegune seisund ja väljakutsed. Pharmacol. Seal. 146, 23–34. doi: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.003

Nyul-Toth, A., Suciu, M., Molnar, J., Fazakas, C., Hasko, J., Herman, H. jt. (2016). Erinevused hematoentsefaalbarjääri molekulaarstruktuuris ajukoores ja valgeaines: in silico, in vitro ja ex vivo uuring. Olen. J. Physiol. Südame ring. Physiol. 310 (11), H1702–H1714. doi: 10.1152/ajpheart.00774.2015

Ovbiagele, B. ja Nguyen-Huynh, MN (2011). Insuldi epidemioloogia: haiguse mehhanismi ja ravi mõistmise edendamine. Neurotherapeutics 8 (3), 319–329. doi: 10,1007/s13311-011-0053-1

Page, S., Munsell, A. ja Al-Ahmad, AJ (2016). Tserebraalne hüpoksia / isheemia häirib selektiivselt tihedaid ühenduskomplekse tüvirakkudest pärinevates inimese aju mikrovaskulaarsetes endoteelirakkudes. Vedelikubarjäärid CNS 13 (1), 16. doi: 10,1186/s12987-016-0042-1

Peng, F., Chen, J., Wang, X., Xu, C., Liu, T. ja Xu, R. (2016). Fenüületanoidglükosiidide taseme, antioksüdantse aktiivsuse ja muude kvaliteediomaduste muutused cistanche deserticola viiludes auruga töötlemisel. Chem. Pharm. Bull. (Tokyo) 64 (7), 1024–1030. doi: 10.1248/CPB.c16-00033

Priestley, JRC, Fink, KE, McCord, JM ja Lombard, JH (2019). NRF2 aktiveerimine Protandimiga nõrgendab soolast põhjustatud vaskulaarset düsfunktsiooni ja mikrovaskulaarset haruldust. Mikrotsirkulatsioon, 26 (7), e12575. doi: 10.1111/mitmesugused 12575

Saboor, F., Reckmann, AN, Tomczyk, CU, Peters, DM, Weissmann, N., Kaschtanow, A. jt. (2016). Nestiini ekspresseerivad vaskulaarseina rakud põhjustavad pulmonaalse hüpertensiooni arengut. Eur. Hingake. J. 47 (3), 876–888. doi: 10.1183/13993003.{9}}

Satoh, T., Okamoto, SI, Cui, J., Watanabe, Y., Furuta, K., Suzuki, M. jt. (2006). Keap1 / Nrf2 raja aktiveerimine neuroprotektsiooniks elektrofiilsete [elektrofiilsete] II faasi indutseerijate abil. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103 (3), 768–773. doi: 10.1073/pnas.0505723102

Schellinger, PD ja Kohrmann, M. (2014). Intravenoosseks trombolüüsiks rekombinantse koe tüüpi plasminogeeni aktivaatoriga on kehtestatud 45-tunnine ajavahemik. Stroke 45 (3), 912–913. doi: 10.1161/ insultaha.113.002700

Sealy-Jefferson, S., Wing, JJ, Sanchez, BN, Brown, DL, Meurer, WJ, Smith, MA jt. (2012). Insuldiriski vanuselised ja etnilised soolised erinevused. Gend Med. 9 (2), 121–128. doi: 10.1016/j.genm.2012.02.002

Shi, Z., Wu, Y., Zhu, Y., Cui, Wang, M., Yin, H. jt. (2019). Betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi kvantitatiivne määramine Cistanches Herbas HPLC-ELSD abil. Mod. Lõug. Med. 32 (6), 1.–11. doi: 10.13313/ j.issn.1673-4890.20190320006

Singh, D., Reeta, KH, Sharma, U., Jagannathan, NR, Dinda, AK ja Gupta, YK (2019). Monometüülfumaraadi neurokaitsev toime isheemia-reperfusioonikahjustusele rottidel: Nrf2 / HO1 raja roll periinfarkti piirkonnas. Neurochem. Int. 126, 96–108. doi: 10.1016/j.neuint.2019.03.010

Siow, RC, Ishii, T. ja Mann, GE (2007). Antioksüdantse geeni ekspressiooni moduleerimine 4-hüdroksünonenaali abil: Nrf2/ARE transkriptsiooniraja ateroprotektiivne roll. Redox Rep 12 (1), 11–15. doi: 10,1179 / 135100007x162167

Suda, S., Katsura, K., Kanamaru, T., Saito, M. ja Katayama, Y. (2013). Valproehape nõrgendab isheemia-reperfusioonikahjustusi roti ajus oksüdatiivse stressi ja põletiku pärssimise kaudu. Eur. J. Pharmacol. 707 (1-3), 26–31. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.03.020

Suzuki, T. ja Yamamoto, M. (2015). Keap1-Nrf2 süsteemi molekulaarne alus. Vaba Radik. Biol. Med. 88 (Pt B), 93–100. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.006

Tenreiro, MM, Ferreira, R., Bernardino, L. ja Brito, MA (2016). Hematoentsefaalbarjääri rakuline reaktsioon vigastusele: potentsiaalsed biomarkerid ja terapeutilised sihtmärgid aju regenereerimiseks. Neurobiol. Dis. 91, 262–273. doi: 10.1016/j.nbd.2016.03.014

Thompson, JW, Narayanan, SV, Koronowski, KB, Morris-Blanco, K., Dave, KR ja Perez-Pinzon, MA (2015). Signaalteed, mis viivad isheemilise mitokondriaalse neuroprotektsioonini. J. Bioenerg. Biomembr. 47 (1-2), 101–110. doi: 10,1007/s10863-014-9574-8

Wang, T., Zhang, X. ja Xie, W. (2012). Cistanche deserticola YC Ma "Kõrbe ženšenn": ülevaade. Olen. J. Chin. Med. 40 (6), 1123–1141. doi: 10,1142/s0192415x12500838

Wang, X., Wang, S., Wang, J., Guo, H., Dong, Z., Chai, L. jt. (2015). Süstimiseks mõeldud xueshuantongi (lüofiliseeritud) neuroprotektiivne toime mööduva ja püsiva roti ajuisheemia mudelis. Evid-Based Complement Altern. Med. 2015, 134685. doi: 10,1155/2015/134685

Wang, D., Wang, H. ja Gu, L. (2017). Traditsioonilise hiina ürdi tsitanche antidepressandid ja kognitiivsed funktsioonid. Evid-Based Complement Altern. Med. 2017, 3925903. doi: 10.1155/2017/3925903

Wang, FJ, Wang, SX, Chai, LJ, Zhang, Y., Guo, H. ja Hu, LM (2018). Xueshuantongi süstimine (lüofiliseeritud) koos salvianoolse lüofiliseeritud süstiga kaitseb rottidel fokaalse ajuisheemia / reperfusioonikahjustuse eest oksüdatiivse stressi nõrgenemise kaudu. Acta Pharmacol. Patt. 39 (6), 998–1011. doi: 10.1038/aps.2017.128Wei, Y., Gong, J., Thimmulappa, RK, Kosmider, B., Biswal, S. ja Duh, EJ (2013). Nrf2 toimib endoteelis raku-autonoomselt, et reguleerida tipurakkude moodustumist ja veresoonte hargnemist. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110 (41), E3910–E3918. doi: 10.1073/pnas.1309276110

Xia, D., Zhang, Z. ja Zhao, Y. (2018). Akteosiid nõrgendab oksüdatiivset stressi ja neuronaalset apoptoosi fokaalse ajuisheemia-reperfusioonikahjustusega rottidel. Biol. Pharm. Bull. 41 (11), 1645–1651. doi: 10.1248/bob.b18-00210

Xiong, W., MacColl Garfinkel, AE, Li, Y., Benowitz, LI ja Cepko, CL (2015). NRF2 soodustab neuronite ellujäämist neurodegeneratsiooni ja ägeda närvikahjustuse korral. J. Clin. Investeeri. 125 (4), 1433–1445. doi: 10.1172/jci79735

Xu, HT, Zhang, CG, He, YQ, Shi, SS, Wang, YL ja Chou, GX (2019). Schnabelia centifolia (Benth.) PDCantino fenüületanoidglükosiidid soodustavad osteoblastide vohamist. Phytochemistry 164, 111–121. doi: 10.1016/j.phytochem.2019.05.003

Ya, BL, Liu, Q., Li, HF, Cheng, HJ, Yu, T., Chen, L. jt. (2018). Kusihape kaitseb fokaalse ajuisheemia / reperfusioonist põhjustatud oksüdatiivse stressi eest, aktiveerides Nrf2 ja reguleerides neurotroofse faktori ekspressiooni. oksiid. Med. Cell Longev 2018, 6069150. doi: 10.1155/2018/6069150

Ye, ZY, Xing, HY, Wang, B., Liu, M. ja Lv, PY (2019). DL-3-butüülftaliid kaitseb hematoentsefaalbarjääri isheemia/hüpoksia kahjustuste eest tänu tihedate ühendusvalkude ülesreguleerimisele. Lõug. Med. J. (ingl.), 132 (11), 1344–1353. doi: 10,1097/cm9,00000000000000232

Yu, Q., Li, X. ja Cao, X. (2016). Cistanche deserticola fenüületanoidglükosiididerikka ekstrakti kardioprotektiivne toime isheemia-reperfusioonist põhjustatud müokardiinfarkti korral rottidel. Ann. Vasc. Surg. 34, 234–242. doi: 10.1016/j.avsg.2016.04.002

Yu, N., Wang, Z., Chen, Y., Yang, J., Lu, X., Guo, Y. jt. (2017). Kaheteistkümne Jing-süvendiga punktsiooni parandav toime ajutursele, mis on põhjustatud püsivast keskmisest ajuisheemiast, kaitstes hematoentsefaalbarjääri tihedaid ühendusi. BMC täiendav alternatiiv. Med. 17 (1), 470. doi: 10,1186/s12906-017-1979-6

Yu, W., Gao, D., Jin, W., Liu, S. ja Qi, S. (2018). Propofool hoiab ära oksüdatiivse stressi, vähendades suktsinaadi isheemilist akumulatsiooni fokaalse ajuisheemia-reperfusioonikahjustuse korral. Neurochem. Res. 43 (2), 420–429. doi: 10.1007/s11064-017-2437-z

Yuen, CM, Chung, SY, Tsai, TH, Sung, PH, Huang, TH, Chen, YL jt. (2015). Kehaväline lööklaine nõrgendab tõhusalt ajuinfarkti mahtu ja parandab rottide neuroloogilist funktsiooni pärast ägedat isheemilist insulti. Olen. J. Transl. Res. 7 (6), 976–994.

Zechariah, A., ElAli, A., Doeppner, TR, Jin, F., Hasan, MR, Helfrich, I. jt. (2013). Vaskulaarne endoteeli kasvufaktor soodustab aju kapillaaride peritsüütide katmist, parandab aju verevoolu järgneva fokaalse ajuisheemia ajal ja säilitab metaboolse poolvarju. Stroke 44 (6), 1690–1697. doi: 10.1161/strokeaha.111.000240

Zhang, QY, Wang, ZJ, Sun, DM, Wang, Y., Xu, P., Wu, WJ jt. (2017). Tenuuri uudsed terapeutilised mõjud isheemilisele insuldile: BBB terviklikkuse uued mehhanismid. oksiid. Med. Cell Longev 2017, 7150376. doi: 10.1155/2017/7150376

Zhang, R., Xu, M., Wang, Y., Xie, F., Zhang, G. ja Qin, X. (2017). Nrf2-tõotav terapeutiline sihtmärk insuldi oksüdatiivse stressi eest kaitsmiseks. Mol. Neurobiol. 54 (8), 6006–6017. doi: 10,1007/s12035-016-0111-0

Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B. jt. (2018). Cistanche deserticola veega ekstraheeritavate polüsahhariidide immunostimuleeriv toime taimse adjuvandina in vitro ja in vivo. PLoS One 13 (1), e0191356. doi: 10.1371/journal.pone.0191356

Zhang, Y., Wang, K., Chen, H., He, R., Cai, R., Li, J. jt. (2018). Isodon terricolous (D.Don) Kudo juurtest pärinevad põletikuvastased lignaanid ja fenüületanoidglükosiidid. Phytochemistry 153, 36–47. doi: 10.1016/ j.phytochem.2018.05.017

Zhang, K., Zhang, Q., Deng, J., Li, J., Li, J., Wen, L. jt. (2019). ALK5 signaalirada vahendab neurogeneesi ja funktsionaalset taastumist pärast ajuisheemiat / reperfusiooni rottidel Gadd45b kaudu. Cell Death Dis. 10 (5), 360. doi: 10,1038/s41419-019-1596-z

Huvide konflikt:

Autorid kinnitavad, et uuring viidi läbi ilma igasuguste äriliste või finantssuhete puudumisel, mida võiks tõlgendada potentsiaalse huvide konfliktina.

Käsitlev toimetaja teatas läbivaatamise ajal jagatud seotusest autoritega KZ ja YJ, kuigi muud koostööd ei tehtud.

Autoriõigus © 2020 Wang, Li, Tu, Chen, Zeng ja Jiang. See on avatud juurdepääsuga artikkel, mida levitatakse Creative Commonsi omistamislitsentsi (CC BY) tingimuste alusel. Kasutamine, levitamine või reprodutseerimine muudes foorumites on lubatud eeldusel, et tunnustatud akadeemilise praktika kohaselt on ära märgitud originaalautor(id) ja autoriõiguste omanik(id) ning tsiteeritakse selles ajakirjas avaldatud originaali. Nendele tingimustele mittevastav kasutamine, levitamine ega reprodutseerimine ei ole lubatud.

For more information:1950477648nn@gmail.com