Cistanche lehtede keemilised koostisosad
Apr 13, 2023
Kokkuvõte: Cistanchelehti on pikka aega kasutatud traditsioonilise meditsiininaravimiselisheemiline insult, stenokardiajahüpertensioonja tervisliku joogina jakosmeetika jaoksVananemisvastane. Selle uuringu eesmärk oli eraldada etanooliekstraktist võimalikult palju ühendeidbioloogiliselt aktiivsete ühendite tuvastamiseks. Antioksüdatiivne toimeEtüülatsetaadi kihi vähenemist hurma lehtede etanooliekstraktist demonstreeriti2,2-difenüül-1-pikrüülhüdrasüüli (DPPH) analüüs ja veebipõhine kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia-2,20 -kasiino-bis (3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape) (HPLC-ABTS) analüüs. Uus flavonoid,kaempferool-3-O- -D-2"-kumaroüülgalaktosiid (1) ja uus looduslik ühend kaempferool-3-O- -D-2"-feruloüülglükosiid (3) eraldati etüülatsetaadi kihist koos 25-ga eelnevalttuntud ühendid, sealhulgasneliteist flavonoidi, üks ionoon, kaks kumariini, seitse triterpenoidi,ja üks atsetofenoon. Spektromeetriliste ja spektroskoopiliste andmete tõlgendamine määras nende struktuurid. Kõiki isoleeritud ühendeid hinnati kiiresti veebipõhise meetodi abilHPLC-ABTSanalüüsja nendest ühendid4–8, 11, 13, 15ja16 selgelt näidanudantioksüdatiivne toime. Thenende ühendite kogus oli {{0}},3–0,65 protsenti ekstraktist.
Märksõnad:Diospyros kaki; hurma lehed; flavonoid; antioksüdant
1. Sissejuhatus
Diospyros kakiThunb. (hurma) kuulub Ebenaceae perekonda ja on laialt levinudlevitatakse Koreas, Hiinas ja Jaapanis. Selle puuvilju süüakse värskelt või kuivatatult, lehtedel agaon pikka aega kasutatud traditsioonilise ravimina isheemilise insuldi, stenokardia, hüpertensiooni,ateroskleroos ja nakkushaigused [1]. Lisaks on kasutatud selle lehtitervislike jookide ja kosmeetikatoodetena tänu nende vananemisvastastele omadustele ja võimeleaitab vältida kolesterooli ja melaniini kogunemist [1]. Hiljutised uuringud on näidanudet hurmalehtede ekstraktidel on lai valik bioloogilisi omadusi,sealhulgas radikaalide eemaldamine, neuroprotektsioon, tromboosi pärssimine, ateroskleroosivastane toime,ja allergiavastane [2–6]. Eelnev fütokeemiline uuring näitas, et mitmesugusedliigidflavonoididja terpenoidid on peamised koostisosad [7] ja mitmed tanniinid,Samuti teatati naftokinoonidest, kumariinidest, ionoonidest ja rasvhapetest [8–12]. Reaktiivsed hapniku liigid (ROS) on reaktiivsed molekulid, mida toodetakse bioloogilistes süsteemides,ja tasakaal ROS-i tekke ja eliminatsiooni vahel on normaalselt hästi kontrollitudraku füsioloogia [13]. Kuid ROS-i liigne tootmine põhjustab oksüdatiivseid kahjustusi,ja omakorda vananemine ja vanusega seotud haigused, sealhulgas vähk, diabeet ja Parkinsoni tõbihaigus [14]. Seega antioksüdantide, näiteks flavonoidide ja fenoolsete ühendite avastaminevõib olla paljutõotav strateegia nende haiguste raviks.
Osana meie pidevast projektist leida bioloogiliselt aktiivseid ühendeid [15],etanooli (EtOH) ekstrakti ja hurma lahustite vaheseinte antioksüdatiivne toimelehti hinnati 2,2-difenüül-1-pikrüülhüdrasüüli (DPPH) testi ja veebipõhise suure jõudlusegavedelikkromatograafia-2,20 -kasiino-bis (3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape)(HPLC-ABTS) analüüs. Huma lehtede fütokeemiline uuring viis isoleerimiseniühest uuest flavonoidist (1), üks uus looduslik ühend (3) ja25 varemtuntud ühendid. Struktuure iseloomustas spektroskoopiliste ja spektromeetriliste meetodite rakendamine. Kõik eraldatud ühendid skriiniti kiiresti nende suhtesantioksüdatiivne toime, kasutades veebipõhist HPLC-ABTS-i. Lisaks kvantitatiivne analüüskõik eraldatud ühendid viidi läbi käesolevas uuringus.
2. Tulemused ja arutelu
2.1. Hurma lehtede antioksüdatiivne toime
Hinnati hurma lehtede etanooli (EtOH) ekstrakti antioksüdatiivset toimetesialgseks sõelumiseks DPPH kaudu (joonis1A). 0.125 mg/mlekstrakt eemaldas ligikaudu 80 protsenti DPPH radikaalist, samas kui 0,025 mg/ml askorbiinhapethape moodustas 94 protsenti radikaalist. Online HPLC-ABTS test viidi läbi kiirestitagada nende tulemuste usaldusväärsus (joonis1D). Sisemiseks kasutati gallushapet ja Troloxistandarditele. Kromatogramm 734 nm juures (negatiivne piik) näitas, et ligikauduüheksal komponendil võib olla antioksüdatiivne toime. gallushape ja trolox (6-hüdroksü- 2,5,7,8-tetrametüülkromaan-2-karboksüülhapehape) kasutati sisestandarditena, et tagadatulemuste usaldusväärsus. Sellest järeldati, et enamik neist tippudest olid flflavonoidi derivaadidnagu flavonoidglükosiid ja flavanool, mis põhinevad teostatud dereplikatsioonianalüüsilühendite ultraviolettkiirguse (UV) ja massispektrite võrdlemisel avaldatugaandmeid. Biotestiga juhitud fraktsioneerimine viitas sellele, et need antioksüdatiivsed ühendid olidrohkesti etüülatsetaadi (EtOAc) kihis, samas kui vesi (H2O) kiht oli nõrktegevus (joonis1B,C).
Joonis 1. Hurma lehtede EtOH ekstrakti (A), EtOAc kihi (B) ja HO kihi (C) HhO kihi DPPH eemaldamise mõju: (D) EtOH ekstrakti ABTS-HPLC online kromatogramm.
2.2. Fütokeemiline uurimine
Nende antioksüdatiivsete ühendite tuvastamiseks kasutatakse erinevaid kromatograafilisi ja spektroskoopilisiviidi läbi meetodid isoleerimiseks ja struktuuri iseloomustamiseksühendid. Uus flflavonoid (1) ja uus looduslik ühend (3) saadi ettevõtteltetanooliekstrakti etüülatsetaadikiht koos 25 varem teatatud ühendiga,nimelt kaempferool-3-O- -2"-kumaroüülglükosiid (2) [16], ( pluss )-katehiin (4) [17], hüperosiid(5) [17], isokvertsitriin (6) [18], kvertsetiin-3-O- -2"-galloüülgalaktosiid (7) [19], kvertsetiin-3-O- -2"-galloüülglükosiid (8) [20], trifoliin (9) [18], astragaliin (10) [18], kaempferool-3-O- - 2"-galloüülgalaktosiid (11) [21], kaempferool-3-O- -arabinosiid (12) [22], kaempferool-3-O- - 2"-galloüülglükosiid (13) [23], kvertsetiin-3-O- -2"-kumaroüülglükosiid (14) [24], kvertsetiin(15) [15], kaempferool (16) [25], (6S,9S)-rososiid (17) [26], skopoletiin (18) [27], umbelliferoon(19) [28], 1-(2,4-dihüdroksü-6-metüülfenüül)etanoon (20) [29], barbinerviinhape (21) [30], diospüriinhape B (22) [7], rotungeenhape (23) [31], pomoolhape (24) [32], siaresinoolhape(25) [33], oleanoolhape (26) [25] ja ursoolhape (27) [25] kasutades spektroskoopilisi jaspektromeetrilised ja füüsikalised andmed võrreldes avaldatud andmetega ja ka õhukeste andmetegakihtkromatograafia (TLC) analüüs (joonised2 ja3). Nende hulgas on ühendid2, 16, 17, 19, 20ja24 esiteks isoleeritiD. kaki.
Ühend 1 saadi kollase pulbrina, mille molekulvalem määrati kõrge eraldusvõimega massispektromeetria (HRMS) andmete põhjal kui C3olO3. Spektris ilmnesid neeldumisribad lainepikkustel 207 ja 315 nm, mis näitab, et ühendil 1 oli flavonooli karkass. 'H tuumamagnetresonantsi (NMR) andmed (tabel 1, joonis S1) näitasid kumaroüülitud flavonoolglükosiidi tüüpilist mustrit, mis näitasid kahte AA'BB-tüüpi signaalide komplekti ({{10}}).{11 }} (2H, d, J= 8,5 Hz, H-2' ja H-6), 6,87 (2H, d, J{{20}} 0,5 HzH-3' ja H-5')) kaempferooli B ringis, samuti signaalid (0 7,45 (2H, d, J=8). 5 HzH-2 ja H{{3{{104}}}}", 6,81 (2H, d, J=8,5 Hz, H-3 ja H-5 protsenti) kumaroüülrühma aromaatses ringis. Kaks dublettsignaali (8H 7,65 (1H, d, J=15,5 Hz, H-7"") ja 6,35 Täheldati (1Hd, J=16.0 Hz, H-8"), mis näitab riigirühma trans-olefiinseid prootoneid. Lisaks anomeerne prootonisignaal (0H 5,57 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1) täheldati suhkrupiirkonnas, mis viitab B-konfiguratsiooniga tsüklilise suhkrurühma olemasolule. 13C ja moonutusteta võimendus polarisatsiooni abil edastavad NMR andmed (võimalik 1Joonis S2) näitas 30 resonantsi, mis koosnesid kahest trans-olefiinsest süsinikust, kümnest aromaatsest süsinikust ja kuuest glükosüülrühma süsinikust ning kümnest protoneerimata süsinikust, sealhulgas kahest karbonüülsüsinikust. Täpsemalt olid flavonool3-0-glükosiidile iseloomulikud signaalid keemilised nihked C-2, C-3 ja C-4 (8c 158,1, 134,9 ja 179,2). Lisaks karbonüülsüsiniku signaal C-1" (8c 168,7) ja kaks trans-olefiinset süsiniku signaali C-2" ja C-3"(6 146.9) , 115,2) olid tüüpilised kumaroüülrühma keemilised nihked. Anomeerne süsiniku signaal C-1(6C 100,4) ja muud glükosüülrühma signaalid vahemikust C-2" kuni C-6" ' (6c74,3, 73,4, 70,5, 77,4 ja 62,0). Need ühemõõtmelised (1D) NMR-andmed olid kattuvad kaempferool-3-0-B-2"-kumaroüülglükosiidi (2) andmetega. (16]. 13C NMR andmete hoolikas võrdlemine kahe ühendi vahel viitas siiski sellele, et ühendis 1 oli galaktoosi fragment, mida demonstreerisid ka tuumaOverhauseri võimendusspektroskoopia (NOESY) NMR andmed (joonis S6). Kuigi NOES korrelatsioon Ühendis 2 täheldati H-2 ja H-4, ühendis 1 nende prootonite vahel korrelatsiooni ei olnud. Üldiselt on 13C NMR ja NOESYNMR andmete tõlgendamine tõhus meetod glükosüülrühma tüübi määramiseks. . Galaktoosifragmendi asukoht leiti olevat C-3 vastavalt C-2ja C-4 allaväljanihkele, mida tõendab ka heteronukleaarne mitmiksideme korrelatsioon (HMBC vahel H{ {123}}" ja C-3 (joonis S5). Kuumaroüülrühma positsioon oli allavälja nihke (0 5,36 (1H, dd, J=10.0, 8,0 Hz, H{) põhjal C-2" {134}}")) ja HMBC korrelatsiooni H-2' ja C-1 vahel. Selle tulemusel määrati ühendi 1 struktuur kaempferool-3-0-B-2"-kumaroüülgalaktosiidina. Kuigi ühend 2 eraldati varem erinevatest allikatest, sealhulgas Ouercus suberist (16] ja Alliumporrumist (34),) ühend 1 eraldati ja struktuuriliselt iseloomustati esimest korda.
Ühend3 eraldati kollase pulbrina ja määrati molekulaarne valemnagu C31H28O14 HRMS-i andmeid analüüsides. UV-spekter näitas UV-kiirgustneeldumine lainepikkustel 210 ja 327 nm, tänu samale aglükoonile koos ühenditega1 ja2. The1H NMR andmed (tabel1, joonis S10) olid sarnased ühendi omadega2, kuid ühend3 sisaldas kumaroüülrühma asemel feruloüülrühma, mida tõendab an olemasolutäiendav metoksürühm (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Lisaks anomeerne prootonsignaal (δH 5.64 (1H, d, J {{0}},0 Hz, H-100 )) täheldati, mis näitab, et glükosüülsidemeoli- konfiguratsioonja allapoole nihutatud signaal (5,03 (1H, t,J = 8,5 Hz, H-200 )) oli näidatud suhkru piirkonnas, nagu ka ühendi puhul1. The13C-TMR andmed (tabel1, JoonisS11) näitas 31 resonantsi, mis koosnesid kahesttrans-olefifiinsed süsinikud, kümme kvaternaarset süsinikku,kümme aromaatset süsinikku, kuus glükosüülrühma süsinikku ja üks metoksüsüsinik ning kümme mitteprotoneeritudsüsinikud, sealhulgas kaks karbonüülsüsinikku, mis vastavad kempferoolile, feruloüülile,ja glükoosirühmad. Eelkõige süsiniku signaalid C-200 C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 ja 62.5) viitasid glükoosiosa olemasolule. Glükoosiosa asukohadja feruloüülrühm määrati pikamaa HMBC korrelatsioonide alusel H-100 jaC-3 (δC 134,8) ja H-200 ja C-1000 (δC 168.4) (joonis S14). Täiendaja positsioonmetoksürühm määrati 3 vahelise võtmekorrelatsiooni järgi000 -OCH3 ja C-3000 (δC 149,4). Ülaltoodud tulemused viitasid ühendi struktuurile3 kaempferoolina-3-O- - 2"-feruloüülglükosiid. Meie teadmiste kohaselt on ühend3 teatati ainult kui a3- hüdrolüüsi saadusO- -(2-O-feruloüül)-glükosüül-7,40 -di-O- -glükosüülkempferool, isoleeritudAllium tuberosum[35]. Seetõttu on struktuur3 selgus kui uuslooduslik ühend.
Ühend11 eraldati kollase pulbrina. The1H NMR andmed (joonis S19)kuvas AA komplekti0 BB0 -tüüpi signaalid (δH 8.06 (2H, d, J {{0}},0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}},0 Hz, H-30, H-50 )) kaempferooli B ringis ja singlettsignaal atδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) galloüülrühma aromaatses piirkonnas, mis on iseloomulik signaaleraldatud flavonoolist. Anomeerne prootoni signaal (δH 5.78 (1H, d, J {{0}},0 Hz, H-100 )) näitas, et glükosüülside oli a- konfiguratsioon. Lisaks allavälinihutatud prootoni signaal (5,27 (1H, t,J = 9,5 Hz, H-200 )) soovitas galloüülrühmaoli seotud C-2 hüdroksüülrühmaga00 sest see nihe võib olla tingitudanisotroopne mõjuO-galloüülrühm [21]. The13C-TMR andmed (joonis S20)näitas 26 resonantsi, mis näitab eraldatud flavonoolglükosiidi. Süsiniku signaalidalates C-200 C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 ja 60.1) viitasid galaktoosi olemasoluleosa. Seetõttu on ühendi struktuur11 kinnitati kui kaempferool-3-O- -200 - galloüülgalaktosiid. Kuigi ühend11 oli varem erinevatest allikatest eraldatud,kaasa arvatudD. kaki[21,36], ainult1H NMR ja MS andmed on varem teatatud. Seegaa13C NMR andmed esitati selles uuringus esimest korda
2.3. Eraldatud ühendite antioksüdatiivne toime
Kõiki eraldatud ühendeid hinnati nende antioksüdatiivse toime suhtes, kasutades kiiret sisselülitamistrea HPLC-ABTS analüüs, et teha kindlaks, millised ühendid aitasid kaasa antioksüdandilehurma lehtede mõju. Ühendid4–8, 11, 13, 15ja16 näitas tugevat antioksüdantset toimetidatiivsed tegevused (joonis4). Enamik neist ühenditest olid kaempferool ja kvertsetiintuletised, kuid mõned tuletised (1–3, 9, 10, 12ja14) tegevust ei näidanud. Thestruktuuri ja aktiivsuse suhe ei olnud täielikult kindlaks määratud, kuid see ilmnes osaliselt. sisseeelkõige kvertsetiin ja kaempferool galloüülrühmadega (7, 8, 11ja13) leitineil on tugev toime, kuid need, millel on kumaroüül- või feruloüülrühmad (1–3 ja16) ei teinudnäidata mis tahes tegevust.
Joonis 4.Eraldatud ühendite radikaali eemaldav toime (4–8, 11, 13, 15ja16) hinnati veebisHPLC-ABTS test.
2.4. Eraldatud ühendite kvantitatiivne analüüs
Kõigi eraldatud ühendite kvantitatiivne analüüs EtOAc-s lahustuvas ekstraktisviidi läbi, et kinnitada, et hurma lehtedel võib olla antioksüdatiivne toimepõhjustatud nendest aktiivsetest ühenditest. Spetsiifiline HPLC meetod koos dioodide massiivi tuvastamisega jasamaaegseks määramiseks töötati välja aurustuva valguse hajumise detektor27 ühendist. Kõikide isoleeritud triterpenoidide sisaldus oli ligikaudu 5,9 protsentiekstrakt ja neist siaresinoolhappe ekstrakt (25), oleanoolhape (26) ja ursolichape (27) moodustasid märkimisväärse osa, nagu on kirjeldatud varasemates uuringutes [7]. Theflavonoidide sisaldus oli ligikaudu 5,4 protsenti ja neist toimeainete sisaldusolid 3,2 protsenti (tabel2). Eelkõige kaempferooli sisu-3-O- -200 -galloüülgalaktosiid(9), kaempferool-3-O- -2"-galloüülglükosiid (10), isokvertsitriin (13) ja kvertsetiin-3-O- -2"- galloüülglükosiid (15) olid rohkem kui 0,3 protsenti . Analüütilist meetodit kontrolliti, kasutades alihtne valideerimismenetlus, et tagada meetodi asjakohasus, mis osutus piisavaksspetsiifilisus, lineaarsus, täpsus ja täpsus.
Küsi lisa:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp pluss 86 15292862950
