Tongluo Digui keetmine ravib diabeetiliste rottide neerukahjustusi, soodustades podotsüütide autofagiat

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zining, XING Yufeng, PANG Xinxin

Abstraktne

EESMÄRK:

Uurida Tongluo Digui keetmise mõju neerukahjustusele ja streptozototsiini poolt indutseeritud podotsüütide autofagiale diabeetilistel rottidel.

MEETODID:

Isased Sprague-Dawley rotid jagati juhuslikult kuue rühma: normaalsed, mudel, Tongluo Digui keetmine (suur, keskmine ja väike annus) ja valsartaan. Streptozototsiini süstiti intraperitoneaalselt, et korrata diabeetilise loommudelit. 8 nädala pärast hinnati proteinuuriat, et luua diabeetilise nefropaatia mudel. Ravi manustati iga päev intragastrilise tee kaudu. 16 nädalat pärast sondimist määrasime 24-tunnise uriinivalgu kontsentratsiooni, veresuhkru, seerumi kreatiniini ja uurea lämmastiku kontsentratsiooni. Seejärel rotid surmati, neerud koguti ja värviti perioodilise happe-Schiffiga, et hinnata glomerulite, sealhulgas glomerulaarsete podotsüütide patoloogilisi muutusi ülekandeelektronmikroskoopia abil. Nefriini, podotsiini, p62, bekliin-1, LC3Ⅱ/Ⅰ ja p-mTOR/mTOR valgu ekspressiooni määramiseks neerukudedes kasutati Western blot analüüsi.

TULEMUSED:

Võrreldes mudelirühmaga seostati Tongluo Digui keetmist 24-tunnise uriinivalgu kontsentratsiooni, vere glükoosisisalduse, hemoglobiini A1c, seerumi kreatiniini, uurea lämmastiku kontsentratsiooni, seerumi üldvalgu ja albumiini vähenemisega. Samal ajal vähenes mesangiaalne mesenteriaalne laienemine ja jalaprotsesside sulandumine, glomerulaarne basaalmembraan ei olnud oluliselt paksenenud ning suurenes podotsüütide arv ja autofagosoomide arv podotsüütides. Lisaks oli nefriini, podotsiini, LC3Ⅱ ja beclin-1 valgu ekspressioon neerukoes ülesreguleeritud, samas kui p62 valgu ekspressioon oli allareguleeritud ja mTOR-i fosforüülimine inhibeeritud.

KOKKUVÕTE:

Tongluo Digui keetmine võib pärssida diabeetilise nefropaatia progresseerumist, inhibeerides mTOR-i fosforüülimist, suurendades seeläbi autofagiat podotsüütide kaitsmiseks ja proteinuuria vähendamiseks.

Märksõnad:diabeetilised nefropaatiad; autofagia; podotsüütide; Tongluo Digui keetmine

cistanche varre eelisedjaoksneerufunktsioon

SISSEJUHATUS

Diabeetiline nefropaatia (DN) on üks diabeedi rasketest mikrovaskulaarsetest tüsistustest, mille puhul 30 protsenti -40 protsenti diabeediga patsientidest põeb neeruhaigust. Diabeedi esinemissageduse suurenemisega on DN-st saanud kogu maailmas lõppstaadiumis neeruhaiguse peamine põhjus.1 See on raske majanduslik koormus nii peredele kui ka ühiskonnale.

Podotsüütide kahjustus on DN progresseerumise oluline põhjus. Lõplikult diferentseerunud rakuna on autofagial oluline roll podotsüütide füsioloogilise funktsiooni säilitamisel.2,3 Normaalses füsioloogilises seisundis on podotsüütide sees suur autofagia, mis eemaldab kahjustatud valgud ja organellid.4 Diabeedihaigetel aga podotsüütide autofagia on inhibeeritud, mis viitab sellele, et podotsüütide autofagia mängib olulist rolli DN patogeneesis.5 DN kuulub traditsioonilises hiina meditsiinis kategooriatesse "Xiao Ke", "Guan Ge" ja "ödeem". Traditsioonilise Hiina meditsiini teooria on, et vere staasi jaYin puuduson DN-i kõige olulisemad põhjused.6 Seetõttu peaks DN-i ravi soodustama vereringet ja toitma yini ning selleks loodi Tongluo Digui keetmine. Varem leidsime, et Tongluo Digui keetmisel oli DN-is kasulik raviefekt. Selles uuringus püüdsime kasutada streptozototsiini (STZ) indutseeritud 1. tüüpi DN roti mudelit, et hinnata Tongluo Digui keetmise mõju neerukahjustusele, autofagiale ja mTOR signaalirajale. Samuti uurisime Tongluo Digui keetmise aluseks olevat molekulaarset mehhanismi DN-i progresseerumise edasilükkamisel ja esitasime tõendeid DN-i kliinilise ennetamise ja ravi kohta.

MATERJALID JA MEETODID

Loomad

Spetsiifilised patogeenivabad (SPF) Sprague-Dawley rotid [n=60, isased, (150 ± 10) g; kvalifikatsioonitunnistuse number: SCXK (Yu) 2017-0001] osteti Henani katseloomade keskusest (Zhengzhou, Hiina). Standardne valgustsükkel (14 tundi valgust, 10 tundi öö), sisetemperatuur (23 ± 2) kraadi, niiskus (40 protsenti -50 protsenti), pidamist (kolm looma puuri kohta) ja söötmist (steriliseeritud sööt ja joogivett) kasutati. Katse viidi lõpule Henani traditsioonilise hiina meditsiini haigla (Zhengzhou, Hiina) rakukujutise keskuse laboris. Kõik katsed viidi läbi vastavalt riiklike tervishoiuinstituutide avaldatud laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhendile.

Narkootikumid

Valsartaani (Val) kapslid osteti ettevõttelt Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b, Peking, Hiina). Tongluo Digui keetmine koosneb Shuichi (Hirudo) 12 g, Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuang (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqi (Radix Astragali Perparata) 20 g, Danggui (Radix Zeomazhi) Somaxie (Radix Angelicae)30R Alismatis) 10 g, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 g, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 g. Hiina ravimtaimed osteti Henani traditsioonilise hiina meditsiini haiglast (Zhengzhou, Hiina).

Eksperimentaalne disain

Rotid jagati juhuslikult kuueks rühmaks, millest igaüks koosnes 10 rotist: kontrollrühm (Ctrl), DN-mudelrühm (STZ), DN-mudel Val-ravirühmaga (Val), DN-mudel Tongluo Digui keetmise suure annusega ravirühmaga (HTL). , DN-mudel Tongluo Digui keetmise keskmise annuse ravirühmaga (MTL) ja DN-mudel Tongluo Digui keetmise väikese annuse ravirühmaga (LTL). Kuus rotirühma surmati 16 nädalat pärast sondi ja neerude kogumist.

Val (10 mg · kg–1 · d–1 ) ja Tongluo Digui keetmist kolmes erinevas annuses manustati sondiga üks kord päevas 16 nädala jooksul. Manustatud annused põhinesid ravimite annuste teisendusvõrrandil loomade ja inimeste vahel. Roti annus (mg/kg)=täiskasvanud inimese annus (mg/kg) × teisendustegur (6,25). Tongluo Digui keetmise suurte, keskmiste ja väikeste annustega rühmadele manustati maosondiga vastavalt 5,4, 2,7 ja 1,35 g·kg – 1·d–1. Rotte kaaluti kord nädalas. 24-h uriin koguti metaboolsete puuride abil 0, 12 ja 24 nädala lõpus. Pärast ravi lõppu (24. nädalal) anesteseeriti rotid kloraalhüdraadi subkutaanse süstiga ning neeru- ja verekoeproovid koguti ja neid säilitati -80 kraadi juures. Rottidel oli vaba juurdepääs normaalsele laboriloomade toidule ja puhtale veele (välja arvatud allpool kirjeldatud juhtudel).

cistanche taim

DN mudeli loomine

STZ-d (Sigma, St. Louis, MO, USA) kasutati diabeedi esilekutsumiseks, nagu eelnevalt kirjeldatud.7 Kõigil 6 0 rotil oli 12 tundi enne katseid piiratud juurdepääs veele. Neist 50 rotile manustati tsitraatpuhvris (0,1 mol/L, pH 4,5) lahustatud STZ-d 60 mg/kg ühekordse intraperitoneaalse süstina. Diabeet kinnitati vere glükoosikontsentratsiooni mõõtmisega 72 tundi pärast STZ süstimist. Loomi, kelle glükoosikontsentratsioon oli 16,7 mmol/l või suurem kolmel järjestikusel päeval, loeti diabeetikuteks. 8 nädala pärast paigutati rotid eraldi metaboolsetesse puuridesse ja uriini koguti 24 tunni jooksul uriini mikroalbumiini (AÜE) mõõtmiseks. DN-mudel kinnitati, kui saadi AÜE väärtus, mis on suurem või võrdne 30 mg/24 h.

Biokeemilised näitajad

Loomade neerufunktsiooni hindamiseks kasutati seerumi ja uriinianalüüse. Roti uriini hinnati metaboolse puuri abil. Roti vereproovid saadi sabalõike meetodil.8 Seerumi- ja uriiniproovid külmutati kuni kasutamiseni -80 kraadi juures. Seerumi kreatiniini, vere uurea lämmastiku, albumiini ja uriini valgu kontsentratsiooni mõõdeti radioimmuunanalüüsiga. Hemoglobiini A1c (HbA1c), C-peptiidi ja insuliini taset mõõdeti HbA1c ELISA komplekti (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, USA), C-peptiid Elisa komplekti (Kainu Bio Ltd., Peking, Hiina) ja insuliini abil. Elisa komplekt (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, USA), järgides vastavalt tootja juhiseid. Kusihappe, seerumi üldvalgu (TP), albumiini (ALB), alaniinaminotransferaasi (ALT) ja aspartaataminotransferaasi (AST) sisaldus rottidel määrati automaatse biokeemilise analüsaatoriga.

Histopatoloogiline uuring

Formaliiniga fikseeritud neerukude sisestati parafiini, viilutati 3-4 μm paksusteks osadeks ja värviti perioodilise happe-Schiffiga (PAS). Neerukoe morfoloogilisi muutusi, sealhulgas mesangiaalsete rakkude proliferatsiooni, rakkude infiltratsiooni ja mesangiaalse maatriksi muutusi, uuriti iga värvitud lõigu puhul valgusmikroskoopia abil (NIKON D3100) (× 400).

Transmissioonelektronmikroskoop

TEM-i kasutati podotsüütide ja mesangiaalsete rakkude morfoloogia jälgimiseks neerukoes. Värsked neerukuded jaotati plokkideks (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Western blot analüüs

Kogu valk ekstraheeriti neerukoest valgu lüüsipuhvriga (Solarbio Biotech, Peking, Hiina). Valgu kontsentratsiooni supernatandis testiti BCA analüüsikomplektiga (Solarbio Biotech, Peking, Hiina, PC{21}}020). 40 ug valku sisaldavad proovid eraldati 12-protsendilise SDS-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga (SDS PAGE) (Applygen, Peking, Hiina, B1004) ja kanti seejärel nitrotselluloosfiltri membraanile (Solar bio Biotech, Peking, Hiina). Pärast 5-protsendilise lõssi blokeerimist toatemperatuuril 2 tundi, -aktiin (Proteintech, artikli number: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, toote number: ab48394), P62 (Proteintech, toote number: 18420-1-AP), beclin-1 (valgutehnoloogia, toote number: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, toote number: #5536), mTOR (CST, toote number: # 2983), lisati nefriin (Abcam, toote number: ab58968) ja podotsiin (igaüks valk, toote number: 20384 -1-AP) ja inkubeeriti 4 kraadi juures üleöö. Seejärel pesti seda segu viis korda TBS-iga pluss 0,05 protsenti Tween-20 (Solar bio Biotech, Peking, Hiina) (TBS-T) 5 minutit enne sekundaarse antikeha (1∶2000) lisamist enne toas inkubeerimist. temperatuuril 1 tund, pestes viis korda TBST-ga 5 minutit, allutades värvi arenemisele täiustatud kemoluminestsentsiga (ECL, Millipore, Billerica, MA, USA) ja eksponeerides ImageJ tarkvara riba halltoonide analüüsiks.

Statistiline analüüs

Andmeid analüüsiti SPSS-tarkvara abil (IBM SPSS Statistics for Windows, versioon 23.0. 2014, Armonk, NY, USA). Rühmadevahelisi erinevusi testiti ühesuunalise dispersioonanalüüsi abil, millele järgnes Tukey test. Andmed väljendati kui keskmine ± standardhälve. P < 0,05="" peeti="">

luteoliin

TULEMUSED

Tongluo Digui keetmise kaitsev toime DN-rottide neerudele

Biokeemilisi näitajaid, nagu vere glükoosisisaldus, glükeeritud hemoglobiin, seerumi kreatiniin, vere uurea lämmastiku kontsentratsioon ja {{0}}tunnine uriini valgu kontsentratsioon, mõõdeti 16 nädalat pärast sondimist. (Tabel 1). Tulemused näitasid, et võrreldes normaalrühmaga olid vere glükoosisisaldus, glükeeritud hemoglobiin, seerumi kreatiniin, vere uurea lämmastiku kontsentratsioon, 24-tunnise uriini valgu kontsentratsioon, TP ja ALB mudelrühmas oluliselt kõrgemad (P < {{="" 7}}.01),="" mis="" näitab,="" et="" mudelrühmal="" oli="" neerufunktsiooni="" kahjustus.="" val="" rühmas="" vähenes="" nii="" seerumi="" kreatiniini="" kontsentratsioon="" kui="" ka="" 24="" tunni="" uriinivalgu="" kontsentratsioon="" (p="">< 0,05).="" lisaks="" täheldati="" tongluo="" digui="" keetmise="" suurte="" annuste="" rühmas="" vere="" glükoosisisalduse,="" hba1c,="" seerumi="" kreatiniini="" ja="" uurea="" lämmastiku="" kontsentratsiooni="" olulist="" vähenemist,="" samuti="" 24-tunnist="" uriinieritust="" (p="">< 0,01).="" need="" toimed="" sõltusid="" annusest.="" kusihappe,="" insuliini,="" alt="" ja="" ast="" tasemetes="" ei="" esinenud="" olulisi="" erinevusi="" igas="" rotirühmas.="" kokkuvõttes="" näitasid="" meie="" leiud,="" et="" tongluo="" digui="" keetmine="" leevendas="" dn-rottidel="" neerukahjustusi="" ja="" parandas="" neerufunktsiooni="" annusest="" sõltuval="">

Muutusi DN-rottide neerupatoloogias hinnati pärast Tongluo Digui keetmisega töötlemist PAS-värvimisega (joonis 1). Võrreldes normaalse rühmaga täheldati glomerulaarsete mesangiaalsete rakkude ja mesangiaalse strooma olulist suurenemist koos mesangiaalse piirkonna laienemisega mudelrühmas. Glomerulaarne mesangiaalne piirkond suurenes kõigil kolmel Tongluo Digui keetmise annusetasemel ja Val rühmas. Lisaks olid need neli ravirühma vähendanud mesangiaalse maatriksi laiust võrreldes mudelrühmaga ja glomerulaarne mesangiaalne piirkond suure annuse Tongluo Digui keetmise rühmas oli väiksem kui Val rühmas. Need leiud näitasid, et Tongluo Digui keetmine lükkas edasi DN glomerulaarsete kahjustuste progresseerumist.

Tongluo Digui keetmise mõju glomerulaarsete podotsüütide vigastustele DN-rottidel

Podotsüüdi markervalkude nefriini ja podotsiini ekspressiooni määramiseks kasutati Western blot analüüsi (joonis 2). Võrreldes normaalse rühmaga oli mõlema valgu ekspressioon mudelrühmas oluliselt vähenenud (P < 0.01),="" mis="" viitab="" podotsüütide="" kahjustusele.="" lisaks="" oli="" nefriini="" ja="" podotsiini="" ekspressioon="" tongluo="" digui="" keetmisrühmades="" võrreldes="" mudelrühmaga="" ülesreguleeritud="" (p=""><0,>

Tongluo Digui keetmise mõju glomerulaarse podotsüütide autofagiale DN-rottidel

TEM-is täheldati muutusi autofagosoomides glomerulaarsetes podotsüütides (joonis 3). Tulemused näitasid autofagosoome normaalse rühma glomerulaarsetes podotsüütides. Mudelrühmas puudusid podotsüütide autofagosoomid ja kadusid ka podotsüütide jalaprotsessid. Kolmes Tongluo Digui keetmise annuserühmas ja valsartaani rühmas täheldasime glomerulaarsete podotsüütide autofagosoome, mis viitasid sellele, et Tongluo Digui keetmine suurendas DN-rottidel podotsüütide autofagiat. Western blot meetodit kasutati autofagiaga seotud valkude P62, beclin-1 ja LC3 Ⅱ ekspressiooni tuvastamiseks (joonis 4). Võrreldes tavarühmaga oli beclin-1 ja LC3Ⅱ ekspressioon mudelrühmas oluliselt vähenenud (P < 0.01),="" samas="" kui="" p62="" ekspressioon="" oli="" oluliselt="" suurenenud="" (p="">< 0.01).="" need="" leiud="" näitasid,="" et="" autofagia="" oli="" dn-rottidel="" nõrgenenud.="" võrreldes="" mudelrühmaga="" oli="" tongluo="" digui="" keetmise="" suurte="" annuste="" rühmas="" ülesreguleeritud="" bekliin-1="" ja="" lc3ⅱ="" ekspressioon="" (p="">< 0,05)="" koos="" p62="" ekspressiooniga.="" need="" tulemused="" näitasid="" koos,="" et="" tongluo="" digui="" keetmise="" neerude="" kaitsev="" toime="" dn-ga="" rottidel="" võib="" olla="" seotud="" suurenenud="" autofagiaga="">

Tongluo Digui keetmine suurendab glomerulaarse podotsüütide autofagiat DN-rottidel, inhibeerides mTOR-i fosforüülimist

MTOR-i fosforüülimise inhibeerimine suurendab autofagiat (joonis 5). Võrreldes normaalse rühmaga oli mTOR-i fosforüülimine mudelrühmas tõhustatud (P < 0.01),="" samas="" kui="" tongluo="" digui="" keetmisrühmades="" oli="" see="" pärsitud="" (p="">< 0,05).="" see="" viitas="" sellele,="" et="" tongluo="" digui="" keetmine="" suurendas="" podotsüütide="" autofagiat,="" inhibeerides="" mtor="" signaaliraja="" aktiveerimist.="" varasemad="" uuringud="" on="" näidanud,="" et="" autofagia="" kaitseb="" podotsüüte="" ja="" parandab="">

ARUTELU

DN-i iseloomustavad peamiselt sellised nähud ja sümptomid nagu uriinivalgu olemasolu, kõrge veresuhkru tase, polüdipsia, polüfaagia ja polüuuria. Sümptomid on sarnased traditsioonilise hiina meditsiini omadega, nagu "Xiao Ke", "Guan Ge" ja "ödeem". DN esinemine ja areng on lahutamatud yini puudulikkuse ja vere staasi patoloogilisest alusest.6 Yini puudulikkuse ja vere staasi tekkega kahjustuvad neerud järk-järgult, millega kaasneb uriini valgu kadu, mis viib veelgi mikrotrombide moodustumiseni ja neeru fibroos. DN-patsiendid põevad paratamatult lõppstaadiumis neeruhaigust.11

Tongluo Digui keetmise koostas kuulus Hiina traditsioonilise meditsiini arst Zhang Binghou ja tema aastatepikkuse DN.12 ravikogemuse põhjal koosneb 13 Tougluo Digui keetmine Shuichi (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Nende hulgas on Shuizhi (Hirudo) ja Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) monarhi ravimid, mis meie arvates mängivad rolli Yini toitmisel ja DN-i vereringe edendamisel. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) parandab organismi immuunsust ja sekretoorset seisundit ning aeglustab vananemist.14 Shuizhil (Hirudo) on muude farmakoloogiliste toimete hulgas antikoagulantne, kasvajavastane, põletikuvastane ja fibroosivastane toime ning see võib parandada neerude tööd. patoloogilised muutused DN-s, et oluliselt vähendada seerumi kreatiniini ja vere uurea lämmastiku kontsentratsiooni ning vähendada valgu eritumist uriiniga.15,16 DN-i korral on podotsüütide kahjustusel oluline roll glomerulaarmembraani filtratsioonibarjääris ja proteinuuria tekkes.17 Nefriin ja podotsiin on mõlemad podotsüütide pinnal olevad pooride membraani valgud. Need kaks valku interakteeruvad, moodustades kompleksi, mis mängib võtmerolli glomerulaarfiltratsiooni barjääri toimimises.18 Valguekspressiooni ebanormaalne jaotumine põhjustab proteinuuria erineva astme.19 Selles uuringus ilmnes STZ-indutseeritud 1. tüüpi DN rottidel tõus. uriini valgu eritumisel ja neerufunktsiooni kahjustusel 24 tunni jooksul. Veelgi enam, PAS-i värvimine näitas, et mesangiaalsete rakkude ja mesangiaalse maatriksi arv suurenes mudelirühmas, mis näitab, et mudel loodi edukalt. Tongluo Digui keetmise erinevad annused vähendasid 24-tunnist uriinivalgu ja seerumi kreatiniini kontsentratsiooni ning parandasid DN-rottide neerupatoloogiat vähenenud mesangiaalsete rakkude ja maatriksiga. Western blot analüüs näitas, et nefriini ja podotsiini ekspressioon Tongluo Digui keetmisrühmas oli suurem kui mudelrühmas, mis näitab, et see valem aeglustab DN-i progresseerumist rottidel, kaitstes podotsüüte.

Autofagia on rakkudes lüsosomaalsete valkude lagunemise rada ja sellel on oluline roll kahjustatud või üleekspresseeritud valkude kliirensis, mis säilitavad raku homöostaasi ja terviklikkuse.20 Autofagia on diabeedi korral podotsüütide lüsosomaalse homöostaasi lahutamatu osa ning tõhustatud autofagia võib vähendada podotsüütide vigastusi. .5 Pärast autofagiaga seotud geeni Atg5 spetsiifilist väljatõrjumist podotsüütides ilmnes hiirtel järk-järgult üldlevinud valkude agregatsioon, mitokondriaalsed kahjustused ja autofagia aktiivsus podotsüütides; podotsüüdid said kahjustatud ning jalaprotsessid kadusid ja ühinesid, mis viitas autofagia säilimisele. Normaalse podotsüütide funktsiooni säilitamine on oluline.21,22 Selles uuringus uurisime TEM-i ja Western blot analüüsi abil Tongluo Digui keetmise mõju autofagiale glomerulaarsetes podotsüütides. TEM näitas, et podotsüütide autofagosoomide arv igas Tongluo Digui keetmisannuse rühmas suurenes võrreldes mudelrühmaga. Lisaks näitas Western blot autofagiaga seotud valkude LC3, beclin-1 ja p62 ekspressiooni. Võrreldes mudelrühmaga suurenes LC3Ⅱ ja beclin{11}} ekspressioon märkimisväärselt Tongluo Digui keetmise rühmas, samas kui p62 valgu ekspressioon oli oluliselt vähenenud. Need leiud näitasid, et Tongluo Digui keetmine suurendas autofagia taset glomerulaarsetes podotsüütides.

Rapamütsiini sihtvalk (mTOR) on üks peamisi autofagia regulaatoreid.23 See on laialt levinud neerukoores ja medullas ning mängib rolli DN podotsüütide kahjustuse tekkes.24,25 Kõrge glükoosisisalduse ja stressi korral mTOR aktiveeritakse ja fosforüülitakse, mis viib selle allavoolu sihtmärkide fosforüülimiseni ja autofagia pärssimiseni. Liu jt 26 näitasid, et mTOR-i inhibiitor rapamütsiin seondus spetsiifiliselt mTOR-kinaasiga ja inhibeeris mTOR-i aktiivsust, suurendas podotsüütide autofagiat ja kaitses neerufunktsiooni. Leidsime, et mTOR-i fosforüülimine oli mudelirühmas tõhustatud ja Tongluo Digui keetmine pärssis seda protsessi, mis viitas sellele, et Tongluo Digui keetmine suurendas podotsüütides autofagiat ja võib pärssida mTOR-i signaaliraja aktiveerimist.

Kokkuvõttes võib Tongluo Digui keetmine pärssida podotsüütides autofagiat, kaitsta glomerulaarseid podotsüüte, säilitada glomerulaarfiltratsiooni membraani terviklikkust, vähendada 24-tunnist uriinivalgu eritumist ja aeglustada DN-i progresseerumist, pärssides mTOR-i aktivatsiooni. Need leiud annavad ülevaate Tongluo Digui keetmise kaitsvast mõjust DN-is, kuid selle aluseks olev mehhanism tuleb veel välja selgitada.

mis on cistancheneeruhaiguste korral

VIITED
1 Tesch GH. Diabeetiline nefropaatia – kas see on immuunhäire? Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS jt. Podotsüütide bioloogia diabeetilise nefropaatia korral. Kidney Int Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Podocyte autofagia: potentsiaalne terapeutiline sihtmärk diabeetilise nefropaatia progresseerumise vältimiseks. J Diabetes Res 2017; 2017(4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Autofagia: rakkude ja kudede uuendamine. Cell 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S jt. Kahjustatud podotsüütide autofagia süvendab diabeetilise nefropaatia proteinuuriat. Diabeet 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. Uuring diabeetilise nefropaatia TCM-i sündroomi jaotusseaduse kohta. Pekingi Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. Alloksaani ja streptosototsiini toimemehhanism roti kõhunäärme B-rakkudes. Physiol Res 2001; 50(6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Qingre Lishi Yisheni keetmise efektiivsus immunoglobuliini A nefropaatia glomerulaarse fibroosi korral roti mudelis. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. mTOR podotsüütide funktsioonis: kas rapamütsiin on diabeetilise nefropaatia jaoks hea? Lahtritsükkel 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C jt. Autofagia mõjutab glomerulaarhaiguste vastuvõtlikkust ja säilitab vananevatel hiirtel podotsüütide homöostaasi. J Clin Invest 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP jt. Taimse traditsioonilise hiina meditsiini ülevaade diabeetilise nefropaatia raviks. J Diabetes Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y jt. Zhang Binghou toitva neeru Yin meetodi rakendamine kroonilise neeruhaiguse ravis. Peking Zhong Yi Yao 2016; 35(4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Professor Zhang Binghou rakenduskogemuse tutvustus. Xin Zhong Yi 2012; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. Küsitlus kilpkonnakarbi "Ziyin Bushen" farmakodünaamika kohta. Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. Leechi ja selle ekstraktide uurimistöö edusammud diabeetilise nefropaatia ravis. Guang Ming Zhong Yi 2019; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. Leechi ja selle toimeainete uurimistöö edusammud diabeetilise nefropaatia ravisZhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. Diabeetilise nefropaatia podotsüütide kahanemise mehhanismi uurimise edenemine. J Diabetes Res 2017; 2017: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nephrin signalisatsioon podotsüütides: uuendatud vaade signaali reguleerimisest pilu diafragmas ja kaugemalgi. Front Endocrinol (Lausanne) 2018; 9: 302.
19 Jaakko P, Karl T. Glomerulaarfiltratsiooni barjääri molekulaarne koostis. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Autofagia võitleb haigustega raku iseseedimise kaudu. Loodus 2008; 451 (7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C jt. Endoteelirakk
ja podotsüütide autofagia kaitsevad sünergistlikult diabeedist põhjustatud glomeruloskleroosi eest. Autofagia 2015; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Podotsüüdi kahjustus diabeetilise nefropaatia korral: angiotensiin Ⅱ-sõltuva TRPC kanalite aktivatsiooni tagajärjed. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. mTORC1 kui autofagia peamine värav. Esseed Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: autofagia reguleerimise farmakoloogiline sihtmärk. J Clin Invest 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z jt. Triptoliid taastab autofagia, et leevendada diabeetilist neerufibroosi läbi miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR raja. Mol Ther Nucleic Acids 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. Rapamütsiini kaitsev toime raku autofagiale diabeetilise nefropaatiaga rottide neerukudedes mTORS6K1-LC3 Ⅱ signaaliraja kaudu. Ren Fail 2018; 40(1): 492-497.