Taksifoliini toime suurte annuste tsisplatiini poolt põhjustatud oksüdatiivsele maksakahjustusele rottidel

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

Abstraktne

Taust. tsisplatiin on mittespetsiifiline plaatinapõhine (derivaat) kemoterapeutiline aine, mis põhjustab vabade radikaalide aktiivsuse suurenemist lieris. Taksifoliini antioksüdantset toimet on demonstreeritud varem ja on teatatud, et taksifoliin inhibeerib eksperimentaalsetes uuringutes hüdroksüradikaali. Eesmärgid. Praeguses kirjanduses ei leitud ühtegi uuringut, mis uuriks taksifoliini kaitsvat toimet tsisplatiinist põhjustatud oksüdatiivse maksakahjustuse korral. Meie eesmärk oli eksperimentaalses uuringus määrata taksifoliini kaitsev toime tsisplatiini poolt põhjustatud hepatotoksilisusele.

Materjalid ja meetodid. Kokku jaotati 18 albiino Wistari isasrotti 3 rühma: terved kontrollid (HC rühm), 5 mg/kg tsisplatiini manustatuna 8 päeva jooksul (CIS rühm) ja 50 mg/kg taksifoliini pluss 5 mg/kg tsisplatiini 8 päeva jooksul (TCG). Ekstraheeritud maksakoes mõõdeti malondialdehüüdi (MDA), üldglutatiooni (TSH), oksüdeerija üldsisalduse (OS) ja antioksüdantide kogumahu (TAS) tasemeid. Tulemused. Maksaliha MDA ja TOS tasemed olid SRÜ rühmas oluliselt kõrgemad. kontrasti ja TAS-i tasemed olid CS-rühmas oluliselt madalamad, kui manustati ainult tsisplatiini (lk<0.00), compared="" to="" other="" groups.="" in="" the="" tcg="" group,="" administered="" cisplatin="" +="" taxifolin,="" mda="" and="" tos="" levels="" were="" significantly="" lower,="" whereas="" tsh="" and="" tas="" levels="" were="" significantly="" higher="" than="" in="" the="" cis="" group=""><>

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

Tingimused. Need tulemused viitavad sellele, et taksifoliin võib olla kasulik tsisplatiiniga seotud maksakahjustuse ennetamisel. Märksõnad: vähk, hepatotoksilisus, tsisplatiin, antioksüdant taksifoliin

Taust

Tsisplatiin on mittespetsiifiline plaatinapõhine (derivaat)kemoterapeutiline aine, mida kasutatakse mao-, munandi-, munasarja-, põie-, neeru-, ureterovesikaalse, pea- ja kaelavähi raviks.1 On teatatud, et see põhjustab tõsiseid toksilisi mõjusid paljudele organitele ja süsteemidele. ravi ajal.2-4 Tsisplatiini kemoteraapia-peutiline efektiivsus suureneb koos annusega. Siiski põhjustab annuse suurendamine kõrvaltoimeid, nagu nefrotoksilisus, ototoksilisus, neurotoksilisus, hepatotoksilisus, iiveldus, oksendamine ja 67 protsendil patsientidest kõhulahtisus, piirates selle kliinilist kasutamist.5,6 Tsisplatiin põhjustab ka vabade radikaalide aktiivsuse suurenemist maks, mis põhjustab oksüdatiivset stressi.7 Intravenoosselt manustatud tsisplatiin (180-480mg/m²) võib saavutada kõrge kontsentratsiooni ka maksas, välja arvatud neerudes ja soolestikus, ning võib põhjustada märkimisväärset toksilisust.8 Seetõttu on teatas, et kõige kriitilisemad kõrvaltoimed on hepatotoksilisus ja nefrotoksilisus. Hepatotoksilisus väljendub seerumi transaminaaside (alaniini aminotransferaasi (ALT) ja aspartaataminotransferaasi (AST)) taseme tõusus. Isegi kasvaja supressorina kasutatav raviannus on näidanud, et see põhjustab hepatotoksilisust.10Kuigi tsisplatiini vigastuste mehhanism ei ole hästi teada, viitavad mõned tõendid, et see on põhjustatud oksüdatiivsest stressist, mis on tingitud reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) aktiivsusest. ROS-i poolt indutseeritud oksüdatiivne stress põhjustab glutatiooni (GSH), mis on endogeenne antioksüdant, vähenemist.

Lisaks mõjutab ROS rakumembraani lipiidide peroksüdatsiooni ja põhjustab toksilisemate toodete, nagu malondialdehüüdi (MDA) esinemist."1 See viitab sellele, et antioksüdantravi võib aidata ära hoida või vähendada tsisplatiini põhjustatud hepatotoksilisust. Uuringud on näidanud, et erinevad antioksüdandid kaitsevad tsisplatiini hepatotoksilisuse eest.12 Siiski on tsisplatiini põhjustatud hepatotoksilisus endiselt üheks oluliseks põhjuseks, miks selle soovitud annuses kasutamist piirata. Seetõttu tehakse tsisplatiini hepatotoksilisuse leevendamiseks mitut tüüpi uuringuid. Oma uuringus uurisime, kas taksifoliin (3,3',4'5,7-pentahüdroksiflava-noone), flavonoid, mis sisaldub sibulas, piimaohakas, merepuukoores ja Douglase kuuse koores, omab kaitset tsisplatiini hepatotoksilisuse vastu.13 Antioksüdant Taksifoliini aktiivsus on dokumenteeritud.14 Eksperimentaalsetes uuringutes on teatatud, et taksifoliin inhibeerib hüdroksüülradikaali (OH), rakku Aron, ja kaitseb raku DNA-d oksüdatiivse toime eest. Need andmed viitavad sellele, et taksifoliin kaitseb maksakudet tsisplatiini põhjustatud oksüdatiivse kahjustuse eest.

Eesmärgid

Kirjanduse ülevaadetes ei leitud andmeid taksifoliini kaitsva toime kohta tsisplatiini poolt põhjustatud maksatoksilisusele. Seetõttu oli meie uuringu eesmärk biokeemilise analüüsi abil uurida, kas taksifoliinil on rottidel tsisplatiini poolt põhjustatud hepatotoksilisusele kaitsev toime või mitte.

Materjalid ja meetodid Uuritavad loomad

Kaheksateist albiino Wistari isasrotti (255-266 g) saadi Atatürki ülikooli meditsiinilise eksperimentaalse rakendus- ja uurimiskeskusest (Erzurum, Türgi). Enne katset hoiti loomi ja toideti neid laboris 1 nädal normaalsel toatemperatuuril (22 kraadi). Loomkatsed viidi läbi vastavalt riiklikele laboriloomade kasutamise ja hooldamise juhistele ning need kiitis heaks Atatürki ülikooli kohalik loomaeetikakomitee (kinnitus nr.{4}}.01.04-E. 1800138920, 4. mai 2018). Katse protseduur Katseloomad jagati tervete kontrollrühma (HC) rühma, tsisplatiini (CIS) rühma 5 mg/kg ja taksifoliini pluss 5 mg/kg tsisplatiini (TCG) rühma. Selles katses manustati suukaudse sondi kaudu 50 mg/kg taksifoliini (Evalar, Biysk, Venemaa) rühma (n=6) rottidele. Rühmades CIS (n=6) ja HC(n=6) manustati lahustina suukaudselt destilleeritud vett. Kirjanduses on tsisplatiini toksilisuse vastast toimet uuritud ravimeid katseloomadele tavaliselt manustatud üks tund enne tsisplatiini. Üks tund pärast taksifoliini ja destilleeritud vee manustamist süstiti TCG ja CIS rühmade loomadele kokku 4 annust tsisplatiini (Ebewe-Liba, Istanbul, Türgi) annuses 5 mg/kg intraperitoneaalselt (IP) iga 2 järel. päeva.7 Taksifoliin ja destilleeritud vett manustati samal meetodil 8 päeva jooksul üks kord päevas ettenähtud annuses ja mahus. Selle perioodi lõpus ohverdati loomad suure annusega (50 mg/kg) tiopentaali (IE Ulagay, Istanbul, Türgi) anesteesiaga ja maksakuded eemaldati. Ekstraheeritud maksakoes mõõdeti malondialdehüüdi, TSH, oksüdatsiooni üldseisundi (TOS) ja antioksüdantide üldseisundi (TAS) taset. Lisaks koguti anesteseerimata rottide külgmisest sabaveenist vereproovid ja tsentrifuugiti 1500 x g juures 10 minutit. Seejärel mõõdeti seerumis ALT ja AST aktiivsust.

Cistanche võib parandada immuunsust

Biokeemilised analüüsid

Enne dissektsiooni loputati kõik probleemid fosfaatpuhverdatud soolalahusega.cistanche propiedaadidMaksakuded homogeniseeriti jääkülmades fosfaatpuhvrites (50 mM, pH 7,4), mis olid mõõdetava muutuja jaoks sobivad. Kudede homogenaate tsentrifuugiti kiirusel 5000 pööret minutis 20 minutit 4 kraadi juures ja supernatandid ekstraheeriti, et analüüsida MDA, tGSH, TAS, TOS ja valgu kontsentratsiooni. Supernatandi valgu kontsentratsiooni mõõdeti Bradfordi kirjeldatud meetodil. Kõik koetulemused väljendati jagades valgu grammidega.18 Kõik spektrofotomeetrilised mõõtmised viidi läbi mikroplaadilugejaga (BioTek Powerwave XS"; BioTek⑩, Winooski, USA).

Malondialdehüüdi analüüs

Malondialdehüüdi mõõtmised põhinesid meetodil, mida kasutasid Ohkawa jt.cistanche tubulosa beneficiosmis hõlmab tiobarbituurhappest (TBA) ja MDA-st moodustunud roosa värvi kompleksi spektrofotomeetriliselt mõõdetud neeldumist. Lühidalt öeldes lisati 25 μL sageli kasutatav homogenaati lahusele, mis sisaldas 25 μL 80 g/l naatriumdodetsüülsulfaati ja 1 ml segulahust (20 g/l äädikhapet pluss 1,06 g 2-tiobarbituraati pluss 180 ml destilleeritud vett). ). Segu inkubeeriti 95 kraadi juures 1 h. Pärast jahutamist tsentrifuugiti segu 10 minutit kiirusel 4000 p/min. Supernatandi neeldumist mõõdeti lainepikkusel 532 nm. Standardkõver saadi 1,1,3,3-tetrametoksüpropaani abil.19 Üldglutatiooni (GSH) analüüs

GSH kogust koguhomogenaadis mõõdeti Sedlak et al.20 ja Baker et al.21 kasutatud meetodil mõningate modifikatsioonidega. Meetodi põhimõte on tumekollase 5-tio-2-nitrobensoehappe (TNB) värviintensiivsus. TNB vabaneb Ellmani reagendi (5,5'-ditiobis (2-nitrobensoehape)-DTNB) redutseerimisel vabade tioolrühmade poolt ja seda mõõdetakse lainepikkusel 412 nm (2 GSH pluss DTNB → GSSG pluss 2 TNB, tumekollane värviühend).

Esiteks rakendati deproteiniseerimisprotsessi kõikidele homogenaadi proovidele, et kõrvaldada valgu sulfhüdrüülrühmade reaktsioon Ellmani reagendiga. Kudede homogenaat sadestati 200 µl 25% trikloroäädikhappega ja sade eemaldati pärast tsentrifuugimist 2500 x g juures 5 minutit 4 kraadi juures. Saadud supernatanti kasutati GSH taseme määramiseks. Kokku 200 μL mõõtepuhvrit (200 mmol/L Tris-HCl puhvrit, mis sisaldab 0,2 mmol/L etüleendiamiintetraäädikhapet (EDTA) pH väärtusel 8,9), 100 μL supernatanti, 5 μL DTNB-d (10 mmol/L, methanol mmol) ja 5 μL glutatioonreduktaasi-NADPHmix (3,75 ml 1 mM NADPH ja 80 μL 625 U/L glutatioonreduktaasi) lisati plaadile ja inkubeeriti 5 minutit toatemperatuuril. DTNB-d kasutati kromogeenina ja see moodustas sulfhüdrüülrühmadega kollase kompleksi. Neeldumist mõõdeti lainepikkusel 412 nm, kasutades ülalmainitud spektrofotomeetrit. Standardkõver saadi vähendatud GSH abil. GSH standardkõvera järgi arvutatakse kõigi kudede GSH tasemed ja tulemused väljendatakse ühikutes nmol GSH/mg valgu kohta. Üldine antioksüdantide staatus (TAS)

ja kogu oksüdatiivse seisundi (TOS) analüüsid

Kudede homogenaatide TOS- ja TAS-tasemed määrati uudse automatiseeritud mõõtmismeetodi ja müügilolevate komplektide (Rel Assay Diagnostics, Gaziantep, Türgi) abil, mõlemad on välja töötatud Ereli poolt.223 TAS-meetod põhineb stabiilsema aine iseloomuliku värvi pleegitamisel. ABTS (2,2'-ja-bis(3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape)) radikaali katioon antioksüdantidega ja mõõtmised tehakse 660 nm juures. Tulemused on väljendatud nmol Troloxi ekvivalendina/L. TOS-meetodi korral oksüdeerisid proovis esinevad oksüdeerijad raua ioon-o-dianisidiini kompleksi raudiooniks. Oksüdatsioonireaktsiooni võimendasid glütserooli molekulid, mida reaktsioonikeskkonnas on rohkesti. Raua ioon tekitas happelises keskkonnas värvilise kompleksi ksülenooloranžiga. Värvi intensiivsus, mida sai spektrofotomeetriliselt mõõta 530 nm juures, oli seotud proovis sisalduvate oksüdeerivate molekulide koguhulgaga. Tulemused on väljendatud vesinikperoksiidi (H2O2) ekvivalendina liitri kohta. ALT ja AST analüüs Seerumi ALT ja AST analüüs viidi läbi autoanalüsaatoriga Roche Cobas 8000, kasutades spektrofotomeetrilist meetodit ja sama ettevõtte komplekte (vastavalt REF:207649557-322,20764949-322; Roche Diagnostics, Basel, Šveits ). Mõlema mõõtmise põhimõte põhineb NADH neeldumise muutuse mõõtmisel 340 nm juures.

Statistilised analüüsid

Statistilised analüüsid viidi läbi kasutades IBM SPSSsoft-ware v.21.{2}}(IBM Corp., Armonk, USA).cistanche tubulosa hiina keelesHinnanguliseks võimsuse ({{0}}beeta) testi väärtuseks arvutati G-Power programmiga 0,99(https://www.psychologie.hhu.de/ar-beitsgruppen/allgemeine-psychologie-und- arbeitspsy-chologie/gpower). Numbrilised muutujad väljendati mediaanina (min-max). Pidevate muutujate analüüsiks viidi läbi Kruskal-Wallise test. Kahe vahelise rühma puhul viidi läbi Dunni test (post hoc võrdlustest). Statistilise olulisuse miinimumkriteeriumiks määrati p<0.05 for="" all="">

Tulemused

Nagu on näidatud tabelis 1, oli seerumi ALAT ja AST aktiivsus SRÜ rühmas oluliselt kõrgem võrreldes HC ja TCG rühmadega (p<>

Keskmiste MDA tasemete võrdlemisel leiti uuringurühmade vahel statistiliselt olulisi erinevusi (lk<0.05). the="" amount="" of="" mda="" in="" the="" tcggroup="" was="" significantly="" decreased="" compared="" to="" the="" cis="" group=""><0.001), but="" no="" significant="" difference="" was="" found="" compared="" to="" the="" hc="" group="" (p="">0.05). Kui võrreldi uuringurühmade keskmisi TSH tasemeid, ilmnes rühmade vahel statistiliselt oluline erinevus (lk<0.05). in="" the="" tcg="" group,="" the="" levels="" were="" significantly="" higher=""><0.001) compared="" to="" the="" cis="" hc="" groups(table="" 1).="" there="" was="" a="" statistically="" significant="" difference="" among="" the="" groups="" in="" terms="" of="" tos=""><0.05). the="">

Arutelu

Meie uuringus uuriti biokeemiliselt taksifoliini mõju tsisplatiini poolt põhjustatud oksüdatiivsele maksakahjustusele rottidel. On palju uuringuid, mis näitavad tsisplatiinist põhjustatud maksakahjustust.7,24 Meie uurimistöös, paralleelselt kirjandusega, tõusid seerumi ALAT ja AST tasemed pärast kokkupuudet suurte tsisplatiini annustega. Need väärtused langesid pärast taksifoliini manustamist. Meie tulemused näitasid, et tsisplatiin põhjustas MDA ja TOS taseme tõusu ning TAS taseme langust loomade maksakoes. Oksüdatiivsete koekahjustuste25 määramiseks ja ravimite biokeemilise toksilisuse hindamiseks kasutatakse oksüdeerija-antioksüdantide parameetreid.26 Suurenenud MDA tootmine SRÜ rühmas viitab sellele, et lipiidide peroksüdatsioon on selle rühma maksakoe rakkudes ägenenud. ROS põhjustab lipiidide peroksüdatsiooni rakumembraanis ja selle tulemusel eritub lipiididest mürgisemaid tooteid, nagu MDA.1 Malondialdehüüd võib kahjustada membraanivalke, inaktiveerides membraanides retseptoreid ja membraaniga seotud ensüüme, mis põhjustab membraanikomponentide ristsidumine ja polümerisatsioon.27 LPO reaktsioon kas lõpetatakse antioksüdantsete reaktsioonide kaudu või jätkub autokatalüütiliste levimisreaktsioonidega.cistanche คือ28 Uuringud on näidanud, et ROS mängib rolli ka tsisplatiini hepatotoksilise toime patogeneesis.7 Niu et al. teatasid, et tsisplatiiniga seotud maksa oksüdatiivse kahjustuse korral suurenes MDA kogus.2 Meie uuringus mõõdeti kõrgeid TOS-i väärtusi pärast tsisplatiini manustamine viitab tsisplatiini poolt indutseeritud oksüdatiivsele stressile. Leiti, et TOS-i tase on tõusnud SRÜ rühmas, kus MDA tase oli kõrge. TOS-i kasutatakse erinevate oksüdeerijate kumulatiivse oksüdatiivse toime määramiseks bioloogilistes süsteemides.23 Uuringud on näidanud, et tsisplatiin tõstab TOS-i taset mitte ainult maksa, vaid ka neerukoes.30 See on kooskõlas meie katsetulemustega, mis näitavad, et MDA ja TOS tase maksakoes tõusis.

Jällegi täheldati selles uuringus, et tsisplatiin vähendas selle kogust maksakoes võrreldes TCG ja HC rühmaga. ROS-i kahjulike mõjude vältimiseks arendavad elusorganismid nii rakus kui ka rakumembraanis mitmeid tõhusaid kaitsemehhanisme. Need mehhanismid toimivad nii radikaalide tootmise blokeerimise kui ka moodustunud radikaalide kahjulike mõjude kõrvaldamise kaudu. Glutatioon, tripeptiid, mis koosneb glutamaadist, L-tsüsteiinist ja glütsiinist, on eluskudede üks tuntumaid antioksüdante. Glutatioon reageerib H, O2 ja orgaaniliste peroksiididega, katalüüsides glutatioonperoksidaasi ensüümi, ensüümi sisaldavat seleeni selle aktiivses kohas, toimides antioksüdandina ja eemaldades rakkudest H, O. Glutatioon detoksifitseerib keemiliselt vesinikperoksiidi või orgaanilisi oksiide ja kaitseb rakke ROS-i kahjustuste eest.31 Meie uuringus mõõdeti TAS-i taset, et uurida tsisplatiini inhibeerivat toimet antioksüdantide mehhanismidele. Meie testitulemused näitasid, et puutumata vähenemise ja TAS-i taseme vahel oli korrelatsioon. Niu et al.kui palju tsistanši võttateatas, et tsisplatiin tekitas oksüdatiivset stressi, vähendades maksakoes GSH ja TAS taset.

Tsisplatiinist põhjustatud oksüdatiivse maksakahjustuse vastu kasutatav taksifoliin pärssis oluliselt MDA ja TOS taseme tõusu ning alandas tGSH ja TAS taset. Varasemates uuringutes on dokumenteeritud, et taksifoliin vähendas rakusisese vabade radikaalide taset, inhibeeris MDA-d ja takistas antioksüdantide tarbimist. 32 Teises uuringus leiti, et taksifoliin suurendab GSH toimet.3

Nagu eespool märgitud, on taksifoliin flavonoid.13Varasemad uuringud on näidanud, et flavonoidid avaldavad antioksüdantset toimet, pärssides lipiidide peroksüdatsiooni ja ensümaatilisi reaktsioone, mis põhjustavad vabade radikaalide moodustumist.34 Hiljutises uuringus väideti, et taksifoliin avaldab maksakaitset. antioksüdantne aktiivsus, pärssides lipiidide peroksüdatsiooni rada.35 Kokkuvõttes on läbivaadatud kirjanduse andmed meie katsetulemustega kooskõlas.

Piirangud. Lisaks peaksid histopatoloogilised leiud toetama kõiki biokeemilisi leide. Teiseks piiranguks võib pidada loomade väikest arvu rühmades.

Järeldused

Selle tulemusena põhjustas tsisplatiin loomade maksakoes oksüdatiivseid kahjustusi. SRÜ rühmas halvenes oksüdantide ja antioksüdantide tasakaal oksüdeerijate suhtes. Taksifoliin hoidis ära oksüdeerijate hulga suurenemise ja antioksüdantide vähenemise tsisplatiini tõttu vigastatud maksakoes. Taksifoliin takistas oksüdeerija-antioksüdantide tasakaalu muutumist oksüdeerijate kasuks. Need leiud viitavad sellele, et taksifoliin võib olla kliiniliselt kasulik aine keemiaravi protseduuridest tuleneva hepatotoksilisuse raviks.

See artikkel on välja võetud N. Kurti et al. Taksifoliini antioksüdantne toime