Cistanche'i uue rakenduse teaduslikud alused
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
Päike Weidong1, Chen fei2, Sun yun2
(1. Yangzhou traditsioonilise hiina meditsiini haigla, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. meditsiinikool, Yangzhou ülikool, Yangzhou 225001, Jiangsu)
KOKKUVÕTE: Loodi eesnäärme hüperplaasia (BPH) roti mudel ja 4 nädala jooksul manustati suukaudselt kolme akteosiidi annustamisrühma, et uurida destilleeritud akteosiidi toimet.Cistanche tubulosaapoptoosi ja ülimikrostruktuuriga eesnäärme kohta BPH-ga rottidel. Eesnäärme ultrastruktuurset muutust täheldati transmissioonielektronmikroskoopia abil. Tulemused näitasid, et normaalse roti eesnäärme apoptoos ei olnud ilmne, see oli madal
eesnäärme apoptoosi määr mudelrühmas suures annuses akteosiidisCistanche tubulosaravi ajal oli roti eesnäärme apoptoos oluliselt kõrgem kui mudelil.
MÄRKSÕNAD:Cistanche, Cistanche tubulosa, akteosiid; rott; alustada eesnäärme hüperplaasiat; apoptoos; ultrastrukturaalne
Healoomulise eesnäärme hüperplaasia (BPH) protsessis on raku apoptoos üks mehhanisme, mis praegu tähelepanu köidavad. Geeni kodeerimine määrab selle ja võimaldab rakkudel kontrollida programmeeritud rakusurma, reageerides spetsiifilistele signaalidele.
Pärast seda, kui eesnääre areneb täiskasvanu suuruseks, hoitakse eesnäärme rakkude proliferatsiooni kiirust 1 kuni 2 protsendi juures, tasakaalustades apoptoosi keskmist kiirust. Kui tasakaal on rikutud, peetakse seda BPH põhjuseks. Normaalsetes tingimustes on östrogeeni ja androgeeni tase ning normaalne vereringe eesnäärmes teatud tüüpi enesetasakaalu seisund, mis eksisteerib proliferatsiooni ja apoptoosi protsessis. Kui tasakaal proliferatsiooni ja apoptoosi vahel on tasakaalust väljas, põhjustab see näärme edasist kasvu ja laienemist, mis põhjustab peamiselt epiteelirakkude sektsiooni laienemist [1].
Selles katses koostasime roti eesnäärme hüperplaasia mudeli, et jälgida ja analüüsida akteosiidi (koosmõjutaoline glükosiid), mis on üks keemilisi komponente.Cistancheroti eesnäärme rakkude apoptoosi ja ultrastruktuursete muutuste kohta, et hinnata akteosiidi toimet Eesnäärme hüperplaasia inhibeeriv toime annab teadusliku aluse Hiina meditsiini Cistanche uute kasutusviiside väljatöötamiseks ja kasutamiseks.
Cistancheväljavõte
1 Materjalid ja meetodid
1. 1 katseloom
Viiskümmend isast SD-rotti vanuses 6-7 nädalat, puhta klassi ja kaaluga 80-100 g, on pärit Yangzhou ülikooli võrdleva meditsiini keskusest.
1. 2 Reaktiivid ja ravimid
Testosterooni propionaadi süstimine on ettevõttelt Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., spetsifikatsioon on 25 mg·mL-1 ja partii number on 060708. PI-värvi lahus pärineb Yangzhou ülikooli testimiskeskusest. Aktisiidi sisaldus on 945 g·kg-1, mille on koostanud Hiina Farmaatsiaülikooli Hiina meditsiini analüüsi osakond.
1. 3 Katseseadmed
Philips Tecnai 12 ülekandeelektronmikroskoop on pärit Philipsist Hollandist; FACSAria voolutsütomeeter on pärit BD-st Ameerika Ühendriikidest.
1. 4 Rühmitamine ja modelleerimine
Pärast kastreerimist vastavalt kirjanduse meetodile [3] süstiti rottidele 5 mg·(kg·d)-1testosterooni propionaati rottide seljale 4 nädala jooksul, et luua eesnäärme hüperplaasia mudel. Mudelrotid jaotati juhuslikult mudelrühmadesse: mudel pluss akteosiidi suure annuse rühm, mudel pluss akteosiidi keskmise annuse rühm, mudel pluss akteosiidi väikese annuse rühm, igas rühmas kümme rotti; veel kümme normaalset rotti olid kontrollrühmaks.
1. 5 Manustamisviis
Nädal pärast modelleerimist anti suure, keskmise ja väikese akteosiidiannusega rühmadele sondiga vastavalt 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1. Mudelrühmale ja kontrollrühmale pandi võrdne kogus tavalist soolalahust üks kord päevas nelja nädala jooksul, kaaluti kord nädalas ja kohandati annust vastavalt kehakaalule.
1. 6 Proovide kogumine ja töötlemine
1) Materjali ja proovi ettevalmistamine: 24 tundi pärast viimast manustamist kaaluge tühja kõhuga rotid ja ohverdage need emakakaela dislokatsiooniga. Avage kohe alakõht, koorige eesnääret ümbritsevad kuded, vabastage eesnääre ja võtke osa eesnäärmest jäävannis kasutamiseks. Homogeniseeriti kudede homogenisaatoriga, valmistati eesnäärme üherakuline suspensioon ja värviti propiidiumjodiidi üheetapilise meetodiga [4]; teine osa eesnäärme koest fikseeriti üliõhukeste lõikude valmistamiseks 25 g·L-1 glutaaraldehüüdis.
2) Valmistage ette üherakuline suspensioon: aseptilistes tingimustes eemaldage roti eesnääre täielikult ja viige see Petri tassi, peske veri ja verehüübed eesnäärmekoe pinnal PBS-iga ning eemaldage ümbritsev rasv, liigsed kiud, ja rakumembraanid. Samast roti eesnäärmest värske eesnäärmekude suurusega umbes 0,5 cm3võeti ja lõigati tükkideks, et valmistada eesnäärmerakkude suspensioon [5]. Asetage eesnäärmekoe blokk Petri tassi ja lisage väike kogus PBS-i; kasutage oftalmoloogilisi kääre koe lõikamiseks jäävannis, jahvatage homogenisaator suspensiooniks, lisage 10 ml PBS-i, pipeteerige koe homogenaat ja kasutage 0,074 mm pooride suurusega nailonvõrk filtriti katseklaasi, tsentrifuugiti kell 1 500 p min-13 minutit ja sadet pesti kolm korda PBS-ga, iga kord 500 p min.-1lühiajaline väikese kiirusega tsentrifuugimine rakujääkide eemaldamiseks kuni 0,037 mm poorisuurusega nailonvõrkfiltrini rakukogumike eemaldamiseks. Loendage rakud ja reguleerige rakkude kontsentratsiooniks 2 × 109 rakku × l-1. Värvige 1 ml PI värvimislahusega, kaitske valguse eest 4 kraadi juures 10 min.
3) Üliõhukese lõigu ettevalmistamine: üliõhukese koelõike ettevalmistamise kohta vt kirjandust [6].
2 Tulemused ja analüüs
Joonis 1 BPH roti mudeli apoptoos ja akteosiidi indutseeritud toime
a. Tavaline rühm; b. Mudelirühm; c. Akteosiidi suurte annustega rühm; d. Akteosiidi väikese annuse rühm
2. 1 Akteosiidi mõju roti eesnäärme apoptoosile
Joonisel 1 on näidatud voolutsütomeetria abil tuvastatud apoptoosi tipp, mis näitab, et akteosiidil on pro-apoptootiline toime. Rakkude apoptoosi tulemuste statistiline analüüs näitas, et pärast ravi suurte, keskmiste ja väikeste doosidega suurenes rotirakkude apoptoosi määr oluliselt (24,7±1,85) protsenti ja (16,1±1.{12}}4) protsenti. akteosiid. , (14,5±0,68) protsenti ja normaalrühm (1,1±{{20}},06) protsenti, mudelrühm (9,5±0,5) protsenti, positiivne rühm (9,83±0,5). 0,76) Protsentuaalse võrdluse erinevus on märkimisväärne (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Joonis 2 Apoptoosi kiirgus BPH roti mudelis ja akteosiidi toime
2.2 Akteosiidi mõju eesnäärme hüperplaasia rakkude ultrastruktuurile.
Elektronmikroskoopia vaatlused näitavad, et normaalsel roti eesnäärmel on täielikud tuumad, ilmselgelt nukleoolid ja tuumakromatiini ühtlane jaotus; krobeline endoplasmaatiline retikulum on sama suurusega, korralikult paigutatud ja sellel puudub vakuolatsioon. Epiteeli pinnal puuduvad sõrmetaolised mikrovillid, mitokondrite turse ja õõnsuses vähe sekreeti. Mudelrühma eesnäärmerakkude tuumad olid deformeerunud ja kahanenud ning tsütoplasma oli rikkalik. Kare endoplasmaatiline retikulum laienes tsüstitaolise kujuga ja tsüst täideti suure tihedusega valguosakestega. Mitokondrid olid kergelt paistes (esinesid ka vakuoolid), Õõnsuses on keskmise tihedusega eritist, osades rakkudes leiti tihedaid ümaraid sekretsioonigraanuleid. Akteosiidiga ravitud rottidel oli tuum võrreldes mudelrühmaga terve. Tuum kontsentreeriti, tuuma tihedus suurenes, heterokromatiin akumuleerus, tsütoplasmas olid vakuoolid ja jämedad endoplasmaatilise retikulumi vakuoolid vähenesid. Väikese annuse akteosiidi rühmas olid tuumad veidi kortsus, kokkutõmbumine, ebaregulaarne, rikkalikum tsütoplasma ja vähenenud kare endoplasmaatiline retikulum (joonis 3).
Tistanche'i eelised: anti-Apoptoos
3 Arutelu
Apoptoos on programmeeritud rakusurma protsess mitmerakulistes organismides, mis reguleerib organismi arengut ja säilitab sisekeskkonna stabiilsuse ning geneetilised koodid määravad selle.
Apoptootilistel rakkudel on oma ainulaadsed morfoloogilised ja bioloogilised omadused: tuuma kromatiini kokkutõmbumine, DNA ulatuslik lagunemine ja killustumine, rakkude täielik kokkutõmbumine, rakumembraanide ja organelle (nagu mitokondrid ja ribosoomid) katvate välimiste eendite kokkutõmbumine ning iseloomulike tuumade moodustumine. fragmendid Apoptootilised kehad, apoptootilised rakud mitte ainult ei säilita täielikku rakumembraani struktuuri ja funktsiooni, vaid neil on ka terviklik organellide struktuur, mis erineb rakunekroosist.
Rakkude apoptoosi molekulaarset mehhanismi ei ole seni täielikult välja selgitatud. Uuringud [7] on näidanud, et raku apoptoosi geeniregulatsioonis osaleb palju geene.
Apoptoos on BPH protsess, mis tõmbab praegu rohkem tähelepanu. Selle määrab geenikodeerimine ja see võimaldab rakkudel kontrollida rakusurma, reageerides spetsiifilistele signaalidele [1]. Pärast seda, kui eesnääre areneb täiskasvanu suuruseks, hoitakse eesnäärme rakkude proliferatsiooni kiirust 1 kuni 2 protsenti apoptoosikiiruse tasakaalu kaudu. Selle tasakaalu hävimist on alati peetud BPH põhjuseks [8]. Normaalsetes tingimustes on östrogeeni ja androgeeni tase ning regulaarne tsirkulatsioon eesnäärmes omamoodi enesetasakaalu seisund, mis eksisteerib proliferatsiooni ja apoptoosi protsessis. Kui proliferatsioon ja apoptoos on tasakaalust väljas, põhjustab see näärmete kasvu ja edasist laienemist, peamiselt epiteelirakkude sektsiooni laienemise tõttu [9]. Selle tasakaalu katkemine võib olla tingitud androgeeni taseme või funktsioonide muutustest; see võib olla tingitud ka mis tahes vastusest, mis on põhjustatud DHT AR-stimuleerimisest või DHT-vahendatud kasvufaktori taseme muutustest [2]. Selles uuringus tuvastas FCM raku apoptoosi ja leidis, et eesnäärme rakkude apoptoosi määr rottidel, kellele manustati akteosiidi suuri annuseid, suurenes märkimisväärselt. Elektronmikroskoopia tulemused näitasid, et mudelrühma eesnäärme rakkude tuumad olid deformeerunud, krobeline endoplasmaatiline retikulum oli tsüstitaolise kujuga tugevalt laienenud ning tsüst täitus suure tihedusega valguosakestega ning avastati vakuolatsioon. Mitokondrid olid kergelt paistes ja seotud uuringud[ 10-11 ] Aruanne on järjepidev.
Pärast akteosiidi sekkumist oli eesnäärme hüperplaasia aste rottidel madalam. Suure annusega rühmas ilmnesid ka varajased apoptoosi tunnused: eesnäärme rakkude tuum jäi puutumatuks ja endoplasmaatilise retikulumi vakuoolid olid oluliselt madalamad. Tuumade kondenseerumine, tuuma tiheduse suurenemine, heterokromatiini akumuleerumine, mis sarnaneb eesnäärmekoe rakkude iseloomustamisega rottidel pärast kastreerimist [12-13]. See näitab, et akteosiid alatescistanchevõib indutseerida rakkude apoptoosi eesnäärme hüperplaasiaga rottidel, reguleerida ja taastada eesnäärme rakkude apoptoosi ja proliferatsiooni tasakaalu ning mängida rolli eesnäärme rakkude proliferatsiooni pärssimisel. Selle uuringu ja varasemate uuringute [14] tulemused näitavad, et akteosiidi, mis on keemiline komponent, pärssiv toime.Cistanche tubulosa, eesnäärme hüperplaasia korral võib see olla seotud raku apoptoosi soodustamisega, AR ja TGF-UR1 üleekspressiooni vähendamisega. Üksikasjalikku toimemehhanismi tuleb veel uurida.
Cistanche kasu: parandab immuunsust
Viited:
[1] Giacomo N, Antonio G, Ra fa el BB jt. Põletik, apoptoos ja BPH, mis on tõendid [J]. European Urology Supplements, 2006(5): 401-408.
[2] Car son IC, Rittmaster R. Dihüdrotestosterooni roll eesnäärme healoomulises hüperplaasias [J]. Urology, 2003, 61: 2-7.
[3] Xu Shuyun, Bian Julian, Chen Yuxiu. Farmakoloogilise katse metoodika[M]. 3. väljaanne. Peking: People's Medical Publishing House, 2002: 1552-1553.
[4] Zhai Qiwei, Ji Hongbin, Yan Mingda jt. Tet-off indutseeritava ekspressioonisüsteemi kasutamine Akt[J] funktsiooni uurimiseks. Chinese Science Bulletin, 2000, 45( 16): 1738-1741.
[5] Xia Anzhou, Xing Shuhua, Zhu Xuewen jt. Võrdlev uuring neerukoe üherakulise suspensiooni valmistamismeetodite kohta [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24(1):50-53.
[6] Sun Yun, Wang Dejun, Liu Xiaomei jt. Kopsude ultrastruktuuri muutused eksperimentaalsetel vananevatel hiirtel ja Cistanche deserticola polüsahhariidi [J] mõju. Chinese Pharmacological Bulletin, 2002, 18(1): 84-87.
[7] Liu Qingming, Lu Mingzhi. Eesnäärme healoomulise hüperplaasia rakkude proliferatsiooni ja apoptoosi patogeneesi uurimine [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science, 2005, 23(2): 141-143.
[8] Sharia t SF, Ashfaq R, Roehrborn CG jt. Surviviini ja apoptootiliste biomarkerite ekspressioon eesnäärme healoomulises hüperplasmas [J]. J Urol, 2005, 174: 2046-2050.
[9] Unter G, Madersbacher S, Berg er P. Eesnäärme healoomuline hüperplaasia: vanusega seotud kudede ümberkujundamine [J]. Exp Gerontol, 2005, 40: 121-128.
[10] Zheng Heng, Shao Chunli, Qian Jiaqing. Vesinikkloriidi inhibeeriv toime eesnäärme hüperplaasiale rottidel [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28(3):227-229.
[11] Zhong Wei, Qiu Shudong, Jiang Sailing. Eesnäärme healoomulise hüperplaasia morfoloogilised muutused ja ARmRN A ekspressiooni erinevus [J]. Xi'ani meditsiiniülikooli ajakiri, 1999, 20(2): 145-149.
[12] Niu Yuanjie, Dong Kequan, Bai Jingwen jt. Koerte eesnäärme dünaamilised patoloogilised muutused pärast kastreerimist [J]. Chinese Journal of Urology, 1998, 19(7): 429-433.
[13] Ye Zhangqun, Lan Ruzhu, Zhou Yusheng jt. Dünaamilised muutused roti ventraalse eesnäärme mikrostruktuuris pärast kastreerimist[ J]. Chinese Journal of Urology, 2001, 22( 8): 468-472.
[14] Sun Weidong, Chen fei, Sun yun. Aktisiidi inhibeeriv toime eksperimentaalsele healoomulise eesnäärme hüperplaasia mudelile [J]. Yangzhou ülikooli ajakiri: Põllumajandus ja bioteadused
väljaanne, 2008, 29(3): 55-58.
