Neeru makrofaagide, AIM-i ja TGF-b1 ekspressiooni roll neerufibroosi progresseerumisel IgAN-i patsientidel

Lisateabe saamiseks. kontaktitina.xiang@wecistanche.com

Eesmärk: Analüüsida makrofaagide, AlM ja TGF- 1 ekspressiooni lgAN-ga patsientide neerudes ning uurida makrofaagide, AlM-i ja TGF- 1 rolli neerufibroosi progresseerumisel lgAN-ga patsientidel. .

meetodid: Vaatlusrühmaks valiti 40 lgAN patsiendi neerukoe parafiiniproovid. Samal ajal valiti normaalseks kontrollrühmaks 11 nefrektoomiaga ravitud patsiendi normaalse neerukoe parafiiniproovid. Me jälgisime makrofaagide jaotumist ning AlM ja TGF- 1 ekspressiooni immunohistokeemilise värvimise ja/või immunofluorestsentsi abil.

Tulemus: Leiti, et MO, M1 ja M2 makrofaagide arv suureneb lgAN-ga patsientidel. M0 makrofaagid on peamiselt polariseeritud M2 makrofaagide suhtes. AlM ja TGF- 1 ekspressioon oli lgAN patsientidel oluliselt kõrgem kui NC. M2 makrofaag, AlM ja TGF- 1 olid positiivses korrelatsioonis seerumi kreatiniini ja 24-tunnise proteinuuriaga, kuid negatiivses korrelatsioonis eGFR-iga. M2 makrofaagid, AlM ja TGF- 1 olid positiivses korrelatsioonis fibrootilise piirkonnaga.

Järeldus: M2 makrofaagid, AlM ja TGF- 1 mängivad olulist rolli lgAN fibroosi protsessis ning need kolm mõjutavad üksteist.

Märksõnad: IgAN, neerufibroos, makrofaagid, AlM, TGF- 1

Siit saate teada, kust osta ja cistanche mõju lingi kaudu 

SISSEJUHATUS

IgA nefropaatia (IgAN) on tavaline süsteemne immuunglomerulonefriit, mida iseloomustab IgA või IgA-põhiste immuunkomplekside ladestumine mesangiaalsesse piirkonda koos mesangiaalsete rakkude proliferatsiooni ja mesangiaalse maatriksi laienemisega (1, 2). Kuigi IgAN progresseerub aeglaselt, areneb kuni 50 protsenti patsientidest lõppstaadiumisse ja see on peamine tüüp, mis põhjustab ESRD(3).Neerufibrooson levinud tee progresseerumiselkrooniline neeruhaigus(CKD)(4). Viimastel aastatel on leitud, et makrofaagid, makrofaagide apoptoosi inhibiitor (AIM) ja transformeeriv kasvufaktor - 1(TGF- 1) mängivad neerufibroosis olulist rolli.

Makrofaagid on seotud paljude neeruhaiguste tekkega. Mõned teadlased usuvad, et makrofaagide ladestumist neerudes saab kasutada olulise näitajana neeruhaiguste arengu ja prognoosi hindamisel. Makrofaagid jagunevad M0, M1 ja M2 tüüpideks(5). Ml makrofaagid soodustavad tüüpi põletikulist vastust ja eemaldavad baktereid või kasvajarakke, sekreteerides põletikulisi tegureid nagu IL-1, IL-6, IL-12, TNF-, reaktiivsed hapniku liigid (ROS), ja ei. Kui aga põletik püsib, levib see edasi ja viib lõpuks koefibroosini (6). Ekspresseerides arginaas 1 (Argl), kitinaasitaolist valku (Yml) ja hüpoksiast põhjustatud mitogeenset faktorit (HIMF), et seista vastu patogeensete mikroorganismide ja allergeenide stimuleerimisele, piiravad M2 makrofaagid põletikulist reaktsiooni ja I tüüpi adaptiivsedpuutumatus, kõrvaldavad jäägid, soodustavad angiogeneesi, mängivad põletikuvastast rolli, vähendavad rakkude apoptoosi, soodustavad rakkude proliferatsiooni ja soodustavad kudede paranemist (7, 8). Täpselt, millist tüüpi makrofaag mängib IgAN-i neerufibroosis suurt rolli, on endiselt vastuoluline. . Uuringud näitasid, et CD68 ja CD80 saab kasutada MO ja M1 makrofaagide spetsiifiliste pinnamarkeritena (9); CD163 on väga spetsiifiline mannoosi retseptor, mida ekspresseeritakse M2 makrofaagides, mida M1 makrofaagides ei ekspresseerita. Seega saab CD68, CD80 ja CD163 kasutada markeritena, mis näitavad erinevat tüüpi makrofaagide olemasolu (10-12).

Lisaks avastati AIM algselt makrofaagide sekreteeritud valguna ja seetõttu nimetati seda Spaks (13). Hiljem nimetati see AIM-iks, kuna leiti selle antiapoptootiline toime valgelibledele (14) või CD5L vastavalt inimese genoomi organisatsiooni nomenklatuurile. AIM-il on lai valik funktsioone ja see mängib olulist rolli leukotsüütide migratsiooni tasakaalu, ainevahetuse japõletikulinevastuseks. Mitmes kirjanduses on mainitud, et AIM mängib rolli immuun-põletikulises reaktsioonis (15), lipiidide homöostaasis, mittealkohoolsetes.maksahaigus(16), autoimmuunhaigused, ateroskleroos (17) ja muud haigused. Viimastel aastatel on tehtud arvukalt uuringuid AIM-i rolli kohta neeruhaiguste korral. Näiteks Tadashi Uramat et al. (18) leiti hüpertensiivsete hiirte mudelis, et AIM ja oxLDL (oksüdeeritud madala tihedusega lipoproteiin, millel on AIM ekspressiooni ülesreguleerimine) ekspressiooni vähendamine võib tõhusalt vähendada neerukoe fibroosi. Samamoodi Megumi Oshima et al. (19) leidis, et AIM-i ja makrofaagide ladestumise pindala neerukoes oli positiivses korrelatsioonis proteinuuria raskusastmega ja eGFR-i langusega kroonilise neeruhaigusega patsientidel. Kõik ülaltoodud uuringud viitavad sellele, et AIM mängib olulist rolli ka neerufibroosi protsessis. Praegu on aga vastupidised tulemused: ägeda neerukahjustuse mudelis on leitud, et AIM võib soodustada apoptootiliste rakujäätmete eemaldamist neerutorukeste epiteelirakkude poolt (20).

Praegu on paljudes uuringutes üksikasjalikult käsitletud makrofaagide, AIM-i ja TGF{0}} rolli neeruhaiguste korral, kuid vähe on uuringuid nende kolme rolli kohta IgAN-i edenemises, fibroosiprotsessis ja korrelatsioonis kolm. Kui IgAN-fibroosi progresseerumise patogeneesi saab selgitada, võib see avada uue akna IgAN-i raviks ja prognoosimiseks. Makrofaagide, AIM-i ja TGF- 1 rolli uurimiseks IgAN-fibroosi progresseerumisel tuvastasime IgAN-i patsientide neerukudedes makrofaagide infiltratsiooni ning AIM-i ja TGF-i ekspressioonitaseme ja omadused- 1 ning seejärel analüüsiti seost kolme ja kliiniliselt seotud näitaja ning IgAN-i patsientide neerufibroosi piirkonna vahel.

MEETODID

Õppeained

Subei People Hospitalist värvati nelikümmend neerubiopsiaga kinnitatud IgAN-iga patsienti. Patsiendid, kellel on kroonilised süsteemsed haigused (süsteemne erütematoosluupus, suhkurtõbi, Henoch-Schönleini purpur, maksatsirroos jne) (glükokortikoidiravi, immunosupressioon, ACE, ARB jne) või kaugelearenenud neerupuudulikkus (hinnanguline glomerulaarfiltratsiooni kiirus eGFR) Väiksem või võrdne 15 ml/min/1,73 m2) jäeti välja. eGFR-i tasemed arvutati võrrandiga Modification of Diet in Neeruhaiguse (MDRD) Kliiniline teave (sugu, vanus, kaal, haiguslugu) ja laboratoorsed andmed ( biopsia ajal koguti seerumi albumiini, kreatiniini, uriini punaste vereliblede, 24-tunnise uriinivalgu ja eGFR-i tasemed. Kontrollina kasutati histoloogiliselt normaalseid neerukudesid, mis lõigati neerukasvajate kõrval (n{6}}). Kõigilt katsealustelt saadi kirjalik teadlik nõusolek ja Subei People Hospital eetikakomitee kiitis uuringu heaks.

Immunofluorestseeruv ja immunohistokeemiline värvimine

Inimese neerukoe sektsioone analüüsiti immunohistokeemilise ja immunofluorestsentsvärvimisega. Massoni värvimine viidi läbi kõigi inimese neerukoe lõikudega. Sektsioonid deparafineeriti ja töödeldi 3% vesinikdioksiidiga. Pärast antigeeni otsimist ja blokeerimist inkubeeriti sektsioone üleöö inimese CD68 antikehaga (lahjendatud 1:600, Abcam), inimese CD80 antikehaga (lahjendatud 1:600, Abcam), inimese CD163 antikehaga (lahjendatud 1:600, Abcam), inimese AIM-iga. antikeha (lahjendatud 1:150, Abcam) või inimese TGF- 1 antikeha (lahjendatud 1:500, Abcam). Pärast töötlemist mädarõika peroksidaasiga märgistatud biotiiniga konjugeeritud sekundaarse antikehaga (lahjendatud 1:200, Biosynthesis Biotechnology, Hiina) ja DAB-värvimist (ZSGB-Bio, Hiina) vaadeldi sektsioone mikroskoobi all. Ühe jaotise kohta pildistati 10 juhuslikult valitud välja (400×). Makrofaagide ekspressioon glomerulites ja tuubulites kvantifitseeriti, kasutades Image-Pro Plus Image Analysis Software (Meyer Instruments, Inc., Houston, TX, USA); AIM ja TGF- 1 ekspressioonid glomerulites kvantifitseeriti samal viisil. Integreeritud optilist tihedust (IOD) mõõtsid iga pildi jaoks kaks patoloogilist eksperti sõltumatult. Seejärel arvutati keskmine IOD/positiivselt värvunud ala (AIOD). Makrofaagide, AIM-i ja TGF- 1 ekspressioonitasemeid IgAN-i neerubiopsiates ja normaalsete neerude biopsiates võrreldi AIOD-i arvutamise teel. Tuumad värviti DAPI-ga toatemperatuuril 5 minutit. Fluorestsentsmärgistatud lõikude kujutised saadi fluorestsentsmikroskoobiga (ZEISS, Axioimager.Z2).

Massoni värvimine fibroosi hindamiseks

Fibroosiala oli roheline ja fibroosi astme kajastamiseks arvutasime välja nägemisvälja ala haljasala protsendi. Iga sektsiooni jaoks valiti juhuslikult kolm suure suurendusega välja (kõik isendid pildistati samades tingimustes), vältides suuri anumaid. Fibroosipiirkonna pindala suhte statistiliseks analüüsimiseks kasutati IPP6.{2}} kujutise analüüsisüsteemi (Kõiki proove analüüsiti samal viisil).

Statistilised analüüsid

Statistiline analüüs viidi läbi kasutades SPSS 22.0. Andmed väljendati keskmisena ± SD või mediaanidena (vahemikuna). Olulisi erinevusi hinnati kas katse- või ühesuunalise ANOVA abil. Katserühmade integreeritud optilise tiheduse võrdlemiseks viidi läbi mitteparameetriline Mann-Whitney U test. Kahe sabaga P<0.05 was="" considered="" statistically="">

TULEMUSED

Makrofaagide jaotumine neerus Immunofluorestsents ja immunohistokeemia (joonised 1, 2) näitasid, et IgAN-rühma makrofaagid jaotusid peamiselt neerutuubulite interstitsiaalis ja mõnikord ka glomerulaarkapillaarpõimikus ja neerutuubuli luumenis, samas kui makrofaagid ei jaotunud normaalsetes neerukude.

Veelgi enam, M{{0}}, Ml ja M2 makrofaagide arv IgAN-i neerude interstitsiumis oli erinev ja M0 polariseerumine oli suurem M2(P) suunas.<0.05, figure="">

AIM, TGF- 1 ekspressioon neerukoes IgAN rühmas ekspresseerub AIM peamiselt glomerulaarsetes kapillaarisilmustes ja neerutuubulite epiteelirakkudes, samuti neerutuubulite luumenis; TGF- 1 ekspresseerub peamiselt neerutuubulite epiteelirakkudes, aga ka neerude interstitsiumis. Normaalsetes neerukudedes esines aga AIM ja TGF- 1 ekspressioon harva või puudus (joonised 4, 5).

Makrofaagide, AlM, TGF{0}} ekspressioon lgAN-i kliinilise manifestatsiooniga

The infiltration of MO and M1 macrophages in the renal tissue of the IgAN group was not significantly correlated with age, sex, urinary red blood cell count,24-hour proteinuria, and eGFR (P>{{0}}.05). M2 makrofaagide infiltratsiooni arv oli positiivses korrelatsioonis seerumi kreatiniini ja 24-tunnise proteinuuriaga (r=0.447, P=0.004; r=0.436, P{ {10}}.005) ning korreleerus negatiivselt eGFR(r=-0.332, P=0.004)(joonis 6).24-tunni uriinivalgu, seerumi kreatiniini ja eGFR oli korrelatsioonis AIM-i ja TGF-ga{18}}, mille hulgas oli 24-tunnine uriinivalk ja seerumi kreatiniinisisaldus positiivses korrelatsioonis AIM-i ja TGF-iga{20}}, eGFR aga negatiivses korrelatsioonis AIM-i ja TGF-B1-ga (Tabel 1). Kuna M0 ja M1 makrofaagide ning kliiniliste näitajate vahel olulist korrelatsiooni ei olnud, arvestasid järgnevad andmed ainult M2 makrofaage. Täiendav statistiline analüüs näitas, et M2 makrofaagide, AIM ja TGF-B1 ekspressioonid olid erinevates patoloogilistes tüüpides erinevad ning M2 makrofaagide, AIM ja TGF{31}} vahel oli korrelatsioon (tabel 2).

M2 makrofaagide, AlM, TGF- 1 ja fibrootilise piirkonna korrelatsioon

Fibrootilise piirkonna ja M2-tüüpi makrofaagide, AIM ja TGF- 1 vahelise korrelatsiooni statistiline analüüs IgAN-i patsientide kudedes näitas, et M2 makrofaagid olid fibrootilise piirkonnaga positiivses korrelatsioonis (joonis 7,r{ {4}}.777, lk<0.01);aim was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area(figure="" 8,r="0.768,"><0.01); tgf-β1="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area="" (figure="" 9,="" r="0.853,"><>

ARUTELU

IgAN on kõige levinum primaarne glomerulonefriit ja ligikaudu 40 protsendil patsientidest tekib lõppstaadiumis neeruhaigus (ESRD) 20-30 aasta jooksul (21). Neerufibroos on vajalik protsess, et kõik kroonilised neeruhaigused saaksid areneda ESRD-ks. Patoloogilisteks ilminguteks on suure hulga fibroblastide ja müofibroblastide moodustumine ning suure hulga ekstratsellulaarse maatriksi kuhjumine, mis põhjustab glomeruloskleroosi ja neerutuubulite interstitsiaalset fibroosi. Lõppkokkuvõttes kaotab neerufunktsioon suure hulga normaalsete nefronite kaotuse tõttu (4). Praegu jaguneb neerufibroos peamiselt neljaks etapiks:1. Neerutuubulite epiteelirakkude aktiveerimine ja monotsüütide/makrofaagide infiltratsioon põletiku tõttu. 2. Tsütokiinide, kasvufaktorite ja muude fibrogeensete tegurite vabanemine.3. Fibroosi teke on avaldunud peamiselt maatriksvalkude ladestumises. 4. Ekstratsellulaarse maatriksi (ECM) ladestumine on neeru struktuurse ja funktsionaalse kahjustuse peamine etapp (efektiivsete nefronite märkimisväärne vähenemine ja glomerulaarfiltratsiooni kiiruse edasine langus).

Müeloidsed tüvirakud diferentseeruvad monotsüütideks ja sisenevad vereringesse luuüdist. Ringluses olevad monotsüüdid migreeruvad ja infiltreeruvad kudedesse erinevate stiimulite, näiteks põletiku ja trauma mõjul, ning seejärel diferentseeruvad makrofaagideks. Makrofaagid on loodusliku immuunsüsteemi heterogeensed rakud, mis suudavad dünaamiliselt reguleerida oma fenotüüpe, et kohaneda kohaliku mikrokeskkonnaga. Vereringes olevad monotsüüdid, mida juhivad põletikulised signaalid, sisenevad neerudesse ja kinnituvad veresoonte endoteelirakkudele, indutseerides samaaegselt kemokiinide ja krooniliste põletikuliste tegurite vabanemist. Selle tulemuseks on monotsüütide ulatuslik lokaalne agregatsioon neerude interstitsiaalis, mis eristuvad erinevate radade kaudu klassikaliselt aktiveeritud makrofaagideks (M1) või selektiivselt aktiveeritud makrofaagideks (M2). Alguses aktiveerivad patogeenid ja nekrootilised rakud Toll-sarnaseid retseptoreid ja teisi kaasasündinud immuunretseptoreid, soodustades M0 makrofaagide polariseerumist M1 makrofaagideks. M1 makrofaagid ladestuvad läbi basaalmembraani neerukahjustuse varases staadiumis, soodustades mitmeid põletikulisi reaktsioone ja põhjustades edasist neerukahjustust. Vigastuste tekkimisel soodustavad makrofaagide poolt fagotsüteeritud apoptootilised ja nekrootilised rakud, samuti järgnev põletikuvastaste tegurite teke makrofaagide polariseerumist M2 makrofaagide suunas. M2 makrofaagid mängivad peamiselt põletikuvastast rolli, soodustades neerude paranemist ja põhjustades fibroosi (6,22-26). Seetõttu näitab M1 ja M2 makrofaagide dünaamiline tasakaal põletiku ja kudede paranemise protsessi, mis määrab neerude prognoosi ja suunab jõupingutusi makrofaagidele suunatud ravimeetoditele.

Selles uuringus valisime patsientide neerupatoloogilised koed, kellel oli diagnoositud IgAN ja kes jälgisid erinevate makrofaagide polarisatsiooni. Valisime CD68 tähistama M0, CD80 tähistama M1 ja CD163 tähistama M2. Meie tulemused näitasid, et M0(CD68*)makrofaagide, M1(CD80*)makrofaagide ja M2(CD163*)makrofaagide arv oli vastavalt normaalse neeruga võrreldes oluliselt suurenenud, mis näitab, et makrofaagide infiltratsioon oli suhteliselt ilmne lgAN-i patsientide neerukuded.

It was not only found that the infiltration of macrophages in the renal tissue of IgAN patients increased significantly, but also found that there were differences in the number of M0, Ml, and M2 macrophages in the interstitium of lgAN patients, with more polarization of M0 towards M2. In other words, the infiltration of M2 macrophages is mainly found in the renal tissue of IgAN patients. There was a positive correlation between M2 macrophages and fibrotic area; The distribution of M0 and M1 macrophages in the lgAN group had no significant correlation with age, sex, urinary red blood cell count, 24-hour proteinuria, and eGFR(P>0.05); Siiski on M2 makrofaagide infiltratsiooni arv positiivses korrelatsioonis seerumi kreatiniini ja 24-tunnise proteinuuriaga; On tõestatud, et M2 makrofaagid mängivad IgAN fibroosi progresseerumisel olulisemat rolli.

AIM mängib olulist rolli ka paljudes haigustes, nagu ateroskleroos, mittealkohoolne maksahaigus (16), insuliiniresistentsus (27), autoimmuunhaigused jne. Samal ajal on AIM tihedalt seotud neerufibroosiga. Megumi Oshima jt (19) võtsid 43 neerubiopsiaga patsiendilt neerukoe ja leidsid, et AIM-i ja makrofaagide ladestusala oli positiivses korrelatsioonis proteinuuria raskusastme ja eGFR-i langusega patsientidel. See viitas sellele, et AIM-il võib olla raskendatud neerukahjustus. Tadashi Uramat jt (18) tuvastasid raske hüpertensiooni ja põhjustasid neerukahjustusi, kasutades spontaanse hüpertensiooni tendentsi (SHRsp) mudelit hiirtel. Pärast hüpertensiooni ravi sarnaste ravimitega leiti, et glomerulitesse ja interstitsiumi infiltreeruvate makrofaagide arv vähenes oluliselt. Võrreldes kontrollrühmaga vähenesid AIM ja oxLDL ekspressioonid oluliselt. Veelgi enam, fibroosi aste neerukoes oli väiksem kui ravimata rühmas.

Meie uuringus esines olulisi erinevusi AIM ekspressioonis igas patoloogilises astmes ning selle ekspressioon oli oluliselt positiivses korrelatsioonis M2 makrofaagide, TGF- 1 ja neerufibroosi astmega. See katse ja ülaltoodud tingimused viitavad kõik sellele, et AIM on seotud CKD neerufibroosi protsessiga, mis võib olla seotud AIM-i apoptootilise toimega makrofaagidele, ja seejärel soodustavad pidevad põletikulised signaalid fibroosi edasist arengut. Takako Tomita jt (28) ekstraheerisid pärmi polüsahhariidide poolt indutseeritud peritoniidiga hiirtelt nekrootilisi rakke in vitro ja leidsid, et AIM võib soodustada Ml ja M2a makrofaagide fagotsütoosi nekrootilisteks rakkudeks. Samuti leiti IgAN mudelis ja isheemia-reperfusiooni (IRI) ägeda neerukahjustuse mudelis, et AIM võib soodustada IgAl ja apoptootiliste rakkude kliirensit, mis põhjustavad makrofaagide poolt nefriiti. Ülaltoodud uuringute põhjal on leitud, et AIM-il, nagu makrofaagidel, võib haiguse erinevates staadiumides olla erinev roll, samas kui AIM-i roll neeruhaiguste korral võib olla sarnane makrofaagidega.

IRI poolt põhjustatud kroonilise neeruhaiguse mudelis on M2 makrofaagid tihedas korrelatsioonis neerufibroosi protsessiga, mis on põhjustatud peamiselt TGF- 1 sekretsioonist (29). TGF- 1 kuulub TGF-superekonda ja mängib olulist rolli kroonilise neeruhaiguse(30) tekkes. Tubulaarse epiteeli müofibroblastide transdiferentseerumine (TEMT) on samuti oluline neerude interstitsiaalse fibroosi mehhanism ja TGF{6}} on oluline TEMT-d reguleeriv tsütokiin (31). Kasutades TGF- 1 neutraliseerivaid antikehi, inhibiitoreid, geenide väljalülitamist ja muid TGF- 1 tarbimise meetodeid, saab neerufibroosi taset tõhusalt vähendada (32). Seni on neerufibroosi põhjustava TGF{11}} mehhanismid hõlmanud peamiselt järgmisi punkte: 1. Indutseerida rakuvälise maatriksi, nagu kollageen I ja fibronektiin, sünteesi (33). 2. Maatriksi metalloproteinaas (MMP) ja metalloproteinaasi koe inhibiitor (TIMP) on tasakaalust väljas, vähendades seega rakuvälise maatriksi lagunemist.3. Soodustada mesangiaalsete rakkude proliferatsiooni ja kollageeni sekretsiooni ning kahjustada epiteeli- ja podotsüütide rakke, soodustades seeläbi põletikku ja edasist koefibroosi (34).4. Edendada erinevatest allikatest (nagu peritsüüdid, epiteelirakud, endoteelirakud, fibroblastid, makrofaagid jne) pärinevate müofibroblastide transdiferentseerumist ja proliferatsiooni, vahendades seega fibroosi arengut (35). Varasemad uuringud on täheldanud, et TGF-B1 mRNA ja valgu ekspressioon IgAN-is ning M2 makrofaagide infiltratsiooniaste neerukoes olid oluliselt suurenenud võrreldes normaalse neerukoega(31), TGF- 1 ekspresseeriti koos M2 makrofaagidega. CKD indutseeritud hüpertensiooni neerubiopsia koes. Kõik see viitas sellele, et M2 makrofaagid võivad TGF- 1 kaudu neerufibroosis mängida rolli.

Selles katses leidsime, et patoloogilise astme suurenemisega suurenes ka M2 makrofaagide infiltratsioon ning AIM ja TGF- 1 ekspressiooniaste. Erinevate patoloogiliste rühmade vahel oli oluline erinevus. Kõik kolm olid tihedalt seotud 24-tunnise uriinivalgu, seerumi kreatiniini, eGFR-i ja muude IgAN-i patsientide kliiniliste näitajatega ning nende kolme ja neerufibroosi piirkonna vahel oli oluline positiivne korrelatsioon, mis näitab, et M2 makrofaagid, AIM ja TGF-B1 olid kõik seotud lgAN-i esinemise ja arenguga ning olid tihedalt seotud IgAN-i fibroosiprotsessiga. Selle katse tulemused olid kooskõlas Braga jt uuringuga. (36, 37), mis leidis, et M2 makrofaagid on seotud ühepoolse ureetra obstruktsiooni (UUO) neerufibroosiga MyD88 signaaliülekande rajal. Seevastu uuringud on leidnud, et makrofaagid mängivad obstruktiivse nefropaatia taastumisfaasis kangelasvastast rolli. Nishida et al. (38) näitasid, et interstitsiaalsete makrofaagide angiotensiin II tüüpi 1 retseptor (Agtr1) vähendab neerufibroosi UUO hilisemas staadiumis. Lopez-Guisa jt (39) kinnitasid, et makrofaagidel oli fibroosi nõrgendav roll, kuna nad aktiveerisid lüsosomaalse kollageeni ringluse raja, ekspresseerides UUO-s mannoosi retseptorit 2 (Mrc2).

M2 makrofaagid, AIM ja TGF- 1 mängivad IgAN fibroosi protsessis olulist rolli ning need kolm mõjutavad üksteist. Selle katse valimi väikese suuruse ning nende kolme koostoimemehhanismi ja seose tõttu on siiski vaja asjakohaseid loomkatseid täiendavalt kontrollida.