Kas cistanche totaalne glükosiid mõjutab haistmisvõimet?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Tistanche koguglükosiidide mõju roti haistmisrakkudele ja nende neurotroofsete tegurite sekretsioonile

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Seljaaju vigastus (SCI) on tõsine tsentraalne vigastusnärvisüsteem, mis moodustab {{0}},2 protsenti –0,5 protsenti kogu traumast. Lülisambamurdude puhul on 16–40 protsenti komplitseeritud seljaaju vigastusega, mis põhjustab sageli raske puude, mis põhjustab igapäevaelus raskusi, mis mõjutavad patsientide elukvaliteeti ning põhjustavad suure koormuse perekonnale ja ühiskonnale.Haistmisvõimeensheathing cell (OEC) on närviliimi eritüüp. Plasmarakud võivad migreeruda ajju kooslõhnatajunärviaksonid ja võivad sekreteerida paljusid kasvufaktoreid, nagu NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptiid-Y ja S-100. Nende omaduste tõttulõhnatajuensheathing rakke, peetakse OEC-sid üheks paljutõotavaks seemnerakkudeks rakkude siirdamiseks SCI parandamiseks. Praegu põhineb SCI ravi taastusravi valdkonnas peamiselt terviklikul taastusravil. Tõhusama meetodi leidmiseks on läbi viidud järgmised uuringud selle mõju kohtacistanchekokkuglükosiididOEC-de kohta:

Cistanche üldglükosiid haistmisrakkude jaoks

1 Materjal ja meetodid

1.1 Katsematerjalid

Wistari rott (pakkuja Sise-Mongoolia ülikooli loomakeskus);cistanchekokkuglükosiidid, DMEM/F12 sööde, vasika loote seerum (FCS), polü-D-lüsiin, arabinosiid (Ara-C), trüpsiin, D-Hanksi lahus, küüliku anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA komplekt (Promega), rakuinkubaator (Thermo-HEPA klass 100), pööratud faasikontrastmikroskoop (Olympus CKX41, Jaapan), ülipuhas töölaud (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Ettevõte, SW-CJ-2FD), ensüüm etiketi analüsaator (Wellscan MKH), voolutsütomeeter jne.

1.2 Uurimismeetodid

1.2.1 OEC kultiveerimine, puhastamine ja identifitseerimine: Wistari rotid surmati peade maharaiumisega ja leotati veinis 5 minutit. Eesmine kolju avati, et paljastadalõhnatajupirn. Kakslõhnatajusibulad eemaldati täielikult lahkamismikroskoobi all. Pesta D-Hanksi lahuses; lõikalõhnatajumikrokirurgiliste kääridega pirn, lisage 2 ml 0,25 protsenti pankreatiini ja inkubeerige 37 kraadi juures 20 minutit; lisage 2 ml tsentrifuugi katseklaasi D MEM/F12 kultiveerimissööde, mis sisaldas 10 protsenti vasika seerumit. Seedimine lõpetati keskel; bussi pipett aspireeris mittetäielikult seeditud koe kiirusel 800 p/min ja tsentrifuugiti 5 minutit, supernatant visati ära; lõpuks kasutas konditsioneeritud söödet (20 protsenti FCS pluss 20|i, mol/LForskolin pluss 20|ig/mlBPE pluss DMEM/F12) Valmistage sellest lx 107 ml üherakuline suspensioon, inokuleerige see polülüsiiniga kaetud rakukultuuri kolbi, asetage seda 37-kraadises 5% CO2 inkubaatoris ja seejärel lisage Arac Puhastamine viidi läbi 36 tunni pärast. Kasutage rakkude immunohistokeemiliseks tuvastamiseks ja fluorestsentsmikroskoobi jälgimiseks küüliku anti-p75E ja FITC-märgistatud kitse anti-küüliku IgG sekundaarset antikeha.

1.2.2 Kasutage MTT-d ja voolutsütomeetriat, et määrata mõjucistanche üldglükosiididpeallõhnatajurakkude ümbritsemine: nakatage kultiveeritud ja puhastatudlõhnatajukatke rakud 96-süvendplaadile 1x106 ja lisagecistanche üldglükosiidid(toimekontsentratsioonid on Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), mõõta OD väärtust ja mõõta rakuvoolu tsütomeetriat pärast 24h toimimist. Seadistage juhtrühm jaCistanche üldglükosiididerinevad kontsentratsioonirühmad: rühm A (kontrollrühm): negatiivse kontrollina kasutatakse seerumit sisaldavat söödet; B-rühm (cistanche üldglükosiididmadala kontsentratsiooniga rühm: llig/ml); Rühm C (tsistanš-glükosiidide keskmise kontsentratsiooniga rühm: L10jxg/MK); Rühm D (cistanche üldglükosiididkõrge kontsentratsiooniga rühm: 100|xg/ml: igas rühmas 15 rotti.

1.2.3 Neurotroofse faktori sisalduse määramine supernatandis ELISA abil: külvatud ja puhastatudlõhnatajurakkude ümbritsemine 6-kaevuplaadil 1x106, lisagecistanche üldglükosiidid(sama kontsentratsioon nagu ülal) 24 tunni pärast ja toimige 24 tundi ning koguge supernatant eraldi, salvestatud -80 Long. Närvikasvufaktorite sisaldus vedelikus määrati ELISA meetodil.

1.3 Statistiline analüüs

Selle uuringu andmeid käsitletakse mõõtmisandmetena ja saadud andmeid väljendatakse keskmisena ± standardhälbena ning statistilise analüüsi jaoks kasutatakse SPSS 11.{1}} statistikatarkvara. Saadud andmeid analüüsitakse dispersioonanalüüsiga ja P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 tulemust

2.1 Mõjucistancheglükosiidid kokkulõhnatajuümbristavad rakud

2.1.1 Metüüloksasolüültetrasooli meetodi (MT) määramise tulemused: rühm A: 0,617±0,149; B-rühm: 0.589±0.147; Rühm C: 0,761±0,138; D-rühm: 0.732±0.234. Võrdlus vahelCistanche üldglükosiidid group (B) and Control group (A), P>0.05, erinevus ei olnud märkimisväärne;Cistanche üldglükosiidid10 mg/ml, 100 mg/ml kontsentratsioonirühm (C, D) võrreldes kontrollrühmaga (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Voolutsütomeetria määramise tulemus on näidatud joonisel 1. Võrreldes kontrollrühmaga oncistanche üldglükosiididrühmas oli kõrgem kui kontrollrühmas ja apoptootiliste rakkude protsent oli madalam kui kontrollrühmas.

2.2 Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) tulemused

Testi tulemused näitasid, et gliaalrakuliinist pärineva neurotroofse faktori (GDNF) sisaldus: enne annustamist: 302,1±16,6 pg/ml, rühm A: 340,5±13,2pg/ml; rühm B: 333,2±23,6 pg/ml; rühm C: 355,2±17,6 pg/ml; rühm D; 379,2±15,3 pg/ml. Võrreldes eelmanustamisega suurenes GDNF sisaldus oluliselt; Võrreldes kontrollrühmaga (A), on GDNF-i sisaldusCistanche üldglükosiidid100 mg/ml kontsentratsioonirühmas (D) suurenes oluliselt.

3 Arutelu

Raskused aksonite regenereerimisel on üks peamisi põhjuseid, miks pärast seljaaju vigastust on raske taastuda. OEC-del on roll tsentraalsete neuronite aksonite regenereerimisel, mida muud tüüpi rakke on raske asendada. Viimastel aastatel on uuritudlõhnatajuümbristavad rakud on muutunud kuumaks kohaks.Haistmisvõimeümbrisrakud on spetsiaalset tüüpi gliiarakud, millel on Schwanni rakkude ja astrotsüütide omadused. Need pärinevadlõhnatajubasaalmembraani ja on laialt levinud pinnallõhnatajulimaskest,lõhnatajunärv jalõhnatajupirn. Sellel on võime kogu eluks jaguneda ja taastuda ning see võib olla kaasaslõhnatajunärviaksonid migreeruvad ajju. Aksonidlõhnatajunärv võib läbida perifeerse närvisüsteemi ja kesknärvisüsteemi vahelise ristmiku iga 30-60 päeva järel, kasvada uuestilõhnatajukatta ja luua sünaptilisi ühendusi4.Haistmisvõimekattekihiga rakud võivad sekreteerida paljusid kasvufaktoreid, nagu NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptiid-Y ja S-100. Uuringud on näidanud, et närvikasvufaktor (NGF) võib takistada seljaaju punaste tuumade neuronite atroofiat ja tugevdada kortikospinaaltrakti. Ida ja soodustab punase tuuma seljaaju närviraja taastumist; nii ajust pärinev neurotroofne faktor (BDNF) kui ka neurotrofiin-3 (NT-3) võivad takistada punase tuuma seljaaju rakkude apoptoosi aksotoomilise vigastusega täiskasvanud rottidel ja päästa surevaid neuroneid ning soodustada aksonite regeneratsiooni P. Lisaks,lõhnatajukattekihiga rakud ekspresseerivad oma rakumembraanidel ka teisi tegureid, nagu närvirakkude adhesioonifaktor (N-CAM), mis on seotud rakkude adhesiooniga ja aksonite kasvuga. Nende omaduste tõttulõhnatajuensheathing rakke, peetakse OEC-sid üheks paljutõotavaks seemnerakkudeks rakkude siirdamiseks SCI parandamiseks.

Keemilised komponendidCistanchehõlmavad peamiselt fenüületanoidglükosiide, iridoide, lenduvaid komponente, lignaane, polüsahhariide ja alkaloide. Uuring leidis, etCistancheja selle keemilistel komponentidel on neuroprotektiivne toime. Deng et al. uuris tubulosa B mõju tuumori nekroosifaktori (TNF) poolt indutseeritud SH-SY5Y neuronite apoptoosile. Tulemused näitasid, et SH-SY5Y neuronitel ilmnesid pärast 36-tunnist TNF-ga töötlemist L-ga tüüpilisi apoptoosi tunnuseid pärast 100 ug/ SH-SY5Y neuronid, samas kui tubuliin B 2-tunnine töötlemine võib oluliselt vähendada TNF-i poolt indutseeritud apoptoosi. Lisaks on uuringud näidanud, et fenüületanoidglükosiidid võivad inhibeerida roti väikeaju graanulite rakkude apoptoosi, inhibeerides kaspaasi-3 ja kaspaasi-8, ning metüülfenüültetrahüdropüridiini (MPTP) põhjustatud hiire C57 mustuse vastu. Kvaliteetsete dopamiinergiliste neuronite kahjustusel on kaitsev toime. Mitte ainult seda, vaidCistanchevõib leevendada ka mitmesuguseid kahjustusi, nagu närvisüsteemi isheemia-reperfusioon. Hiire ajuisheemiakahjustuse katse näitab, et infarkti vahemik 24 ja 48 tundi pärast isheemiat ajuisheemia-reperfusioonirühmas on keskmiselt 72,98 protsenti ja 60,45 protsenti. SeevastucistancheGlükosiidide summaarsed suured, keskmised ja väikese annuse rühmad (vastavalt 250.0mg·kg/päevas; 125,0mg·kg/päevas; 62,5 mg·kg/päevas) võivad muuta hiirte aju pärast ajuisheemiat-reperfusiooni 24 tundi Infarkti suurust vähendati 25,94 protsendini, 25,81 protsendini ja 31,13 protsendini ning ajuinfarkti suurust vähenes 48 tunni pärast 22,14 protsendini, 20,06 protsendini ja 22,27 protsendini. Nende kahe vahel oli märkimisväärne erinevus, mis näitas olulist pärssivat toimet neuronaalsele apoptoosile.

Selles uuringus on erinevad kontsentratsioonidcistanche üldglükosiididkohaldati OEC-dele. MTT meetod ja voolutsütomeetria mõõtmine kinnitasid, et 10mg/ml100mg/mlcistanche üldglükosiididvõib soodustada levikutlõhnatajuümbristavad rakud. Voolutsütomeetria tulemused näitasid sedacistanche üldglükosiididvõib soodustada levikutlõhnatajurakkude ümbritsemine See soodustab peamiselt G1 tsükli proliferatsioonilõhnatajusperma rakud ja vähendab oluliselt apoptootilisi rakke. SeetõttuCistanche üldglükosiididei saa mitte ainult soodustada levikutlõhnatajukestavad rakke, vaid suurendavad ka rakkude aktiivsust ja inhibeerivad nende apoptoosi. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs tõestab sedaCistanche üldglükosiididvõib oluliselt soodustada GDNF sekretsioonilõhnatajuümbristavad rakud. Ülaltoodud tulemused annavad eksperimentaalse aluse ravimi kliiniliseks kasutamiseksCistanche üldglükosiidid.

Viited

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang jt. Taastusravi ajal seljaaju vigastusega patsientide elukvaliteeti mõjutavad tegurid [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J jt. Lamina propria jalõhnatajuhärja ümbrisrakkudel on erinev integratsioon ja migratsioon ning need soodustavad deferentsiaalsete aksonite idanemist kahjustatud seljaajus [J]. J Neurosci, 2005.25 (46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. haistmisrakud: nende roll kesknärvisüsteemi parandamisel [J.Int J. Biochem Cell Biol. 2005, 37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Puhastatud multipotentsus. sisse siirdatud glükoosi basaalrakudlõhnatajuepiteel[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914):457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. BDNF-i ekspresseeriv marostromaalrakk; toetada ulatuslikku aksonite kasvu kohtades d seljaaju vigastus[J]. Exp Neurol, 2005, 191(2):344-360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD jt. Tubulosa B kaitsev toime TNF-i indutseeritud apoptoosile neuronaalsetes rakkudes [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004, 25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FenüületanoidglükosiididalatesCistanchessalsa pärsib 1-metüül-4-fenüülpüridiiniumiooni poolt neuronites [J] indutseeritud apoptoosi. J Ethnopharmacol, 2005, 97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X jt. Neuroprotektiivne toime