Arutelu

Vananev elanikkond kasvab kogu maailmas jätkuvalt enneolematu kiirusega. Vananemist seostatakse rakufunktsioonide vähenemise, kahjustuste kuhjumise ja krooniliste haiguste suurenemise tõenäosusega, mis põhjustavad süsteemide kokkuvarisemist ja surma [3–7]. Vanusega seotud patoloogiate levimus hilises eas mõjutab oluliselt elukvaliteeti ja tervishoiukulusid. Seega on tungiv vajadus tõhusa vananemisvastase toimega sekkumiste järele, mida saaks kasutada geroprotektorina vananemise edasilükkamiseks ja tervise pikendamiseks.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja see suudab eemaldada reaktiivseid hapniku liike ja takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist, samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake, et hankida jaemüügiks Cistanche'i tooteid

【Lisateabe saamiseks: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Rakkude vananemist kontrollib omavahel seotud keeruliste bioloogiliste protsesside võrgustik [8, 9]. Hiljutised uuringud on näidanud, et vananevatesse bioloogilistesse protsessidesse sekkumine võib oluliselt pikendada mudelorganismide, sealhulgas imetajate tervet eluiga [10, 14]. Kronoloogiline vananemine tärkavates pärmides Saccharomyces cerevisiae on väljakujunenud mudelsüsteem inimese postmitootilise rakkude vananemise sekkumiste määramiseks [16–19].

Töötasime välja uue, kiire ja odava kvantitatiivse meetodi nimega PICLS CLS-i mõõtmiseks, kasutades (1) pärmirakke, mida inkubeeriti söötme ja testühenditega läbipaistvatel 96-süvendiga plaatidel; (2) fluorestseeruv värvaine propiidiumjodiid (PI), rakukindel, mis siseneb ainult surnud rakkudesse [23–25]; ja (3) mikroplaadi lugeja rakkude kvantitatiivse ellujäämise näidu jaoks. Tuleb märkida, et rakkude tihedust (ja rakkude kasvu) saab mõõta OD600 nm juures samalt plaadilt. 96-Süvendiga plaatide surnud pärmirakkude puhul leidsime kõrge lineaarse korrelatsiooni PI fluorestsentsi ja OD600 nm neeldumise vahel optimaalses rakutiheduse vahemikus, mis vastab 0,05–12 OD-le. Seda metoodilist lähenemisviisi saab kasutada rakkude elujõulisuse kvantifitseerimiseks suure läbilaskevõimega testides.

PICLS-iga on seotud mitmeid olulisi uuendusi: (i) PICLS on praegu ainus väljakasvuvaba meetod CLS-i kvantifitseerimiseks. Kriitiline aja- ja ressursinõudlik samm on protokollist välja lõigatud ja seega on PICLS esimene tõeline suure läbilaskevõimega sõeluuring (HTS) keemiliste ainete ja CLS-i mõõtmise kultiveerimistingimuste jaoks. (ii) PICLS-i aluseks oleva metoodilise idee võib üldiselt sõnastada plaadipõhise meetodina, kus (a) surnud/ellujäänud rakkude osa ja (b) rakkude koguhulk määratakse samaaegselt otse samalt plaadilt optilise intensiivsusega. mõõteseade (tavaliselt saadaolev plaadilugeja). Selles töös kasutasime 96-kaevuplaate, kuid 384-kaevuplaadid näivad samuti kasutatavad (võimalik, et tundlikkus on väiksema kultuurikoguse tõttu mõnevõrra vähenenud). Kasutada võib mis tahes värvainet, mis eristab surnud ja ellujäänud rakke ning millel on fluorestsents või neeldumine kanalis, mis ei sega üldist rakutiheduse mõõtmist (nt neeldumise kaudu OD600nm juures). Kasutasime propiidiumjodiidi, mis märgib selektiivselt surnud rakke, kuid see pole PICLS-i jaoks kriitiline.

Joonis 7 2,5-anhüdro-D-mannitooli analoogide mõju testimine pärmi kronoloogilisele elueale. Prototroofset pärmitüve (CEN.PK113-7D) kasvatati sünteetilises määratletud söötmes erineva kontsentratsiooniga 2,5-veevaba Dmannitooli (2,5-AM), D-fruktoosiga. , D-mannitool, D-maltoos ja D-sorbitool 96-süvendiplaatidel 30 kraadi juures. Rakkude kasvu OD600nm mõõdeti erinevatel ajahetkedel 24 h, 48 h ja 72 h, kasutades mikroplaadilugejat ja graafikut 2,5-AM, fruktoosi, mannitooli, maltoosi ja sorbitooli erinevate kontsentratsioonide suhtes. B Inkubeeritud 2,5-AM, fruktoosi, mannitooli, maltoosi ja sorbitooli rakkude erinevate kontsentratsioonide kronoloogiline eluiga (CLS) määrati propiidiumjodiidi fluorestsentsil põhineva meetodi abil. Rakkude ellujäämine erinevates kronoloogilistes vanusepunktides kvantifitseeriti ja kasvuaeg 72 tundi loeti päevaks 1. C Vananenud rakkude CLS määrati väljakasvu meetodil YPD vedelsöötmes. Kasvuaeg 72 tundi loeti 1. päevaks. Erinevatel kronoloogilistel vanusepunktidel kanti 3-μL kultuur teisele 96-süvendiga plaadile, mis sisaldas 200 μL YPD söödet. Väljakasvu OD600nm YPD vedelas söötmes mõõdeti pärast 24-tunnist inkubeerimist 30 kraadi juures, kasutades mikroplaadilugejat. Graafik on kujutatud 1. päeva suhtes. D Süvendi plaadi väljakasv YPD vedelsöötmes pildistati pärast 24-tunnist inkubeerimist 30 kraadi juures. E Erinevates kronoloogilistes vanusepunktides märgiti YPD agarplaadile 3-μL kultuure. Väljakasv pildistati pärast 48-tunnist inkubeerimist 30 kraadi juures. Kõik andmed on esitatud keskmistena±SD.; *P<0.05, **P<0.01, and  ****P<0.0001 based on two-way ANOVA followed by Dunnett's multiple comparisons tests (B and C). n.s, non-significant 

Märgime, et fluorestsentsanalüüside jaoks soovitatakse tavaliselt kasutada musti mikroplaate, kuna see materjal kustutab osaliselt autofluorestsentsi. Siiski hindasime meetodit läbipaistvates mikroplaatides ja leidsime sarnase efektiivsuse nagu mustade mikroplaatide puhul. Kuna mustad mikroplaadid on seotud suurte kuludega, on see oluline eelis suuremahuliste suure läbilaskevõimega sõelumisprojektide jaoks.

Valideerisime oma väljatöötatud meetodi tuntud vananemisvastaste sekkumistega, nagu rapamütsiini manustamine ja kalorite piiramine [10–16], taasesitades nende mõju pärmi CLS-ile. Need tulemused viitavad sellele, et meie meetod on tõhus uute vananemisvastaste sekkumiste tuvastamiseks. Oleme uute vananemisvastaste ühendite tuvastamiseks kasutanud oma äsja väljatöötatud protokolli keemiliste ainete sõelumiseks (joonis 8). Tuvastasime 2,5-anhüdro-D-mannitooli (2,5-AM), mis pikendab pärmi CLS-i. Meie tulemuste põhjal soovitame kasutada 2,5-AM eraldi või koos teiste vananemisvastaste sekkumistega.

2, 5-AM on fruktoosi analoog ja mõlemad suhkrud võivad siseneda glükolüütilisse rada. Glükolüüs on metaboolne protsess, mille käigus heksokinaasi toimel glükoos esmalt fosforüülitakse, moodustades glükoos-6-fosfaadi (G6P). Fosfoglükoisomeraas muudab G6P omavahel fruktoos-6-fosfaadiks (F6P), mis metaboliseeritakse edasi erinevateks allavoolu glükolüütilisteks vaheühenditeks, sealhulgas püruvaadiks, mis siseneb mitokondriaalsesse TCA tsüklisse. Nagu glükoos, fosforüülib fruktoosi ka heksokinaas, moodustades F6P. Fosfofruktokinaas muudab F6P fruktoosiks-1,6-bisfosfaadiks (FBP), mis metaboliseeritakse edasi erinevateks allavoolu glükolüütilisteks vaheühenditeks. 2,5-AM võib samuti fosforüülida heksokinaasiga, moodustades 2,5-AM- 6-fosfaadi (2,5-AM6P) [39–41]. Lisaks muudab fosfofruktokinaas 2,5-AM6P 2,5-AM- 1,6-bisfosfaadiks (2,5-AMBP). 2,5-AMBP-d ei saa aga edasi metaboliseerida allavoolu glükolüütilisteks vaheühenditeks [39–41].

Kuna 2,5-AM on fruktoosi analoog, uurisime, kas fruktoos võib pikendada ka pärmi eluiga. Kuid me ei täheldanud fruktoosi vananemisvastast toimet pärmi CLS-i pikendamisel. Mannitool ja maltoos võivad samuti siseneda glükolüüsi ja metaboliseeruda allavoolu glükolüütilisteks vaheühenditeks. Uurisime ka mannitooli ja maltoosi mõju pärmi elueale. Fruktoos, mannitool ja maltoos ei suuda samuti pikendada pärmi CLS-i.

Kuna sorbitool mõjutab CLS-i väga kõrgetel kontsentratsioonidel (18 protsenti ekvivalendina 1 M) veel üks, veel metaboliseerumata suhkur, [20, 45], siis soovisime selgitada, kas vananemisvastane toime on 2,{{7 }}AM võib olla tingitud söötme suurenenud osmolaarsusest. Meie katsed näitasid, et sorbitool ei suurenda pärmi CLS-i madalamates kontsentratsioonides, mis on efektiivsed 2,5- AM korral. Kuna sorbitool vajab pärmi CLS-i suurendamiseks kõrgemaid kontsentratsioone, ei sõltu 2,{12}}AM-i vananemisvastane mehhanism osmolaarsuse mõjust. Need leiud näitasid, et 2,5-AM-i vananemisvastane toime on spetsiifiline ega ole paralleelne mitme teise sarnase keemilise struktuuriga analoogiga.

Kuidas 2,5-AM eluiga pikendab, tuleb aga veel uurida. Huvitav on uurida, kas 2,5-AM moduleerib otseselt vananemise tunnuseid [8]. TORC1 ja AMPK on glükoositundlikud kompleksid, mis osalevad vananemisprotsessis [32, 43]. TORC1 inhibeerimisega pikendatud kronoloogiline eluiga väheneb aga AMPK inhibeerimisel. Glükoos ja glükolüütilised vaheühendid reguleerivad TORC1 ja AMPK aktiivsust [34, 46, 47]. 2, 5-AMBP inhibeerib aldolaasi aktiivsust, mis katalüüsib FBP muutumist glütseraldehüüd-3-fosfaadiks (G3P) ja dihüdroksüatsetoonfosfaadiks (DHAP) [39, 40]. DHAP muundatakse triosefosfaadi isomeraasi toimel G3P-ks. Hiljutised tõendid näitavad, et DHAP on oluline glükoosi signaalimolekul, mis aktiveerib TORC1 [48].

Kui G3P ja DHAP süntees on mõjutatud, on glükolüütiline fux häiritud, mis vähendab ATP tootmist. Huvitaval kombel aktiveeritakse AMPK, kui rakkude energiaseisund on ohus, ja pärsib rakkude kasvu, inhibeerides TORC1 [46, 47]. Seega on AMPK ja TORC1 antagonistlik suhe tõhus metaboolne kohanemine, et tagada tervete rakkude raku homöostaasi tasakaal. Kuigi me ei täheldanud 2,5-AM mõju rakkude kasvule (joonised 6 ja 7). Need leiud välistasid glükoosi piiramise efekti, mis kahjustas rakkude kasvu (joonis 5), kuid pikendas aeglase kasvu fenotüübiga eluiga [49]. Kuid rapamütsiini eluea pikendamine ei vaja suuremat annust, kui see kahjustab rakkude kasvu (joonis 4). Seetõttu ei saa me TORC1/AMPK kaudu või TORC1/AMPK-st sõltumatult välistada 2,5-AM vananemisvastase toime võimalust.

Erinevalt 2,5-AMBP inhibeerivast toimest aldolaasile aktiveerib see väidetavalt püruvaatkinaasi, viimast glükolüüsi ensüümi [39–41]. Püruvaadi kinaas katalüüsib fosfoenoolpüruvaadi muundumist püruvaadiks, mis on üks NAD plusi (nikotiinamiidadeniindinukleotiid) genereerimise allikatest. NAD plus on oluline metaboliit, mis reguleerib mitmeid rakulisi protsesse ja funktsioone, mis on kriitilised tervete rakkude säilitamiseks ja eluea pikendamiseks [50, 51]. Püruvaat on ka mitokondriaalsete reaktsioonide peamine substraat, et tekitada mitmesuguseid ehitusplokkide metaboliite, mis sünteesivad elutähtsaid elemente, sealhulgas aminohappeid, nukleiinhappeid ja ATP-d, mis on põhiliselt rakkude ellujäämise ja tervisliku vananemise jaoks [52–55]. Tõepoolest, mitokondriaalse aktiivsuse langus on seotud vananemise ja vanusega seotud haigustega [53–56]. Hiljuti pakuti 2,5-AM-i potentsiaalse ravivahendina ägeda müeloidleukeemia (AML) vähi raviks [57].

Vahemärkusena andsime oma uuele meetodile nimeks PICLS (PI-põhine CLS-meetod), pidades silmas sõnamängu "marineeritud kurgid". Kui meie uue protokolli kõiki elemente on mujal juba iseseisvalt kirjeldatud, muudab nende "kääritatud" kombinatsioon mõõtmise lihtsaks ja odavaks ning lõpuks suure läbilaskevõimega valmis.

Kokkuvõtteks oleme välja töötanud kvantitatiivse meetodi pärmi kronoloogilise eluea mõõtmiseks ja tuvastanud 2,5-AM uudse vananemisvastase ühendina. Praegu on käimas uuring, et uurida 2,5- hommikul vananemisvastase toime mehhanisme.

materjalid ja meetodid

Pärmitüvi, sööde ja kemikaalid

Selles uuringus kasutati prototroofse CEN.PK113-7D tüve geneetilist tausta [35, 36]. Standardrikas sööde YPD (1% Bacto pärmiekstrakt, 2% Bacto peptoon ja 2% glükoosi), YPD agar (2,5% Bacto agar) ja sünteetiline määratletud (SD) sööde, mis sisaldab 6,7 g/l pärmi lämmastiku alust ammooniumsulfaadiga ilma aminohapeteta (DIFCO) ja 2 protsenti glükoosi. Rapamütsiini (Enzo) põhilahus valmistati dimetüülsulfoksiidis (Sigma). DMSO lõppkontsentratsioon ei ületanud üheski testis 1 protsenti. 2,5-Anhüdro-D-mannitooli (Santa Cruz), D-fruktoosi (Sigma), D-mannitooli (Sigma), D-maltoosi (Sigma) ja D-sorbitooli (Sigma) töökontsentratsioonid, mis on valmistatud värskelt lahustades pulbri otse söötmes ja steriliseerides filtriga.

Pärmi kasvutingimused

Pärmitüvi saadi külmutatud glütserooli varust YPD agarisöötmel 30 kraadi juures. Pärmi kasvatati SD söötmes üleöö 30 kraadi juures loksutades kiirusel 220 p/min. Üleöö kasvatatud rakud lahjendati värskes SD söötmes väärtuseni OD600nm ~ 0,2, et alustada kronoloogilise eluea katseid.

Kronoloogiline eluea analüüs

Kronoloogilise eluea (CLS) katsed viidi läbi {{0}}süvendiplaatidel, milles oli kokku 20{{10}} µL pärmikultuuri, nagu eelnevalt kirjeldatud [58]. Rakuline inokulaat kanti 96-süvendiga plaadile, mis sisaldas järjestikku topeltlahjendatud kontsentratsioonides (0–10 nM) rapamütsiini. Kalorite piiramise testi jaoks valmistati rakulised inokulaadid SD-söötmes, mis sisaldas 2 protsenti, 0,5 protsenti ja 0,25 protsenti glükoosi, ning kanti 96-süvendiga plaatidele. Samuti kanti rakuline inokulaat 96-süvendiplaatidele, mis sisaldasid järjestikku topeltlahjendatud kontsentratsioonides (0–8 mM) 2,5-anhüdro-D-mannitooli, D-fruktoosi, D-mannitooli, D-maltoos ja D-sorbitool. Rakke inkubeeriti 30 kraadi juures ja kasvu mõõdeti erinevatel ajahetkedel. Kasvuaeg 72 tundi loeti CLS-testi 1. päevaks. Rakkude ellujäämist kvantifitseeriti erinevatel vanusepunktidel kolme erineva lähenemisviisiga: (i) propiidiumjodiidi fluorestsentsil põhinev meetod, (ii) väljakasv YPD vedelsöötmes ja (iii) määrimisanalüüs.

i) propiidiumjodiidi fluorestsentsil põhinev meetod:Propiidiumjodiidi (PI) fluorestsentsil põhineva lähenemisviisi väljatöötamise üksikasjalikud protseduurid on mainitud tulemuste jaotises. CLS-testi jaoks kanti {{0}}µl pärmirakke erinevatel vanusepunktidel teisele 96-süvendiga plaadile. Rakke pesti ja inkubeeriti 15 minutit pimedas 100 µl 1 × PBS-s koos PI-ga (5 µg/ml). Kvantitatiivseks analüüsiks lisati positiivsete ja negatiivsete proovide kontroll. Positiivne kontroll (rakke keedeti 100 kraadi juures 15 minutit) värviti PI-ga ja töödeldi samal 96-süvendiga plaadil. PI-värvitud rakkudeta proovid olid negatiivseks kontrolliks. Pärast inkubeerimist rakke pesti ja resuspendeeriti 100 µl PBS-is. Proovi fluorestsentsi näitu (ergastus 535 nm juures, emissioon 617 nm juures) ja OD600 nm mõõdeti mikroplaadilugejaga (BioTek). Iga proovi fluorestsentsi intensiivsus normaliseeriti OD600 nm-ga. Iga proovi normaliseeritud fluorestsentsi intensiivsus lahutati värvimata negatiivse proovi taustsignaalist. Positiivse kontrollproovi (keedetud surnud rakud) saadud fluorestsentsi intensiivsust loeti rakkude ellujäämiseks 0 protsenti. Kinnitasime raku surma b, võimaldades sellel söötmes kasvada. Rakkude ellujäämine erinevates vanusepunktides arvutati, normaliseerides fluorestsentsi intensiivsust positiivse kontrollprooviga (keedetud rakud).

kus Iij(535nm∕617nm) on süvendis mõõdetud fluorestsentsi intensiivsus plaadi koordinaatidega i ja j ergastuse juures 535 nm ja emissiooniga 617 nm juures, ID(535nm∕617nm) on fluorestsentsi intensiivsus mõõdetud rakkude surnud protsendi juures 10 PI-ga värvitud rakud, IC(535nm∕617nm) on PI-ta rakkude puhul mõõdetud fluorestsentsi intensiivsus ja vastavad OD väärtused on vastavate rakkude puhul mõõdetud neeldumine lainepikkusel 600 nm, normaliseerides rakkude arvu.

(ii) Väljakasv YPD vedelsöötmes:Erineva vanusega ajapunktidega pärmi statsionaarne kultuur (3-μL) kanti teisele 96-süvendiga plaadile, mis sisaldas 200 µl YPD söödet, ja inkubeeriti 24 tundi 30 kraadi juures. Vananenud rakkude väljakasv (OD600nm) mõõdeti mikroplaadilugejaga. Rakkude ellujäämise kvantifitseerimine iga vanusepunkti kohta määrati 1. päeva suhtes (peetakse 100-protsendiliseks rakkude ellujäämiseks), nagu eelnevalt kirjeldatud [19, 20, 58].

iii) määrimisanalüüs:Erineva vanusega ajapunktidega pärmi statsionaarne kultuur (3 μL) märgiti YPD agariplaadile ja inkubeeriti 48 tundi 30 kraadi juures. Vananenud rakkude väljakasv YPD agarplaadil pildistati BioRad GelDoc pildisüsteemi abil.

Andmete analüüs

Kõigi tulemuste, nagu keskmine väärtus, standardhälbed, korrelatsioon (R2), olulisus ja graafikute statistiline analüüs viidi läbi tarkvara GraphPad Prism v.9.3.1 abil. Tulemusi võrreldi statistiliselt, kasutades tavalist ühesuunalist ANOVA-d ja kahesuunalist ANOVA-d, millele järgnes mitmekordne võrdlus Dunnetti post hoc testi või Sidaki post hoc testiga. Kõigil graafikutel on P väärtused näidatud kui *P<0.05,  **P<0.01, ***P<0.001, and ****P<0.0001 were considered significant. n.s, non-significant.

TänuavaldusedAutori MA ja FE on kahe patenditaotluse (10202201534P ja 10202201536U) leiutajad, mis sisaldavad osa selles artiklis kirjeldatud tööst.

Autori panusMA töötas välja projekti, viis läbi katsed ja analüüsis andmeid. FE koostas projekti, hindas andmeid ja töötas välja strateegia. MA ja FE kirjutasid töö ning kõik autorid vaatasid selle läbi ja nõustusid selle lõpliku versiooniga.

RahastamineSeda tööd toetasid Bioinformaatika Instituut (BII), A*STAR Career Development Fund (C210112008) ja Global Healthy Longevity Catalyst Awardsi stipendium (MOH-000758–00).

Deklaratsioonid

Konkureerivad huvidAutorid ei deklareeri konkureerivaid huve.

Avatud juurdepääsSee artikkel on litsentsitud Creative Commons Attribution 4.0 Rahvusvaheline litsents, mis lubab kasutamist, jagamist, kohandamist, levitamist ja reprodutseerimist mis tahes andmekandjal või vormingus, tingimusel et annate originaalautori(te)le asjakohase tunnustuse. ) ja allikas, lisage link Creative Commonsi litsentsile ja märkige, kas muudatusi on tehtud. Selles artiklis olevad pildid või muu kolmanda osapoole materjal sisaldub artikli Creative Commonsi litsentsis, kui materjali krediidilimiidil ei ole märgitud teisiti. Kui materjal ei sisaldu artikli Creative Commonsi litsentsis ja teie kavandatud kasutamine ei ole seadusega lubatud või ületab lubatud kasutust, peate hankima loa otse autoriõiguste omanikult.

Viited

1. das nações Unidas, O. ÜRO majandus- ja sotsiaalküsimuste osakond, rahvastikuosakond (2019). Maailma rahvastiku väljavaated, esiletõstmised (ST/ESA/SER.A/423). 2019.

2. Robine J. Vananev elanikkond: me elame kauem, kuid kas oleme tervemad? ÜRO majandus- ja sotsiaalministeerium, rahvastikuosakond, UN DESA/POP/2021/TP/NO. 2. (2021).

3. Niccoli T, Partridge L. Vananemine kui haiguste riskitegur. Curr Biol. 2012. aasta.

4. Hou Y et al. Vananemine kui neurodegeneratiivsete haiguste riskitegur. Nat Rev Neurol. 2019.

5. Harman D. Vananemisprotsess: peamine haiguste ja surma riskitegur. Proc Natl Acad Sci US A. 1991.

6. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Seoses silmitsi vananemise ülemaailmsete väljakutsetega. Loodus. 2018.

7. Fontana L, Kennedy BK, Longo VD. Meditsiinilised uuringud: ravige vananemist. Loodus. 2014. aasta.

8. López-Otín C, Blasco MA, Partridge L, Serrano M, Kroemer G. Vananemise tunnused. Kamber. 2013. aasta.

9. Kennedy BK et al. Geroscience: vananemise seostamine krooniliste haigustega. Kamber. 2014. aasta.

10. Partridge L, Fuentealba M, Kennedy BK. Püüd aeglustada vananemist ravimite avastamise kaudu. Nat Rev ravimite avastus. 2020.

11. Mattison JA et al. Kalorite piiramine parandab reesusahvide tervist ja ellujäämist. Nat Commun.

12. Bitto A et al. Mööduv ravi rapamütsiiniga võib pikendada keskealiste hiirte eluiga ja tervist. Elife. 2016. aasta.

13. Fontana L, Partridge L. Tervise ja pikaealisuse edendamine dieedi kaudu: mudelorganismidest inimesteni. Kamber. 2015. aasta.

14. Zhang Y, Zhang J, Wang S. Rapamütsiini roll tervise pikendamisel elundite vananemise edasilükkamise kaudu. Aging Res Rev. 2021.

15. Selvarani R, Mohammed S, Richardson A. Rapamütsiini mõju vananemisele ja vanusega seotud haigustele – minevik ja tulevik. GeroScience. 2021. aasta.

16. Fontana L, Partridge L, Longo VD. Terve eluea pikendamine pärmist inimesele. Teadus. 2010. aasta.

17. Zimmermann A, et al. Pärm kui vahend vananemisvastaste ühendite tuvastamiseks. FEMS Yeast Res. 2018.

18. Longo VD, Shadel GS, Kaeberlein M, Kennedy B. Saccharomyces cerevisiae replikatiivne ja kronoloogiline vananemine. Lahtri metab. 2012. aasta.

19. Powers RW, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy BK, Fields S. Kronoloogilise eluea pikendamine pärmis TOR-raja signaalimise vähenemisega. Genes Dev. 2006.

20. Murakami CJ, Burtner CR, Kennedy BK, Kaeberlein M. Meetod pärmi kronoloogilise eluea suure läbilaskevõimega kvantitatiivseks analüüsiks. J Gerontol. Ser. A Biol. Sci. Med. Sci. (2008).

21. Teng X, Hardwick JM. Geneetiliselt kontrollitud rakusurma kvantifitseerimine tärkavas pärmis. Meetodid Mol Biol. 2013. aasta.

22. Garay E et al. Statsionaarse faasi ellujäämise kõrge eraldusvõimega profiilide koostamine näitab pärmi pikaealisuse tegureid ja nende geneetilisi koostoimeid. PLoS Genet. 2014. aasta.

23. Alfatah M et al. Hüpokulosiid, Acremoniumi sfingoid-aluselaadne ühend, häirib pärmirakkude membraani terviklikkust. Teadusvabariik 2019.

24. Alfatah M et al. Mono-(2-etüülheksüül)ftalaadi keemilis-geneetilise interaktsiooni maastik, kasutades pärmi kemogenoomilist profiili. Kemosfäär. 2019.

25. Kwolek-Mirek M, Zadrag-Tecza R. Pärmirakkude elujõulisuse ja elujõulisuse hindamise meetodite võrdlus. FEMS Yeast Res. 2014. aasta.

26. Chadwick SR et al. Tööriistakast Saccharomyces cerevisiae kronoloogilise eluea ja ellujäämise kiireks kvantitatiivseks hindamiseks. Trafc. 2016. aasta.

27. Pereira C, Saraiva L. Vananemiskeskkonna interferents pärmi kronoloogilise eluea hindamisel propiidiumjodiidiga värvimisega. Folia Microbiol. (Praha). (2013).

28. Lamming DW, Ye L, Sabatini DM, Baur JA. Rapaloogid ja mTOR-i inhibiitorid vananemisvastaste ravimitena. J Clin uurimine. 2013. aasta.

29. Arriola Apelo SI, Lamming DW. Rapamütsiin: Lihavõttesaare pinnasest tuleb välja vananemise pidurdaja. Gerontoloogia ajakirjad – A-seeria bioloogia- ja meditsiiniteadused. 2016. aasta.

30. Wilkinson JE et al. Rapamütsiin aeglustab hiirte vananemist. Vananev rakk. 2012. aasta.

31. Saxton RA, Sabatini DM. mTOR signaalimine kasvus, ainevahetuses ja haigustes. Kamber. 2017;168:960–76.

32. Johnson SC, Rabinovitch PS, Kaeberlein M. MTOR on vananemise ja vanusega seotud haiguste peamine modulaator. Loodus. 2013. aasta.

33. González A, saal MN. Toitainete tuvastamine ja TOR signaalimine pärmis ja imetajates. EMBO J. 2017;36:397–408.

34. Alfatah M et al. TORC1 reguleerib Saccharomyces cerevisiae transkriptsioonilist vastust glükoosile ja arengutsüklit Tap{2}} Sit4-Rrd1/2 raja kaudu. BMC Biol. 2021. aasta.

35. Van Dijken JP et al. Nelja Saccharomyces cerevisiae tüve füsioloogiliste ja geneetiliste omaduste laboritevaheline võrdlus. Enzyme Microb Technol. 2000.

36. Mülleder M et al. Prototroofsete deletsioonimutantide kollektsioon pärmi metaboloomika ja süsteemibioloogia jaoks. Nat Biotechnol. 2012. aasta.

37. Alvers AL, et al. Autofagia on vajalik pärmi kronoloogilise eluea pikendamiseks rapamütsiini poolt. Autofagia. 2009.

38. Zhang JH, Chung TDY, Oldenburg KR. Lihtne statistiline parameeter suure läbilaskevõimega sõeltestide hindamiseks ja valideerimiseks. J Biomoli ekraan. 1999. aasta.

39. Riquelme PT, Wernette Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. Süsivesikute metabolismi reguleerimine 2,5-anhüdro-D-mannitooliga. Proc Natl Acad Sci US A. 1983.

40. Riquelme PT, Wernette-Hammond ME, Kneer NM, Lardy HA. 2,5-anhüdro-D-mannitooli toimemehhanism hepatotsüütides. Fosforüülitud metaboliitide mõju süsivesikute metabolismi ensüümidele. J. Biol. Chem. (1984).

41. Riquelme PT, Kneer NM, Wernette-Hammond ME, Lardy HA. Glükolüüsi inhibeerimine isoleeritud roti hepatotsüütides ja Ehrlichi astsiidirakkudes 2,5-anhüdromannitooli poolt. Proc Natl Acad Sci US A.

42. Hardie DG. AMP-aktiveeritud / SNF1 proteiinkinaasid: rakuenergia konserveeritud valvurid. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007.

43. Burkewitz K, Zhang Y, Mair WB. AMPK energeetika ja vananemise ühenduses. Lahtri metab. 2014. aasta.

44. McCartney RR, Chandrashekarappa peadirektoraat, Zhang BB, Schmidt MC. Saccharomyces cerevisiae 2-desoksüglükoosi suhtes resistentsuse ja tundlikkuse geneetiline analüüs. Geneetika. 2014. aasta.

45. Burtner CR, Murakami CJ, Kennedy BK, Kaeberlein M. Pärmi kronoloogilise vananemise molekulaarne mehhanism. Lahtri tsükkel. 2009.

46. ​​Lin SC, Hardie peadirektoraat. AMPK: tuvastab nii glükoosi kui ka raku energiaseisundi. Lahtri metab. 2018.

47. González A, Hall MN, Lin SC, Hardie DG. AMPK ja TOR: yin ja yang rakkude toitainete tuvastamisel ja kasvu kontrollimisel. Lahtri metab. 2020.

48. Orozco JM, et al. Dihüdroksüatsetoonfosfaat annab mTORC1-le signaali glükoosi saadavusest. Nat Metab. 2020.

49. Aguiar-Oliveira MH, Bartke A. Kasvuhormooni puudulikkus: tervis ja pikaealisus. Endocr Rev. 2019.

50. Orlandi I, Alberghina L, Vai M. Nikotiinamiid, nikotiinamiidribosiid ja nikotiinhape – esilekerkivad rollid pärmi replikatiivses ja kronoloogilises vananemises. Biomolekulid. 2020.

51. Covarrubias AJ, Perrone R, Grozio A, Verdin E. NAD pluss ainevahetus ja selle roll rakuprotsessides vananemise ajal. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021. aasta.

52. Spinelli JB, Haigis MC. Mitokondrite mitmekülgne panus raku ainevahetusse. Nat Cell Biol. 2018.

53. Berry BJ, Kaeberlein M. Geroscience energeetika perspektiiv: mitokondriaalne protonmotoorjõud ja vananemine. Gero-Science. 2021. aasta.

54. Sun N, Youle RJ, Finkel T. Vananemise mitokondriaalne alus. Mol Cell. 2016. aasta.

55. Kauppila TES, Kauppila JHK, Larsson NG. Imetajate mitokondrid ja vananemine: värskendus. Lahtri metab. 2017. aasta.

56. Bratic A, Larsson NG. Mitokondrite roll vananemisel. J Clin uurimine. 2013. aasta.

57. Chen WL et al. SLC2A5 vahendatud tõhustatud fruktoosi kasutamine on terapeutilise potentsiaaliga ägeda müeloidse leukeemia ainulaadne metaboolne tunnus. Vähirakk. 2016. aasta.

58. Jing JL, Ning TCY, Natali F, Eisenhaber F, Alfatah M. Raua lisamine lükkab edasi vananemist ja pikendab raku eluiga mitokondriaalse funktsiooni võimendamise kaudu. Cells 11, (2022).

Väljaandja märkusSpringer Nature jääb avaldatud kaartide ja institutsionaalsete seoste suhtes erapooletuks.

【Lisateabe saamiseks: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】