Abstraktne

Taust: On teatatud, et mesilaspiim vähendab melaniini sünteesi ja pärsib melanogeneesiga seotud valkude ja geenide ekspressiooni. Selles uuringus hindame Apis mellifera mesilasema piimhappe 10-hüdroksü-2-dekaanhappe (10-HDA) melanogeenset ja depigmenteerivat toimet.

Mõned uuringud on seda väitnudcistanchevõib aidata vältida naha vananemistoksüdatiivse stressi vähendaminejapõletik, mis mõlemad võivad kaasa aidatakortsud, tumedad laigudja muid vananemise märke. Siiski on ebaselge, kascistanchesaabkergendama nahkavõivähendada pigmentatsiooni. Lühidalt, kuigi tsistanche võib nahale kasulikke toimeid avaldada, pole selge, kas seda saab kasutada usaldusväärse vahendina.naha valgendamineagent. Alati on kõige parem konsulteerida dermatoloogiga, et saada nõu ohutute ja tõhusate viiside kohta oma naha eest hoolitsemiseks.

Valgendamiseks klõpsake valikul Cistanche Tubulosa

Lisateabe saamiseks:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Meetodid:Selles uuringus hindame {{0}}HDA valgendavat aktiivsust võrreldes muutustega rakusisese türosinaasi aktiivsuses, melaniinisisalduses ja melaniini tootmisega seotud valgu tasemetes B16F1 melanoomirakkudes pärast ravi {{4 }}HDA. Lisaks hinnati nahka valgendavat toimet, kandes 0,5%, 1% ja 2% 10-HDA-d sisaldavat kreemtoodet hiirte nahale (C57BL/6 J) 3 nädala jooksul, et jälgida DL-i mõju. *-väärtused.

Tulemused:Tulemused näitasid, et 10-HDA inhibeeris MITF-valgu ekspressiooni (IC50 0.86 mM) B16F1 melanoomirakkudes. Western blot analüüs näitas, et 10-HDA inhibeeris türosinaasi aktiivsust ja türosinaasiga seotud valgu 1 (TRP-1), TRP-2 ja mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktori (MITF) ekspressiooni B16F1 melanoomirakkudes. Lisaks näitab hiirte nahale kantud 10-HDA märkimisväärselt suurenenud keskmine naha valgendamise indeks (L väärtus).

Järeldused:Valideerimisandmed näitasid 10-HDA potentsiaali kasutada naha pigmentatsiooni pärssimisel. 10-HDA on välja pakutud melanogeneesi inhibeeriva kandidaadina, seega võiks seda välja töötada kosmeetikatoodete nahahooldustootena.

Märksõnad:Mesilaspiim, 10-hüdroksü-2-dekaanhape, melanogenees, naha valgendamine, melanogeneesi inhibiitor

Taust

Mesilaspiim (RJ) on noore töömesilase (Apis mellifera) sekretsioon, mida toodavad hüpofarüngeaalsed ja alalõualuu näärmed, arenevat mesilasemat toideti sellega ainult kogu elu [1]. RJ pakub kõrgeid toiteväärtusi valkude, vabade aminohapete, lipiidide, vitamiinide ja suhkrute rohkete koguste tõttu [2, 3]. RJ bioaktiivsed valgud on peamised mesilasema piimavalgud (MRJP), apisimiin ja royaliseeriv valk, mis on mitmetes uuringutes näidanud immunoreguleerivat ja antibakteriaalset toimet [4–6]. 10-hüdroksü-2- dekaanhape (10-HDA) oli RJ peamine rasvhape, millel on inimesele mitmeid tervisele kasulikke toimeid, mis on näidanud kasvajavastast, antibakteriaalset ja immunomoduleerivat toimet [7 –9]. 10-HDA-d leidub ainult RJ-s, seega on seda kasutatud mesilasema piimatoodete kvaliteedimarkerina [10, 11]. RJ mitmed farmakoloogilised toimed on juba kinnitatud loomkatsetega ja farmakoloogilised toimed, sealhulgas antioksüdatsioon [12, 13], põletikuvastane [14], kasvajavastane [15, 16], anti-agenees [17], antibakteriaalne [18–20], vasodilatatiivne [21, 22], hüpertensiivne [21, 22], antihüperkolesteroleemiline [23], nefroprotektiivne [24] ja nahka valgendav toime [25]. Selle toiteväärtuse ja inimeste tervisele kasuliku mõju põhjal on turgudel üha rohkem müügilolevaid RJ-tooteid.

Loomade ja inimeste nahavärv on seotud melaniini pigmendi sisaldusega nahas. Melaniini roll on kaitsta nahka UV-kiirguse kahjustuste eest, kuid melaniini liigne kogunemine põhjustab tõsiseid nahahäireid, nagu värvimuutus ning pigmenteerunud ja kiirenenud naha vananemine [26]. Melaniini sünteesiti melanogeneesi mehhanismide kaudu epidermise sisemises kihis asuvates melanotsüütides [27]. Melanogenees on keeruline biosünteesirada, mida kontrollivad türosinaas, türosinaasiga seotud valgud 1 ja 2 (TRP-1 ja TRP-2) ning mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktor (MITF) [28, 29]. Türosinaas on kiirust piirav ensüüm melaniini sünteesi kontrollimiseks. Melaniini tootmise esimene samm on L-türosiini hüdroksüülimine L-3,4-dihüdroksüfenüülalaniiniks (L-DOPA) ja L-DOPA muundamine dopakinooniks [30]. TRP-2 katalüüsib dopakroomist muundatud 5,6--dihüdroksüindoolkarboksüülhappe ja TRP-2, 5,6--dihüdroksüindoolkarboksüülhappe saadust. TRP-1 substraat muudetakse indool-5,6-kinoonkarboksüülhappeks, mille tulemuseks on melaniini süntees [31, 32]. Melaniini sünteesi pärssimine melanogeneesi katkemise kaudu oleks peamine viis hüperpigmenteerunud häirete, nagu melasma ja vanuselaikude, ennetamiseks või parandamiseks. Seetõttu oleks meditsiini- ja kosmeetikatööstuses tähelepanuväärne potentsiaalse, ohutu ja tõhusa ühendi otsimine nende melanogeneesi tegurite allareguleerimiseks [25, 33, 34].

On tõestatud, et mesilaspiim võib vähendada melaniini sünteesi [22], kuid RJ peamine toimeaine või nende toimete aluseks olev mehhanism jääb teadmata. Eelmises uuringus leidsime, et 10-HDA võib pärssida türosinaasi aktiivsust (avaldamata andmed). Selles uuringus hinnati täiendavalt 10-HDA pärssivat toimet türosinaasile. 10-HDA melanogeneesi inhibeeriva toime uurimiseks viidi läbi nii melaniini biosünteesi in vitro mudelid, milles kasutati B16F10 melanoomi rakukultuuri, kui ka nahale kantud hiire loommudel.

meetodid

10-HDA valmistamine mesilaspiimast

Mesilaspiima valmistas Taiwanis Hualiinis asuv Fu-Chang Beekeeping. 3-päeva vanused vastsed viidi raamidel olevatesse kuningannakuppidesse ja iga kaader sisaldas 30 mesilasema tassi. Raamid viidi mesilaste tarudesse ja RJ koguti 72 tundi pärast vastsete ülekandmist. Igas tarus on ligikaudu 25,{5}} mesilast [35]. Kogutud RJ proove hoiti kuni edasise analüüsini temperatuuril –2{51}} kraadi. Mesilaspiima (40 g) keedeti püstjahutiga metanooliga (400 ml × 4 × 30 min) ja supernatant koguti tsentrifuugimise teel 4500 xg juures 30 minutit. Supernatant kontsentreeriti alandatud rõhul, et saada toorekstrakt (10,76 g) nimega RJM. Metanoolis suspendeeritud RJM puhastati silikageeli kolonnkromatograafiaga (SiO2 CC) ja elueeriti seejärel kloroformi ja metanooli gradientidega (300:1 kuni 1:1), et saada kümme TLC-ga analüüsitud fraktsiooni. Fraktsioonidel 4 ja 5 olid olulised laigud ning seetõttu puhastati ja analüüsiti neid veelgi. Fraktsioone 4 ja 5 puhastati korduvalt SiO2 CC-ga (elueeriti kloroformi/metanooliga, 300:1 kuni 1:1) ja seejärel kristalliseeriti atsetooniga, et saada 10-hüdroksü-2-dekaanhape ({{32} } HDA). Puhastatud produkti keemilist struktuuri kinnitati NMR ja GC-massispektri analüüsiga. 10-HDA kvantitatiivne analüüs määrati kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) abil Waters 1525 pumpamissüsteemiga, mis oli varustatud Water 2489 detektoriga, RP-8 GP250 kolonniga (4,6 mm) ja Watersi seadmega. 717plus automaatne proovivõttur. Liikuvaks faasiks oli metanoolilahus (60:40 maht/maht ülipuhta ja deioniseeritud veega), mis reguleeriti fosforhappega pH väärtuseni 2,5, filtreeriti läbi membraani (0,45 μm) ja degaseeriti 5 minutit. Liikuva faasi voolukiirus reguleeriti väärtusele 1,0 ml/min ja tuvastamine viidi läbi 225 nm juures. 10HDA sisaldus lõplikus puhastatud proovis on 90 protsenti, mida kasutatakse edasiseks analüüsiks.

Rakukultuur ja 10-HDA-ravi

B16F10 melanoomirakke (BCRC number: 60 031) kultiveeriti Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes (DMEM), millele oli lisatud 10% (maht/maht) veise loote seerumit temperatuuril 37 kraadi niisutatud, CO2-kontrollitud (5%) inkubaatoris. . Rakud külvati sobiva rakutihedusega 24-süvendisse või 6-süvendiga plaadile. Pärast 1-päevast inkubeerimist töödeldi rakke erineva kontsentratsiooniga 10-HDA-ga. Kontrollrühmas kasutati kandjat 10-HDA asemel. Seejärel rakud koguti ja kasutati erinevate analüüside jaoks.

Rakkude elujõulisuse mõõtmine

Rakkude elujõulisust mõõdeti {{0}}(4,5-dimetüültiasool-2- üül)-2,5 -difenüültetrasooliumbromiidi (MTT) testiga vastavalt meetod, mille on kirjeldanud Carmichael et al. [36]. B16F10 melanoomirakke kultiveeriti DMEM-is, mis sisaldas 10% FBS-i ja 1% L-glutamiini (4 mM) 5% CO2 inkubaatoris temperatuuril 37 °C. Kultiveeritud rakud (1 × 104 rakku süvendi kohta) külvati 96-süvendiga plaadile, 10-HDA (lahustatud dimetüülsulfoksiidis (DMSO)), lahjendati söötmega kontsentratsiooniga 1, 0,5, 0,1. Süvenditesse lisati mM ja 1 mM kojhapet. Söödet kasutati toorikuna. Pärast 24-tunnist inkubeerimist 37 kraadi juures 5% CO2 atmosfääris eemaldati sööde igast süvendist, seejärel pesti süvendeid kaks korda PBS-ga (1 M fosfaatpuhvri soolalahus). Igasse süvendisse lisati 200 ul MTT lahust (2 mg/ml). Reaktsioon lõpetati 100 µl DMSO lisamisega pärast 4- h inkubeerimist. Iga süvendi neeldumist mõõdeti 540 nm juures, kasutades immuunanalüüsi lugejat (BIO-TEK, Winooski, VT) [20–23]. Rakkude elujõulisus määrati järgmise võrrandiga: rakkude elujõulisus (protsent)=[(AB)/C] × 100 protsenti, A: proovi neeldumismaht, B: pimekatse neeldumismaht, C: neeldumismaht.

Rakulise melaniini sisalduse mõõtmine

B16F10 melanoomirakkude intratsellulaarset melaniinisisaldust mõõdeti Bilodeau jt [37] poolt kirjeldatud modifitseeritud meetodil. B16F10 melanoomirakkude kultiveerimise lõpus rakud koguti ja pesti PBS-ga. Kogutud rakud lüüsiti külmas lüüsipuhvris (20 mM naatriumfosfaat (pH 6,8), 1% Triton X-100, 1 mM fenüülmetüülsulfonüülfluoriid (PMSF), 1 mM etüleendiamiintetraäädikhape (EDTA)). Pärast tsentrifuugimist kiirusel 15,000 × g 30 minutit, lahustati graanulid 1 N NaOH-s, mis sisaldas 20 protsenti DMSO-d, 1 tund temperatuuril 60 kraadi. Supernatandi valgusisaldus määrati Bradfordi testi abil. Mõõdeti neeldumine lainepikkusel 405 nm ja melaniinisisaldus arvutati sünteetilise melaniini teadaoleva standardi alusel. Melaniini tase ( protsenti )=[(AB)/ C] × 100 protsenti ; A: proovi neeldumismaht; B: tühikatse neeldumismaht; C: neeldumismahu reguleerimine.

Raku türosinaasi aktiivsuse mõõtmine

Türosinaasi aktiivsuse test viidi läbi vastavalt meetodile, mida on eelnevalt kirjeldanud Martinez-Esparza et al., [38], väikeste muudatustega. B16F10 melanoomirakud lüüsiti 20 mM naatriumfosfaadis (pH 6,8), 1 protsendilises Triton X-100 ja 1 mM fenüülmetaansulfonüülfluoriidis või PMSF-is ning tsentrifuugiti kiirusel 14,000 p/min 15 minutit. Iga supernatandi valgusisaldus määrati Bradfordi testiga, kasutades valgustandardina veise seerumi albumiini (BSA). Türosinaasi aktiivsus määrati reaktsioonisegus (1 ml), mis sisaldas 50 mM fosfaatpuhvrit (pH 6,8), 2 mM L DOPA-d ja 300 ug supernatantvalke. Pärast 15-minutilist inkubeerimist 37 kraadi juures mõõdeti mikroplaadilugejaga neeldumine lainepikkusel 475 nm. Türosinaasi aktiivsus (protsent)=[(AB)/C] × 100 protsenti ; A: proovi neeldumismaht; B: tühikatse neeldumismaht; C: neeldumismahu reguleerimine.

Western blot analüüs

Rakke pesti 3 korda jääkülmas PBS-is ja lüüsiti RIPA puhvris (pH 7,4, 50 mM tris, 0,1% SDS, 50 mM NaCl, 1% NP-40, 1 mM PMSF, 10 ug/ml aprotiniini ja 10 ug/ml leupeptiini). Lüsaadi alikvooti kasutati valgusisalduse määramiseks Bradfordi analüüsi meetodil, kasutades standardina veise seerumi albumiini. Valgud (40 ug) eraldati 10% SDS-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga ja blotiti Hybond-C Extra nitrotselluloosmembraanile (Amersham Bioscience, UK). Membraanid blokeeriti 30 minuti jooksul 5% rasvavaba piimaga Tris-puhvri soolalahuses (TBS), mis sisaldas 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ja 150 mM NaCl. Küüliku polüklonaalsete antikehade abil tuvastati vastavalt MITF, türosinaas, dopakroom tautomeraas 2 (TRP-2), TRP-1 ja -aktiin (sisekontrollina). Membraane inkubeeriti täiendavalt kitse polüklonaalse sekundaarse antikehaga küüliku IgG-H&L (HRP) vastu. Seejärel tuvastati kõik seotud antikehad Super Signal® West Pico kemiluminestsentssubstraati (ECL) (Thermo Scientific) kasutades. Iga riba signaali intensiivsus kvantifitseeriti densitomeetrisüsteemiga Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad), mis oli varustatud integraatoriga ja normaliseeriti sisemise kontrolli omaga.

Depigmentatsiooni aktiivsuse määramine hiirtel

Depigmentatsiooni aktiivsust testiti hiire mudelisüsteemi kaudu Tai et al. modifitseeritud protokolli järgi. [39]. Uuringu kiitis heaks riikliku Formosa ülikooli eetikakomitee (kinnitusnumber: 10,401). Viie nädala vanused emased mustad hiired (C57BL/6 J), kaaluga 20–25 g, osteti Taipeis asuvast riiklikust loomalabori keskusest. Kõigi katsete ajal hoiti loomi konditsioneeritud ruumis, kus oli konstantne temperatuur (25 kraadi ± 2 kraadi) ja neid hoiti 12-tunnisel valguse: pimeduse tsüklil. Loomi aklimatiseerus 7 päeva enne katset. Pärast karvade raseerimist anti loomadele 1-päevane puhkus. 10-HDA-d sisaldavad geeliproovid valmistati, dispergeerides ravimid vaseliinis. Kokku nelikümmend hiirt jagati võrdselt viide rühma ja igale rühmale määriti kaks korda päevas 0,1 g vaseliini (kontroll), 1 protsendi kojiinhapet vaseliinis, 0,5 protsenti, 1 protsenti või 2 protsenti 10-HDA vaseliinis . Rakendusi jätkati 3 nädalat ja naha valgendamise indeksit (L väärtus) mõõdeti iga päev samal nahapiirkonnal DermaLab® Combo (Cotex Technology, Taani) abil, mis on kolorimeetriline instrument, mis kasutab kõrge intensiivsusega valget värvi. LED valgusallikana. Kolorimeetriline instrument on ühendatud arvutiga [40]. Võtsime arvesse ainult parameetrit L ja L-väärtus oli suhteline heledus, mis ulatus kogumustast (L=0) kuni valgeni (L=100). Naha valgendamise indeksi esialgne L-väärtus määrati iga hiire nahast enne testitavate ainetega pealekandmist.

Statistiline analüüs

Kõiki selle uuringu tulemusi analüüsiti üldise lineaarse mudeli protseduuriga, mis on saadaval Statistical Analysis System tarkvarapaketi versioonist 9.1 (Statistical Analysis System Institute, 2002). Ravimeetodite vaheliste erinevuste tuvastamiseks kasutati Duncani mitme vahemiku testi [41]. Iga katse viidi läbi kolmes eksemplaris.

Tulemused

10-HDA mõju B16F1 melanoomirakkude elujõulisusele

Optimaalne annus rakkude elujõulisuse testist MTT abil B16F1 melanoomirakkudes on näidatud joonisel 1. See näitas selgelt, et 10-HDA ei olnud B16F1 melanoomirakkudele tsütotoksiline kontsentratsioonidel 0,1, { {8}},5 ja 1 mM ning kojihape ei olnud kontsentratsioonis 1 mM melanoomirakkudele tsütotoksiline. Rakkude elujõulisus vähenes oluliselt (vähenes 20 protsenti) melanoomirakkudes, mis puutusid kokku 1,5 mM 10-HDA-ga (P < 0.05) (andmeid pole näidatud) ja 5 mM kojhapet. Seetõttu kasutati järgmistes katsetes kontsentratsioone 0,1, 0,5, 1 mM 10-HDA ja 1 mM kojichapet.

Türosinaasi aktiivsuse ja melaniini sünteesi pärssimine B16F10 melanoomirakkudes 10-HDA poolt

Kojichape on tõhus ja hästi tuntud melanogeneesivastane aine ning seda kasutati selles uuringus positiivse kontrollina. 10-HDA pärssis oluliselt (p < 0.05) melaniini sünteesi ja türosinaasi aktiivsust võrreldes ravimata B16F1 melanoomirakkude kontrolliga. 1 mM annuse korral indutseeris 10- HDA raku türosinaasi aktiivsuse vähenemist 28 ± 2,4 protsenti (P ​​< 0.01) ja 40,4 ± 3 .0 protsentuaalne vähenemine raku melaniini sünteesis (P < 0,001), samas kui kojhape (1 mM) vähendas oluliselt ka türosinaasi aktiivsust ja melaniini sünteesi 14,4 ± 3,7 protsenti (P ​​< 0,05) ja 19,3 ± 1,5 protsenti (P) < 0,001) vastavalt (joonised 2 ja 3).

Türosinaasi, TRP{0}} ja TRP-2 valgu ekspressiooni pärssimine B16F10 melanoomirakkudes 10-HDA poolt

Uurimaks, kas 10-HDA võib mõjutada melanogeense valgu ekspressiooni, viidi läbi Western blot analüüs, kasutades 10-HDA-ga töödeldud B16F10 melanoomirakkude lüsaati (joonis 4). 10-HDA inhibeeris oluliselt türosinaasi, TRP-1 ja TRP-2 ekspressiooni B16F1 melanoomirakkudes võrreldes töötlemata rakkude omadega (joonis 4b–d). Sisekontrollina kasutatud majapidamisvalk -aktiin muutusi ei näidanud. 10-HDA inhibeeris kojhappega sarnaste melanogeensete ensüümide valgu ekspressioonitaset.

10-HDA inhibeeriv toime valgu tasemele, mis on seotud melanogeensete teguritega B16F10 rakkudes

Imetajate rakkude melanogeneesi protsessis mängib MITF TRP-de raja sünteesis, sealhulgas TYR, TRP{{0}} ja TRP-2 [25, 26], peamist regulaatorrolli. 10-HDA mõju MITF-i ekspressioonile hinnati Western blot analüüsi abil. B16F1{{10}} melanoomirakud puutusid kokku 10- HDA erinevate kontsentratsioonidega (0,1, 0,5 ja 1 mM), mille tulemuseks oli MITF-i ekspressiooni alareguleerimine 10-HAD poolt ( joonis 4e). IC50 väärtus 10-MITF-i ekspressiooni HDA supressiooni puhul oli hinnanguliselt 0.{18}} mM. Praegused tulemused viitavad sellele, et 10-HDA vähendab MITF-i valgu taset. 10-HDA hüpopigmentatsiooniefekt võib olla allareguleeritud MITF-i geeniekspressiooni tulemus, mis seejärel surub alla türosinaasi, TRP-1 ja TRP-2 valgu ja geeniekspressiooni.

10-HDA depigmentatsiooni aktiivsuse hindamine in vivo hiirte kaudu

Inimese annuse spekuleerimiseks kasutasime loommudelina hiiri, et uurida {{0}}HDA depigmenteerivat aktiivsust. Pärast raseerimist töödeldi hiiri 1-protsendilise kojichappega vaseliinis, 0,5-protsendilise, 1-protsendilise või 2-protsendilise 10-HDA-ga vaseliinis ning mõõdeti ja registreeriti naha heledamaks muutumise indeks. Selle in vivo uuringu jaoks kasutasime positiivse kontrollina kojhapet. Kojichapet kasutatakse laialdaselt naha depigmentatsiooniteraapia vahendina kogu maailmas. Pärast esimest ravinädalat suurenes naha valgendamise määr 10- HDA-ga ravitud hiirtel võrreldes kontrollrühmaga oluliselt ja see suurenemine jätkus kuni katse lõpuni. 0.5, 1 ja 2 protsendi 10-HDA depigmentatsiooni aktiivsus oli võrreldav 1 protsendilise kojhappe omaga. Meie tulemused näitasid, et 10-HDA suutis märkimisväärselt soodustada hiirte naha valgenemist juba 0,5 protsendilise kontsentratsiooniga (joonis 5). Seetõttu näib 10-HDA olevat hea kandidaat nahka valgendava vahendina naha hüperpigmentatsiooni raviks.

Arutelu

Melaniini sünteesi kontrollib türosinaasi, TRP1 ja TRP2 kompleksne ensümaatiline kaskaad. Melanogeneesiga seotud geenide ja valkude inhibeerimise aste mängib olulist rolli depigmenteeriva aine efektiivsuses, mida tavaliselt kasutatakse hüperpigmentatsiooni ravis või kosmeetikatoodetes [28]. Et selgitada 10-HDA tõelist inhibeerivat toimet melanogeneesile, analüüsiti B16F10 rakkude melaniini sisaldust ja rakusisest türosinaasi aktiivsust samas kontsentratsioonivahemikus. Tulemused joonistel fig. 2 ja 3 näitasid, et 10-HDA-l oli suurem inhibeerimisaktiivsus melaniini sünteesi suhtes B16F10 rakkudes kui kojhape. Andmed näitasid, et 10- HDA blokeerib melanogeneesi B16F10 melanoomirakkudes.

Melanogeneesis domineerivad imetajate melanotsüütides vähemalt kolm regulatoorset valku, türosinaas, TRP1 ja TRP2 [29]. TRP-1, TRP-2 ja MITF ekspressioonid olid kõik inhibeeritud B16F10 melanoomirakkudes, mida töödeldi 10-HDA-ga. MITF on peamine transkriptsioonifaktor melanogeensete ensüümide, nagu türosinaas, TRP-1 ja TRP-2 [42, 43], ekspressiooni reguleerimiseks. Meie Western blot analüüsi andmetel (joonis 4) vähendavad 10-HDA-ga töödeldud imetajarakud kõigi kiirust piiravate ensüümide, sealhulgas türosinaasi, TRP-1 ja TRP-2 ekspressiooni. ja vältida melaniini ebanormaalset kogunemist melanogeneesi protsessis. Need andmed viitasid sellele, et 10- HDA võib pärssida melanogeneesi protsessi, pärssides MITF-i ekspressiooni. Selles uuringus näitasime, et 10-HDA pärsib melanogeneesi, vähendades MITF-valgu, türosinaasi ja melaniini tootmist. 10-HDA inhibeeriv rada MITF-i ekspressioonile erines teistest melanogeneesi inhibiitoritest, nagu kojiinhape, arbutiin ja askorbiinhape, mis ei mõjutanud MITF-i ekspressiooni [44, 45]. See viitab sellele, et 10-HDA-l on suurepärane potentsiaal kasutada funktsionaalse kosmeetika ohutu ja loomuliku nahka valgendava ainena [46].

Melanoom, nahavähk, tekib melanotsüütidest moodustunud pahaloomulisest transiidist. Krooniliselt päikesekahjustusega nahal, limaskestade pindadel ja akraalsel nahal tekkinud melanoomid olid põhjustatud BRAF-i ja NRAS-i [47] üleaktiveerimisest, CDKN2A lookuse kadumisest [48], MITF-i üleekspresseerimisest [49], komplekti üleaktiveerimisest [50]. ], aktiveerivad mGluR1 üle [51, 52]… et al. Selles uuringus võib 10-HDA pärssida MITF-i ekspressiooni B16F10 melanoomirakkudes. See näitas, et 10-HDA võib olla naharavimite või melanoomivastaste vähivastaste ravimite koostisosa.

RJ-d on kasutatud paljude dermatoloogiliste preparaatide jaoks, sealhulgas naha värskendamiseks, naha taastamiseks, noorendamiseks, põletuste parandamiseks või haavade paranemiseks [53, 54]. Lisaks teatati, et mõned RJ-s olevad küllastumata rasvhapped võivad pärssida melaniini sünteesi ja türosinaasi aktiivsust, mis viib melanogeneesi allareguleerimiseni [55], ja me näitasime, et RJ depigmentatsiooniefekt võib olla tingitud {{3 }}HDA. Kuna hiirte nahk on inimese omaga sarnane, kasutasime hiiri in vivo loommudelina 10-HAD depigmenteeriva aktiivsuse uurimiseks. Nagu on näidatud joonisel fig 5, suurenes nahavärvi naha valgendamise indeks kontrolliga võrreldes oluliselt hiirtel, keda raviti 10-HAD-ga. Lisaks Koya-Miyata jt. hinnati 10-HDA kollageeni tootmist soodustavat aktiivsust fibroblasti rakuliinides, mis toodavad trans-moodustavat kasvufaktorit- 1 (TGF- 1), mis on kollageeni tootmise oluline tegur [55] . Seetõttu näib 10-HDA olevat väga paljulubav looduslik ühend naha taastamiseks ja hüperpigmentatsiooni raviks.

Järeldus

10-HDA inhibeeris mitte ainult türosinaasi aktiivsust, vaid ka melanogeensete ensüümide ekspressioone, sealhulgas türosinaasi, TRP-1 ja TRP-2, pärssides MITF-i B16F10 melanoomirakkudes. Järelikult vähenes melaniini pigment B16F10 melanoomirakkudes. Lisaks näitas in vivo loommudel 10-HDA depigmenteerivat toimet paiksel kasutamisel. Need tulemused näitasid, et 10-HDA-l on kandidaat, mis võiks olla ohutu ja loomulik melanogeneesi inhibiitor kosmeetikatööstuses, kus loodusliku ja tõhusa ühendi otsimine on parema nahahooldustoote väljatöötamise üks väga olulisi eesmärke. .

Lühendid

10-HDA: 10-hüdroksü-2-dekaanhape; BSA: veise seerumi albumiin; DMEM: Dulbecco modifitseeritud Eagle'i sööde; DMSO: dimetüülsulfoksiid; EDTA: etüleendiamiintetraäädikhape; L-DOPA: L-3,4- dihüdroksüfenüülalaniin; MITF: mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktor; MRJP: peamised mesilasema piimavalgud; MTT: 3-(4,5-dimetüültiasool-2-üül)-2,5- difenüültetrasooliumbromiid; PBS: fosfaatpuhversoolalahus; PMSF: fenüülmetaansulfonüülfluoriid või fenüülmetüülsulfonüülfluoriid; TLC: õhukese kihi kromatograafia; TRP-1: türosinaasiga seotud valk 1; TRP- 2: türosinaasiga seotud valk 2

Tänuavaldused

Täname proua Li-Yu Lee'd Fu-Chang Beekeepingust mesilaspiima valmistamise eest

Rahastamine

Seda tööd toetas Taiwani teadus- ja tehnoloogiaministeeriumi toetus (MOST102–2622-B-150-002-CC2 ja MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 CC Peng).

Andmete ja materjalide kättesaadavus

Kõik selle uuringu käigus loodud või analüüsitud andmed sisalduvad selles avaldatud artiklis ja selle täiendavates teabefailides.

Autorite kaastööd

CCP mõtles välja ja kavandas katsed. HZS ja IPL viisid katsed läbi. CCP ja PCK analüüsisid andmeid. CCP, PCK ja JCL andsid oma panuse reaktiivide/materjalide/analüüsivahenditega. CCP ja IPL kirjutasid ja muutsid paberi. Kõik autorid kiitsid käsikirja lõpliku versiooni heaks.

Autorite teave

CCP, biotehnoloogia doktor, riikliku Formosa ülikooli biotehnoloogia osakonna dotsent. HZS, biotehnoloogia magister, lõpetanud riikliku Formosa ülikooli biotehnoloogia osakonna. IPL, biotehnoloogiadoktor, Challenge Bioproducts Co., Ltd. PCK teadus- ja arendusosakonna juhataja, keemiadoktor, riikliku Formosa ülikooli biotehnoloogia osakonna dotsent. JCL, Honey Bee Town Co., Ltd. peadirektor.

Eetika heakskiit

Kõik loomkatsed kiitis heaks riikliku Formosa ülikooli eetikakomitee (kinnitusnumber: 10 401) ja need vastasid laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhistele.

Nõusolek avaldamiseks

Selles jaotises ei kohaldata. See artikkel ei ole kliiniline uuring, mis hõlmab inimesi ja see käsikiri ei sisalda individuaalseid kliinilisi andmeid.

Konkureerivad huvid

Autorid kinnitavad, et neil puuduvad konkureerivad huvid

Väljaandja märkus

Springer Nature jääb avaldatud kaartide ja institutsionaalsete seoste suhtes erapooletuks.

Autori üksikasjad

1 Biotehnoloogia osakond, National Formosa University, Huwei, Yunlin, Taiwan. 2 Teadus- ja arendusosakond, Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Taiwan. 3 Honey Bee Town Co., Ltd., nr.{3}} Huaxi, 970 Hualien City, Taiwan.

Saabunud: 9. märts 2017 Vastu võetud: 21. juuli 2017

Avaldatud Internetis: 09. august 2017

Viited

1. Chen C, Chen S. Valgukomponentide muutused ja kuningliku piima säilitamise stabiilsus erinevates tingimustes. Food Chem. 1995;54:195–200.

2. Takenaka T. Mesilaspiima keemiline koostis. Honebee Sci. 1982; 3:69–74.

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. A family of major royal jelly proteins of the honey bee Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 1998;54:1020–30.

4. Okamoto I, Taniguchi Y, Kunikita T, Kohno K, Iwaki K, Ikeda M. Major royal jelly protein 3 modulates immune responses in vitro and in vivo. Life Sci. 2003;1:2029–45.

5. Fujiwara S, Imai J, Fujiwara M, Yaeshima T, Kawashima T, Kobayashi K. Tugev antibakteriaalne valk mesilaspiises. J Biol Chem. 1990;265:11333–7.

6. Bilikova J, Hanes J, Nordhoff E, Saenger W, Klaudiny J, Simuth J. Apisimin, uus seriini-valiinirikas peptiid mesilase (Apis Mellifera L.) kuninglikust želeest: puhastamine ja molekulaarne iseloomustus. FEBS Lett. 2002;528:125–9.

7. Townsend GF, Brown WH, Felauer EE, Hazlett B. Rasvhapete in vitro kasvajavastase toime uuringud. IV. Hapeestrid, mis on tihedalt seotud 10- hüdroksü-2-dekaanhapetega kuninglikust piimast siirdatava hiire leukeemia vastu. Can J Biochem Physiol. 1961;39:1765–70.

8. Blum MS, Novak AF, Taber S. 10-Hüdroksü-2Δ-dekaanhape, mesilaspiises leiduv antibiootikum. Sci. 1959;130:452–3.

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. Kuninglikust želeest eraldatud rasvhapped moduleerivad in vitro dendriitrakkude poolt vahendatud immuunvastust. Int Immunopharmacol. 2007;7:1211–20.

10. Weaver N, Law JH. Mesilaspiima rasvhapete heterogeensus. Loodus. 1960;188:938–9.

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. (E)-10-hüdroksiidide-eenhappe hindamine mesilaspiima värskuse parameetrina. Food Chem. 2003;80:85–9.

12. Takeshi N, Reiji I. Mesilaspiima vesiekstrakti ja aluselise ekstrakti valmistamine ja funktsionaalsed omadused. Food Chem. 2004;84:181–6.

13. Takeshi N, Mizuho S, Rriji I, Hachiro I, Nobutaka S. Mõne kaubandusliku mee, mesilaspiima ja taruvaigu antioksüdatiivne toime. Food Chem. 2001;75: 237–40.

14. Martos MV, Navajas YR, López JF. Mee, taruvaigu ja mesilaspiima funktsionaalsed omadused. J Food Sci. 2008;73:117–24.

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. Mesilastooted takistavad VEGF-indutseeritud angiogeneesi inimese nabaveeni endoteelirakkudes. BMC Complement Altern Med. 2009;9:1–10.

16. Tamura T, Fujii A, Kuboyama N. Kuningliku želee (RJ) kasvajavastane toime. Nippon Yakurigaku Zasshi. 1987;89:73–80.

17. Park HM, Cho MH, Cho Y, Kim SY. Mesilaspiim suurendab kollageeni tootmist roti nahas pärast munasarjade eemaldamist. J Med Food. 2012;15:568–75. doi: 10.1089/jmf. 2011.1888.

18. Izuta H, Shimazawa M, Tsuruma K, Araki Y, Mishima S, Hara H. Mesilastooted takistavad VEGF-indutseeritud angiogeneesi inimese nabaveeni endoteelirakkudes. BMC Complement Altern Med. 2009; 6:489–94.

19. Tseng JM, Huang JR, Huang HC, Tzen JTC, Chou WM, Peng CC. Antimikroobse peptiidi-Royalisiini ja selle antikehade tootmine tehisõlikeha süsteemi kaudu. Biotechnol Prog. 2011;27:153–61.

20. Bílikova K, Huang SC, Lin IP, Šimuth J, Peng CC. Apis Mellifera kuninglikust piimast pärit antimikroobse peptiidi, royaliseerimise, struktuuri ja antimikroobse toime suhe. Peptiidid. 2015;68:190–6.

21. Okuda H, Kameda K, Morimoto C, Matsuura Y, Chikaki M, Jiang M. Uuringud insuliinitaoliste ainete ja angiotensiini konverteeriva ensüümi inhibeerivate ainete kohta mesilaspiimas. Mitsubachi Kagaku. 1998;19:9–14.

22. Shinoda M, Nakajin S, Oikawa T, Sato K, Kamogawa A, Akiyama Y. Biokeemilised uuringud mesilaspiima vasodilatatiivse faktori kohta. Yakugaku Zasshi. 1978;98:139–45. 23. Vittek J. Mesilaspiima mõju seerumi lipiididele katseloomadel ja ateroskleroosiga inimestel. Kogemused. 1995;51:927–35.

24. Ibrahim A, Eldaim MA, Abdel-Daim, MM. Mesilasmee ja mesilasema želee nefroprotektiivne toime subkroonilise tsisplatiini toksilisuse vastu rottidel. Tsütotehnoloogia. 2016;68:1039–48.

25. Han SM, Yeo JH, Cho YH, Pak SC. Mesilaspiim vähendab melaniini sünteesi türosinaasi ekspressiooni vähenemise kaudu. Am J Chin Med. 2011; 39:1253–60.

26. Gilchrest BA, Eller MS. DNA fotokahjustus stimuleerib melanogeneesi ja muid fotoprotektiivseid reaktsioone. J Investig Dermatol Symp Proc. 1999;4:35–40.

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME. Signaalteed melanogeneesis. Int J Mol Sci. 2016;17:1144. doi: 10.3390/ijms17071144.

28. Kobayashi T, Vieira WD, Potter B, Sakai C, Imokawa G, kuuldav VJ. Melanogeense valgu ekspressiooni moduleerimine EL-lt feomelanogeneesile üleminekul. J Cell Sci. 1995;108:2301–9.

29. Kim SS, Kim MJ, Choi YH, Kim BK, Kim KS, Park KJ, Park SM, Lee NH, Hyun G. Türosinaasi, TRP-1, TRP-2 ja MITF alareguleerimine tsitrusviljade presskookide ekspressioonid hiire B16 F10 melanoomi korral. Asian Pac J Trop Biomed. 2013;3: 617–22.

30. Land EJ, Ito S, Wakamatsu K, Riley PA. Eumelanogeneesi kahe esimese keemilise etapi kiiruskonstandid. Pigment Cell Res. 2003;16:487–93.

31. Yen FL, Wang MC, Liang CJ, Ko HH, Lee CW. Melanogeneesi inhibiitor(id) Phyla nodiflora ekstraktist. Evid Based Complement Alternat Med 2012; ID: 867494. doi 10.1155/2012/867494.

32. Tachibana M. MITF: pigmendirakkude jaoks voolav oja. Pigment Cell Res. 2000;3:230–40.

33. Jung SO, Kim DH, Son JH, Nam KC, Ahn DU, Jo CR. Munakollase fosfitiini funktsionaalne omadus melanogeneesi inhibiitorina. Food Chem. 2012;135: 993–8.

34. Yeon HK, Youn OJ, Cho CW, Son DW, Park SJ, Rho JH, Sang YC. Kaneelhappe pärssiv toime melaniini biosünteesile nahas. Biol Pharm Bull. 2008;31:946–8.

35. Liu JR, Yang YC, Shi LS, Peng CC. Mesilaspiima antioksüdantsed omadused on seotud vastsete vanuse ja saagikoristuse ajaga. J Agri Food Chem. 2007;56: 11447–52.

36. Carmichael J, DeGraff WG, Gazdar AF, Minna JD, Mitchell JB. Tetrasooliumil põhineva poolautomaatse kolorimeetrilise analüüsi hindamine: kemosensitiivsuse testimise hindamine. Cancer Res. 1987;47:936–42.

37. Bilodeau ML, Greulich JD, Hullinger RL, Bertolotto C, Ballotti R, Andrisani O. MP-2 stimuleerib türosinaasi geeni ekspressiooni ja melanogeneesi diferentseerunud melanotsüütides. Pigment Cell Res. 2001;14:328–36.

38. Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes D, Solano F, Lonzano JA, JC CB. Kasvaja nekroosifaktor-alfa melanogeneesi inhibeerimise mehhanism hiire B16/F10 melanoomirakkudes. Eur J Biochem. 1998;255:139–46.

39. Ding HY, Chang TS, Shen HC, Tai SK. Hiire türosinaasi inhibiitorid Cynanchum Bungei'st ja in vitro ja in vivo depigmentatsiooni aktiivsuse hindamine. Eksp Dermatoloogia. 2011;20:720–4.

40. Takiwaki H, Serup J. Psoriaatiliste naastude värviparameetrite mõõtmine kitsaribalise peegeldusspektrofotomeetria ja tristimuluskolorimeetria abil. Skin Pharmacol. 1994;7:145–50.

41. Montgomery DC. Katsed ühe teguriga: dispersioonanalüüs. Eksperimentide kavandamises ja analüüsis. Montgomery, DC, toim., John Wiley and Sons, New York, 1991; 75–77.

42. Park HY, Wu C, Yonemoto L, Murphy-Smith M, Wu H, Stachur CM. MITF-vahendab cAMP-indutseeritud proteiinkinaasi Cb ekspressiooni inimese melanotsüütides. Biochem J. 2006;395:571–8.

43. Goding CR. Mitf närviharjast melanoomini: signaaliülekanne ja transkriptsioon melanotsüütide liinis. Genes Dev. 2000;14:1712–28.

44. Kim DS, Park SH, Kwon SB, Li K, Youn SW, Park KC. (-)-Epigallokatehhiin-3- gallaat ja hinokitiool vähendavad melaniini sünteesi MITF-i tootmise vähenemise kaudu. Arch Pharm Res. 2004;27:334–9.

45. Choi YK, RhoYK, Yoo KH, Lim YY, Li K, Kim BJ. C-vitamiini ja multivitamiini mõju melanogeneesile: võrdlev uuring in vitro ja in vivo. Praktikant J Dermatol. 2011;49:218–26.

46. ​​Dynek JN, Chan SM, Liu J, Zha J, Fairbrother WJ, Vucic D. Mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktor on melanoomi apoptoosi melanoomi inhibiitori kriitiline transkriptsiooniregulaator. Cancer Res. 2008;68:3124–32.

47. Curtin JA, Fridlyand J, Kageshita T, Patel HN, Busam KJ, Kutzner H, Cho KH, Aiba S, Bröcker EB, LeBoit PE, Pinkel D, Bastian BC. Melanoomi geneetiliste muutuste erinevad komplektid. N Engl J Med. 2005;353(20):2135–47.

48. Chan SH, Lim WK, Scott T Michalski ST, Lim JQ, NDB, Met-Domestici M, Young CNC, Vikstrom K, Esplin ED, Fulbright J, Ang MK, Wee J, Sittampalam K, Farid M, Lincoln SE, Itahana K, Abdullah S, The BT, Ngeow J. CDKN2A-CDKN2B lookuse idutee hemisügootne deletsioon Li-Fraumeni sündroomiga patsiendil. npj genoomimeditsiin. 2016; doi:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. Hartman ML, Czyz M. MITF melanoomi korral: selle ekspressiooni ja aktiivsuse taga olevad mehhanismid. Cell Mol Life Sci. 2015;72:1249–60. doi:10,1007/s00018-014- 1791-0.

50. Antonescu CR, Busam KJ, Francone TD, Wong GC, Guo T, Agaram NP, Besmer P, Jungbluth A, Gimbel M, Chen CT, Veach D, Clarkson BD, Paty PB, Weiser MR. L576P KIT mutatsioon päraku melanoomides korreleerub KIT valgu ekspressiooniga ja on tundlik spetsiifilise kinaasi inhibeerimise suhtes. Int J Vähk. 2007; 121:257–64.

51. Abdel-Daim M, Funasaka Y, Komoto M, Nakagawa Y, Yanagita E jt. Metabotroopse glutamaadi retseptori alatüübi 1 farmakogenoomika ja in vivo pahaloomuline melanoomi moodustumine. J Dermatol. 2010;37:635–46.

52. Ohtani Y, Harada T, Funasaka Y, Nakao K, Takahara C jt. Metabotroopse glutamaadi retseptori alatüüp -1 on melanoomi in vivo kasvu jaoks hädavajalik. Onkogeen. 2008;27:7162–70.

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. Mesilaspiim suurendab inimese dermaalsete fibroblastide migratsiooni ning muudab kolesterooli ja sfinganiini taset in vitro haavade paranemise mudelis. Nutr Res Pract. 2010;4:362–8.

54. Fujii A, Kobayashi S, Kuboyama N, Furukawa Y, Kaneko Y, Ishihama S, Yamamoto H, Tamura T. Haavade paranemise suurendamine kuningliku želee (RJ) abil streptozototsiiniga diabeetikutel rottidel. Jpn J Pharmacol. 1990;53:331–7.

55. Koya-Miyata S, Okamoto I, Ushio S, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. Kollageeni tootmist soodustava faktori tuvastamine mesilaspiima ekstraktist ja selle võimalik mehhanism. Biosci Biotechnol Biochem. 2004; 68:767–73.

Lisateabe saamiseks: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501