Traditsioonilise hiina ürdi Cistanche antidepressandid ja kognitiivset arengut parandavad tegevused Ⅰ
Jun 23, 2022
Abstraktne
Üle kümne protsendi inimestest kannatab elu jooksul vähemalt üks depressiooniepisoodi ja sellega seotud psüühikahäired ning depressioon ja sellega seotud psüühikahäired on üks maailma suurimaid rahvatervise probleeme. Mitme süsteemi teooria väidab, et depressiooni ja sellega seotud vaimsete häirete patogeneesi aluseks on mitme süsteemi düsregulatsioon ning hädasti on vaja uusi ravimeetodeid, mis põhinevad mitme süsteemi düsregulatsiooni teoorial. Selles uuringus antidepressantne toime Keetmine ürdiCistanche deserticolaYCMa jaCistanche tubulosavaadati läbi. ürtCistanchekeetmine vähendas liikumatuse perioodi oluliselt hiire saba suspensiooni testis. Morrise veelabürindi testis näitasid ürtide keetmisega töödeldud hiired paremat ruumilise õppimise ja mälu võimet. Rühmad, keda raviti ürtide keetmisega, näitasid allareguleeritud monoamiini oksüdaasi (MAO) aktiivsust; dopamiini (DA) kontsentratsioon ajus oli ülesreguleeritud, mis näitab, et ravimtaimCistanchekeetmine parandas närvide erutatavust; kortikosterooni (CORT) kontsentratsioon seerumis oli alareguleeritud, mis näitab, et hiirtel oli vähenenud stressitase. Seega antidepressantide efektiivsus ja mehhanismtraditsiooniline hiina ürtCistancheuuriti selles uuringus. ürtCistanchenäitas potentsiaali välja töötada depressiooni täiendava ja alternatiivse ravina.
1. Sissejuhatus
Depressioon ja sellega seotud meeleoluhäired, hinnanguliselt 12–17 protsenti elanikkonnast kogevad elus vähemalt ühte episoodi, on vaimse puude peamised põhjused ja neid peetakse üheks ülemaailmseks suurimaks rahvatervise probleemiks. Eriti oluline on see, et märkimisväärne osa depressiooni põdevatest patsientidest kannatab mälukaotuse, keskendumisprobleemide, energia- või väsimuse vähenemise, hobide ja tegevuste vastu huvi või naudingu kaotuse ning unehäirete, varahommikuse ärkamise või üle magamise all. Kuigi depressiooni ja sellega seotud sündroomide ebanormaalsuse närvisubstraadid on ebaselged, on üldiselt aktsepteeritud, et neuroplastilisuse ja rakulise vastupidavuse halvenemine põhjustab depressiooni patofüsioloogiat ja edukas ravi võib sõltuda neurotransmitteri taseme sekkumisest. Depressiooniravimite lähenemine põhineb põhimõtteliselt klassikalisel monoamiinisüsteemi hüpoteesil, mis väidab, et monoamiinide, eriti serotoniini (5-HT) ja norepinefriini (NE) regulatsioonihäired aitavad kaasa depressiooni patogeneesile ja neurotransmitterite süsteemi sekkumisele dopamiiniga. agonistid ja dopamiini-noradrenergilised modulaatorid leevendaksid depressiooni sümptomeid. Kuigi antidepressandid on laialdaselt välja kirjutatud, on nende ravitõhusus küsitav ja kõrvalmõju ei saa eirata, kuna märkimisväärne osa patsientidest ei reageeri monoamiinisüsteemiga manipuleerimisele. Hiljuti näitavad uudsed depressiooni patogeneesi teooriad, et mitmed süsteemid, sealhulgas põletikurajad, oksüdatiivse stressi rada, hüpotalamuse-hüpofüüsi-neerupealise (HPA) telg, metaboolne ja bioenergeetiline süsteem, neurotroofsed rajad, glutamaadi süsteem, opioidisüsteem ja kolinergiline süsteem, on tihedalt seotud depressiooni esinemisega. Tõendid näitavad, et mitu sihtotstarbelist sekkumist andis parema efektiivsuse kui üks sihtsekkumine. Hädasti on vaja uusi ravimeetodeid, mis põhinevad mitme süsteemi düsregulatsiooni teoorial.

Cistanche'i eeliste kohta lisateabe otsimine
Taimsed tooted tarbisid väidetavalt üle poole USA elanikkonnast; Huvi ja nõudlus ürtide või taimsete toodete kui täiendava depressiooniravimeetodi vastu kasvab kogu maailmas. On leitud, et mitmel ravimtaimel on depressiooni leevendav kasulik toime. Maitsetaimed, millel on väidetavalt depressiooni mahasuruv ja kognitiivset funktsiooni parandav toime, on astelpaju,Ginkgo biloba,Piper nigrum,Hypericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Feruulhappe ja piperiini kombineeritud manustamine avaldas hiirtel sünergistlikku antidepressandi sarnast toimet, manipuleerides monoaminergilise süsteemiga. Albifloriini iseloomustas kõrge selektiivne afiinsus neurotransmitterite retseptorite ja transporterite suhtes ning oluliselt suurenenud 5-HT ja NE rakuväline kontsentratsioon vabalt liikuvate rottide hüpotalamuses. RavimtaimMelissa officinalisL. leevendas hiirte depressiivset käitumist, avaldades mõju serotonergilise neurotransmitteri tasemele. Need maitsetaimed või dekoktid, mis on välja töötatud alternatiivsete depressiooniravimina, aitavad leevendada depressiooni sümptomeid ja pakuvad uut allikat antidepressantide väljatöötamiseks. ürtCistancheHiina põhjaosa kuivadel maadel ja kõrbetes levinud liigid on traditsioonilised hiina meditsiini ravimtaimed ja neid on Hiinas rohkem kui 1,000 aastat laialdaselt kasutatud erinevate haiguste raviks. Maitsetaime mitmekordne efektiivsusCistancheKeetmine jääb afrodisiaakumide vahele [14], immuunsüsteemi tugevdav [15], antioksüdatiivne [16] ja hepatoprotektiivne [17] omadused.C. deserticoladekoktid indutseerivad munandite steroidogeenseid ensüüme [18], soodustavad peenise erektsioonireaktsiooni ja lühendavad erektsioonireaktsiooni latentsusperioodi kastreeritud rottidel [19]. ürtCistancheOn teatatud, et see pärsib dopamiinergiliste neuronite aktiivsust, reguleerides inhibeerivaid apoptoosi geene ja neurotroofseid tegureid.20].C. tubulosadekoktid muutsid A põhjustatud kognitiivset düsfunktsiooni 1-42 blokeerides amüloidi ladestumist ja taaselustades kolinergilise ja hipokampuse dopamiinergilise neuronaalse funktsiooni [21]. Taimede neuroprotektiivne omadusCistanchetähendab kognitiivsete haigustega seotud terapeutilist potentsiaali. Depressioon on emotsionaalreaktsioonide sagedane segatüüp, mille sagedasteks sümptomiteks on unustamine ja kognitiivne langus [22]. ürtCistanchekasutati tavaliselt traditsioonilise hiina meditsiinina unustamise raviks; pealegi näitab hiljutine aruanne, et maisijahu varajaste täiskasvanute manustamist täiendatiC. tubulosaon kasulik mitteselgrootsete pikaealisuse edendamiseks ning haistmisega seotud õppimiseks ja mälu parandamiseksDrosophilamudel [23]. Need faktid näitavad ürdi kognitiivseid omadusiCistanche; siin selles uuringus iseloomustasime esimest korda antidepressandi omadust ja selle seost kognitiivsete parendustegevustega imetajate mudelis, reguleerides monoamiinisüsteemi ja HPA telge. Ürdi antidepressandi omaduse ja esialgse mehhanismi valgustamineCistanchevõib laiendada ürdi kasutusspektritCistanche, mida võiks välja töötada alternatiivse depressiooniravimina.

2. Cistanche'i depressioonivastase funktsiooni materjalid ja meetodid
2.1. Cistanche taimse materjali ja keetmise valmistamine
C. deserticolaYCMa saadi Hiinast Nei Mongoli autonoomsest piirkonnast;C. tubulosasaadi Hiinast Xinjiangi Uiguuri autonoomsest piirkonnast. Enne keetmist maitsetaim (C. deserticolaYCMa võiC. tubulosa) kontrolliti ehhinakosiidi ja verbaskosiidi sisalduse tuvastamiseks HPLC (kõrgefektiivse vedelikkromatograafia) abil (Milford, MA, Waters, USA) ning loomkatsetes kasutati sobivat toodet (vastavalt Hiina Rahvavabariigi farmakopöale) . Keetmine saadi Sun Yat-seni ülikooli riikliku haridusministeeriumi toidu- ja tervishoiutehnika uurimiskeskuse välja töötatud veeaurutamismeetodil. KuivatatudCistanche deserticola125 g YCMa purustati ja sõeluti 120-sõelaga ning seejärel lahustati pulber 3 L ülipuhas vees, kuumutati 100 kraadi juures 2 tundi, seejärel jahutati toatemperatuurini ja sõeluti. ; supernatant võeti ringlusse. Seejärel lahustati sete 2 l ülipuhtas vees ja kuumutati seejärel 1,5 tundi ja jahutati, nagu ülalpool mainitud, et supernatant taaskasutada; setet kasutati seejärel supernatandi taaskasutamiseks. Kogu supernatandi sisu rikastati pöörleva vaakumaurustiga 60 kraadi juures; lõpuks määrati toorravimi kontsentratsiooniks 0,5 g/ml ja toodet säilitati temperatuuril -20 kraadi.

2.2. Ehhinakosiidi ja verbaskosiidi analüüs HPLC analüüsi abil
Ehhinakosiidi ja verbaskosiidi kvalitatiivse ja kvantitatiivse analüüsi mõõtmiseks kasutati HPLC-d (kõrge jõudlusega vedelikkromatograafiat); verbaskosiid (puhtus > 93 protsenti) ja ehhinakosiid (puhtus > 93 protsenti) osteti riiklikust toidu- ja ravimikontrolli instituutist (Peking, Hiina) ja neid kasutati standardkontrollina.
2.3. Loomade hooldamine ja katsetamine Cistanche'is
Katsealused olid SPF (spetsiifilised patogeenivabad) isased Kunmingi hiired kaaluga 21–25 grammi, tarnitud Guangdongi provintsi meditsiinikatseloomade keskusest. Loomad paigutati plastpuuridesse (kümme puuri kohta); keskkonnatingimused määrati järgmiselt: õhuniiskus 40–70 protsenti, toatemperatuur 21 ± 1 kraadi ja hele-pimeduse periood 12 tundi: 12 tundi. Kõik loomkatsed kiitis heaks Sun Yat-seni ülikooli loomaeetika komitee.
2.4. Saba vedrustuse test Cistanche'is
Saba riputamise test viidi läbi vastavalt protokollile, mida on kirjeldanud Cryan et al. [24] tagasihoidlike muudatustega. Lühidalt, 21. päeval riputati hiired saba külge, kasutades nailonkateetriga seotud metallist võllapuud, mille pea oli põrandast 50 mm kõrgusel. Hiired riputati konksu külge kleeplintidele 10–20 mm kaugusel selle saba otsast ning isoleeriti akustiliselt ja visuaalselt klapplaudadega. Hiire kehaliigutused registreeriti ja hingamisliigutusi eirati. Enne katsepäeva suspendeeriti hiired kohanemiseks 8 minutiks.
2.5. Morrise veelabürindi test Cistanche'is
Veelabürindi test viidi läbi vastavalt Vorheesi jt kirjeldusele. [25–27] kasutades Hiina meditsiiniteaduste akadeemia väljatöötatud seadet. Kasutati ümmargust basseini (läbimõõt 150 cm), mis oli täidetud veega (26 ± 1 kraadi; äärise kõrgus (kaugus veepinnast seina ääreni): 10 cm), ümmargust päästeplatvormi (läbimõõt: 11 cm; platvormi keskpunkti ja basseini vaheline kaugus). sein: 27 cm) sukeldati 1–1,5 cm veepinnast allapoole ja peegelduste vältimiseks valgustati katseala kaudse valgustusega (50 ± 10 luksi). Kasutati nelja stardikohta, N, S, E ja W. Ruumiõppe testi jaoks treeniti loomi iga päev 9.–11. päevadel kindlas stardikohas. Põgenemislatentsusperioodi mõõdetakse, et kuvada hiirte ruumiline mälu ja õppimisvõime. Kui hiired ei leidnud platvormi ega ronida sellele, juhitakse hiired platvormile ja nad jäävad 10 sekundiks. Pärast 60 sekundilist puhkust alustatakse järgmise treeningsessiooniga. Vormimise baasväärtusena kasutati viimase ruumilise õppimise testi andmeid. Päevadel 23–28 tehti kohanavigatsioonitest ja ruumisond. Koha navigatsioonikatse kestis 6 päeva ja tehti kell 13.00, loomad pandi vette peaga vastu basseini seina päripäeva ja registreeriti latentsusperiood (2 min jooksul). Pärast kohanavigatsiooni testimist eemaldati platvorm. Hiired pandi vette, peaga basseini seina poole, juhuslikus kohas ning registreeriti liikumisjälg ja sagedus, mille jooksul hiired ujusid üle platvormi 2 minuti jooksul. Liikumisjälg salvestati hiirte liikumise multifunktsionaalse autonoomse salvestajaga (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Hiina).
2.6. MAO aktiivsuse tuvastamine
MAO aktiivsust mõõdeti MAO tuvastuskomplekti (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Hiina) abil ja tuvastamine viidi läbi vastavalt tootja protokollile. Ajukoest saadi homogenaat; 500μMind segati 300-gaμAgent 1 ja 300 lμ1 ainet 2, inkubeeriti 3 tundi 37 kraadi juures ja lisati seejärel järjestikku 300 uiμl ainet 3, 3 ml ainet 4 ja segage 2 minutit. Reaktsioonisegu tsentrifuugiti kiirusel 3, 000 p/min 10 minutit ja supernatandi optiline tihedus määrati ultraviolettkiirguse ja nähtava spektri spektrofotomeetriga (Lambda 25, PerkinElmer, USA), kasutades 242 nm ergastusvalgust.
2.7. Neurotransmitterite ning ACTH ja CORT ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs
Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) tuvastuskomplekt dopamiini (DA), norepinefriini (NE) ja 5-hüdroksütrüptamiini (5-HT) jaoks osteti ettevõttest BLUE GENE, Shanghai. ELISA tuvastamise komplektid osteti ettevõttelt Qiyun Biotech, Guangzhou.
Protseduurid on järgmised: katse viidi läbi toatemperatuuril. Katke PVC mikrotiiterplaadi süvendid püüdmisantikehaga 1–10μg/mL kontsentratsioon karbonaat/vesinikkarbonaat puhvris (pH 9,6). Sulgege plaat ja inkubeerige üleöö 4 kraadi juures; peske plaati 3 korda PBS/tweeniga ja mittespetsiifilised seondumiskohad blokeeritakse Block Solutioniga; seejärel peske plaati 3 korda PBS/tweeniga. Standardid ja proovid lahjendatakse blokeerimislahuses ja 100-gaμl lisatakse plaadi süvendisse, plaat suletakse ja inkubeeritakse 37 kraadi juures 1 tund. Lisage 100μl lahjendatud detekteerimisantikeha ja inkubeerida plaati 37 kraadi juures 1 tund; peske plaati 3 korda PBS/Tweeniga. Lisage 50μl värvi arenduslahust ja hoida plaati valguse eest eemal ning inkubeerida toatemperatuuril 15 min; 50μReaktsiooni peatamiseks lisatakse 1 stopppuhvrit. Mõõtke iga süvendi optiline tihedus (OD) mikroplaadilugejaga, mis on seatud 405 nm peale 30 minuti jooksul.

2.8. Statistiline analüüs
Kõik andmed esitati kui keskmine ± SEM (keskmise standardviga), olulist erinevust analüüsiti t-test või ühesuunaline ANOVA, millele järgneb Duncani mitme vahemiku test, kasutades SPSS 16.0, ja erinevused rühmade vahelP< 0,05 peeti statistiliselt oluliseks.






