Velvet Antler polüpeptiidi vananemisvastane toime sõltub soolestiku mikrobiota modulatsioonist ja PPAR/APOE4 raja reguleerimisest 1. OSA

Uurisime sametsarve polüpeptiidi vananemisvastast toimet D-galaktoosi (D-gal) poolt indutseeritud vananemishiirtele. D-gal-indutseeritud vananevad hiired loodi ja jagati juhuslikult viide rühma: kontroll-, mudel-, E-vitamiini (VE), sametsarve polüpeptiidi väikese annuse ja sametsarve polüpeptiidi suure annuse rühma. Vananevate hiirte õppimis- ja mäluvõime hindamiseks kasutati Morrise veelabürindi testi. Hippokampuse neuroneid täheldati hematoksüliini-eosiini värvimise ja ülekandeelektronmikroskoopia abil. Biokeemilisi meetodeid kasutati superoksiiddismutaasi, malonaldehüüdi ja teiste ensüümide aktiivsuse tuvastamiseks ning sametsarve polüpeptiidi mõju hindamiseks vananevate hiirte antioksüdantsele võimele. 16S rRNA geenide sekveneerimise ja meristeemtehnoloogia abil hindasime sametsarve polüpeptiidi mõju vananevate hiirte soolefloorale ja rasvhapete metabolismile. Katsetulemused näitasid, et sametsarve polüpeptiid võib oluliselt parandada vananevate hiirte õppimis- ja kognitiivseid võimeid ning suurendada superoksiidi dismutaasi, glutatioonperoksidaasi ja katalaasi aktiivsust seerumis, et vähendada malonaldehüüdi sisaldust. Soolestiku mikroökoloogiline analüüs näitas, et sametsarve polüpeptiid võib märkimisväärselt suurendada kasulike bakterite perekonna lactobacillus arvukust. Western blot analüüs näitas lisaks, et sametsarve polüpeptiid võib soodustada rasvhapete metabolismi, aktiveerides peroksisoomi proliferaator-aktiveeritud retseptori (PPAR) ja reguleerides üles allavoolu ensüümide karnitiin-palmitoüültransferaas-1 A ja atsüül-CoA oksüdaas 1 ekspressiooni, vähendades samal ajal allareguleerimist. apolipoproteiin E4 (APOE4), vähendades seeläbi rasvhapete akumulatsiooni ja suurendades adenosiintrifosfaadi (ATP) tootmist. Seetõttu parandab sametsarve polüpeptiid soolestiku mikroökoloogiat ja aktiveerib PPAR / APOE4 rada rasvhapete metabolismi reguleerimiseks.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja see suudab eemaldada reaktiivseid hapniku liike ja takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist, samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Cong Rong Cistanche

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Märksõnad

sametsarve polüpeptiid; D-galaktoos; Vananemine; soolestiku mikroökoloogia; Õppimine; Kognitiivne häire; PPAR /APOE4 rada; Mikrobioota

1. Sissejuhatus

Sametsarve polüpeptiid (VAP) moodustab 50–60 protsenti sametsarve märgmassist ja on üks selle peamisi toimeaineid [1]. VAP on rikas valkude, aminohapete, fosfolipiidide, kolesterooli ja kaltsiumi ioonide poolest ning avaldab mitmesuguseid tervist edendavaid toimeid, teatatud on antioksüdantidest [2], osteoporoosiresistentsusest [3] ja immuunsüsteemi regulatsioonist [4]. VAP-i rolli paremaks mõistmiseks neurodegeneratiivsete haiguste ennetamisel ja ravis kinnitasid ka meie uurimisrühma varasemad uuringud, et VAP võib vähendada glükokortikoidi retseptori, mineralokortikoidi retseptori ja kortikotropiini vabastava hormooni taset. Samuti on täheldatud VAP-i mõju taalamuse-hüpofüüsi-neerupealise teljele ja selle võimet pärssida neuronaalset apoptoosi [5].

Aju vananemine on loomulik füsioloogiline protsess, mida iseloomustavad oksüdatiivne stress (OS), oksüdatiivsete kahjustuste molekulide kuhjumine ning muutused neuronite struktuuris ja funktsioonis, mis lõppkokkuvõttes viib kognitiivsete funktsioonide languseni ja mälukaotuseni [6]. Nende tegurite hulgas peetakse OS-i vananemisega seotud neurodegeneratiivsete haiguste peamiseks põhjuseks [7]. Kui keha on allutatud kahjulikele stiimulitele, tekib vabade radikaalide tekke ja eemaldamise vahel tasakaalustamatus, mille tulemuseks on vabade radikaalide suurenemine tasemeni, mis ületab organismi antioksüdantide võime. Eelkõige on liigsed vabad radikaalid tsütotoksilised, põhjustades otsest kahjustust kesknärvisüsteemile [8, 9]. Inimese aju moodustab vaid 2–3 protsenti inimese kehakaalust. Siiski moodustab kesknärvisüsteem (KNS) 20 protsenti inimkeha kogu hapnikuvarustusest. Seetõttu on neuronaalsete vabade radikaalide sisaldus kesknärvisüsteemis märkimisväärne, mis kujutab endast suurt OS-i riski [10].

Inimese soolestiku mikrobiota, mis koosneb enam kui 100 liigist, sisaldab ligikaudu 10- korda rohkem baktereid kui inimese rakud [11]. Firmicutes on inimese soolestiku mikrobiotas kõige levinumad liigid, moodustades 60 protsenti kõigist bakteritest, millele järgnevad Bacteroidetes (15 protsenti) ja muud komponendid, mis moodustavad väikese osa. Soolestiku mikrobiota on inimkehaga dünaamilises tasakaalus ning soolestiku mikroobidel on oluline roll inimese ainevahetuses, endokriinsetes funktsioonides ja immuunregulatsioonis. Seega, kui soolestiku mikrobiota struktuur on häiritud, võivad tekkida neurodegeneratiivsed haigused, südame-veresoonkonna haigused ja rasvumine [12]. Soolestiku mikroorganismide hulga ja mitmekesisuse muutused võivad mõjutada ka soole- ja kesknärvisüsteemi. Neid koostoimeid nimetatakse mikrobiota-soolestiku-aju teljeks, mis on oluline keha funktsioonide jaoks [13, 14]. Kuigi muutused soolestiku mikrobiota profiilides ei pruugi tervist mõjutada, on tuummikrobiota mitmekesisuse vähenemine seotud kognitiivse funktsiooni ja mälu vähenemisega [15]. Tõepoolest, vanuse kasvades iseloomustab bakteriaalse floora muutusi peamiselt mitmekesisuse, probiootikumide, fakultatiivsete anaeroobide ja lühikese ahelaga rasvhapete koguhulga vähenemine [16].

Kuigi arvukad uuringud on kinnitanud, et VAP-iga seotud antioksüdandid ja vananemisvastased toimed nõrgendavad vananemist, on selle tegevuse täpne mehhanism jäänud ebaselgeks. Seetõttu hinnati käesolevas töös VAP-i vananemisvastast toimet in vivo hiirtel Morrise veelabürindi (MWM) testi, biokeemilise analüüsi, hematoksüliin-eosiini (H&E) värvimise ja transmissioonielektronmikroskoopia (TEM) abil. Lisaks hindasime muutusi soolestiku mikroökoloogias VAP-iga töödeldud vananevates hiiremudelites, kasutades 16S ribosomaalse RNA (rRNA) geenijärjestustehnoloogiat. Meie eesmärk oli selgitada VAP-i aktiivsuse mehhanismi vananemise kontekstis ja luua teoreetiline alus uute vananemisvastaste terapeutiliste lähenemisviiside väljatöötamiseks.

2. Materjalid ja meetodid

2.1 Katsematerjalid

VAP was provided by the Molecular Pharmacology Laboratory, Changchun University of Chinese Medicine. Dgalactose (D-gal) and VE (purity >90 protsenti ) osteti ettevõttelt Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd. (Shanghai, Hiina). Kaubanduslikud superoksiidi dismutaasi (SOD), malonaldehüüdi (MDA), katalaasi (CAT) ja glutatioonperoksidaasi (GSH-Px) komplektid osteti ettevõttelt Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd. (Nanjing, Hiina). Kõik kemikaalid ja reaktiivid olid analüütilise puhtusega.

Morrise veelabürindi (MWM) videojälgimis- ja analüüsisüsteem osteti ettevõttelt Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd. (Chengdu, Hiina). Transmissioonelektronmikroskoop osteti ettevõttelt Tecnai Corporation (Hillsboro, OR, USA). Suure läbilaskevõimega sekveneerimisplatvormi (MiSeq PE300) pakkus Illumina (San Diego, CA, USA).

2.2 Loomkatsed

Kuuskümmend tervet ICR-hiirt (SPF-klassi, pooled isased ja pooled emased, kaaluga 22–26 g) osteti ettevõttest Changchun Yisi Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (sertifikaadi nr SCXK(Ji) -2018-0007). Hiiri kasvatati eraldi puurides 12-tunnise valguse/pimeduse tsüklite ja standardtemperatuuri (22 ± 2 °C) all, kusjuures toitu ja vett anti ad libitum. Kõik hiired kohandati nende tingimustega vähemalt ühe nädala jooksul enne katsete algust. Kõik hiired jagati viide rühma: kontroll-, mudel-, E-vitamiini (VE), VAP madala annuse (VAP1) ja VAP suure annuse (VAP2) rühmad. VE, VAP1 ja VAP2 rühmadele manustati vastavalt VE (100 mg/kg), VAP (200 mg/kg) ja VAP (400 mg/kg) 10 päeva jooksul, samas kui kontroll- ja mudelrühmad said destilleeritud vett. (sama maht ja sama intragastrilise tee kaudu). Alates 11. päevast süstiti kontrollrühmale subkutaanselt tavalist soolalahust. D-gal (1000 mg/kg) süstiti subkutaanselt teiste rühmade hiirte kuklasse ja mudeli manustamist jätkati 60 päeva.

2.3 Morrise veelabürint

MWM test viidi läbi 1 tund pärast D-gal manustamist päeval 57. Lühidalt, platvorm asetati veelabürindi keskele. Vett lisati platvormile, kuni see ületas 1 cm, ja seda hoiti umbes 25 ◦C juures. Hiiri treeniti pidevalt 1 nädal ja MWM-test viidi ametlikult läbi veelabürindi standardse tööprotseduuri järgi. Enne katse ametlikku algust lisati vette titaandioksiidi, et hiired ei tajuks platvormi konkreetset asendit. Hiirte pead värviti andmete jälgimiseks ja kogumiseks kollaseks. Morrise veelabürindi videojälgimise analüüsitarkvara salvestas hiirte ujumistee, keskmises ringis viibimise protsendi ja keskmise rõnga liikumiskauguse protsendi.

2.4 H&E värvimine

Hiirte terved ajud fikseeriti 4-protsendilises paraformaldehüüdi lahuses ja sisestati parafiini. 24 tunni pärast lõigati ajukoed osadeks, deparafineeriti, rehüdreeriti ja värviti H&E-ga. Seejärel vaadeldi sektsioone optilise mikroskoobi all, et registreerida patoloogilised muutused.

2.5 KAUPA

Pärast perfusiooni lõigati hipokampuse kuded, fikseeriti 2-protsendilise paraformaldehüüdi ja 2,5-protsendilise glutaaraldehüüdfosfaadi puhverlahusega, dehüdreeriti alkoholigradienti, puhastati etoksüpropaaniga, sisestati, lõigati viiludeks ja värviti uranüülatsetaadi ja pliitsitraadiga. Hipokampuse neuronite ultrastruktuuri vaadeldi ülekandeelektronmikroskoobi all.

2.6 Biokeemilised analüüsid

Hiire vereproovid koguti ja tsentrifuugiti kiirusel 3000 p/min 15 minutit temperatuuril 4 °C, seejärel koguti supernatant. Seerumi MDA sisaldus ning SOD, GSH-Px ja CAT aktiivsuse määramine viidi läbi komplekti juhiste järgi.

2.7 Väljaheiteproovide mikrobiota profiilide koostamine

Kogu DNA ekstraheeriti väljaheiteproovidest ja seda kasutati matriitsina bakteriaalse 16S rRNA geeni V3–V4 piirkonna PCR amplifitseerimiseks. Toorandmekogum on hoiustatud projektis NCBI BioProject PRJNA731623 BioSample'i registreerimisnumbrite all SAMN19291644 kuni SAMN19291668. PCR-produkte analüüsiti kvantitatiivselt ja 16S rRNA geenide sekveneerimine viidi läbi Illumina MiSeq platvormi (Illumina, San Diego, USA) abil. Toorandmed põhinevad minimaalsel kattuvuse pikkusel 10 bp, maksimaalne lubatud mittevastavussuhe kattumise piirkonnas on 0,2 (vaikimisi). Iga proovi lugemised ühendati ja märgised, mille pikkus oli pärast kvaliteedikontrolli alla 75 protsendi märgise pikkusest, filtreeriti. Kimäärid (st kui kahel vanemal on päringujärjestusega enam kui 80 protsenti sarnane järjestus, siis peetakse päringut kimääriks) eemaldati kvaliteetsete sildijärjestuste saamiseks. Uurimistarkvara (Sonoma, USA) [17] kasutati märgiste rühmitamiseks 97-protsendilise sarnasuse tasemel, operatiivsete taksonoomiliste üksuste (OTU) klassifitseerimiseks, liikide klassifikatsiooni saamiseks OTU järjestuse koostise põhjal ning proovide lahjenduste [18] ja Shannoni indeksi kõverate joonistamiseks. . PICRUSt (Halifax, CAN) [19] kasutati iga proovi funktsionaalse geenikoostise määramiseks, võrreldes liigikoostise teavet vastavalt 16S rRNA geenijärjestuse tulemustele. Sel viisil saab määrata funktsionaalseid erinevusi erinevate proovide või rühmade vahel. Arvused, rajad, EÜ teave ja OTU arvukus iga funktsionaalse kategooria kontekstis saadi Kyoto geenide ja genoomide entsüklopeedia [20] andmebaasi abil.

2.8 Western blot meetod

Kogu valk ekstraheeriti ajukoest ja valgu kontsentratsiooni hindamiseks kasutati Coomassie briljantsinise meetodit. Seejärel, pärast SDS-PAGE elektroforeesi, on valgud kandunud membraanile, mida seejärel inkubeeriti primaarsete antikehadega sihtvalkude apolipoproteiin E (APOE4), atsüül-CoA oksüdaasi 1 (ACOX1), peroksisoomi proliferaatoriga aktiveeritud retseptori (PPAR) vastu. karnitiin-palmitoüültransferaas-1 A (CPT1A) ja glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaas (GAPDH) üleöö temperatuuril 4 ◦C. Seejärel pesti membraani ja inkubeeriti seejärel sekundaarse antikehaga toatemperatuuril 1 tund. Pärast membraani pesemist Tris-puhverdatud soolalahuse ja Tween 20-ga (TBST) lisati täiustatud kemoluminestsents (ECL) lahus. Skaneerimisel fotograafias kasutatakse täisautomaatset geelpildisüsteemi (Aplegen, Pleasanton, USA).

2.9 Vabade rasvhapete (FFA) taseme tuvastamine ajukoes

Hiire ajukude koguti ja lisati sobiv kogus tavalist soolalahust. Seejärel tsentrifuugiti proove 4 °C juures 3000 p/min juures 10 minutit ja supernatandid koguti. FFA tasemed ajukoes määrati komplekti juhiste järgi.

2.10 ATP sisalduse tuvastamine ajukoes

Hiire ajukoed koguti ja lüüsiti ajukoe: lüüsipuhvri suhtega 1:5. Seejärel tsentrifuugiti proove 12,000 × g juures 4 ◦C juures 5 minutit ja supernatandid koguti. ATP sisaldus ajukoes määrati komplekti juhiste järgi.

2.11 Statistiline analüüs

Andmeanalüüsiks kasutati SPSS 19.0 (Chicago, IL, USA). Tulemused on väljendatud keskmisena ± standardhälbe (x ± s). Rühmade võrdlemiseks kasutati õpilase t-testi ja erinevusi peeti oluliseks, kui P < 0.05 või P < 0,01.

3. Tulemused

3.1 VAP-ravi saanud vananevate hiirte tunnetuse, õppimise ja mälu parandamine

MWM test tugineb põgenemisplatvormi leidmisel loomade ellujäämisinstinktile ja hõlmab mäluga seotud ruumilise positsiooni otsimist. Joonisel 1 on näidatud viimasel päeval MWM-testi saanud hiirte tüüpilised jäljed. Mudelrühma hiire käitumise trajektoori diagramm oli keerulisem ja ebakorrapärasem ning hiired platvormi ei leidnud. Pange tähele, et VAP1 ja VAP2 rühmade hiirte käitumistrajektoori diagramm oli lihtne ja leiti platvorm. Võrreldes kontrollrühmaga vähenesid keskmise rõnga retentsiooniaja protsent ja mudelirühma keskmise rõnga poolt nihutatud kauguse protsent oluliselt (P < 0.01). Võrreldes mudelirühmaga suurenes retentsiooniaja protsent keskmises ringis ja keskmise rõnga poolt nihutatud kauguse protsent oluliselt VE, VAP1 ja VAP2 rühmades (P < 0.05, P < 0,01). Need leiud näitavad, et VAP-i manustamine parandas D-gal-indutseeritud vananevate hiirte kognitiivseid võimeid.

3.2 VAP-i kaitsev toime hipokampuse neuronitele vananevatel hiirtel

H&E värvimist kasutati ajukudede patoloogilise morfoloogia jälgimiseks vananevatel hiirtel, et uurida, kas VAP võib parandada D-gal-indutseeritud neuronaalseid patoloogilisi kahjustusi (joonis 2A). Kontrollrühma hipokampuse CA1 rakke oli palju, normaalse rakustruktuuri, täieliku morfoloogia ja ilmsete tuumadega. Seevastu CA1 rakkude arv mudelirühma hipokampuses vähenes ja näitas ebaregulaarset morfoloogiat, kusjuures mikroskoobi all ei täheldatud ilmseid tuumasid. Hipokampuse CA1 piirkonna neuronid olid suhteliselt normaalsed ja tuuma kokkutõmbumine vähenes VE rühmas võrreldes mudelrühmaga. Tähelepanuväärselt erines VAP1 ja VAP2 rühmade hipokampuste CA1 piirkond oluliselt mudelrühmas täheldatust ja sarnane kontrollrühma omaga. Struktuur oli suhteliselt normaalne, rakud olid tihedalt paigutatud ja korrapärased ning morfoloogia oli täielik.

Lisaks kasutati TEM-i hipokampuse neuronite ultrastruktuuri jälgimiseks vananevatel hiirtel ja mõistmaks, kas VAP-i vastupidine mõju õppimise ja mälu vähenemisele oli seotud neuronite mikrostruktuuri reguleerimisega ajus (joonis 2B). Hipokampuse neuronitel oli kontrollrühma tsütoplasmas terve morfoloogia, ühtlane kromatiini jaotus ja arvukad organellid. Suure suurenduse korral olid mitokondrid elliptilised, läbipaistva kahekordse välismembraaniga ja tervete kristallidega. Seevastu mudelrühma hipokampuse piirkonna neuronid olid ebanormaalsed; täheldati varaseid apoptootilisi muutusi, nagu kromatiini kondenseerumine; lipofustsiini veresooned olid sagedasemad; sünaptiline struktuur oli ebaselge; lipiiditilgad hajutati ja tuvastati Golgi kompleksi vesiikulitaoline laienemine ja vähenenud kare endoplasmaatiline retikulum. Tähelepanuväärne on, et võrreldes mudelrühmaga olid VAP1 ja VAP2 rühmades hipokampuse neuronid, mis kippusid olema normaalse struktuuri ja morfoloogiaga, siledate tuumamembraanide, normaalsete nukleoolide ja rohkete organellidega. Nimelt täheldati rohkem sünapse, eesmise membraani sünaptilistel vesiikulitel ei olnud ebanormaalset agregatsiooni, intratsütoplasmaatilise Golgi keha ja mitokondrite morfoloogia oli normaalne ning lipofustsiini esines harva.

3.3 VAP mõju oksüdatiivsete kahjustustega seotud ensüümidele

OS-i negatiivne mõju on vabade radikaalide tootmine kehas, mis on üks peamisi vananemise ja haiguste põhjuseid (joonis 3). Võrreldes kontrollrühmaga olid SOD, CAT ja GSH-Px aktiivsused D-galaadiga manustatud mudelhiirte seerumis oluliselt vähenenud (P < 0.01, P < {{7) }}.{{10}}5) ja MDA sisu suurenes oluliselt (P < 0.05), mis näitab edukat modelleerimist. Võrreldes mudelrühmaga olid SOD, CAT ja GSH-Px aktiivsused VE rühmas oluliselt suurenenud (P < 0.01, P < 0.05) . Võrreldes mudelrühmaga suurenesid SOD ja GSH-Px aktiivsused VAP1 rühmas oluliselt (P < 0,05, P < 0,01). Seevastu CAT oli veidi suurenenud, kuid ei erinenud oluliselt. Võrreldes mudelrühmaga suurenesid SOD, CAT ja GSH-Px aktiivsused VAP2 rühmas oluliselt (P < 0,05, P < 0,01). Võrreldes mudelrühmaga vähenes VAP1 ja VAP2 rühmade hiirte seerumi MDA sisaldus oluliselt (P < 0,05). Ülaltoodud tulemused näitavad, et VAP-i vananemisvastane toime on seotud seerumi antioksüdantsete ensüümide aktiivsuse suurendamisega vananevatel hiirtel ja lipiidide peroksüdatsiooni vähendamisega.

3.4 VAP mõju soolestiku mikrobiota koostisele ja mitmekesisusele hiirtel

16S rRNA geenide sekveneerimise tulemused andsid 1 999 460 PE lugemist ning pärast kimääride filtreerimist ja eemaldamist saadi 1 776 708 efektiivset märgist. Kontroll-, mudel-, VE-, VAP1- ja VAP2-rühmade proovide keskmised järjestuse pikkused olid vastavalt 417,2, 416,2, 418,2, 421,0 ja 420,4 aluspaari. Phredi kvaliteediskooriga üle 30 (Q30) olevate lugemiste suhe oli vahemikus 94,15–95,71 protsenti.

Seejärel määrasime soolestiku mikrobiota koostise, kasutades 16S rRNA geeni lugemist. Suure läbilaskevõimega sekveneerimisega saadud märgised koondati 97-protsendilise sarnasuse tasemele ja genereeriti Venni diagramm (joonis 4A). Igal rühmal oli 490 OTU-d ja konkreetseid OTU-sid rühma kohta sisuliselt ei olnud. Et kontrollida, kas sekveneerimise sügavus vastas liikide identifitseerimisnõuetele, joonistasime kõigi proovide jaoks Shannoni ja harulduse kõverad (joonis 4B, C). Kõikide proovide mõlemad kõverad olid küllastusplatoo lähedal, mis näitas suurt katvust (99 protsenti). Need andmed viitavad sellele, et valdav enamus proovides leiduvast teabest mikroobide mitmekesisuse kohta ekstraheeriti ning bakterikoosluse struktuuri ja mitmekesisust saab täpselt kindlaks määrata.

Alfa mitmekesisus peegeldab liikide arvukust (rikkust) ja liigilist mitmekesisust. Shannoni ja Simpsoni indekseid kasutatakse liigilise mitmekesisuse mõõtmiseks ning neid mõjutavad valimikoosluse liikide arvukus ja liikide ühtlus (koosluse ühtlus). Mida suurem on Shannoni indeksi väärtus, seda väiksem on Simpsoni indeksi väärtus, mis näitab, et valimi liigiline mitmekesisus on suurem [21]. Joonisel 4D esitatud tulemused ei näita olulisi erinevusi hiirefloora Shannoni indeksi väärtustes rühmade vahel.

Võrreldes kontrollrühmaga ei ole mudelrühma Simpsoni indeksi väärtusel olulist erinevust. Mudelrühma ja iga ravirühma vahel olulist erinevust ei täheldatud. Need tulemused ei näita olulist erinevust hiirte soolefloora mitmekesisuses rühmade vahel.

PCA viidi läbi hiire sooleflooraga (joonis 4E), kus PC1 ja PC2 on kaks iseloomulikku väärtust, mis põhjustavad proovide vahel suurima erinevuse. Tulemused näitasid, et 32,94 ja 19,74 protsenti mõjuastmest moodustasid vastavalt PC1 ja PC2. Mida kaugemal on punktid, seda suurem on erinevus. Viis proovide rühma on rühmitatud kolme kategooriasse, kusjuures mudelrühmade proovid on jaotatud joonise vasakus ülanurgas, teistest rühmadest kaugel. Kontroll-, VE- ja VAP2-rühmad näitasid rohkem kattumisi ja kolm proovirühma olid lähestikku. Joonise 4E ülemine keskosa näitab, et pärast VAP-i sekkumist paranes VAP2-rühma hiirte soolefloora sarnasus kontrollhiirte omaga.

Bakterite arvukuse erinevusi kontrollmudelis, VE, VAP1 ja VAP2 rühmades hinnati 20 parima perekonna puhul (joonis 4F). Lachnospiraceae_NK4A136_rühma ja Lactobacillus'e arvukus oli kontroll- ja mudelloomade vahel erinev, kusjuures Lactobacillus'e arvukus mudelrühmas oli oluliselt vähenenud. Seevastu ülejäänud perekondade arvukus suurenes oluliselt. Nimelt on Lactobacillus'e liikmed vananemisvastase ja põletikuvastase toimega probiootikumid [22, 23]. Seetõttu polnud need tulemused üllatavad. Tähelepanuväärselt suurenes Lactobacilluse arvukus VAP1 ja VAP2 rühmades võrreldes mudelrühmaga märkimisväärselt, mis viitab sellele, et VAP võib suurendada kasulike bakterite sisaldust soolestikus, vältides vananemist.

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】