Fenüületanooli glükosiidide uuring Cistanche Tubulosas

Abstraktne: Eesmärk: Kinnitada fenüületanoidglükosiidide sisaldust Cistanche deserticola (Xinjiang) ravimtaimes ja luua kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) meetod fenüületanoidglükosiidide samaaegseks määramiseks. Meetod: kasutati ThermoSyncronis C18 kromatograafilist kolonni (25{6}}mm) × ４．６ｍｍ,５ μ ｍ）; Atsetonitriil liikuva faasina A, 0,1 protsenti fosforhappe lahus liikuva faasina B, gradientelueerimine (0-10min, 10 protsenti A{{10}} protsenti A; 10-20min, 15 protsenti A-18 protsenti A; 20-45min, 18 protsenti A-27 protsenti A); Voolukiirus 1,0 ml/min; Kolonni temperatuur 30 kraadi ; Tuvastamise lainepikkus on 330 nm; Sissepritse maht 10 μ Ｌ. Tulemus: Cistanche deserticola sisaldab kuut fenüületanoolglükosiidi, sealhulgas ehhinasiidi, antotsüaniin A, pilosiidi, isopilosiidi, 2'-atsetüülpilosiidi ja antotsüaniin B, ilma muude fenüületanoolglükosiidideta; Kuue fenüületanoolglükosiidi eraldamiseks väljakujunenud kõrgsurvevedelikkromatograafia meetod andis häid tulemusi vahemikus 80,438 kuni 1287.{28}} mg/L, 7,552 kuni 120,834 mg/L, 28,144 kuni 450,305 mg/L. 865 vastavalt kuni 301,840 mg/L ja 1,100 kuni 17,593 mg/L Lineaarne seos on hea vahemikus 0,382–6,113 mg/L (R2 on suurem või võrdne 0,9998); Täpsuse, stabiilsuse ja korratavuse RSD on alla 3,2 protsendi; Keskmine taastumismäär on 97,19–102,51 protsenti ning meetod on täpne ja usaldusväärne. Järeldus: Cistanche deserticola (Xinjiang) sisaldab kuut fenüületanoolamiinglükosiidi, sealhulgas ehhinakosiidi, antotsüaniin A, basseiniäärset, isopilosiidi, 2'-atsetüülpilosiidi ja antotsüaniin B. Väljakujunenud kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia meetod on lihtne, kiire, täpne ja reprodutseeritav. suudab üheaegselt määrata kuue fenüületanoolamiinglükosiidi sisaldust Cistanche deserticola's, See võib anda teadusliku aluse Cistanche deserticola kvaliteedi uurimiseks ja kontrollimiseks.

Märksõnad: torukujuline Cistanche; fenüületanoolglükosiidid; ＨＰＬＣ

See toode on kuiv lihakas vars, mille kestendavad lehed on pärit Orobaceae perekonda kuuluvast taimest Cistanchetu hulosa (Schenk) Wish. Sellel on neeru yangi toniseeriv toime, essentsi ja verd toitev toime ning kõhukinnisuse leevendamiseks soolestikku niisutav toime. Seda kasutatakse neerude yangi puudulikkuse, essentsi- ja verepuuduse, impotentsuse ja viljatuse, nõrga talje ja põlvede, nõrkade lihaste ja luude ning soolestiku kuivuse ja kõhukinnisuse raviks. Kaasaegsed uuringud on näidanud, et Cistanche perekonda kuuluvate ravimtaimede peamiste keemiliste komponentide hulka kuuluvad fenüületanoolamiinglükosiidid, iridoidid, lignaanid, polüsahhariidid, alkaloidid, lenduvad õlid ja muud komponendid [2]. Nende hulgas on fenüületanoidglükosiidid Cistanche deserticola peamised toimeained selle vananemisvastase, väsimuse, neerude ja yangi toniseeriva, seniilse dementsuse ja muude farmakoloogiliste mõjude tõttu. Cistanche deserticola sisaldab peamiselt ehhiaatsiat, gangliosiidi A, basseiniäärt, isopilosiidi, krüsotiili, 2'-atsetüülglükosiidi, 2'-atsetüülbasseini, tsistanche glükosiidi A, tsistanche glükosiid C fenüületanoolglükosiide, nagu antotsüaniin B] [3-7. Selles uuringus kasutati HPLC-d Cistanche deserticola (Xinjiang) fenüületanoolamiinglükosiidide tuvastamiseks ja kehtestati samaaegse määramise meetod, mida saab kasutada Cistanche deserticola autentsuse ja kvaliteedi eristamiseks, pakkudes teadusliku aluse Cistanche deserticola kvaliteedi uurimisele ja kontrollile.

Cistanche deserticola peamised keemilised koostisosad

1 Instrumendid, testitavad ravimid ja proovid

Kromatograaf: Ultramate3000 seeria kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (LPG 3400SDN kvaternaarne gradientpump, WPS-3000SL automaatne proovivõttur, TCC 3000RS kolonni temperatuurikast, VWD 3100 detektor); Kromatograafiline kolonn: ThermoSyncronisC18 kolonn (4,6 mm × ２５０ｍｍ, ５ μ ｍ）; Elektrooniline kaalu: 1/100000 elektroonilise kaalu mudel on Sedoris SQP; 1/10000 elektroonilise kaalu mudel on Sedoris SQP ; Puhta vee/ülipuhta vee integreeritud süsteem: PURELABClassicUV, ülipuhta vee süsteem.

Ehhinosiid, Cistanche deserticola peamine keemiline komponent

Ehhinosiid: Lemaitian Pharmaceutical, partii number: DST191008-038, sisaldus 99,9 protsenti ; Guanhua glükosiid A: ChemFace, partii number: CFN90669, sisaldus 98 protsenti; Maorui lille glükosiid: ETTEVAATUST, partii number PS011530, sisaldus: 94,6 protsenti ; Isopilosiid: ChemFace, partii number CFN97049, sisaldus 98 protsenti; 2 '- atsetüülpilosiid: ChemFace, partii number: CFN92452, sisaldus: 98 protsenti . Guanhua glükosiid B: Greep, partii number: 20120903, sisaldus 98,57 protsenti ; Atsetonitriil: Fisheri kromatograafiliselt puhas; Fosforhape: Fisher, kromatograafiliselt puhas; Metanool: Hiina meditsiin, analüütiliselt puhas.

Guanhua Cistanche ravimtaim osteti ettevõttelt Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd., mille päritolu on Xinjiang. Nii Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd. kui ka Jinpai Zhengtang Pharmaceutical Co., Ltd. on selle tuvastanud kui Guanhua Cistanche.

2 Meetodid ja tulemused

2.1 Kromatograafilised tingimused

täiteainena oktadetsüülsilaaniga seotud silikageeli kasutamine (ThermoSyncronisC18); Kasutades atsetonitriili (A) -0,1 protsenti fosforhappe lahust (B), gradientelueerimine (0-10min, 15 protsenti A → 18 protsenti A; 10-20min, 18 protsenti A → 2 0 protsenti A; 20-45min, 20 protsenti A → 27 protsenti A); Voolukiirus 1,0 ml/min; Kolonni temperatuur 30 kraadi ; Tuvastamise lainepikkus on 330 nm; Sissepritse maht 10 μ Ｌ. Nendes kromatograafilistes tingimustes uuritava lahuse kromatogramm on näidatud joonisel 1.

Joonis 1 Cistanche deserticola testlahuse kromatograafiline analüüs

2.2 Lahuse valmistamine

2.2.1 Uuritava lahuse valmistamine

Võtke umbes 0,1 g proov (sõelutud läbi 3. sõela), kaaluge see täpselt, lisage 20 ml 50% metanooli, kaaluge mass, leotage 30 minutit, ultraheliga (500 W, 53 kHz) 40 minutit, laske sellel jahtuda, kaaluge mass uuesti, kasutage kaotatud massi korvamiseks 50% metanooli, loksutage korralikult ja võtke proov.

2.2.2 Võrdluslahuse valmistamine

Kaaluge ehhinatsetiini, antotsüaniini A, pilosiidi, isopilosiidi, 2'-atsetüülpilosiidi ja antotsüaniini B kontrollproove täpselt ning lisage 50% metanooli, et saada kontsentratsioon 1287.000mg/l, 120,834 mg/l, 450 g. Saadakse vastavalt 301,840 mg/L ja 17,593 mg/L 6,113 mg/L segatud võrdluslahus. Võrdluslahuse kromatogramm on näidatud joonisel 2

Joonis 2  6 26 fenüületanoidglükosiidi võrdluslahuste kromatogramm

2.3 Fenüületanoidglükosiidide määramine Cistanche deserticola's (Xinjiang)

Valmistage võrdluslahus fenüületanoolamiinglükosiidide jaoks, nagu ehhinakosiid, antotsüaniin A, antotsüaniin A, on antotsüaniin, antotsüaniin, 2' - atsetüülantotsüaniin, 2' - atsetüülantotsüaniin A, antotsüaniin C ja antotsüaniini B proovid, ja koguge antotsüaniini B proovid. Heji, Xinjiang (päritolu Xinjiang) alates 2017. aastast. Valmistage katselahus vastavalt valmistamismeetodile "2.2.1" ning analüüsige standardlahust ja katselahust kromatograafiliste tingimustega "2.1". Tulemused näitasid, et kromatograafiliste piikide jaotus kolmes Cistanche deserticola proovipartiis oli ühtlane. Kombineerides retentsiooniaja iga fenüületanoolamiinglükosiidiühendi täislainepikkuse neeldumiskõveraga, tuvastati proovide kromatograafilised piigid. Tulemused näitasid, et kõigil kolmel Cistanche deserticola proovide partiil oli kuus fenüületanoolamiinglükosiidi: ehhinakosiid, antotsüaniin A, antotsüaniin, antotsüaniin, 2'-atsetüülantotsüaniin ja antotsüaniin B. Fenüületaani glükosiidide kromatograafilisi tippe ei ole. Kromatograafiliste piikide identifitseerimine on näidatud joonisel 3.

Cistanche deserticola peamised keemilised koostisosad

Cistanche toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4 Metoodika ülevaade

2.4.1 Lineaarse seose kontroll

Võrdluslahuse 2 # -5 # saamiseks lahjendage võrdluslahus (1 #) punktis "2.2.2" 2, 4, 8 ja 16 korda. Võetakse iga võrdluslahuse tase ja analüüsitakse seda vastavalt kromatograafilistele tingimustele punktis 2.1. Kasutage iga taseme võrdluslahuse kontsentratsiooni x-teljena ja iga taseme piigi pindala y-teljena lineaarse regressiooni jaoks. Tulemused on näidatud tabelis 1, mis näitab head lineaarset seost vastavas lineaarses vahemikus olevate komponentide vahel.

Tabel 1  6 Fenüületanoidglükosiidide lineaarsed seosed

Joonis 3 Cistanche deserticola fenüületanoolglükosiidide kromatograafiliste piikide tuvastamine

2.4.2 Täpsuskatse

Vastavalt punktis 2.2.1 kirjeldatud uuritava lahuse valmistamismeetodile valmistage üks osa uuritavast lahusest ja analüüsige seda pidevalt kuus korda punktis 2.1 kirjeldatud kromatograafilistes tingimustes. Igas analüüsis saadi ehhinakosiidi, antotsüaniini A, antotsüaniini, antotsüaniini, 2'-atsetüülantotsüaniini ja antotsüaniini B sisaldus, mille RSD väärtused olid 0,3 protsenti, 0,3 protsenti ja Vastavalt 0,2 protsenti , 0,1 protsenti , 1.0 protsenti , 3,1 protsenti , mis viitab heale instrumendi täpsusele.

2.4.3 Stabiilsuskatse

Vastavalt katselahuse "2.2.1" valmistamismeetodile valmistage üks portsjon uuritavat lahust ja analüüsige 6 korda kromatograafilistes tingimustes "2.1" temperatuuril 0, 2, 4,5, 1{{16 }}, vastavalt 13,5 ja 20 tundi, et saada igas analüüsis ehhinakosiidi, antotsüaniini A, antotsüaniini, antotsüaniini, 2'- atsetüülantotsüaniini ja antotsüaniini B sisaldust. Sisu RSD väärtused on vastavalt {{20}},6 protsenti , 0,4 protsenti , 0,5 protsenti , 0,4 protsenti , 1,3 protsenti ja 3,1 protsenti , mis näitab, et testlahus on 20 tunni jooksul hea stabiilsusega.

2.4.4 Korratavuse test

Vastavalt katselahuse "2.2.1" valmistamismeetodile valmistage katselahusest 6 proovi ja analüüsige neid kromatograafilistes tingimustes "2.1", et saada iga analüüsi sisu ehhinakosiidi, antotsüaniin A, antotsüaniin A, on antotsüaniin, 2'- atsetüülantotsüaniin B ja antotsüaniin B, mille RSD väärtused on 0,6 protsenti, {{10}},6 protsenti, 0,6 protsenti, 1,5 protsenti ja 1,5 protsenti näitavad head korratavust sellest meetodist.

2.4.5 Märgistuse taastumise test

Võtke ligikaudu {{0}},05 g teadaolevast ravimpulbri sisaldusest, kaaluge see täpselt ja kaaluge paralleelselt 9 portsjonit. Lisage võrdluslahused, mis on võrdväärsed 50-protsendilise, 100-protsendilise ja 150-protsendilise 6 testitava komponendi sisaldusega ravimmaterjalis, ning valmistage paralleelselt 3 portsjonit. Valmistage katselahus meetodi "2.2.1" järgi, analüüsige seda kromatograafilistes tingimustes "2.1" ja arvutage iga komponendi taastumismäär. Tulemused on toodud tabelis 2, mis näitab, et selle meetodi täpsus on hea. . 2.5 Proovisisalduse määramine: Kaaluda ligikaudu 0,1 g erinevaid ravimipulbri partiisid (sõeluda läbi sõela nr 3), kaaluda täpselt, valmistada katselahus vastavalt punktis "2.2.1" kirjeldatud meetodile, mõõta vastavalt kirjeldatud kromatograafilistele tingimustele. punktis "2.1" registreerige piigi pindala ja arvutage regressioonivõrrandi abil kuue fenüületanoidglükosiidi sisaldus. Tulemused on toodud tabelis 3.

3 Arutelu

3.1 Fenüületanoidglükosiidide määramine

Kõik kolm testitud Cistanche deserticola (Xinjiang) partiid sisaldavad kuut fenüületanoidglükosiidi, nimelt ehhinakosiidi, antotsüaniin A, basseiniäärt, isopilosiidi, 2'-atsetüülpilosiidi ja antotsüaniini B ning ükski neist ei sisalda muid fenüületanooli komponente. See näitab, et Cistanche deserticola (Xinjiang) fenüületanoolglükosiidide tüübid on suhteliselt ühtlased, sealhulgas ehhinasiid ja pilosiid. Glükosiidide sisaldus Isomeria lilles on suurem kui 1 protsent.

Fenüületanoolglükosiid on Cistanche deserticola peamine aktiivne komponent

3.2 Ekstraheerimistingimuste optimeerimine

Selles katses viidi läbi ühefaktoriline uuring ekstraheerimislahustiga (10% ~ 90% metanooli) ja lõpuks määrati optimaalseks lahustiks 50% metanool; Ultraheli ekstraheerimisaja (20-60 minutit) kohta viidi läbi ühefaktoriline uuring ja leiti, et 2'-atsetüülbasseini ääres saavutas maksimumi ultraheliga ekstraheerimisaja vahemikus 30-40 minutit. Pärast 60-minutilist ultraheli sisaldus aga vähenes ja see komponent võib ultraheli pikenemise tõttu kahjustuda. Võttes arvesse teiste komponentide ekstraheerimisefekte, on 40-minutiline ultraheli optimaalne ekstraheerimisaeg.

3.3 Kromatograafiliste tingimuste optimeerimine

Täislainepikkusega skaneerimine (190-400nm) viidi läbi dioodimassiivi detektoriga, mis näitas, et kuue fenüületanoidglükosiidi täislainepikkuse neeldumiskõverad olid järjepidevad ning neeldumispiigid olid 195 nm ja 330 nm juures. Madalatele lainepikkustele avaldasid tugevat mõju liikuva faasi neeldumishäired ja lisandi tausta, seega oli 330 nm optimaalne neeldumise lainepikkus. Uuriti erinevate kromatograafiliste kolonnide eraldusefekte ja leiti, et DiamonsilC18, AgilentZORBAXSB-AqC18 ja ThermoSyncronis C18 kromatograafilised kolonnid suutsid eraldada need kuus fenüületanoidglükosiidi Cistanche deserticola katseproovist, mille hulgas oli ka cchromatographic C18 Chromatographic C18. oli parim eraldusefekt.

Tabel 2 Suurenenud taastumise testi tulemused

Tabel 3 6 fenüületanoolglükosiidi sisaldus Cistanche deserticolas ( protsentides )

4. Järeldus

Selle katsega tuvastati Cistanche deserticola (Xinjiang) fenüületanoolamiinglükosiidid ja kehtestati samaaegne meetod kuue fenüületanoolamiinglükosiidi sisalduse määramiseks Cistanche deserticolas, sealhulgas ehhinasiidi, antotsüaniin A, antotsüaniini, isoantotsüaniini, antotsüaniini, antotsüaniini, antotsüaniini, 2'-anthotsüaniini sisalduse samaaegseks määramiseks Cistanche deserticola's. meetod on lihtne, kiire, täpne ja sellel on kahekordne roll kvalitatiivses ja kvantitatiivses analüüsis. See annab analüütilised meetodid ja teadusliku aluse Cistanche deserticola kvaliteedi tõhusaks kontrollimiseks.

Cistanche ekstrakti pulber

viide:

[1] Riiklik farmakopöa komisjon. Hiina Rahvavabariigi farmakopöa [M]. Peking: Hiina meditsiiniteaduse ja -tehnoloogia ajakirjandus, 2020:140-141

[2] Wang Jia, Yang Wen, Wang Dong jt. Nelja liigi Cistanche deserticola võrdlev uuring HPLC iseloomulike spektrite põhjal [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021, 41 (3): 384-393

[3] Ding Yanxia, ​​Wang Xiaoqin, Zhang Ying. Kuue peamise fenüületanoolamiinglükosiidi sisalduse määramine perekonda Cistanche kuuluvates ravimtaimedes kõrgsurvevedelikkromatograafia alusel [J]. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2020, 31 (4): 813-816

Xiong Hui, Liu Yuqi, Qu Wenjia jt. Cistanche deserticola HPLC iseloomulik spekter ja viie fenüületanoolamiinglükosiidi määramine ［ J ］. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2019, 39 (2): 233-239

[5] Ma Zhiguo, Tan Yongxin. Kuue fenüületanoidglükosiidi muutused Cistanche deserticolas erinevatel aurutamisaegadel [J]. traditsioonilised Hiina patentravimid ja lihtsad preparaadid, 2011, 33 (11): 1951-1954

［ 6］ Ma Xueqin, Dong Yanhong, Guo Qi jt. Kuue fenüületanoolamiinglükosiidi määramine Cistanche deserticola maitsetaimedes ühe testi mitmekordse hindamismeetodiga ［ J ］. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2018, 29 (10): 2309-2312

[7] Liang Jiansong, Xue Cuili, Wu Menghua jt. Kuue fenüületanoolglükosiidi määramine Cistanche deserticola ja Cistanche deserticola puhul UPLC ja kemomeetrilise hindamise abil [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021, 41 (2): 226-235