Herba Cistanche ehhinakosiidi ja akteosiidi östrogeense toime uuring
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Tianjini Traditsioonilise Hiina Meditsiini Ülikool, Tianjin 300193, Hiina
Abstraktne: Selles uuringus östrogeenset toimetehhinakosiidjaakteosiiduuriti Herba Cistanche. Östrogeense toime tuvastamiseks kasutati lucifi kustutamise reporteri plasmiidiseadustehhinakosiidjaakteosiid. Östrogeeniretseptori konkureeriva sidumise katseid kasutati nende östrogeeniga konkureeriva toime tuvastamiseks. Tulemused näitasid sedaehhinakosiidjaakteosiidvõib suurendada ERE aktiivsust. MillalehhinakosiidvõiakteosiidLisatakse östrogeeni toimimisse, saab ERE juhitud reportergeeni aktiivsust stimuleerida östrogeeni agonistina. Seetõttu jõuti järeldusele, etehhinakosiidjaakteosiidtal oli fütoöstrogeenide aktiivsus, stimuleerides ERE-d suurendavat reportergeeni aktiivsust.ehhinakosiidjaakteosiidolid potentsiaalsed SERM-id.
Märksõnad: ehhinakosiid; akteosiid; fütoöstrogeenid;
Herba Cistanche on Cistanche perekonna (Cistanche) perekonda Cistanche kuuluv taim (Orobanchaceae). See on kuiv lihakas vars, millel on ketendavad lehed. Sellel on neeru yangi toitmine, essentsi ja vere toitmine ning soolte niisutamine. Seda kasutatakse neeru-yangi puudulikkuse, essentsi ja vere puuduse, impotentsuse ja viljatuse, talje ja põlvede valulikkuse, lihaste ja luude nõrkuse, soolestiku kuivuse ja kõhukinnisuse korral. 2J. Praegu on Cistanche'ist eraldatud ja tuvastatud peamised keemilised komponendid fenüülglükosiidid, iridoidid, lignaanid, flavonoidid, polüsahhariidid, oligosahhariidid, galaktitool, lenduvad komponendid, alkaloidid jne. Nende hulgas on fenetüülalkoholi glükosiidid Cistanche'i tsistanche'i peamised toimeained, ja on ka Cistanche kvaliteedikontrolli peamised tuvastamisnäitajad ning neid esindavadehhinakosiid ja verbaskosiid. Kaasaegsed farmakoloogilised uuringud on näidanud, et Cistanche'il on immuunregulatsiooni, oksüdatsiooni-, vananemis-, väsimus-, neuro- ja maksakaitse funktsioonid. Mõned farmakoloogilised uuringud näitavad ka, et Cistanche võib soodustada luude taastumist - l"J, inhibeerida osteoporoosi ja fütoöstrogeenide teket menopausijärgses eas naistel"]. Selles katses valisime ehhinakosiidi ja verbaskosiidi, mis on peamised kvaliteedikontrolli näitajad Cistanche'is, ning testisime östrogeenset.ehhinakosiidi mõjuja verbaskosiid lutsiferaasi reporterplasmiidi meetodil ja östrogeeniretseptori konkureeriva sidumise katsega. Uurige ehhinakosiidi ja verbaskosiidi östrogeeni mehhanismi
1 Materjal ja meetodid
1.1 Materjal Hela rakud (inimese emakakaelavähi rakud), ostetud Shanghai Rakubioloogia Instituudist;ehhinakosiideraldati ja puhastati meie laboris Cistanche deserticolast ning seda testiti HPLC-ELSD abil. TheehhinakosiidKontrollina kasutati võrdlusainet (China National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, partii number: 111670) ja mõõdetud puhtus oli 95,1 protsenti. Theakteosiideraldati ja puhastati meie laboris Cistanche kõrbest ning saadi HPLC abil. ELSD-test, mille kontrollaineks oli Verbascum glükosiid (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, partii number: 111530), oli mõõdetud puhtus 96,4 protsenti; plasmiidid ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (ekstraheeritud meie labori poolt); östradiool (E), Sigma Company; Veise loote seerum (FBS), PAA Company; Aktiivsöega töödeldud veiseloote seerum (CS-FBS), PAA Company; Phenol Red-Free DMEM, Sigma Company; dimetüülsulfoksiid (DMSO) ), Amresco Company; LB medium, Shanghai Shenggongi biotehnoloogiaettevõte; PassiveLysis5X puhver, Promega Company; Lipofectamine2000, Promega Company; Plasmiidi ekstraheerimise komplekt, TIANGEN Company; Lutsiferaasi reportergeenide tuvastamise komplekt on Promega Company toode.
1.2 Rakukultuur Hela rakke kasvatati DMEM söötmes, mis sisaldas 10 protsenti veise loote seerumit. Vähemalt üks põlvkond enne katset asendati DMEM söötmega, mis sisaldas 1 protsenti aktiivsöega töödeldud veise loote seerumit.
1.3 Transfektsioon ja lutsiferaasi aktiivsuse määramine Hella rakud külvati 24-süvendiga plaadile tihedusega 70–80 protsenti. Kui rakud on seina külge kleepunud ja rakkude tihedus jõudis 90 protsendini, järgige lipo juhiseid. Feetamine2000 transfektsioonireagendi juhised transfekteerivad ERa, ER[3 ekspressiooniplasmiide ja ERE, Renila reporterplasmiide, vahetavad 8 tunni pärast söödet ja lisavad erineva kontsentratsiooniga testravimeid. Pärast üleöö inkubeerimist kasutage östrogeeni vastuse tuvastamiseks multifunktsionaalset plaadilugejat. Komponent ERE lutsiferaasi aktiivsus, arvutage ravimite suhteline mõju lutsiferaasi aktiivsusele.
1.4 Andmetöötlus ja statistiline analüüs
Kasutades SPSS18.{1}} statistikatarkvara, väljendatakse andmeid keskmisena ± standardhälbe (x±S). Andmete analüüsimiseks rühmade vahel kasutati ühesuunalist dispersioonanalüüsi (ANOVA) ja Dunnetti mitmekordse võrdluse t-testi. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Akteosiid
2 Katsetulemused
2.1 Verbaskosiidi mõju östrogeeni vastuse elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsusele Tulemused näitavad, et võrreldes kontrollrühmaga, kui seda vahendavad ERa ja ER[3, võib E (10 nmol) oluliselt ülesreguleerida östrogeeni vastuse elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsust Verbaskosiidi aktiivsus võib ülesreguleerida östrogeeni vastuse elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsust 10, 100, 1, 10 ja 50 txmol juures. Kui kontsentratsioon jõuab 50 µmol-ni, on ERE lutsiferaasi aktiivsuse ülesreguleerimine samaväärne östradiooli omaga. See on annusest sõltuv, kuid selektiivsus östrogeeniretseptorite ERa ja EP~ suhtes ei ole ilmne (joonis 2).
2 Erinevate kontsentratsioonide mõjuakteosiidERE lutsiferaasi aktiivsuse kohta
Märkus. Võrreldes kontrollrühmaga on P
2.2 Mõjuehhinakosiidöstrogeeni vastuse elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsuse kohta Tulemused näitavad, et võrreldes kontrollrühmaga, kui seda vahendavad ERa ja ER[3, võib E (10 nmol) oluliselt ülesreguleerida östrogeeni vastuse elementi ERE fluorestsents Ehhinakosiid võib östrogeeni vastust üles reguleerida elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsus 10, 100, 1, 10 ja 50 Ixmol juures. Kui kontsentratsioon jõuab 50 Ixmol-ni, on ERE lutsiferaasi aktiivsuse ülesreguleerimine veidi madalam kui östrogeenil. Diool on samuti meetrist sõltuv, kuid sellel on östrogeeniretseptorite ERa ja E suhtes väike erinevus selektiivsuses (joonis 3).
2.3 Verbascum glükosiidide ja östradiooli konkureeriv siduv toime östrogeeni retseptoritele Tulemused näitavad, et Verbascum glükosiidid võivad östradiooliga konkureerivalt seostuda östrogeeni retseptoritega ja antagoniseerida östradiooli aktiivsust östrogeeni vastuse elemendile ERE lutsiferaasile. Ülesreguleerimise efekt. Võrreldes E (10 nmo1) rühmaga võivad verbaskosiidid östrogeeni vastuse elemendil ERE erineval määral alla reguleerida östradiooli lutsiferaasi aktiivsust 1, 10 ja 50 p, mol juures ning verbaskosiidid näitavad annusest sõltuvust. , Kui kontsentratsioon jõuab 50 Ixmol-ni, on antagonistlik toime östradioolile kõige ilmsem (joonis 4).
2.4 Konkurentsi siduv mõjuehhinakosiidja östradiool östrogeeni retseptoritele. Tulemused näitavad sedaehhinakosiidvõib ka östradiooliga konkureerivalt seonduda östrogeeni retseptoritega ja antagoniseerida östradiooli vastust östrogeenile. ERE lutsiferaasi aktiivsuse ülesreguleerimine. Võrreldes E (10 nmol) rühmaga, võib verbaskosiid 1, 10 ja 50 mol juures erineval määral alla reguleerida östradiooli lutsiferaasi aktiivsust östrogeeni vastuseelemendil ERE.ehhinakosiideksponeerib laiska annust. Seks, kui kontsentratsioon jõuab 50 lxmol-ni, on antagonistlik toime östradioolile kõige ilmsem (joonis 5)
3 Arutelu
See katse näitas esimest korda, et selged andmed näitasid sedaehhinakosiidja verbaskosiid, Cistanche peamised toimeained, võivad seostuda östrogeeniretseptoritega ERa ja EP~, reguleerida ERE lutsiferaasi aktiivsust ja avaldada östrogeenset toimet, näidates SERM-ide aktiivsust. Ülaltoodud katseandmete analüüs näitab, et ERa süsteemis on östrogeeni vastuseelemendi ERE lutsiferaasi aktiivsuse verbaskosiidi ülesreguleerimine 50 lxmol juures võrdne 0,977-kordse E2-ga (1 0nmol), mis on samaväärne ERI3 süsteemiga. 0,970 korda; samamoodi on ERa süsteemis ehhinakosiidi ülesreguleerimise toime östrogeeni vastuse elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsusele 50 lxmol juures samaväärne E omaga (10 nmol), mis võrdub 0-ga ERI3 süsteemis. 937 korda on verbaskosiidi ülesreguleerimine östrogeeni vastuse elemendi ERE lutsiferaasi aktiivsusele veidi kõrgem kuiehhinakosiid, ning selektiivsus östrogeeniretseptorite ERa ja ER[3 suhtes ei ole ilmne, samas kui ehhiaatsia glükosiididel on östrogeeniretseptorite ERa ja ERI3 suhtes nõrk selektiivsus. Need erinevused võivad olla seotud erinevate rühmadega, mis on ühendatud verbaskosiidi ja ehhinakosiidi positsiooniga R4. Östrogeen toimib peamiselt östrogeeniretseptori kaudu. Östrogeeniretseptoritel on kaks peamist alatüüpi, ERa ja ER [3, östrogeen ja östrogeeni toimivad ained ühinevad östrogeeniretseptoriga, moodustades dimeeri ja seejärel dimeriseerunud. Keha ühineb östrogeeni reaktsioonielemendiga ERE ja avaldab seejärel östrogeeniefekti. [2l,. Fütoöstrogeenidel ja östrogeenidel on sarnased struktuurid ja funktsioonid. Uuringud on näidanud, et fütoöstrogeenid suudavad reguleerida luu ainevahetust ning neil on äärmiselt oluline roll luu resorptsiooni ja luukoe moodustumise tasakaalu säilitamisel. See on efektiivne seniilse hüpofunktsiooniga patsientide osteoporoosi korral. Sellel on teatav kliiniline ennetus- ja raviefekt. Seetõttu oletatakse, et Cistanche toime luude taastumise soodustamisel ja osteoporoosi tekke pärssimisel menopausijärgses eas naistel on selle fütoöstrogeenide kaudu. See katse näitab ka, et ehhinakosiid ja verbaskosiid võivad östradiooliga konkureerivalt seostuda östrogeeni retseptoritega ja antagoniseerida östradiooli ülesreguleerimist ERE lutsiferaasi aktiivsusel. Selle toimemehhanism on teadaolevalt resveratrool. Fütoöstrogeenide toime on sarnane J-ga. Lisaks selgitatakse, et ehhinakosiid ja verbaskosiid avaldavad östrogeenset toimet, seondudes östrogeeniretseptoritega ERa ja ER3. Ülaltoodud uuringud Cistanche fütoöstrogeeni aktiivsuse ja selle östrogeeni toime mehhanismi kohta näitavad, et Cistanche võib naistel menopausijärgse osteoporoosi teket edasi lükata, parandades östrogeeni taset organismis või ravides östrogeeni taseme langusest põhjustatud ravi. östrogeeni organismis. Osteoporoos annab võimaluse ja loob teoreetilise aluse Cistanche kliinilise meditsiinilise kasutamise ulatuse laiendamiseks.
Viide
1 Hiina farmakopöa komisjon (国家药典委员）). Hiina Rahvavabariigi farmakopöa. Peking: Chemical Industry Press, 2010. Vol 1:126.
2 Li SZ（李时珍）.Compendium of Materia Medica. Peking: People * s Medical Publishing House （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）, Zheng YF（郑一凡）, Lv ZL（吕志良）. Tsistanchide polüsahhariidide immunobioloogiline aktiivsus ja selle toimemehhanism. J Zhejiang Univ, Med Ed （浙江 大学学报, 医学版）, 2002, 31:284-287.
