Persicaria Senticosa õhust osade ekstrakti nahaga seotud omadused ja koostisosad

Kontakt: ali.ma@wecistanche.com

Yun-Hyeok Choi, 1 Jae Yeon Lee, 2 Ji Eun Lee, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Young-Rak Cho, 2 ja Chun Whan Choi 1

1. Sissejuhatus

Persicaria senticosaon üheaastane taim perekonnast Polygonaceae, mis on levinud kogu Koreas. Varasematest aegadest on seda taime kasutatud rahvameditsiinis, millel on kasulik toime erinevate haiguste raviks, näiteks haava või karbunkulite ja tselluliidi tursete eemaldamiseks ning veresoonte kõrvaldamiseks. Hiljutised uuringud on seda näidanudPersicaria senticosaoli põletikuvastane toime [1]; Siiski ei ole seda taime bioaktiivse kosmeetilise koostisosana kirjeldatud. Ja varasemad fütokeemilised uuringud perekonna Polygonum lillede, varte ja juurte kohta on näidanud mitmesuguseid flavonoide ja fenoolseid ühendeid, nagu hüdroksübensoehape, rutiin, kvertsetiin-3-O-glükuroniid, kvertsetiin-3-O-glükosiid ja luteoliin-7-O-rutinosiidi peeti peamisteks aktiivseteks komponentideks [2, 3]. Nendel aktiivsetel ühenditel on mitmesugused farmakoloogilised toimed, nagu põletikuvastane, haavandivastane, antihüpertensiivne ja vähivastane toime [4]. Kosmeetikatoodete koostisainete sõeluuringu käigus mõõdeti radikaali eemaldavat toimet 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüülile (DPPH), ABTS-i radikaalide eemaldamisele, elastaasi inhibeerimisele,türosinaasinhibeerimise ja lämmastikoksiidi testiga, leiti, et mitmel polügonumekstraktil on tugev toime.

Klõpsake selleksCistanche kasutab türosinaasi aktiivsuse vähendamiseks.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Taimsed materjalid ja looduslike toodete üldised protseduurid.

Persicaria senticosakoguti Seo-myeonist, Chuncheon-si, Gangwon-do, Korea, 2016 (GPS: N 37 kraadi 55′30,1″, E 127 kraadi 37′ 57,0″, kõrgus: 434 m). Vautšeri näidised (G071) kinnitas dr Chun Whan Choi.Persicaria senticosadeponeeriti Herbaariumis Biocenter, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, Lõuna-Korea (joonis S3). ThirtyfourPolygonum'i 99,9-protsendiline metanooliekstrakt saadi Korea Bioteaduste ja Biotehnoloogia Uurimisinstituudist (Daejeon, Korea) Korea Plant Extract Bankat. 1H ja 13C NMR katsed viidi läbi Bruker Ascend 700 MHz spektromeetril tetrametüülsilaaniga (TMS). LC-ESI-MS saadi Triple TOF 5600 plus instrumendiga (AB SCIX, USA) ja HRESI-MSon LTQ Orbitrap XL instrumendiga (Thermo, USA). Õhukese kihi kromatograafia (TLC) viidi läbi silikageeli 60F254 (Merck, Saksamaa) ja Silica gel 60 RP-18 F254S (Merck, Saksamaa) plaatidel. Kolonnkromatograafia (CC) viidi läbi, kasutades silikageeli 60 (70-230 mešši, Merck, Saksamaa), ODS-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Jaapan) ja preparatiivne HPLC viidi läbi LC{{ 23}}A (Shimadzu, Jaapan).

2.2. EI Analüüsi.

RAW 264.7 rakud külvati 96-süvendiga plaatidele (5 × 104 rakku süvendi kohta) ja neid töödeldi prooviga 1 tund enne LPS-i (1 ug/ml) stimuleerimist 24 tundi. Negatiivset kontrolli töödeldi seerumivaba söötmega. Nitriti, NO stabiilse metaboliidi kogust mõõdeti Griessreagendi abil (1% sulfaniilamiid ja 0,1% naftüületüleendiamiindivesinikkloriid 2,5% fosforhappes). Seejärel mõõdeti neeldumist lainepikkusel 540 nm, kasutades ELISA-lugejat. Nitraadi kogus määrati naatriumnitriti standardkõvera alusel [5–7].

2.3. Rakkude tsütotoksilisuse test.

RAW 264.7 rakud plaaditi tihedusega 5 × 104 rakku süvendi kohta 96-süvendiga plaatidele. Rakke töödeldi proovidega 1 tund enne LPS-i (1 ug/ml) stimuleerimist 24 tundi. Igasse süvendisse lisati MTT (5 mg/ml PBS-s) ja inkubeeriti 2 tundi. Sööde eemaldati süvenditest aspireerimisega, igasse süvendisse lisati DMSO ja plaati loksutati. Iga süvendi neeldumist mõõdeti ELISA lugeja abil lainepikkusel 540 nm. Andmed on esitatud kolme korduse keskmise ± standardhälbena.

2.4. DPPH radikaali eemaldamise aktiivsuse test.

DPPH radikaalide eemaldamise aktiivsust mõõdeti meetodil, mida kirjeldasid Blois [8] ja Ozgen et al. [9]. Proovile lisati metanoolis lahustatud DPPH lahus, mis lahjendati vajaliku kontsentratsioonini ja reaktsioon viidi läbi toatemperatuuril 30 minutit. Neeldumist mõõdeti lainepikkusel 517 nm, kasutades ELISA lugejat. Positiivse kontrollina kasutati antioksüdanti butüülitud hüdroksüanisooli (BHA) ja määrati proovi IC50 väärtus.

2.5. ABTS-i radikaali eemaldamise tegevus.

ABTS-i radikaalide eemaldamise aktiivsust mõõdeti eelnevalt kirjeldatud meetodi [10, 11] abil. ABTS plus moodustati 7 mM ABTS lahuse ja 2,45 mM kaaliumpersulfaadi (K2S2O8) lahuse segamisel ABTS: K2S2O8-ga (suhe 2:1) 12–16 tunni jooksul, et moodustada katioon (ABTS plus). Neeldumist mõõdeti ELISA lugejaga lainepikkusel 734 nmus. Positiivse kontrollina kasutati antioksüdanti BHA-d.

2.6. Türosinaasi inhibeerimise test.

Türosinaasinhibeerivat aktiivsust mõõdeti Yagiet al. [12]. Reaktsioon viidi läbi 0,1 M kaaliumfosfaatpuhvris (pH 6,5), mis sisaldas 1,5 mM L-türosiini ja 1250 ühikut/ml seene türosinaasi. Reaktsioonisegu inkubeeriti 37 kraadi juures 20 minutit. Testitavaid proove analüüsiti türosinaasi inhibeerimise suhtes, mõõtes selle toimettürosinaasaktiivsus, kasutades SpectraMax 190PC mikroplaadi ELISAreaderit lainepikkusel 490 nm. Positiivse kontrollina kasutati arbutiini ja kojhapet ning määrati proovi IC50 väärtus.

2.7. Elastaasi inhibeerimise test.

Reaktsioon viidi läbi {{0}},5 mM Tris puhvris (pH 8,5), mis sisaldas 1 mg/ml N-suktsinüül-(Ala)3-p-nitroaniliidi ja 0,6 ühikut/ml elastaasi . Reaktsioonisegu inkubeeriti 25 kraadi juures 10 minutit. Testitavaid proove analüüsiti elastaasi inhibeerimise suhtes, mõõtes selle mõju elastaasi aktiivsusele, kasutades ELISA lugejat lainepikkusel 405 nm. Ursolicacidi kasutati positiivse kontrollina ja määrati selle proovi IC50 väärtus [13].

2.8. Statistiline analüüs.

Andmete statistiline analüüs viidi läbi PRIZM5 tarkvaraga (GraphPad, CA, USA) ja andmed on esitatud kui keskmine ± SD. Rühmadevahelise erinevuse olulisuse analüüsimiseks kasutati ühepoolset Studenti t-testi ja statistiliselt oluliseks peeti P <>

3. Tulemused ja arutelu

3.1. Polygonaceae perekonna taimeekstraktide nahaga seotud omadused.

Radikaalne eemaldav toime DPPH-le, ABTS-i radikaalide eemaldamine, elastaasi inhibeerimine,türosinaasinhibeerimine ja lämmastikoksiidi test mitmel Polygonum'i ekstraktil näitasid tugevat aktiivsust. Tulemused näitasid, et Persicariajaponica ja Rumex longifolius on NO-testiga (IC{{0}},3 ja alla 25,0 ug/ml). DPPH puhul oli Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum ja Persicaria Chinensise metanooliekstrakti IC50 vastavalt 36,9, 15,4 ja 19,2 ug/ml. ABTS-i radikaali püüdmise aktiivsuses oli Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum ja Persicaria Chinensis'e metanooliekstrakti IC50. ja vastavalt 5,3 ug/ml. sissetürosinaasinhibeeriv toime, oli Polygonum sachalinensroot ja Polygonum cuspidata metanooliekstrakti IC50 vastavalt 289,0 ja 483,9 ug/mL. Elastaasi inhibeerimise testis määrati Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Perisponaria jalongic, Perisponaria jaic, Rumexacetosella, Rumexacetosella, Polygonum Cruisss metanooliekstrakti IC50. Persicaria conspicua, Rheum palmatum ja Persicaria lapathifolia oli alla 100 ug/ml (tabel 1).

3.2. Persicaria senticosa fraktsioonide nahaga seotud omadused.

Radikaali eemaldav toime 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüülile (DPPH), ABTS-i radikaalide eemaldamisele, elastaasi inhibeerimisele ja lämmastikoksiidi testilePersicaria senticosaleiti, et fraktsioonid näitavad tugevat aktiivsust. Tulemused näitasid, et CH2Cl2 ja EtOAc fraktsioonidel on NO test (vastavalt alla 25 ja 44,64 ug/ml). EtOAc fraktsioonide DPPH ja ABTS radikaali püüdvad aktiivsused olid 13,7 ja 5.0 ug/mL. Elastaasi inhibeerimise testis oli n-heksaani ja CH2Cl2 fraktsioonide IC50 alla 100 ug/ml (tabel 2).

3.3. Ühendite eraldamine ja määramine Persicaria senticosa ekstraktist.

Persicaria senticosavarjus kuivatatud ja pulbristatud õhust osad (1,4 kg) lisati 4{{10}} Lof 70 protsendilisele etanoolile (HPLC klass) ja kaks korda toatemperatuuril (iga kord 2 päeva) ja kontsentreeriti vaakumis 40 kraadi juures, saades 180,4 g ekstrakte. Ekstraktid suspendeeriti destilleeritud vees ja jaotati seejärel n-heksaani (4:0 l x 3), CH2Cl2 (4:0 l x 3), EtOAc (4:0 l x 3) ja n-butanooliga (4:0 l x 3). et saada n-heksaan (11,7 g), CH2Cl2 (7,4 g), EtOAc (21,7 g), butanool (22,5 g) ja vees lahustuvad fraktsioonid (110,1 g), (skeem 1). EtOAc fraktsioon (21,7 g) eraldati MPLC-ga, kasutades eluentidena gradientsegusid (F{41}}). Ühendid 1 (3,2 mg) ja 5 (3,9 mg) eraldati F002-st, mida kasutati prep-HPLC-ga. Fraktsioon F001 eraldati MPLC-ga, kasutades eluentidena gradientsegusid (F{51}}F018). Ühend 6 (1,5 mg) eraldati F016-st, mida kasutati preparatiivse HPLC abil. Ühend 7 (2,7 mg) eraldati F017-st, mida kasutati preparatiivse HPLC abil. F012 eraldati MPLC abil, mis kasutas eluentidena gradientsegusid (F121-F124). Ühend 4 (10,8 mg) eraldati F124-st, mida kasutati preparatiivse HPLC abil. Lisaks eraldati F014 preparatiivse HPLC abil, kasutades eluentidena gradientsegusid (F141-F143). Ühend 3 (2,3 mg) eraldati F141-st preparatiivse HPLC abil. Ühend 2 (4,8 mg) eraldati F142-st, kasutades poolpreparatiivset HPLC-d. EtOAc lahustuva kihi puhastamine viidi läbi kolonnkromatograafilise eraldamise ja MPLC analüüsiga ühenditeks 1-7. See tuvastati kui lolioliid (1) [14], kvertsetiin-3-O-glükosiid (2) [15], kvertse tina-3-O-glükuroniid (3) [16], 4-metoksü kaftrariinhape (4) [17], kaempferool-3-(6-metüülglükuroniid) (5) [18], kvertsetiin-3-(6-metüülglükuroniid) (6) [19, 20] ja kvertsetiin (7) [21]. Struktuur selgitati 1D ja 2D NMR ja MS-spektromeetria kombinatsiooni, samuti võrdluse kirjandusega (joonis 1).

3.4. Persicariasenticosa ühendite nahaga seotud omadused.

Radikaalne puhastav toime DPPH-le,türosinaasinhibeerimine ja lämmastikoksiidi analüüs mitmete ühendite kohtaPersicaria senticosaleiti, et see näitab tugevat aktiivsust (joonis S4-7). Tulemused näitasid, et ühendil 7 on NO-analüüs (IC50 29,7 ug/ml). DPPH korral oli ühendite 2, 3, 5 ja 7 IC50 vastavalt 39,6, 31,2, 37,0 ja 22,7 ug/ml. Türosinaasi inhibeeriva toime korral oli ühendi 7 IC50 14,3 ug/ml (tabel 3).

4. Järeldused

Persicaria senticosaon üheaastane taim perekonnast Polygonaceae, mis on levinud kogu Koreas. Varajastest aegadest on seda taime kasutatud rahvameditsiinis, millel on kasulik toime erinevate haiguste raviks. Selles uuringus hinnati Persicaria senticosa ja kolmekümne nelja Polygonaseae taime õhust ekstrakti nahaga seotud omadusi ja koostisosi. Kosmeetikatoodete koostisainete sõeluuringu käigus, mõõtes radikaali eemaldavat toimet DPPH-le, ABTS-i radikaali eemaldamist, kortsudevastasust hinnati elastaasi inhibeerimise abil, valgendamist uurititürosinaasinhibeerimist ja põletikuvastast toimet testiti lämmastikoksiidi testiga. Leiti, et mitmel Polygonumi ekstraktil on tugev toime. Tulemused näitasid, et Persicaria senticosametanool ekstraktil on DPPH ja ABTS radikaale eemaldav toime (IC50 61.0 ja 17,5 ug/ml). Elastaasi inhibeerimise testis ja lämmastikoksiidi testis oli Persicaria senticosa metanooliekstrakti IC50 vastavalt 241,5 ug/ml ja 71,8 ug/ml. Persicaria senticosa 70% etanooliekstrakt jaotati n-heksaani, CH2Cl2, EtOAc, n-BuOH ja vesifraktsioonidega.

EtOAc lahustuv fraktsioon näitas tugevat nahaga seotud aktiivsust (joonis 2 ja tabel 3). Need tulemused näitasid, et aktiivsed komponendid sisalduvadPersicaria senticosaNahaga seotud aktiivsuse eest vastutavad ained kontsentreeriti Persicaria senticosa EtOAc lahustuvas fraktsioonis (skeem 1). Teisest küljest näitasid Persicaria senticosa ekstraktist saadud n-heksaanis, diklorometaanis lahustuv fraktsioon ja BuOH lahustuv fraktsioon lämmastikoksiidi analüüsi, DPPH ja ABTS-i radikaalide eemaldamise aktiivsust samaväärselt, samas kui ülejäänud veefraktsioonil oli nõrk inhibeeriv toime2 (T ).

Seega toimub kolme aktiivse fraktsiooni, st EtOAc lahustuva fraktsiooni, biotesti juhitud puhastamine.Persicaria senticosaviidi läbi nahaga seotud aktiivsuse eest vastutavate toimeainete puhastamiseks, millele järgnes vastavalt skeemil 1 kirjeldatud protsess.

EtOAc lahustuva kihi puhastamine alatesPersicaria senticosa70-protsendiline etanoolne ekstrakt viidi läbi kolonnkromatograafilise eraldamise ja MPLC analüüsiga ühenditele 1-7. See identifitseeriti kui lolioliid (1), kvertsetiin3-O-glükosiid (2), kvertsetiin-3-O-glükuroniid (3), 4-metoksükaftraarhape (4), kaempferool{{ 11}}(6-metüülglükuroniid) (5), kvertsetiin-3-(6-metüülglükuroniid) (6) ja kvertsetiin (7). Struktuur selgitati 1D ja 2D NMR ja MS-spektromeetria kombinatsiooni ning teatatud kirjandusega võrdlemise (joonis S2). 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüül(DPPH) radikaali eemaldav toime,türosinaasinhibeerimine ja lämmastikoksiidi test mitmete Persicaria senticosa ühenditega näitas tugevat toimet. Tulemused näitasid, et ühendil 7 on NO test (IC5029,7 µM). DPPH puhul oli ühendite 2, 3, 5 ja 7 IC50 vastavalt 39,4, 32,1, 37,0 ja 22,7 µM. sissetürosinaasinhibeeriva toimega, oli ühendi 7 IC50 14,3 µM. Nagu on näidatud joonisel 3, on ühendid 2 ja 5 peamised ühendid Persicaria senticosa EtOAc lahustuvas fraktsioonis (-joonis S1). Ja ühenditel 2 ja 5 oli suurepärane antioksüdantne toime (joonis 4), mis on kooskõlas varasemate uuringutega [18, 22].

Käesolev uuring näitas sedaPersicaria senticosaja Polygonaseae sisaldavad keemilisi ühendeid, millel on kaupade nahaga seotud tegevus ja need võivad olla huvitavad kui uudsed bioaktiivsete ainete allikad kosmeetikatööstuses.