joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

IL-22-vahendatud neerude metaboolne ümberprogrammeerimine PFKFB3 kaudu neerukahjustuse raviks

Wei Chen et al

Graafiline kokkuvõte

IL-22 nõrgendabneerudvigastusneerude TEC-de metaboolse ümberprogrammeerimise kaudu, reguleerib mitokondriaalset funktsiooni ja glükolüüsi kahjustatud TEC-des ning leevendab mitokondriaalse ROS-i ja düsfunktsionaalsete mitokondrite akumuleerumist AMPK / AKT ja PFBFK3 aktiivsuse indutseerimise kaudu. ParanemineneerudvigastusofIL-22 metabolismi reguleerimise kaudu on tsisplatiinist põhjustatud neerukahjustuse ja diabeetilise nefropaatia loommudelites sertifitseeritud asjakohane signaalimine.

Abstraktne

Neerukahjustus põhjustab tuubulite rakkude metaboolsete seisundite halvenemist, mis viib lõppstaadiumis neeruhaiguse (ESTD) tekkeni. Interleukiin-22 (IL- 22) on tõhus terapeutiline antidootneerudvigastusneerude taastumise soodustamise kaudu, kuid selle aluseks olevatest molekulaarsetest mehhanismidest on vähe teada. Siin esitame esmalt tõendid selle kohta, et IL{0}} nõrgendabneerudvigastusneerutuubulaarsete epiteelirakkude (TEC) metaboolse ümberprogrammeerimise kaudu. Täpsemalt näitavad meie andmed, et IL{0}} reguleerib mitokondriaalset funktsiooni ja glükolüüsi kahjustatud TEC-des. Täiendavad tähelepanekud näitavad, et IL-22 leevendab mitokondriaalsete reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) ja düsfunktsionaalsete mitokondrite kuhjumist AMPK/AKT signaaliülekande ja PFBFK3 aktiivsuse indutseerimise kaudu. Hiirtel paranemineneerudvigastusja nekroos ja neerufunktsioonide paranemine nende metabolismi reguleerimise kaudu. Rekombinantse IL-22 asjakohane signaalimine ja mitokondriaalne sobivus on sertifitseeritud tsisplatiinist põhjustatud neerukahjustuse ja diabeetilise nefropaatia (DN) loommudelites. Kokkuvõttes avavad meie leiud uued mehhaanilised arusaamad IL-22 kaitsvast mõjust neerudele ning toovad esile IL-22 ravivõimalused ja kaasatud metaboolsed regulaatorid mitmesuguste neeruhaiguste korral.

MÄRKSÕNADinterleukiin-22,neerudvigastus, metaboolne ümberprogrammeerimine, mitokondriaalne düsfunktsioon

Cistanchetubulosaennetab neeruhaigust, proovi saamiseks klõpsake siin

1. SISSEJUHATUS

Ägeneerudvigastus(AKI), mis on levinud rahvatervise probleem, mis on seotud kõrge suremuse ja haigestumusega, mõjutab miljoneid haiglaravil olevaid patsiente kogu maailmas ja selle esinemissagedus kasvab kiiresti.1–3 AKI aluseks olevaid patofüsioloogiat ei mõisteta täielikult, kuid see hõlmab neerukahjustusi ja apoptoosi. tubulaarsed epiteelirakud (TEC), eriti proksimaalses tuubulis.4–7 Mitmesugused kirjandused kinnitavad, et nende tõsine ja püsiv kahjustus põhjustab sageli mittetäielikku ja kohanemisvõimetut kudede paranemist, mis viib põletikulise reaktsiooni, tubulaarse degeneratsiooni, neerufibroosi ja võimaliku progresseerumiseni lõppstaadiumis neeruhaigus (ESTD). 8–10 Kahjuks puuduvad väljakujunenud ravimeetodid peale dialüüsipõhise toetava ravi.neerudvigastuson saadaval. Seetõttu on ennetav ravi väga vajalik, et vähendada patsientide kannatusi ja sellega kaasnevat märkimisväärset rahalist koormustneerudvigastusüksikisikutele ja ühiskonnale.

Interleukiin-22 (IL-22), mis on IL-10 perekonna tsütokiinide oluline liige, on hiljuti pälvinud tohutut tähelepanu kui ellujäämise agens paljudes epiteelikahjustusest tingitud häiretes.11–13 IL. -22 kutsub esile kudede kaitse ja homöostaasi peamiselt STAT3 signaaliraja aktiveerimise ja epiteeli proliferatsiooni soodustamise kaudu.14,15 Oluline on see, et uuringud on näidanud, et IL-22R1 ekspressioon piirdub neerude proksimaalsete TEC-dega. ja ravi IL-22-ga võib kaitsta neerude epiteeli kahjustuse eest ja kiirendada tubulite regeneratsiooni.16,17 Kuigi kogunev tõendusmaterjal näitab, et IL- 22 on tõhus terapeutiline antidootneerudvigastusIL{0}}indutseeritud TEC-de taastumise aluseks olevate mehhanismide kohta on vähe teada. IL-22 molekulaarse aluse mõistmine on oluline nii selleks, et uurida, kuidas IL-22 inhibeerib AKI-d või ESTD-d, kui ka molekulaarsete modifikaatorite ja neerukahjustuste ärahoidmisega seotud oluliste protsesside avastamiseks.

Neerude paranemine pärast kahjustust on metaboolselt sõltuv ja keeruline protsess.18 Hiljutised tõendid näitavad, et rakkude metaboolsed signatuurid võivad reguleerida neerurakkude ellujäämist ja plastilisust ning seega anda kasulikku mehhaanilist teavet selle kohta, kuidas metaboolsed protsessid kontrollivad kudede paranemist.19,20 Täpsemalt, need leiud näitavad, et metaboolne ümberprogrammeerimine PGC1 või S-nitroso-CoA reduktaasi süsteemi poolt kaitsebneerudvigastus. Mehhaaniliselt võib suurenenud glükolüüs ja oksüdatiivne fosforüülimine (OXPHOS) soodustada kasvu ja kaitsvaid signaaliülekandeteid või rahuldada mitoosi ja anaboolse biosünteesi suuremaid energiavajadusi elundite parandamise ajal.19,21 Hiljuti on meie uuringud näidanud, et IL-22 leevendab mitokondriaalne düsfunktsioon maksas, mis hõlmab raku ainevahetusprotsesse.22,24 Seega küsime, kas IL-22 kaitseb neerukahjustuste ja apoptoosi eest, reguleerides nende metaboolseid seisundeid. IL-22 vahendatud neeruparanduse mehhanismide määramiseks ravime inimese proksimaalseid tubulaarseid epiteelirakke (PTEC) stressistimulatsiooniga. Soovitame, et IL-22 juhiks metaboolset ümberprogrammeerimist, et tõhustada glükolüüsi ja OXPHOS-i, mis takistavad TEC-de talitlushäireid. Lisaks demonstreerime, et IL-22 kutsus selle programmi esile AMPK/AKT signaaliülekande ja selle molekulaarsete modifikaatorite aktiveerimise kaudu, et leevendada mitokondriaalset düsfunktsiooni. Meie tähelepanekud valgustavad metaboolsete seisundite reguleerimist neeruhaiguste raviks ja ennetamiseks ning annavad uusi teadmisi tõhusate uudsete sekkumiste väljatöötamiseks elundikahjustuste korral üldiselt.

Cistanche saab ravidaneerudvigastus

2. MATERJALID JA MEETODID

2.1 Reaktiivid

Oligomütsiin, rotenoon ja tsüaniid-p-trifluorometoksüfenüülhüdrasoon (FCCP) saadi firmast Sea horse Biosciences; rekombinantse IL-22 hankis Novoprotein (Hiina); Saadi tsisplatiin (Crisp.), MitoTrackerGreen, LY294002, 5,5',6,6'-tetrakloro-1,1',3,3'-tetraetüülbensimidasolüülkarbotsüaniiniodiid (JC-1) ja ühend C firmalt Beyotime Biotechnology (Hiina); Glut1, -Actin, p-AMPK, AMPK ja GAPDH sihtmärgiks olevad antikehad osteti ettevõttelt Abcam; STAT3, p-STAT3 (Y705), AKT, p-AKT (S473), PFKFB3 ja kaspaasi-3 antikehad osteti ettevõttest Cell SignalingTechnology; rapamütsiin, palmitiinhape (Palm.), Z-VAD-FMK ja glükoos saadi firmalt Sigma-Aldrich; MitoSOX, Hoechst33342, MitoTracker Red ja PKH26 saadi ettevõttest Invitrogen.

2.2 Rakukultuur

Inimese proksimaalne tuubuli epiteelirakk (HK{{0}}) saadi Hiina Teaduste Akadeemia Shanghai Biokeemia ja Rakubioloogia Instituudi rakupangast ja seda hoiti standardsete protokollide järgi. HK-2 külvati kuue süvendiga plaatidele (1 × 106 rakku süvendi kohta) või 96-süvendiga plaatidele (1 × 105 rakku süvendi kohta) ja kultiveeriti 90% RPMI1640 söötmes (Gibco), millele on lisatud 100 U/ml penitsilliini, 100 ug/ml streptomütsiini ja 10% veiseloote seerumit (FBS) (Gibco). Esmalt inkubeerisime HK-2 IL-22-ga (0,5 µg/ml) 0,5 tundi, seejärel 50 mM d-glükoosi või 5 µg/ml tsisplatiini või 0,2 mM palmitiinhappe või 4 µM doksorubitsiiniga (DOX). ) 24 tundi. Mõnel juhul kultiveeriti rakke Z-VAD-FMK (10 uM), ühendi C (5 uM), LY294002 (20 uM) või rapamütsiini (50 nM) juuresolekul näidatud aegadel.

2.3 Merihobuse katsed

Analüüsisime TEC-sid, kasutades Seahorse XF96 ekstratsellulaarse voolu analüsaatorit rakuvälise happe kiiruse (ECAR) ja hapnikutarbimise määra (OCR) muutuste jaoks. Lühidalt, HK-2 (1 × 105) kasvatati 96-kaevu Seahorse plaatidel üleöö. Seejärel pesti rakke merihobukatse söötmega, mis sisaldas 1 mM püruvaati, 10 mM glükoosi ja 2 mM glutamiini (või glükoosivaba ECAR testimiseks) CO2-vaba atmosfääris temperatuuril 37 °C {{18} }},5 h. Katseandmed registreeriti pärast allnimetatud inhibiitorite süstimist optimaalses kontsentratsioonis FCCP (1.0 µM), oligomütsiini (1,0 µM), rotenoon/antimütsiin A (0,5 µM), 2-DG (50 µM) mM) või glükoosi (10 mM).

Cistanche saab ravidaneerukahjustus

2.4 Hiired ja loomamudelid

Isased BALB/c hiired (6–8 nädalat) osteti ettevõttest Slaccas Experimental Animal Co. (Shanghai, Hiina). Db / db ja Db / m hiired pakkus Nanjingi ülikooli (Nanjing, Hiina) Mudelloomade uurimiskeskus. Kõiki hiiri hoiti spetsiifilistes patogeenivabades (SPF) rajatistes ja neid kasvatati standardsete protokollide järgi. AKI mudeli jaoks said BALB/c hiired tsisplatiini (20 mg/kg) või kontrolli soolalahusega intraperitoneaalse süstina. Diabeetilise nefropaatia (DN) esilekutsumiseks toideti Db / db hiiri näidatud ajahetkedel kõrge rasvasisaldusega dieediga (HFD). Db/m hiiri toideti kontrollrühmana chow-dieediga. AKI loomkatsetes süstiti IL-22 intraperitoneaalselt annuses 0,5 mg/kg/päevas või 1,5 mg/kg/päevas 4 järjestikuse päeva jooksul. DN-loomkatsetes süstiti IL-22 intraperitoneaalselt annuses 2,5 mg/kg kaks korda nädalas kaheksa järjestikuse nädala jooksul. Kontrollhiired said sobiva koguse PBS-i. Meie loomkatsete protseduurid viidi läbi vastavalt protokollidele, mida hindas ja kiitis heaks Fudani ülikooli farmaatsiakooli loomade hooldamise ja kasutamise eetikakomitee. Immunohisto keemiline värvimine, mitokondriaalse membraani potentsiaali mõõtmine, neerulõikude histoloogiline ja reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) värvimine viidi läbi nagu eelnevalt kirjeldatud.22–24

2.5 Reaalajas PCR

Kogu-RNA saime TRNzol reagentidega (Beyotime Biotechnology, Hiina) raku- või koeproovidest ja seejärel transkribeerisime need cDNA-ks, kasutades MMLV-pöördtranskriptaasi testikomplekti (Beyotime Biotechnology). MRNA ekspressioonitaset analüüsiti reaalajas PCR-seadmetega (BioRad), kasutades SYBR rohelist qPCR-mix testikomplekti (Beyotime Biotechnology) ja standardiseeriti GAPDH-le.

2.6 Voolutsütomeetria

Neerurakke kasvatati ja töödeldi ülalkirjeldatud viisil. MitoSOX (mitokondriaalne ROS), MitoTracker Green (mitokondriaalne kogumass) ja MitoTracker Red (mitokondriaalne membraanipotentsiaal) värvimine viidi läbi vastavalt tootja juhistele ja varasematele uuringutele.22–24 Tulemused saime Beckman Coulter Flow Cytometer ja Tarkvara CytExpert (BD Biosciences).

2.7 Glükoosi omastamine

Mõõtsime glükoosi kontsentratsioone rakukultuuri supernatandis glükoosi omastamise testi testiga vastavalt tootja protokollile ja varasematele uuringutele (GAHK20; Sigma). Tulemuste normaliseerimine viidi läbi vastavalt rakkude arvule.

2.8 Geeni knockdown

Spetsiifiliste geenide hävitamiseks kasutasime väikest segavat RNA-d (siRNA; RiboBio, Hiina). Esiteks segati Lipofectamine RNAiMAX ja siRNA (100 pmol) õrnalt pipetiga ja inkubeeriti temperatuuril 37 °C 0,5 tundi. Seejärel muutsime standardse rakukultuuri söötme transfektsioonikokteiliks ja inkubeerisime rakke 6 tundi siRNA geeni transfektsiooniks. Järgmisena vahetasime transfektsioonikokteili värske rakukultuuri söötme vastu. 48 tunni pärast inkubeeriti neerurakke edasisteks uuringuteks IL-22-ga.

Cistanche saab ravidaneerukahjustus

2.9 Western blot

Ekstraheerisime rakkudest või kudedest koguvalgud RIPA lüüsipuhvriga (Beyotime Biotechnology, Hiina). Seejärel kogusime lüsaadid tsentrifuugimisega 4 °C juures 12 000 p/min 10 minutit. Seejärel kuumutati lüsaate proovipuhvritega 100 °C juures 15 minutit, viidi läbi naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforees (SDS-PAGE) ja elektrotransfereeriti polüvinülideendifluoriidi (PVDF) membraanile (Millipore, Saksamaa). Seejärel blokeeriti membraanid 5% veise seerumi albumiiniga (BSA) 2 tundi ja inkubeeriti koos primaarsete antikehadega temperatuuril 4 °C üleöö. Pärast kolmekordset pesemist inkubeeriti membraane mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud sekundaarsete antikehadega (CST, USA). Valgu blotid visualiseeriti täiustatud kemoluminestsentskujutise süsteemiga.

2.10 Immunofluorestsents

Neerurakud fikseeriti 3–4 protsendi paraformaldehüüdiga ja muudeti permeabiliseerituks 0,1 protsendi Triton X-100-ga. Seejärel blokeerisime rakud 2 tunniks 5-protsendilise BSA-ga. Rakke inkubeeriti üleöö anti-GLUT1 antikehaga temperatuuril 4 °C, pesti neli korda ja värviti seejärel PKH26-ga. Seejärel värviti neerurakud Hoechst 33342-ga ja paigaldati slaididele. Andmed saadi konfokaalse mikroskoopia abil.

2.11 RNA-seq ja bioinformaatika

TEC-i proovid (2 × 107) lüüsiti ja kogu RNA ekstraheeriti RNeasy minikomplekti abil vastavalt tootja protokollidele (Beyotime, Shanghai, Hiina). Eukarüootne RNA-seq viidi läbi järgmise põlvkonna sekveneerimise (NGS) tehnoloogia abil Illumina HiSeqi sekveneerimissüsteemis, pakkudes 50-baaslugemispikkust. Järjestusnäitude joondamine viidi läbi TopHat v2.0.12 ja UCSC mm10 koostu abil. Diferentsiaalekspressioonianalüüs arvutati DESeq2 (http://www.bioconductor.org/packages/release/bioc/html/DESeq2.html) paketi abil ja statistilise olulisuse analüüsid viidi läbi R-s (v3.1.1; http://www. .r-project.org/). Raja üleesitamine viidi läbi R-paketi ReactomePA abil.

2.12 Statistika

Andmed väljendati kui keskmine ± standardhälve (SD) ja näidati GraphPad Prism 5 abil.0. Kahe või enama rühma võrdlemise tulemuste puhul arvutati erinevused Studenti t-testi või ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil: ***p < 0.00="" 1,="" **p="">< 0,01="" ja="" *p=""><>

Cistanche saab ravidaneerukahjustus

3 TULEMUST

3.1 IL-22 säilitab rakkude metabolismi TEC-des

Kuna arvati, et mitokondrid on olulised organellid, mis integreerivad rakkude metabolismi ja apoptootilisi protsesse, hindasime mitokondriaalset funktsiooni TEC-des, mida stimuleeritineerudvigastustegurid ja raviti IL-ga -22.25 Nagu on näidatud joonistel 1A–D, blokeeriti mitokondriaalne hapnikutarbimise määr (OCR), maksimaalne hingamismaht (MRC) ja hingamine TEC-des stressiolukordades oluliselt. Nimelt hoiti neid kõrvalekaldeid suures osas ära IL- 22-ravi. Glükolüüs kahjustatud TEC-des, mida tõendab ekstratsellulaarne hapestumise kiirus (ECAR), oli samuti märkimisväärselt vaoshoitud, võrreldes IL-22 pluss stiimulitega provotseeritud TEC-dega (joonis 1B ja E). Lisaks näitasime, et kahjustatud oksüdatiivne fosforüülimine (OXPHOS) ja glükolüüs kahjustatud TEC-des ei olnud apoptoosi sekundaarsed mõjud pan-kaspaasi inhibiitori samaaegsel töötlemisel (joonis S1). Ja IL{10}}vahendatud reparatiivne toime metaboolsetele defektidele oli spetsiifiline neerude TEC-de puhul (joonis S2). Lisaks soodustas IL-22 HK2 rakke OXPHOS ja glükolüüsi stiimulite puudumisel, mis näitab, et IL-22 toime metaboolsetele radadele ei olnud kahjustatud TEC-de suhtes spetsiifiline (joonis S3). Lisaks näitasid meie tulemused, et IL-22 soodustas IL-22R1 ekspressiooni ja translokatsiooni. Vahepeal demonteeriti IL-22R1 löögi tõttu täielikult STAT3 fosforüülimine ja IL-22 metaboolsed ümberprogrammeerimise efektid (joonis S4). Need leiud viitasid sellele, et IL-22 taastas TEC-de metaboolse oleku, aktiveerides otse IL-22R1. Kuna mitmed tõendid viitasid sellele, et Glut1 mängis peamist rolli glükolüüsis ja glükoosi homöostaasis26, küsisime seetõttu, kas IL-22 mõjutas Glut1 translokatsiooni või ekspressiooni. Nagu oodatud, näitasime, et IL-22 mitte ainult ei soodustanud ümberpaigutatud Glut1 rakumembraani pinnale (PKH26) ja Glut1 ekspressiooni, vaid suurendas ka glükoosi omastamist (joonis 1F ja G). Üldiselt näitasid need tähelepanekud, et IL-22 võib parandada OXPHOS-i ja glükolüüsi vigastatud TEC-des.

JOONIS 1 IL-22 säilitab mitokondriaalse sobivuse ja glükolüüsi TEC-des. (A ja B) Me kasutame Seahorse XF96 ekstratsellulaarse voolu analüsaatorit, et testida TEC-de rakuvälise happesisalduse (ECAR) ja hapnikutarbimise määra (OCR) muutusi. OCR ja ECAR TEC-des, mida inkubeeriti 50 mM glükoosi või 5 µg/ml tsisplatiiniga või 0,2 mM palmitiinhappega või 4 µM DOX-ga IL{{8} juuresolekul või puudumisel }. (C) TEC-de maksimaalne hingamisvõime (MRC), mida hinnatakse OCR-i reaalajas muutustega. (D ja E) TEC-de OCR-i ja ECAR-i kõverad pärast oligomütsiini, FCCP, glükoosi, rotenooni ja {{10}}DG-ga inkubeerimist. (F) Tuuma (sinine), Glut1 (roheline) ja plasmamembraani (punane) lokaliseerimine ja ekspressioon TEC-des. (G) Glükoosi tarbimine TEC-des pärast IL-22-ravi 24 tundi. n=3; skaala ribad, 20 µm; õpilase t-test (paarimata); ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.2 IL-22 leevendab mitofagia aktiveerimise kaudu düsfunktsionaalsete mitokondrite kuhjumist TEC-des

LC3 puncta moodustumine TEC-des pärast kokkupuudet stiimulitega (joonis 2F). Seejärel ammendasime mitofagia, et hinnata selle funktsiooni tuubulite rakkude metabolismis siRNA-ATG5 kaudu (joonis S6). Meie andmed näitasid, et mitofagia ammendumine TEC-des pärssis oluliselt IL-22 kaitsvat toimet mitokondriaalse sobivuse säilitamisel (joonis 2E), mis näitab, et IL-22 hoiab ära mitokondrite düsfunktsiooni mitofagia aktiveerimise kaudu.

JOONIS 2 IL-22 pärsib mitokondriaalset düsfunktsiooni ja mitokondriaalset ROS-i akumulatsiooni mitofagia esilekutsumise kaudu. (A) Mitokondriaalne mass värviti ja seda hinnati MitoTracker Greeni ja voolutsütomeetriaga. Mitokondriaalset ROS-i hinnati MitoSOX-iga värvitud TEC-des (B). Mitokondriaalse membraani potentsiaali hinnati MitoTracker Greeni ja MitoTracker Rediga värvitud TEC-des (C); mitokondriaalset ROS-i akumulatsiooni hindasid MitoTracker Green ja MitoSOX (D). (E) Konfokaalsete kujutiste tulemused viitasid mitokondriaalsele ROS-i tootmisele, mis on märgistatud MitoSOX-iga. (F) Tüüpilised mikroskoopilised kujutised näitasid LC3-GFP punktide moodustumist IL-22 TEC-de juuresolekul või puudumisel, mida stimuleeriti nagu (A) 24 tundi. (E) OCR-i hinnati IL-22 ja siRNA-ATG5 juuresolekul või puudumisel 24 tunni jooksul. n=3; õpilase t-test (paarimata); ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.3 IL-22 säilitab TEC-de mitokondriaalse terviklikkuse AMPK/AKT signaalimise aktiveerimise kaudu

AMPK signaalimine kui peamine signaalimiskeskus, mis ühendab rakkude ellujäämist ja ainevahetust, kontrollitud glükoosi metabolismi, lipiidide sünteesi ja mitokondriaalset funktsiooni.28 Vastavalt interleukiini-22 neerude kaitsvale toimele, mida vahendab TEC-de metaboolne ümberprogrammeerimine, hindasime, kas IL-22 reguleeris mitokondriaalset terviklikkust AMPK signaaliülekande aktiveerimise kaudu. Leidsime, et IL-22 suurendas vigastatud TEC-des STAT3/AMPK/AKT signaaliülekande aktiivsust, mida tõendab STAT3, AMPK ja AKT fosforüülimine (joonis 3A). Lisaks blokeeriti need protsessid torukujulistes rakkudes, millel puudus STAT3, mis näitas, et IL-22 reguleeris AMPK/AKT signaaliülekannet STAT3 kaudu (joonis 3B ja C; joonis S7). Lisaks inkubeerisime TEC-sid ühendiga C ja LY294002, et otseselt pärssida AMPK / AKT signaaliülekandeid, ning seejärel hinnata nende mitokondriaalseid funktsioone ja ainevahetuse olekuid. Tulemused näitasid, et samaaegne töötlemine nende signaaliülekande inhibiitoritega takistas oluliselt IL-22-ravi indutseeritud paranenud OXPHOS-i ja glükolüütilist voogu (joonis 3D–I), mis viitas sellele, et IL-22 soodustas AMPK aktiveerimise kaudu TEC-de metabolismi. /AKT signaalirada.

JOONIS 3 AMPK/AKT signaali indutseerimine IL-22 poolt säilitab mitokondrite sobivuse. TEC-sid stimuleeriti 50 mM glükoosiga või 5 µg/ml tsisplatiiniga või 0,2 mM palmitiinhappega või 4 µM DOX-iga IL-22, ühendi C juuresolekul või puudumisel. või LY294002 näidatud aegadel. (A ja B) AMPK/AKT signaaliraja aktivatsiooni TEC-des või STAT3-WT ja STAT3–KD TEC-des hinnati Western blot analüüsiga. (C ja D) Analüüsiti muutusi TEC-de OCR-is ja ECAR-is. (E) AMPK / AKT signaaliraja aktiveerimist TEC-des hinnati Western blot analüüsiga. (F–I) TEC-de OCR-i ja ECAR-i muutusi mõõdeti TEC-des võrreldes ühendiga C ja LY294002-ga töödeldud TEC-des. õpilase t-test (paarimata); n=3; ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.4 IL-22 säilitab PFKFB3 indutseerimise kaudu raku metabolismi ja TEC-de mitokondriaalse terviklikkuse

Lisaks sellele, et uurida, kuidas TEC-de mitokondriaalne sobivus ja ainevahetus paranesid, kasutasime RNA sekveneerimisanalüüsi (RNA-seq), et hinnata geeniekspressiooni pärast stiimulikahjustust ja IL-22 ravi. Näitasime, et pärast IL-22 inkubeerimist muutusid TEC-des mitu geeni oluliselt (joonis 4A). Kasutades saadaolevaid andmebaase, viidi läbi nende ülesreguleeritud geenide geenikomplekti rikastamise analüüs, mis viitas geenide märkimisväärsele rikastumisele AMPK signaalirajas ja MYC sihtmärkide signalisatsioonirajas (joonis S8). Nimelt indutseeris PFKFB3 märkimisväärselt IL-22 geenide hulgastneerudvigastustegurite stimuleerimine (joonis 4A). Neid tähelepanekuid näitasid ka konfokaalsed kujutised, Q-PCR ja Western blot. PFKFB3 kõrge ekspressioon sõltus AMPK / AKT signaalimisest (joonis 4B ja C; joonis S9).

Varasemad uuringud näitasid, et PFKFB3 saab reguleerida arvukate signaaliülekannetega, et kiirendada epiteeli regeneratsiooni ja paranemist pärast vigastust.29,30 Seega oletasime, et IL-22 indutseeris PFKFB3, et säilitada TEC-de rakuline metabolism ja säilitada nende mitokondriaalne sobivus. . Me täheldasime, et AMPK / AKT signaaliülekande pärssimine vähendas PFKFB3 ekspressiooni (joonis 4D). Niisiis vaigistasime PFKFB3, et uurida selle funktsioone TEC-des pärast IL-22 inkubeerimist. Meie leiud näitasid, et vaigistatud PFKFB3 leevendas IL-22 metaboolset ümberprogrammeerimist ECAR ja OCR taastamisel (joonis 4E ja F) ning takistas glükoosi omastamist ja düsfunktsionaalseid mitokondreid (joonis 4G ja H). Lisaks näitasime, et IL-22 metaboolsed ümberprogrammeerimisefektid olid täielikult desarmeeritud STAT3-knockdowniga, samas kui PFKFB3 üleekspressioon võib need fenotüübid päästa, mis viitab sellele, et IL-22 taastas kahjustatud neeruepiteelirakkude metaboolne seisund, suunates otse STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3 signaali (joonis S10). Kokkuvõttes näitasid need leiud, et PFKFB3 aktiveerimine mängis olulist rolli mitokondriaalses sobivuses ja düsfunktsionaalses mitokondrite eliminatsioonis pärast seda.neerudvigastus.

JOONIS 4 IL-22 säilitab PFKFB3 indutseerimise kaudu TEC-de mitokondriaalse terviklikkuse ja raku metabolismi. (A) Vulkaanidiagramm geenide ekspressiooni jaoks TEC-des, mida on stimuleeritud glükoosi, tsisplatiini või palmitiinhappe või CCl4-ga IL-22 juuresolekul või puudumisel 24 tunni jooksul. (B) Konfokaalsed mikroskoopilised andmed näitasid PFKFB3 üleekspressiooni TEC-des pärast IL-22-ravi, mis nõudis AMPK/AKT signaali aktiveerimist. (C) Reaalajas PCR tulemused näitavad, et IL-22 indutseeris TEC-des PFKFB3 üleekspressiooni, mida võib pärssida AMPK/AKT signaaliplokk. (D) AMPK/AKT/PFKFB3 signaaliraja aktiveerimine TEC-des pärast töötlemist ühendiga C ja LY294002. (E ja F) ECAR ja OCR TEC-des IL-22 või si-PFKFB3 olemasolul või puudumisel 24 tunni jooksul. (G) Glükoosi tarbimine TEC-des pärast 24-tunnist ravi IL-22 või si-PFKFB3-ga. (H) Mitokondriaalset düsfunktsiooni hinnati MitoTracker Redi ja MitoTracker Greeniga värvitud TEC-des. õpilase t-test (paarimata); n=3; ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.5 IL-22 leevendab neerukahjustusi tsisplatiinist põhjustatud AKI-s, pärssides neerude ROS-i akumulatsiooni ja mitokondriaalset düsfunktsiooni

Et kontrollida meie hüpoteesi, et IL-22 reguleerib neerude metaboolseid profiile, et pärssida neerutorukeste vigastusi in vivo, hindasime algselt neerufunktsioone IL-22--ravi saanud hiirtel, kellele oli manustatud tsisplatiini (joonis 5A). Neli päeva pärast tsisplatiini süstimist ei vähendanud IL-22 oluliselt tubulaarseid rakukahjustusi ja hemorraagiat; nende neerufunktsiooni häired olid samuti oluliselt nõrgenenud, mida hinnati vere uurea lämmastiku (BUN) ja kreatiniini (Cr) tasemete järgi (joonis 5B–D). Lisaks soovitasime IL-22 ära hoidaneerudvigastusneerude regenereerimise tõhustamise ning AMPK / AKT signaaliülekande ja PFKFB3 aktiveerimise kaudu (joonis 5E ja F; joonis S11). Järgmisena kasutasime raku metabolismi ja apoptoosiga seotud mitokondriaalse düsfunktsiooni hindamiseks MitoSOX-i (mitokondrispetsiifiline ROS-värv) ja JC-1 (mitokondriaalse membraani potentsiaalist sõltuv värvaine). Tsisplatiiniga ravitud hiirte neeruosades esines võrreldav ROS-i kogunemine. Märkimisväärne on see, et neli päeva pärast IL-22-ravi vähenes ROS-i tase vigastatud neerudes märkimisväärselt võrreldes hiirte ROS-iga pärast PBS-ravi (joonis 5G). Kokkuvõttes andsid need tähelepanekud tõendeid selle kohta, et IL-22 mängis mitokondriaalse sobivuse kontrollimise kaudu tsisplatiinist põhjustatud AKI-s kaitsvat rolli.

JOONIS 5 IL-22 leevendab neerukahjustust tsisplatiinist põhjustatud AKI-s, inhibeerides neerude ROS-i akumulatsiooni ja düsfunktsionaalseid mitokondreid. (A) Katseprotokollide skemaatiline diagramm tsisplatiini (20 mg/kg) põhjustatud neerukahjustuse IL-22 kaitsva toime hindamiseks. PBS kandja kontrollrühmana ja N-atsetüül-l-tsüsteiin (NAC, 150 mg/kg) positiivse kontrollrühmana. (B ja C) Hinnati seerumi BUN taset, seerumi Cr taset, neerude kaalu ja kehakaalu. Esitati tüüpilised HE (D), Ki-67 värvimise (E), MitoSOX (G) ja JC{{10}} (G) kujutised neerulõikudest. (F) STAT3/AMPK/AKT/PFKFB3 aktivatsiooni võrdlust IL-22--ga töödeldud hiirte neeruekstraktides hinnati Western blot meetodil. õpilase t-test (paarimata); n=3; ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.6 IL-22 leevendab diabeedist põhjustatud neerukahjustusi mitokondriaalse düsfunktsiooni pärssimise kaudu AMPK/AKT signaaliülekande ja PFKFB3 aktiveerimise kaudu

Meie ja teised olime näidanud, et IL-22 võib avaldada kaitsevõimet diabeetilise nefropaatia (DN) korral, mis oli ESTD peamine põhjus.31–33 Alusmehhanismide edasiseks uurimiseks toitsime db/db hiiri kõrge kontsentratsiooniga rasvadieeti (HFD) ja seejärel raviti neid IL-22-ga (2,5 mg/kg, IP) 8 nädala jooksul (joonis 6A). Kui hiiri toideti ainult HFD-ga, leiti lisaks atroofiale ka neeru tubulaarne fibroos ja dilatatsioon. Seevastu kui hiiri raviti IL-22-ga, paranesid oluliselt neerufibroos ja histopatoloogia, samuti neerufunktsioonid. Neerufunktsiooni paranemist demonstreeris ka seerumi Cr, BUN taseme ja uriini kogualbumiini/24 h (AÜE) vähenemine (joonis 6B–E). Et uurida, kas need tegevused olid seotud mitokondritega, hindasime raku metabolismi ja apoptoosiga seotud mitokondriaalset funktsiooni. Tulemused näitasid, et IL-22-ravi leevendas oluliselt suurenenud mitokondriaalset ROS-i taset ja akumuleerunud düsfunktsionaalseid mitokondreid (joonis 6F ja G). Edasiseks uurimiseks, kas IL-22 kaitsefunktsioonid neerudes olid vahendatud PFKFB3 kaudu, süstisime hiirtele PFKFB3 shRNA adenoviirust, et PFKFB3 maha lüüa. Meie andmed näitasid, et IL-22 kasulik mõju HFD-indutseeritud neerukahjustusele, nekroosile, steatoosile, mitokondriaalsele düsfunktsioonile ja ROS-i akumulatsioonile ning sellega seotud signaaliradade aktiveerimisele blokeeris märkimisväärselt PFKFB3 väljalangemise (joonis 6B–G). . AMPK/AKT signaaliülekande suurenenud ekspressiooni täheldati ka pärast ravi IL-22-ga (joonis 6H). Koos neerufunktsiooni häirete leevendamisega paranesid PFKFB3 ja raku metabolismis oluliste ensüümide ekspressioonid ka IL-22--ravi saanud hiirte neerudes (joonis 6H ja I). Lisaks ei näidanud peamiste organite histoloogiline analüüs pärast IL-22 süstimist morfoloogilisi vigastusi, mis viitab sellele, et IL-22 võib olla ohutu vastumürk ilma oluliste kõrvalmõjude või toksiliste reaktsioonideta.neerudvigastushäired (joonis 12S). Üldiselt näitasid meie andmed, et IL- 22 leevendas neerukahjustusi AMPK/AKT signaaliülekande aktiveerimise, ROS-i akumulatsiooni pärssimise ja mitokondriaalse funktsiooni reguleerimise kaudu PFKFB3 kaudu.

JOONIS 6 IL-22 leevendab diabeedist põhjustatud neerukahjustusi AMPK/AKT signaaliülekande ja düsfunktsionaalsete mitokondrite pärssimise kaudu PFKFB3 aktiveerimise kaudu. (A) Katseprotokollide skemaatiline diagramm IL-22 kaitsva toime hindamiseks diabeedist põhjustatud neerukahjustuse korral. Db/m kandja kontrollrühmana. (B–D) Hinnati seerumi BUN taset, seerumi Cr taset ja AÜE. Esitati tüüpilised HE (E), MitoSOX (F) ja JC-1 (G) kujutised neerulõikudest. (H ja I) STAT3/AMPK/AKT/PFKFB3 aktivatsiooni võrdlust IL-22--ga töödeldud hiirte neeruekstraktides hinnati Western blot meetodil. õpilase t-test (paarimata); n=3; ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

4 ARUTELU

IL-22 sekreteerivad immuunrakud, nagu NK-rakud, neutrofiilid, kaasasündinud lümfoidrakud (ILC-d) ja T-rakud, kuid see ei mõjuta neid rakke otseselt. See reguleerib peamiselt epiteelirakkude funktsioone tänu piiratud IL-22R1 ekspressioonile epiteelirakkudel, sealhulgas TEC-del.15,34 Varasemad uuringud on näidanud, et IL-22 võib kaitsta neeruepiteeli vigastuste eest ja kiirendada tubulite regeneratsiooni. NLRP3 põletiku inhibeerimise ning STAT3 ja AKT signaaliülekande aktiveerimise kaudu.16,31 Selle kaitse aluseks olevaid mehhanisme pole aga veel selgitatud. IL- 22 funktsiooni molekulaarse aluse edasiseks määramiseksneerudvigastus, uurime esmalt, kas IL{0}} võib nende metaboolsete seisundite reguleerimise kaudu leevendada neerurakkude düsfunktsiooni ja sellele järgnevat apoptoosi. Lisaks uurime kahte mudelitneerudvigastushaigused (AKI ja DN) IL-22 manustamisega ja võrrelda tähelepanekuid kontrollrühmade omadega. Näitame, et IL-22 korrigeerib metaboolset ümberprogrammeerimist, et säilitada mitokondriaalne terviklikkus, vähendab mitokondriaalset ROS-i akumulatsiooni vigastatud TEC-des ning leevendab progresseeruvat neerukahjustust ja nekroosi. Lisaks näitavad meie leiud, et IL- 22 võib aktiveerida AMPK/AKT-ga seotud signaaliradasid TEC-des ja neerudes, mis on epiteeli haavade paranemise ja rakkude ellujäämise olulised vahendajad, et leevendada mitokondriaalset düsfunktsiooni ja metaboolsete profiilide halvenemist ning avada uudne. IL-22 vahendatud neerude kaitsemehhanismi väli. Üldiselt näitavad meie tulemused, et IL-22 neerude kaitsev toime on vahendatud metaboolsete ümberprogrammeerimisprotsesside kaudu.

OXPHOS-i ja glükolüüsi kriitiline roll neerude kaitsmisel on ilmnenud varasemates uuringutes, kus kütuse kasutamise tasakaalustamine püruvaatkinaasi M2 (PKM2) inhibeeriva S-nitrosüülimise teel kaitseb selle eest.neerudvigastus.19 Meie tulemused, mis viitavad OXPHOS-i ja glükolüüsi soodustamisele IL-22 poolt metaboolsete regulaatorite ekspressiooni ja glükoosi omastamise suurendamise kaudu, näitavad, et IL-22 pöörab tagasi metaboolsete seisundite halvenemise, mis on seotudneerudvigastus. Need tähelepanekud on kooskõlas rekombinantse irisiini neerude kaitsvate funktsioonidega ja ka hepatotsüütide leidudega, kus rakuliste funktsioonide jaoks on vaja nii OXPHOS-i kui ka glükolüüsi, kuid kui need on inhibeeritud, muutuvad primaarsed tuubulirakud ja hepatotsüüdid düsfunktsionaalseks.35, 36

Mitokondriaalne düsfunktsioon on kujunenud peamiseks molekulaarseks aluseks, mis ühendab metaboolseid profiile ja rakusurma. Siin illustreerime, et vigastustegurite stimuleerimisel parandas TEC-de ravi IL-22-ga mitokondriaalse ROS-i ja düsfunktsionaalsete mitokondrite kogunemist, võrreldes mitokondriaalse terviklikkuse ja funktsiooni vähenemisega kontrollrühmades. Oluline on see, et AMPK signaalirajad, kriitilised energiaandurid moduleerivad metaboolseid protsesse, et säilitada raku homöostaasi ja vältida raku- või koekahjustusi.37–39 Käesolevas uuringus näitavad meie tähelepanekud, et IL-22 säilitab mitokondriaalse terviklikkuse ja funktsiooni, aktiveerides AMPK/AKT signaalimine näitamaks, et IL-22 takistab mitokondriaalset düsfunktsiooni otsesel meetodil, mis on ülioluline TEC-de hingamisvõime säilitamiseks. Lisaks demonstreerime, et IL-22 signaaliülekandel STAT3 kaudu on otsene mõju mitokondriaalse sobivuse säilitamisele, kuna varem on uuritud, et indutseeritud STAT3 fosforüülimine on mitokondriaalse terviklikkuse säilitamiseks kriitilise tähtsusega.40,41

Mitmesugused kirjandused on varem näidanud, et PFKFB3 mängib rakkude metabolismis keskse modulaatori rolli.29–30,42 Siin demonstreerime kõigepealt, et IL-22 soodustab PFKFB3 aktiveerimist AMPK/AKT signaaliülekande kaudu TEC-des, mis viitab IL{le. {6}} reguleerib metaboolseid seisundeid, kaasates PFKFB3 kontrolli. Lisaks näitavad varasemad uuringud, et PFKFB3 on oluline liialdatud OXPHOS-i ja glükolüüsi kontrollimiseks paljudes rakkudes või kudedes.42,43 Kooskõlas nende uuringutega näitavad meie tähelepanekud ka OXPHOS-i ja glükolüüsi soodustamist IL-is-22- töödeldud TEC-sid PFKFB3 aktiveerimise kaudu. Paljude uuritud IL-22 allavoolu modulaatorite hulgas näitavad meie andmed, et PFKFB3 on pärast IL-22-ravi TEC-de kahjustuste ajal oluliselt ülesreguleeritud ja et STAT3-AMPK/AKT PFKFB3 telg on säilimise jaoks ülioluline. mitokondriaalne terviklikkus ajalneerudvigastus(Joonis 7). Neid tuleb veel uurida, kas IL-22 reguleerib ka teisi metaboolseid regulaatoreid ja neerukahjustusega seotud protsesse, aktiveerides STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3 signaaliraja.

JOONIS 7 Meie tulemused illustreerivad IL-22 olulist rolli neerurakkude metabolismi kontrollimisel, et ravida neerukahjustusi STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3 telje aktiveerimise kaudu. Need tulemused viitavad sellele, et IL-22 ravivõimalused ja sellega seotud metaboolse signaalimise sihtimine võivad olla otseselt soodsad paljude neerukahjustuste ravis või ennetamises.

5. KOKKUVÕTTED

Kokkuvõtteks demonstreerisime IL-22 terapeutilist potentsiaali ja selle aluseks olevaid mehhanisme neerukahjustuste korral. IL-22 reguleeris neerurakkude metabolismi metaboolse ümberprogrammeerimise kaudu, et säilitada mitokondriaalne terviklikkus. Nende regulaatorite (st AMPK, Akt ja PFKFB3) inhibeerimine võib põhjustada ebanormaalseid metaboolseid profiile ja mitokondriaalse sobivuse kaotust, nagu on näidatud spontaanse -22 raviga TEC-des, mis suurendasid düsfunktsionaalseid mitokondreid ja mitokondriaalset ROS-i akumulatsiooni. Kõige tähtsam on see, et mitokondriaalse düsfunktsiooni ja ROS-i akumuleerumise põhjustatud neerukahjustusi hiirmudelites leevendas oluliselt IL-22-ravi STAT3-AMPK-AKT-PFKFB3 signaaliülekande aktiveerimise kaudu. Seega näitas meie uuring, et seotud metaboolse signaalimise sihtimine võib olla otseselt soodne paljude neerukahjustusega seotud haiguste puhul ja IL-22 on potentsiaalne raviaine nende haiguste ennetamiseks ja raviks.

Cistanche tooted võivad ravidaneerukahjustus

Alates: 'IL{0}}vahendatud neeru metaboolne ümberprogrammeerimine PFKFB3 kaudu raviksneerudvigastus' kõrvalWei Chen et al

---Clin. Tõlk. Med. 2021;11:e324.

VIITED

1. Mehta RL, Burdmann EA, Cerdá J jt. Ägeda äratundmine ja juhtimineneerudvigastusRahvusvahelises Nefroloogiaühingus 0by25 Global Snapshot: rahvusvaheline läbilõikeuuring. Lancet. 2016;387:2017-2025.

2. Lameire NH, Bagga A, Cruz D jt. Ägeneerudvigastus: kasvav ülemaailmne mure. Lancet. 2013;382:170-179.

3. Mehta RL, Cerdá J, Burdmann EA jt. Rahvusvahelise nefroloogiaühingu 0by25 algatus ägedateneerudvigastus(2025. aastaks ennetatavate surmade arv null): nefroloogia inimõiguste juhtum. Lancet. 2015;385:2616-2643.

4. Levey AS, James MT. Ägeneerudvigastus. Ann Intern Med.2017;167:ITC66-ITC80.

5. Jansen MPB, Florquin S, Roelofs JJTH. Trombotsüütide roll ägedasneerudvigastus. Nat Rev Nephrol. 2018;14:457-471.

6. Agarwal A, Dong Z, Harris R jt. AKI rakulised ja molekulaarsed mehhanismid. J Am Soc Nephrol. 2016;27:1288-1299.

7. Linkermann A, Chen GC, Dong G, Kunzendorf U, KrautwaldS, Dong Z. Reguleeritud rakusurm AKI-s. J Am Soc Nephrol.2014;25:2689-2701.

8. Ferenbach DA, Bonventre JV. AKI-järgse halva kohanemise parandamise mehhanismid, mis põhjustavad neerude kiirendatud vananemist ja CKD.Nat Rev Nephrol. 2015;11:264-276.

9. Chawla LS, Eggers PW, Star RA, Kimmel PL. Ägeneerudvigastusja krooniline neeruhaigus kui omavahel seotud sündroomid. N Engl J Med. 2014;371:58-66.

10. He L, Wei QQ, Liu J jt. AKI CKD kohta: suurenenud vigastus, mahasurutud remont ja selle aluseks olevad mehhanismid. Kidney Int.2017;92:1071-1083.

11. Forbester JL, Lees EA, Goulding D jt. Interleukiin-22 soodustab fagolüsosomaalset sulandumist, et kutsuda esile kaitse inimese epiteelirakkudes salmonella enterica Typhimurium'i vastu.Proc Natl Acad Sci USA. 2018;115:10118-10123.

12. Geng H, Bu HF, Liu F jt. Põletikulistes soolekudedes ja epiteelirakkudes suurendab interleukiin 22 signaaliülekanne H19 pika mittekodeeriva RNA ekspressiooni, mis soodustab limaskesta regeneratsiooni. Gastroenteroloogia. 2018;155:144-155.

13. Aden K, Tran F, Ito G jt. ATG16L1 korraldab interleukiini-22 signaaliülekannet sooleepiteelis cGAS-STINGi kaudu. J ExpMed. 2018;215:2868-2886.

14. Huber SN, Gagliani LA, Zenewicz FJ jt. IL-22BP-d reguleerib põletik ja see moduleerib kasvaja teket soolestikus. Loodus. 2012;491:259-263.

15. Lindemans CA, Calafiore M, Mertelsmann AM jt. Interleukin-22 soodustab soolestiku tüvirakkude poolt vahendatud epiteeli regeneratsiooni. Loodus. 2015;528:560-564.

16. Xu MJ, Feng D, Wang H, Guan Y, Yan X, Gao B. IL-22 leevendab neeruisheemia-reperfusioonikahjustust, suunates proksimaalse tuubuli epiteeli. J Am Soc Nephrol. 2014;25:967-977.

17. Kulkarni OP, Hartter I, Mulay SR jt. Toll-like retseptorite 4-indutseeritud IL-22 kiirendab neerude regeneratsiooni. J Am Soc Nephrol. 2014;25:978-989.

18. Kang HM, Ahn SH, Choi P jt. Defektsel rasvhapete oksüdatsioonil neerutuubulite epiteelirakkudes on neerufibroosi arengus võtmeroll. Nat Med. 2015;21:37-46.

19. Zhou HL, Zhang R, Anand P jt. Metaboolne ümberprogrammeerimine S-nitroso-CoA reduktaasi süsteemi poolt kaitseb selle eestneerudvigastus. Loodus. 2019;565:96-100.

20. Dumesic PA, Egan DF, Gut P jt. Evolutsiooniliselt konserveerunud uORF reguleerib PGC1 ja oksüdatiivset metabolismi hiirtel, kärbestel ja hariliku tuuni puhul. Lahtri metab. 2019;30:190-200.

21. Shyh-Chang N, Zhu H, Yvanka de Soysa T jt. Lin28 suurendab kudede paranemist, programmeerides ümber raku metabolismi. Kamber. 2013;155:778-792.

22. Chen W, Luan J, Wei G jt. Interleukiini-22 hepatotsellulaarne ekspressioon in vivo, kasutades potentsiaalsete hepatiidivastaste ravimitena penetratsioonipõhiseid hübriid-nanoosakesi. Biomaterjalid. 2018;187:66- 80.

23. Chen W, Zhang X, Fan J jt. Interleukiini-22 sidumine apolipoproteiini AI-ga leevendab hiirtel atsetaminofeenist põhjustatud maksakahjustust. Teranostika. 2017;7:4135-4148.

24. Zai W, Chen W, Wu Z jt. Sihtotstarbeline interleukiini-22 geeni kohaletoimetamine maksas polümetformiini ja läbitungimispõhiste hübriidsete nanoosakeste abil mittealkohoolse rasvmaksahaiguse raviks. ACS Appl Materi liidesed. 2019;11:4842-4857.

25. Khacho M, Harris R, Slack RS. Mitokondrid kui närvi tüvirakkude saatuse ja kognitiivse funktsiooni kesksed regulaatorid. Nat Rev Neurosci. 2019;20:34-48.

26. Ip WKE, Hoshi N, Shouval DS, Snapper S, Medzhitov R. IL-10 põletikuvastane toime, mida vahendab makrofaagide metaboolne ümberprogrammeerimine. Teadus. 2017;356:513-519.

27. Saito Y, Chapple RH, Lin A, Kitano A, Nakada D. AMPK kaitseb leukeemiat initsieerivaid rakke müeloidse leukeemia korral metaboolse stressi eest luuüdis. Raku tüvirakk. 2015;17:585- 596.

28. Mihaylova MM, Shaw RJ. AMPK signaalirada koordineerib rakkude kasvu, autofagiat ja ainevahetust. Nat Cell Biol. 2011;13:1016-1023.

29. Li FL, Liu JP, Bao RX jt. Atsetüülimine akumuleerib PFKFB3 tsütoplasmas, et soodustada glükolüüsi ja kaitsta rakke tsisplatiini poolt indutseeritud apoptoosi eest. Nat Commun. 2018;9:508.

30. De Bock K, Georgiadou M, Schoors S et al. PFKFB3- juhitud glükolüüsi roll veresoonte idanemisel. Kamber. 2013;154:651-663.

31. Dudakov JA, Hanash AM, van den Brink MR. Interleukiin-22: immunobioloogia ja patoloogia. Annu Rev Immunol. 2015;33:747- 785.

32. Wang S, Li Y, Fan J jt. Interleukiin-22 leevendas neerukahjustust ja fibroosi diabeetilise nefropaatia korral, pärssides NLRP3 põletikulist aktivatsiooni. Cell Death Dis. 2017;8:e2937.

33. Shen YL, Chen W, Han L jt. VEGF-B antikeha ja interleukiini -22 liitvalk leevendavad diabeetilist nefropaatiat, pärssides lipiidide akumulatsiooni ja põletikulisi reaktsioone. Acta Pharm Sin B. 2020. https://doi.org/10.1016/j. apsb.2020.07.002.

34. Ouyang W, O'Garra A. IL-10 perekonna tsütokiinid IL-10 ja IL-22: alusteadusest kliinilise tõlkeni. Immuunsus. 2019;50:871- 891.

35. Xiang X, Feng D, Hwang S jt. Interleukiin-22 leevendab ägedat ja kroonilist maksapuudulikkust, programmeerides ümber hiirte kahjustatud regeneratsioonirajad. J Hepatol. 2020;72:736-745.

36. Chen W, Zai W, Fan J jt. Interleukiin-22 juhib metaboolset adaptiivset ümberprogrammeerimist, et säilitada mitokondriaalne sobivus ja ravida maksakahjustusi. Teranostika. 2020;10:5879-5894.

37. Peng H, Wang Q, Lou T jt. Müokiini vahendatud lihaste ja neerude läbirääkimine pärsib metaboolset ümberprogrammeerimist ja fibroosi kahjustatud neerudes. Nat Commun. 2017;8:1493.

38. Saberi B, Ybanez MD, Johnson HS, Gaarde WA, Han D, Kaplowitz N. Proteiini kinaas c (PKC) osaleb atsetaminofeeni hepatotoksilisuses c-jun-n-terminaalse kinaasi (jnk) sõltuvate ja sõltumatute signaaliradade kaudu. Hepatoloogia. 2014;59:1543-1554.

39. Mo R, Lai R, Lu J jt. Tugevdatud autofagia aitab kaasa IL-22 kaitsvale toimele atsetaminofeenist põhjustatud maksakahjustuse eest. Teranostika. 2018;8:4170-4180.

40. Wegrzyn J, Potla R, Chwae YJ et al. Mitokondriaalse Stat3 funktsioon rakulises hingamises. Teadus. 2009;323:793-797.

41. Chen W, Hu Y, Ju D. Neurodegeneratiivsete häirete geeniteraapia: edusammud, arusaamad ja väljavaated. Acta Pharm Sin B. 2020;10:1347-1359.

42. Cao Y, Zhang X, Wang L jt. PFKFB3-vahendatud endoteeli glükolüüs soodustab pulmonaalset hüpertensiooni. Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116:13394-13403.

43. Doménech E, Maestre C, Esteban-Martínez L jt. AMPK ja PFKFB3 vahendavad glükolüüsi ja ellujäämist vastusena mitofagiale mitootilise peatamise ajal. Nat Cell Biol. 2015;17:1304- 1316.