Isoliquiritigeniini renoprotektiivne toime tsisplatiinist põhjustatud ägedale neerukahjustusele FPR2 inhibeerimise kaudu makrofaagides

Lisateabe saamiseks võtke ühendust: ali.ma@wecistanche.com

Tan Rui-Zhi jt

Neeruhaiguse raviks klõpsake Cistanche'il

Abstraktne

Äge neerukahjustus (AKI) on tõsine tüsistus kriitilises seisundis patsientidel. Kogunev tõendusmaterjal näitas, et makrofaagidel on oluline põletikuvastane rollÄge neerukahjustusja isoliquiritigeniin (ISL) võivad pärssida makrofaagilist põletikku, kuid selle rollÄge neerukahjustusja selle aluseks olev mehhanism pole teada. Käesoleva uuringu eesmärk on uurida ISL-i renoprotektiivset toimet AKI-le ja formüülpeptiidi retseptorite 2 (FPR2) rolli selles protsessis. Selles uuringus kasutati in vivo ja in vitro katsete läbiviimiseks tsisplatiinist indutseeritud AKI mudelit ja lipopolüsahhariidist indutseeritud makrofaagide põletikumudelit. Tulemused näitasid, et ISL leevendas tugevaltneerukahjustusja inhibeeris neerupõletikku in vivo ja pärsib makrofaagilist põletikulist vastust in vitro. Oluline on see, et leiti, et FPR2 oli AKI ja LPS-indutseeritud makrofaagide kontrollrühmaga võrreldes oluliselt ülesreguleeritud, samas kui ISL surus seda tugevalt alla. Huvitaval kombel muutis FPR2 üleekspressioon pcDNA3 transfektsiooniga.{4}}FPR2 muutis tõhusalt ümber ISL-i põletikuvastase toime makrofaagides, mis viitab sellele, et FPR2 võib olla ISL-i potentsiaalne sihtmärk, et vältida põletikku ja parandada põletikku.neerukahjustuskohtaÄge neerukahjustus. Kokkuvõttes näitasid need leiud, et ISL parandas tsisplatiini poolt indutseeritud toimetneerukahjustusinhibeerides FPR2 kaasatud makrofaagilist põletikku, mis võib pakkuda potentsiaalset ravivõimalust AKI jaoks.

1. Sissejuhatus

Ägeneerudvigastus (AKI) on levinud tõsine tüüpneerudkõrge suremusega haigus.1 Seda iseloomustab kiire neerufunktsiooni langus, mis ilmneb 7 päeva jooksul või vähem. Hiljutised väljaanded teatasid, et AKI esinemissagedus on 5 protsendil statsionaarsetel patsientidel ja 30 protsendil rasketest patsientidest.AKIpõhjustab igal aastal maailmas 2 miljonit surma, millest on saanud ülemaailmne terviseprobleem. Kuigi määratlus on tavaline ja ühtne, võib AKI põhjustada mitmesugused põhjused, sealhulgas nefrotoksiliste ravimite tarbimine, isheemia-reperfusioonikahjustus (isheemia-reperfusioonikahjustus, IRI), sepsis, kardiovaskulaarne kirurgia, hüpertensioon ja diabeet.2,3 Vanad vanus, diabeet ja südamepuudulikkus suurendavad AKI riski, mis tavaliselt põhjustab mõnel patsiendil pöördumatut kroonilist neeruhaigust (CKD) ja lõppstaadiumis neeruhaigust (ESRD).4 Eelkõige on uuringud näidanud, et sellega on seotud peaaegu kõik immuunrakud. neeru immuunpõletikus AKI-s.5 Nende hulgas on makrofaagidel osutunud oluline roll neerupõletiku soodustamisel.6 Makrofaagide kustutamine parandab AKI neerukahjustust ja põletikku.7 Seetõttu võib makrofaagilise põletiku efektiivne pärssimine olla kasulik AKI juhtimise praeguste terapeutiliste lähenemisviiside parandamine.

Isolikviritigeniin (ISL) on kalkoonse struktuuriga flavonoid, mille juured on kuulsas traditsioonilises Hiina taimses meditsiinis.8 Viimastel aastatel on see pälvinud teadlaste laialdast tähelepanu tänu oma antioksüdantsele, põletikuvastasele, trombotsüütide agregatsioonivastasele ja antibakteriaalsele toimele. , viirusevastased, kasvajavastased, hepatoprotektiivsed, neuroprotektiivsed, südamekaitse ja võõrutusomadused.9 On näidatud, et ISL pärsib rakkude proliferatsiooni, vähendab ROS-i ja kutsub esile apoptoosi, nekrootilist ja vähirakkude surma erineval määral.10 Viimased aruanded näitasid, et isoliquiritigeniin võib pärssida IL-6 ja TNF-a tootmist, mida indutseerib LPS lipiid A osa RAW264.7 makrofaagides ja nõrgendada LPS-TLR4/MD-2 kompleksi moodustumist. Lisaks võib ISL indutseerida HepG2 rakkude apoptoosi ROS-vahendatud MAPK, STAT3 ja NF-kB signaaliradade kaudu.11 Eksperimentaalsed tõendid näitasid ka, et ISL kutsub esile ROS-vahendatud sisemise aktivatsiooni ja aktiveerib mitokondriaalse tsütokroom c-tsüsteiini proteaasi mehhanismi. PC-12 rakkude apoptoosi. Väärib märkimist, et ISL-i kasutatakse sageli naiste toidulisandina.12 Hiljutised uuringud on näidanud, et ISL-il on märkimisväärne põletikuvastane toime AKI-le, kuid konkreetne toimemehhanism on endiselt ebaselge.

Meie töörühma varasemad uuringud näitasid, et Mincle, makrofaagide poolt indutseeritud C-tüüpi lektiin, on transmembraanne mustrituvastusretseptor, mis on seotud neerupõletikuga,13 mille kaudu me skriinisime formüülpeptiidi retseptoreid 2 (FPR2), millel on teatud seos Mincle'iga. GEO andmebaas. Siiski ei ole selle rolli ägeda neeruhaiguse korral kontrollitud. FPR2 on valku kodeeriv geen, mis kuulub G-valguga seotud retseptorite perekonda ja sisaldab 351 aminohappejääki.14,15 Need on 7- transmembraansed G-valguga seotud retseptorid, mis võivad vahendada immuunregulatsiooni, põletikuliste faktorite sekretsiooni, rakkude kemotaksist ja rakkude adhesiooni, mis on tihedalt seotud erinevate haiguste esinemise ja arenguga.16 Selle homoloogia FPR1 ja FPR3-ga on koguni 69 protsenti ja 83 protsenti. FPR2 alamrakud paiknevad rakumembraanis ja on mitme läbipääsuga membraanivalgud. Neid ekspresseeritakse peamiselt neutrofiilides, eosinofiilides, monotsüütides, epiteelirakkudes, fibroblastides, gliiarakkudes, mesangiaalrakkudes jne, mis on jaotunud erinevates organites, nagu kops, põrn ja maks. Nimelt ekspresseerub FPR2 rikkalikult neerude interstitsiumis,17 kus asuvad põletikulised rakud. FPR2 põhiülesanne on kombineerida teatud spetsiaalseid lagunemist soodustavaid aineid (SPM), et vahendada nende metaboliitide aktiivsust põletiku mahasurumisel ja kõrvaldamisel. Siiski pole veel teada FPR2 roll AKI põletikus ja kas seda saab kasutada ravimite sekkumise sihtmärgina.

Selles käesolevas uuringus kasutasime nefrotoksilise ravimi - tsisplatiini poolt indutseeritud hiire AKI mudelit ja LPS-i indutseeritud põletikuliste rakumudelit, et uurida ISL-i paranevat mõju AKI-s esinevatele vigastustele ja neerupõletikule, samuti FPR2 võtmerolli neerupõletikus. ja AKI ravi ISL-iga. See uuring annab uusi suundi põletikuliste vigastuste mehhanismi ja AKI ravistrateegiate mõistmiseks.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Narkootikumid

Isoliquiritigenin (purity>98 protsenti) on lagritsajuurest ekstraheeritud isoflavooniühend. Selle molekulaarvalem on C15H12O4. Selles uuringus osteti isoliquiritigeniin firmalt Chengdu Bio purify Phytochemicals Ltd. (BP0787), lahustati 10% DMSO-s (ST038, Beyotime, Hiina) ning tsisplatiiniga indutseeritud hiirtele manustati maosiseselt annustes 7,5 mg/kg ja 30 mg. /kg vastavalt.

2.2. BMDM-i isoleerimine

BMDM-rakkude isoleerimiseks valiti isased C57BL/6 hiired vanuses 6–8 nädalat. Eraldage ettevaatlikult jala tagaluu reieluust ja eemaldage kinnitatud lihased. Jahvata luud uhmris PBS-is, kuni luude värvus muutub punasest valgeks. Seejärel koguge supernatant ja filtreerige läbi 70 °C kurna, millele järgneb tsentrifuugimine kiirusel 1500 p/min 5 minutit. Erütrotsüüdid purustati filtreeritud vedelikus 10 - PBS-iga, mis seejärel filtreeriti 40 mm rakusõelal. Inkubeerige saadud rakke 10 cm kultiveerimisnõus ja indutseerige 30% L929 supernatandiga 7 päeva. Põletikulise raku mudeli konstrueerimiseks stimuleeriti BMDM-rakke 100 ng/ml LPS-ga.

2.3. FPR2 katkestamine ja üleekspressioon BMDM-is

FPR2 reguleeriti alla transfektsiooni teel Zeta LifeAdvanced Transfection Reagent (AD600050, Zeta Life, USA) ja FPR2 siRNA-ga BMDM-ks (FPR2 siRNA järjestused: Sense, 5'-GGAGAUGUGUAUUGUACAUTT-3'; Antisense, CAUCUCCTT{10}}'. Sangon Biotech, Hiina). Samamoodi transfekteeriti pcDNA3.{12}}FPR2 plasmiid (konstrueerija Fenghui Biotech, Hiina) koos ZETA-ga BMDM-i, et rakkudes üleekspresseerida FPR2.

2.4. Loomkatsed

Kõik loomkatsed viidi läbi vastavalt Southwest Medical University'i eetikakomitee juhistele. 32 isast C57BL/6 hiirt osteti ettevõttest ChengduDaShuo Animal Co., Ltd, mis jaotati juhuslikult 4 rühma: võltsrühm, mudelrühm (tsisplatiiniga indutseeritud AKI rühm), ISL-i väikese annuse rühm (7,5 mg/kg, rühm L), ja suure annuse rühm (30 mg/kg, rühm H). Mudelrühmale süstiti esimesel päeval 20 mg/kg tsisplatiini (P4394, Sigma-Aldrich, USA), väikese annuse rühmale aga 7,5 mg/kg ISL-i ja suurele rühmale 3 päeva jooksul 30 mg/kg ISL-i. . 3 päeva pärast koguti ohverdatud hiirtelt seerum ja neer.

2.5. Neerufunktsiooni test

Pärast iga hiirerühma seerumi kogumist järgige rangelt komplektide juhiseid, et tuvastada seerumi kreatiniini (C011-2-1, Jiancheng Biotech, Hiina) ja uurea lämmastiku (C013-2-1, Jiancheng Biotech, Hiina).

2.6. Patoloogiline värvimine

H&E värvimine: sektsioonide rutiinne vaha eemaldamine ja rehüdratsioon, hematoksüliiniga värvimine 5 minutit, RO veega loputamine, 1% vesinikkloriidhappe alkoholi eraldamine 2 sekundit, loputus kraaniveega, 75% etanooli sukeldamine 2 sekundit, 1% alkoholis lahustuv eosiini 30 , loputus kraaniveega, 100% etanool Dehüdreerige 1 min, kuivatage, ksüleen läbipaistev 10 min, kuivatage, tihendage neutraalse palsami kinnitusvahendiga (36313ES60, Yepsen, Hiina).

PAS-värvimine: viilud asetati toatemperatuuril 5–8 minutiks perioodilise happe lahusesse, millele järgnes loputamine kaks korda RO veega. Seejärel pange need viilud 10–20 minutiks Schiffi reaktiivi, loputage kraaniveega 10 minutit, värvige hematoksüliiniga 1–2 minutit, kuivatage ja muutke 100% alkoholis läbipaistvaks, kuivatage, sulgege neutraalse palsamiga.

2.7. Immunofluorestsents

Asetage külmutatud koelõigud PBS-i, peske kaks korda, fikseerige 10-protsendilise formaldehüüdiga 10 minutit. Sektsioonide kude blokeeriti 5% kitse seerumiga 30 minutit, millele järgnes inkubeerimine hiire primaarse hiirevastase FPR2-ga (1:200, sc{8}}, Santa Cruz, USA) ja roti hiirevastase vastase F4/80-ga. antikehi (1:200, sc-52664, Santa Cruz, USA) temperatuuril4 - C üleöö. Järgmisel päeval peske lõike kaks korda PBS-ga, inkubeerige sekundaarse antikehaga (1:200) toatemperatuuril 1 tund ja värvige tuum DAPI-ga. Pildid jäädvustati EVOS süsteemiga.

2.8. Elisa

IL-1b, IL-6, TNF-a kontsentratsiooni seerumis ja raku supernatandis analüüsiti ELISA komplektidega (EMC001B, EMC004, EMC102A, Neobioscience, Hiina) vastavalt komplekti juhistele.

2.9. Reaalajas-PCR

Kogu RNA ekstraheeriti RNA ekstraheerimiskomplekti (Tiangen, Hiina) abil, järgides tootja juhiseid. Pärast ekstraheeritud RNA pöördtranskribeerimist cDNA-ks, selle lisamist 10 ml reaktsioonisüsteemi, et teostada Roche LightCycler 480 süsteemiga reaalajas PCR ja reaktsioonisüsteem on järgmine: Eastep® qPCR MasterMix 2 -, 5 ml; cDNA matriits, 1 ml; ülesvoolu praimer (10 mM), 0,5 ml; allavoolu praimer (10 mM), 0,5 ml; Nukleaasivaba vesi, 3 ml. Selles katses kasutatud praimerid sünteesis Sangon (Shanghai, Hiina) ja kõigi praimerite järjestused on loetletud tabelis 1.

2.10. Western blot

Valkude eraldamiseks neerukudedest ja BMDM-rakkudest kasutati RIPA lüüsipuhvrit. Pärast valgu lahustamist 10% SDS-PAGEgeelis ja ülekandmist PVDF membraanile, membraani blokeerimist 5% BSA-s 1 tunni jooksul ja 3 korda TBST-ga pesemist, millele järgnes membraani inkubeerimine primaarsete antikehadega öö läbi temperatuuril 4 - C (valmistatud). 5% BSA-ga, 1:1000). Seejärel inkubeeriti membraane sekundaarse antikehaga (peroksidaasiga konjugeeritud kitse hiirevastane IgG (ZB-2305, 1:3000), kitse küülikuvastane IgG (ZB-2301, 1:3000)). toatemperatuuril 1 tund. Pildid jäädvustati geelkuvamissüsteemiga (BIORAD, USA). Ribade halli intensiivsus arvutati Image J tarkvara abil.

2.11. Statistiline analüüs

Tulemused esitati kui keskmine ± standardhälve. Andmete analüüs viidi läbi ühesuunalise ANOVA testiga, millele järgnes mitmekordne võrdlus LSD testiga, kasutades SPSS tarkvara 21.0. P < 0,05="" peeti="" statistiliselt="" oluliseks.="" iga="" katserühm="" dubleerub="" 3="">

3. Tulemused

3.1. Isolikviritigeniin parandas tsisplatiinist põhjustatud neerukahjustust ja pärssis neerupõletikku

Isoliquiritigeniini renoprotektiivse ja põletikuvastase toime uurimiseks AKI-s tuvastasime reaalajas PCR ja ELISA abil iga rühma seerumi Cre ja BUN tasemed, samuti põletikulise tsütokiini ekspressiooni ja sekretsiooni. Lisaks mõõdeti neerupatoloogiat H&E ja PAS värvimisega. Tulemused näitasid, et võrreldes tavarühmaga suurenesid AKI mudelis seerumi Cre ja BUN tasemed, samas kui ravi 7,5 mg/kg või 30 mg/kg ISL-iga vähendas oluliselt seerumi Cre ja BUN taset, sealhulgas 30 mg/kg annusel on parim terapeutiline toime (joonis 1A ja B). Eelkõige võib 30 mg/kg ISL-i parandada neerutuubulite kahjustusi vastavalt hinnatud tubulaarse nekroosi protsendile (joonis 1C). ELISA ja PCR tulemused näitasid, et IL-1b, IL-6 ja TNF-a sekretsioon on pärast ISL-i (7,5 mg/kg ja 30 mg/kg) sekkumist ning mRNA ekspressioon vähenenud. IL-1b, IL-6 ja TNF-a sisaldus vähenes samuti märkimisväärselt, kui manustati 30 mg/kg ISL-i (joonis 1DeI). Teisest küljest näitasid H&E ja PAS-i värvimise tulemused, et AKI rühma neerudel esines tõsine neerutuubulite kahjustus, neeruepiteeli eraldumine, mesangiaalrakud ja mesangiaalne interstitsiaalne hüperplaasia ning põletikuliste rakkude infiltratsioon, üllataval kombel 30 mg/kg ISL-i. võib AKI-s neerukahjustuse tõhusalt tagasi pöörata (joonis 1J). Kõik tulemused näitasid, et 7,5 mg/kg ja 30 mg/kg ISL-i manustamine võib nii parandada tsisplatiinist põhjustatud neerukahjustust kui ka pärssida neerupõletikku, mille puhul on 30 mg/kg ISL-l parim toime.

3.2. Isolikviritigeniin vähendas FPR2 ekspressiooni AKI hiirte makrofaagides

Paljud varasemad aruanded näitasid, et FPR2 mängib immuunvastuses ja põletikuga seotud haigustes üliolulist rolli. FPR2 potentsiaalne toime AKI neerudele on aga määratlemata. Selles uuringus teostasime immunofluorestsentsi, et tuvastada FPR2 ja makrofaagid (F4/80, makrofaagide tootja). Tulemused näitasid, et makrofaagid (rohelised laigud) infiltreerusid AKI hiirte neerudesse mahukalt, samal ajal paiknes FPR2 (punased laigud) koos F4/80-ga, mis näitab, et FPR2 ekspresseeriti peamiselt makrofaagidel ja FPR2 tase oli märkimisväärselt suur. suurenenud AKI hiirte neerudes (joonis 2A). Lisaks tuvastasime FPR2 mRNA ja põletikuga seotud valkude ekspressiooni neerudes reaalajas PCR ja Western blot analüüsiga ning tulemused näitasid, et 30 mg/kg ISL-i võib tõhusalt alandada FPR2 mRNA ja valgu taset neerudes. AKI hiirte neerud võrreldes 7,5 mg/kg ISL rühmaga (joonis 2B, G, H). Oluline on see, et Western blot analüüsi tulemused näitasid, et 30 mg/kg ISL-i pärssis ka p-65 aktivatsiooni ja reguleeris alla TNF-a, IL-6 ja IL{{28} valgu taset. }b AKI hiirte neerudes (joonis 2CeF). Kõik ülaltoodud andmed viitasid sellele, et AKI hiirte ISL-i leevendatud neerupõletik võib olla seotud FPR2 ekspressiooni vähendamisega makrofaagides.

3.3. Isolikviritigeniin pärssis FPR2 ja põletikuliste tsütokiinide ekspressiooni ja sekretsiooni LPS-i indutseeritud BMDM rakkudes

ISL-i mõju edasiseks tuvastamiseks LPS-indutseeritud BMDM-rakkudele uurisime pärast ISL-i manustamist reaalajas PCR-i ja ELISA-ga FPR2 mRNA taset, põletikuliste tsütokiinide ekspressiooni ja sekretsiooni LPS-indutseeritud BMDM-rakkudes. Tulemused näitasid, et ISL vähendas FPR2, IL-1b, IL-6 ja TNF-a mRNA taset (joonis 3AeD), samuti IL-1b sekretsiooni. , IL-6 ja TNF-a raku supernatandis LPS-indutseeritud BMDM rakkudes (joonis 3EeG). Ülaltoodud tulemused viitasid sellele, et ISL-i ravi kontsentratsiooniga 40 mM inhibeeris tugevalt põletikku LPS-indutseeritud BMDM-rakkudes.

3.4. Isolikviritigeniin vähendas FPR2 ja põletikuliste tsütokiinide valgu taset LPS-i indutseeritud BMDM rakkudes

Samuti tuvastasime FPR2 ja põletikuliste tsütokiinide valgu tasemed LPS-i indutseeritud BMDM rakkudes pärast ISL-i manustamist Western blot analüüsiga. Andmed näitasid, et võrreldes kontrollrühmaga suurenesid FPR2, p-p65, IL-6 ja TNF-a valgu tasemed LPS-i indutseeritud BMDM rakkudes oluliselt ja vähenesid tugevalt 40 mM ISL manustamisel ( joon. 4AeE). Need tulemused näitasid veelgi, et ISL võib pärssida NF-kB aktivatsiooni ja alandada põletikuliste tsütokiinide valgu taset LPS-i indutseeritud BMDM-rakkudes.

3.5. FPR2 inhibeerimine pärssis LPS-i indutseeritud põletikku BMDM-rakkudes

FPR2 rolli uurimiseks makrofaagide põletikus kasutasime siRNA-d FPR2 hävitamiseks BMDM rakkudes. Tulemused näitasid, et siRNA transfektsioon võib oluliselt pärssida FPR2 ekspressiooni LPS-i indutseeritud makrofaagides (joonis 5A) ja tõhusalt vähendada IL-1b ja TNF-a ekspressiooni (joonis 5B ja C). Lisaks näitasid Western blot tulemused, et pärast siRNA transfektsiooni pärssis FPR2 valgu tase oluliselt, olenemata sellest, kas seda stimuleeris LPS (joonis 5D ja E). Nimelt vähendas FPR2 mahalöömine oluliselt põletikuliste tsütokiinide valgu taset ja pärssis NF-kB signaaliülekande aktiivsust (joonis 5FeK), mis näitab, et FPR2 mängib olulist rolli makrofaagide põletikulise reaktsiooni soodustamisel. Samuti võib see olla ISL-i peamine sihtmärk makrofaagide põletiku pärssimisel.

3.6. FPR2 üleekspressioon neutraliseeris isoliquiritigeniini põletikuvastase toime LPS-i indutseeritud BMDM rakkudes

Et teha kindlaks, kas ISL pärsib AKI põletikku, inhibeerides makrofaagides FPR2, kasutasime FPR2 üleekspressiooni plasmiidi, et reguleerida FPR2 ekspressiooni ISL-iga töödeldud põletikulistes BMDM rakkudes. Nagu on näidatud joonisel 6, tõusis FPR2 valgu ja mRNA tase pcDNA3-s märkimisväärselt.{7}} FPR2 transfekteeritud rühm (joonis 6A, B, G) ja FPR2 üleekspressioon kaotas tõhusalt 40 inhibeeriva toime. mM ISL p65 aktiveerimisel ning IL-1b, IL-6 ja TNF-a valgu tasemetel LPS-indutseeritud BMDM rakkudes (joonis 6CeF). Samamoodi eemaldas FPR2 ülesreguleerimine 40 mM ISL-i supresseeriva toime põletikuliste tsütokiinide ekspressioonile ja sekretsioonile LPS-indutseeritud BMDM-rakkudes, nagu IL-1b, IL-6 ja TNF-a. (joonis 6HeM), mis viitab sellele, et ISL vähendas põletikku LPS-indutseeritud BMDM-rakkudes, inhibeerides FPR2.

4. Arutelu

Äge neerukahjustus on üks levinumaid kliinilisi haigusi. Tavaliselt põhjustab see lühikese aja jooksul patsientide immuunfunktsiooni häireid. Trauma verekaotuse, elundikahjustuse, šoki korral on neer kõige vastuvõtlikum organ ja kalduvus areneda ägedaks vigastuseks.18e20 Arvukad uuringud on kinnitanud, et põletikul on AKI tekkes võtmeroll, mida on peetud. AKI ravi potentsiaalse sekkumise sihtmärgina. Viimastel aastatel on Hiina ravimid, sealhulgas kurkumiin, kvertsetiin, naringeniin ja muud monomeerid, teinud tohutuid edusamme põletiku sekkumisel. Isolikviritigeniin on flavonoidühend, millel on palju bioloogilisi toimeid, nagu põletikuvastane, vabade radikaalide vastane, kasvajavastane ja muud toimed.21 Varasemad uuringud näitasid, et ISL pärssis angiotensiini apoptoosi, põletikku ja rakuvälise maatriksi tootmist. II-indutseeritud HK-2 rakud.22 Wu Yangpingi uuringud näitasid, et ISL võib IL-6 ja IL-8 alla reguleerida, pärssides NF-kB aktiivsust psoriaasi mudelis, mis viitab ISL võib olla kandidaat psoriaasi ja teiste autoimmuunsete põletikuliste haiguste raviks.23 Teisest küljest näitas hiljutine uuring, et ISL võib leevendada septilist AKI-d, pärssides NF-kB p65 translokatsiooni ja inhibeerides põletikulisi reaktsioone.24 Selles uuringus tegime kindlaks, et leidis, et ISL võib tõhusalt parandada tsisplatiiniga indutseeritud AKI hiirte neerufunktsiooni, vähendada neerukahjustusi ja pärssida neerupõletikku. ISL-i põletikku pärssiva täpne mehhanism on aga ebaselge.

FPR2 kuulub kemotaktiliste retseptorite perekonda ja on G-valguga seotud retseptor, mis on 7 korda transmembraanne. Varasemad uuringud on leidnud, et FPR2 osaleb mitmesugustes füsioloogilistes ja patoloogilistes protsessides, sealhulgas kaitsereaktsioonides, põletikes, neurodegeneratiivsetes haigustes, kasvajates, glükoosi- ja lipiidide metabolismiga seotud häiretes.25,26 FPR2 võivad olla ülesreguleeritud lipopolüsahhariidide, erinevate põletikuliste tegurite, ja prostaglandiin E2 põletikulises protsessis, millel võib olla põletikuvastane ja põletikuvastane roll.27,28 FPR2 erinevad mõjud põletikule sõltuvad keskkonnast ja ligandidest, mis aktiveerivad erinevaid signaaliülekandeteid.29 Selles uuringus avastasime, et FPR2 ekspresseeritakse peamiselt makrofaagides neerude interstitsiumis ja ekspresseeritakse tugevalt tsisplatiiniga indutseeritud AKI hiirte neerudes, mis viitab sellele, et makrofaagides olev FPR2 võib olla seotud AKI neeru makrofaagide põletikulise vastusega. Üha rohkem tõendeid on kinnitanud, et suur hulk makrofaage infiltreerus neerudesse mõne tunni jooksul pärast AKI esinemist ja süvendas neerukahjustusi, reageerides põletikule.30e33 Seetõttu võib AKI neerude infiltreerunud makrofaagide põletiku allareguleerimine olla oluline suund AKI täiustamisel ja pole teada, kas FPR2 on sellesse protsessi kaasatud.

Meie katsetulemused näitasid, et tsisplatiiniga indutseeritud AKI hiirte ravi väikese ja suure annusega ISL-iga ei paranda mitte ainult neerude struktuuri ja funktsiooni, vaid vähendab ka põletikuliste tsütokiinide taset. Lisaks võib ISL tõhusalt reguleerida FPR2 valgu taset ja p65 aktiivsust. Kuna FPR2 ekspresseeritakse peamiselt makrofaagides, näitab see, et ISL võib parandada neerupõletikku, inhibeerides makrofaagides FPR2. Infiltreerunud makrofaagide olulise rolli tõttu neerupõletikus ekstraheerisime seejärel primaarsed luuüdist pärinevad makrofaagid, et in vitro tuvastada ISL-i parandavat toimet makrofaagide põletikule ja võimalikku mehhanismi. Meie tulemused näitasid, et ISL võib märkimisväärselt pärssida LPS-i indutseeritud makrofaagide põletikku ja alareguleerida põletikusiseste tegurite IL-1b, IL-6 ja TNF-a ekspressiooni ja sekretsiooni. Samal ajal võib ISL vähendada ka põletikuliste molekulide valgu taset makrofaagides ja pärsib LPS-i poolt stimuleeritud FPR2 mRNA ekspressiooni ja valgu taset. Et kontrollida FPR2 põletiku inhibeerimise võtmerolli ISL-iga, kasutasime FPR2 üleekspresseerimiseks pcDNA3.{18}}FPR2 plasmiidi ja leidsime, et ISL-ga töödeldud põletikulises makrofaagis neutraliseerib FPR2 üleekspressioon ISL-i inhibeerivat toimet põletikule, mis näitab, et ISL-i alla reguleeritud makrofaagide põletik tuleneb peamiselt FPR2 inhibeerimisest. Eelkõige kasutasime in vivo tsisplatiiniga indutseeritud AKI mudelit ja valisime in vitro LPS-indutseeritud põletikulise raku mudeli. Kuigi kahe mudeli indutseerimisreagendid ei ole järjepidevad, tunnustatakse praegu neid kahte meetodit põletikumudelite konstrueerimiseks vastavalt in vivo ja in vitro. Arvestades, et see uuring keskendub põletikulistele reaktsioonidele, on võimalik kasutada neid kahte meetodit ühes uuringus.

Need andmed tõestasid, et ISL võib tõhusalt vähendada põletikuliste tegurite ekspressiooni in vivo ja in vitro ning seda võib saavutada FPR2 ekspressiooni inhibeerimisega. ISL võib seega olla AKI potentsiaalne terapeutiline ravim.

Tänuavaldused

Seda tööd toetasid Luzhou – Edela Meditsiiniülikooli ühisprojekt (2017LZXNYD-P01 ja 2018LZXNYD-PT03), Edela Meditsiiniülikool – Traditsioonilise Meditsiini Haigla Ühisprojekt (2018XYLH-034), Sichuani Provincial Key Laboratory ehitusprojekt Meditsiin (2018#53), Luzhou teadus- ja tehnoloogiaprojekt (2020-JYJ-56) ja Luzhou Municipal – Edela Meditsiiniülikooli ühistoetus kõrgetasemeliste talentide tutvustamiseks (Lan Hui-Yao meeskond ).

Viited

1. Soares DB, Mambrini JVM, Botelho GR, Girundi FF, Botoni FA, Martins MAP. Narkootikumide ravi ja muud tegurid, mis on seotud ägeda neerukahjustuse tekkega kriitilises seisundis patsientidel: läbilõikeuuring.PeerJ. 2018;6:e5405. e-pubi trükist ees 2018/08/22.

2. Sato Y, Yanagita M. Immuunrakud ja põletik AKI-s kuni kroonilise neeruhaiguse progresseerumiseni.Am J Physiol Ren Physiol. 2018;315(6):F1501eF1512. e-pubi trükki ees 2018/ 08/30.

3. Ram P, Mezue K, Pressman G, Rangaswami J. Äge neerukahjustus pärast transkateetri aordiklapi asendamist.Clin Kardiol. 2017;40(12):1357e1362. e-pubi trükist ees 2017/12/19.

4. YH H, IJ C, YF L, YJ C, YH L, HW C. Laktoferriin aitab kaasa renoprotektiivsele toimele ägeda neerukahjustuse ja varase neerufibroosi korral.Farmaatsia. 2020;12(5):434.

5. Bonavia A, Singbartl K. Ülevaade immuunrakkude rollist ägeda neerukahjustuse korral.Pediatr Nephrol. 2018;33(10):1629e1639. e-pubi trükist ees 2017/08/13.

6. Li J, Tang Y, Tang PMK jt. Makrofaagide migratsiooni inhibeeriva faktori blokeerimine kaitseb hiirtel tsisplatiinist põhjustatud ägeda neerukahjustuse eest.Mol Seal. 2018;26(10):2523e2532. e-pubi trükki ees 2018/08/06.

7. Ferenbach DA, Sheldrake TA, Dhaliwal K jt. Makrofaagide / monotsüütide ammendumine klodronaadi, kuid mitte difteeriatoksiini poolt, parandab hiirtel neeruisheemiat / reperfusioonikahjustusi.Kidney Int. 2012;82(8):928e933. e-pubi trükist ees 2012/06/08.

8. JQ, JC, BM jt. Isolikviritigeniin inhibeerib ateroskleroosi, blokeerides TRPC5 kanali ekspressiooni.Kardiovaskulaarsed ravimid. 2020;2020:1926249.

9. YG, XL, HY, LP, X C. Isolikviritigeniinil on antioksüdatiivne ja põletikuvastane toime, aktiveerides KEAP-1/Nrf2 rada ja inhibeerides NF-kB ja NLRP3 radu karrageenist põhjustatud pleuriidi korral.Toit& funktsiooni. 2020;11(3):2522e2534.

10. LS, XY, XY, YW, Q Z. Isolikviritigeniin indutseerib inimese põievähi T24 rakkude apoptoosi tsükliinist sõltuva kinaasist sõltumatu mehhanismi kaudu.Onkoloogilised kirjad. 2017;14(1):241e249.

11. Wang JR, Luo YH, Piao XJ jt. Isolikviritigeniini poolt indutseeritud apoptoosi ja rakutsükli peatamise aluseks olevad mehhanismid ROS-vahendatud MAPK / STAT3 / NF-kappaB radade kaudu inimese hepatotsellulaarsetes kartsinoomirakkudes.Drug DevRes. 2019;80(4):461e470. e-pubi trükist ees 2019/01/31.

12. AH, CS, YY jt. Lagritsaliikide östrogeense aktiivsuse hindamine võrreldes menopausi sümptomite leevendamiseks botaanilistes preparaatides kasutatava humalaga.PLoSÜks. 2013;8(7):e67947.

13. LL L, PM T, CJ L jt. Mustri tuvastamise retseptor Mincle on oluline M1 makrofaagi fenotüübi säilitamiseks ägeda neerupõletiku korral.Kidney Int. 2017;91(3):587e602.

14. Schroder N, Schaffrath A, Welter JA jt. Formüülpeptiidi retseptorite inhibeerimine parandab Alzheimeri tõve hiiremudeli tulemust.JNeuropõletik. 2020;17(1):131. e-pubi trükist ees 2020/04/26.

15. Neymeyer H, Labels R, Reverte V et al. Anneksiin A1 signaaliülekande aktiveerimine neerufibroblastides avaldab antifibrootilist toimet.Acta Physiol. 2015;215(3):144e158. e-pubi trükki ees 2015/09/04.

16. FC, MP, RA. Erinevad formüülpeptiidretseptor 2 (FPR2) agonistid kutsuvad esile erinevad signaaliülekandekaskaadid.Int J Mol Sci. 2013;14(4):7193e7230.

17. HW, XP, YG jt. Ganoderma-A tuletatud ühend avaldab inhibeerivat toimet formüülpeptiidi retseptori 2 kaudu.Front Pharmacol. 2020;11:337.

18. Wang Y, Cai J, Tang C, Dong Z. Mitofagia ägeda neerukahjustuse ja neerude parandamise korral.Rakud. 2020;9(2). e-pub enne trükist 2020/02/07.

19. Sato Y, Takahashi M, Yanagita M. AKI patofüsioloogia kuni kroonilise neeruhaiguse progresseerumiseni.Semin Nephrol. 2020;40(2):206e215. e-pubi trükist ees 2020/04/19.

20. Ronco C, Bellomo R, Kellum JA. Äge neerukahjustus.Lancet. 2019; 394 (10212): 1949e1964. e-pubi trükist ees 2019/11/30.

21. PZ, HM J, JW Z jt. Isolikviritigeniini kaitsev toime ajukahjustuse vastu septilistel hiirtel NF-KB nõrgenemise kaudu.sisseflammofarmakoloogia. 2019;27(4): 809e816.

22. DX, WH, ST Y, YS T. Isolikviritigeniin leevendas Ang II-st põhjustatud hüpertensiivset neerukahjustust põletikuliste tsütokiinide ja oksüdatiivse stressi põhjustatud apoptoosi pärssimise kaudu Nrf2 ja NF-kB radade kaudu.Biochem BiophysRes Commun. 2018;506(1):161e168.

23. YW, XC, XG jt. Isolikviritigeniin takistab psoriaasilaadsete sümptomite progresseerumist, inhibeerides NF-kB ja põletikku soodustavaid tsütokiine.J MolMed(Berl). 2016;94(2):195e206.