Cistanche mõju uurimine vabadele radikaalidele

Lisateabe saamiseks:Ali.ma@wecistanche.com

Teine pilvemets Vana Zhang Hongjing

Praegu arvatakse, et masina immuunfunktsiooni langus on seotud vananemisega. Uuringu põhjal, etCistanchevõib tugevdada hiirte humoraalseid ja rakulisi immuunfunktsioone ning võidelda d-galaktoosi põhjustatud vananemismudeli vastu, uurisime täiendavalt ravimi toimet hiirtele. Osooni sissehingamine<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">vabad radikaalidkehas. Ravimirühma hiirte kemiluminestsentsi ekspressioonikiirus suurenes, SOD Suurenes elujõud "Lipiidperoksiidide sisaldus plasmas, põlvi- ja reiekudedes ning koridori kudede MAOB-i elujõulisus vähenes; erinevate annuste rühmade vahel oli doosi-mõju seos. -hiirte vananemismõju alaägeda vananemise vastu on kooskõlas uuringugaCistancheimmuunfunktsiooni tugevdamine hiirtel.Cistanchevõib tugevdada immuunfunktsiooni, parandada keha stressivastast võimet ja on asjakohane saada või kaudselt kõrvaldadavabad radikaalidkehale. , pärsib 1WMAO-B elujõudu. Et saavutada vananemist edasilükkav efekt. See katse annab eksperimentaalse aluse rakenduseksCistanchevananemisvastases ja teatud seniilsete haiguste ravis.

Klõpsake vabade radikaalide eeliste ja kõrvalmõjude vaatamiseks

1 Materjal ja meetodid

1.1 Materjal

1.1.1 Ravim ja reaktiivid:Cistanchedeserticola YC Ma keedeti vees 3 korda, keetmised ühendati, kontsentreeriti sobiva mahuni ja lisati teatud kogus etanooli. Pärast 24-tunnist seismist see filtriti. Filtraat aurustati alkoholivabaks. Enne 0,25% ~0,5% kontsentratsiooni kasutamist valmistage see aurutava veega. ml sisaldab toorravimeid umbes lg). Luminol (luminool), ®National E Merck ettevõtte tooted Huang Howling Oxidation 88 (HO), Hypochromatic Howling (HX), standardne tetraetoksüpropaan, kõik on Sigma Ettevõtte toode, sool, bensalkoonium, Changzhou Guangmingi biokeemiauuringute instituut; tsükloheksaan, Shanghai reagendi nr 1 toode; Tiobarbituurhape, Shanghai reagendi nr 2 toode, LuzhanSuperoksiidDismutaas, Shanghai Hiina Teaduste Akadeemia Biokeemiliste Toodete Instituudi tooted.

Cistanche

1.1. 2 seade Beckman LS-98OO33, ainult vedelikstsintillatsiooniloendus, Shimadzu RF-540 fluorestsentsspektofotomeeter, 752 ultraviolettvõrega spektrofotomeeter-G1-20Kiire külmtsentrifuug, CPS-1A ultraheli pulverisaator.

1.1.3 Animal ICR hiired, 2 kuu vanused, kaaluga 20 ± 2 g, tarninud Jiangsu Eksperimentaalne Loomade Keskus.

1.2 meetod

Hiired jaotati kontrollrühmaks (ärge sisenege Q-keskkonda), mudel- ja ravimirühma, millest igaühes oli 10 hiirt, kes söövad vett kiiresti ilma piiranguteta. Ravimirühm jagati kahte annustamisrühma, 2. köide, 7. väljaanne, 1994, Chinese Journal of Chinese Materia MedicaCistancheekstrakti 100 ja 200 mg/kg (vastab toorravimitele 20 ja 4Qg/kg). Kontrollrühmale ja mudelrühmale anti iga päev võrdne kogus tavalist soolalahust. Manustamisrühmale ja mudelirühmale anti O, keskkond (0,9 X 10-^Oaft kraad), pidev 2. Päev. Iga sõrme tüve test viidi läbi katse 21. päeval.

1. 2.1 Vastupidavuse test Asetage iga ülaltoodud rühma hiired 40 cm ja 12 ± l sügavusele. Alustage Water®L-i anumas ajastust, kuni see vajub põhja ja ei liigu, mis on hiirte ujumisaeg.

   
   

1.2.2 Soojakindluse test Hiir seatakse esmalt 15-le. Ujuge vees 2 minutit ja seejärel sisestage 15P sügavkülmikusse, et jälgida täielikku külmumisaega.

1.2.3 Atmosfääri hüpoksia taluvuse test Pange väike gluteen 250 ml laia suuga pudelisse, mis on täidetud naatriumlubjaga, ja registreerige pärast sulgemist iga rühma hiirte ellujäämisaeg.

1.2.4 Aju B-tüüpi monoamiini oksüdaasi (MACXB) määramine Vastavalt kirjanduse suukaudsele meetodile võtke hiirte kogu aju, lisage sobiv kogus eeljahutatud 0.2mol/L fosfaatpuhvrit (PH7.4). ), homogeniseerige ja ultraheliga (24 kC) Purustage 3 korda, kokku kaks korda intervalliga 30sr1000r/min, 0C 30 min, võtke supernatant kiirusel 17000 p/min, 4 °C 30 minutit, visake supernatant ära ja võtke sade ning kasutage sobivat kogust. .2mo(/L PH7.4) Hape puhverdatakse ja resuspendeeritakse, et saada toorkäärituslahus. Võtke sobiv kogus kääritamise toorlahust, lisage 16 mmol/l bensamidiini 0,3 ml, kasutage ülaltoodud fosfaatpuhvrit 3 ml lisamiseks ja kasutage fosforhappetrumlit. 3 ml puhverlahust kasutatakse tühja katseklaasina. Kõik katseklaasid asetatakse temperatuurile 37 °C. Loksutage 3 tundi veevannis, võtke see välja, lisage reaktsiooni lõpetamiseks 6% peroksühapet, seejärel lisage 3 m [tsükloheksaani, loksutage segamiseks, tsentrifuugige kiirusel 1000 p/min 1 minut, ja võtke see üles Selge lahuse neeldumist mõõdetakse 242 nm juures ja tühja katseklaasi tuleb enne hiina amiini lisamist hoida soojas. Valgu hägusus määratakse foliin-fenooli meetodil, kusjuures standardvalguks on vasika seerumi albumiin. Üks ensüümi aktiivsuse ühik ja üks ensüümi aktiivsuse ühik on määratletud kui 37P toodab ensüümi koguse neeldumise muutusega 0,01/3 tundi.

1. 2. 5 seerumsuperoksiiddismutaas(SOD) aktiivsuse määramine (5 µl, hiire seerum 10M, lisati luminestsentssegule (segatud 0, 1mmol/l luminooli ja 0,1mmol/l hüpoksantiiniga) 980". 37C inkubaatoris 20 minutit. Pärast väljavõtmist lisage reaktsiooni käivitamiseks Huang Guanyin oksüdaas. Beckman LS~98OO vedelas kiirsöötmes arvutatakse luminestsentsi arv 1 minuti lõpus luminestsentsi astme põhjal ühe fotoni tuvastamine. Ühikuna kasutatakse Com. Luminestsentsi inhibeerimise määr arvutatakse madalama seerumirühmaga kui tühikatse. Lisaks kasutatakse standardsetsuperoksiiddismutatsioonkontsentratsiooni (abstsiss) ja luminestsentsi inhibeerimise kiirust (koordinaat) kasutatakse standardse valgusisalduse määramisena nagu varemgi. 1. 2.6 Lipiidperoksiidi (LPO) määramine plasmas, ajus ja maksas ④ Võtke 50 purki hiire plasmat, homogeniseerige maks ja aju (kasutage 0,2 mol/L fosfaatpuhvrit, pH 7,4). , homogenisaatoris Valmistatud kontsentratsiooniga 10 protsenti) iga 50 esivanema kohta, lisage l/24mol/l väävelhapet 4 ml, 1% fosforhapet 0,5 ml, segage ja asetage 5 minutiks, tsentrifuugiti kiirusel 1000 p/mm 10 minutit, ja aspireeris supernatandi. Lisage sademele 2 ml l/24 mol/l väävelhapet ja 0,3 ml 10% kaltsiumfosfaati, segage hästi, tsentrifuugige kiirusel 1000 p/min ja lisage sademele 1 ml vastupidavat argpükslikku vett, segage hästi suspensiooni moodustamiseks, lisage purustatud barbitaal Happereaktiiv 1 ml, 95 °C juures. Pärast jahutamist 14 °C õlivannis, lisage 5 ml n-butanooli, segage hästi *100 or/min tsentrifuugimine 10 min, võtke n-butanooli faas ja mõõtke fluorestsentsi intensiivsus RF-l{{ 33}}OS-spektrofotomeeter (ergastuse lainepikkus 515 mn, emissiooni pikkus 553 nm), lisaks kasutada standardkõverana standardset tetraetoksüpropaani ja suhtelist fluorestsentsi intensiivsust.

   
   

2. 

2 tulemust

2.1 Mõju vabade radikaalide poolt vigastatud hiirte vastupidavuskatsele

Mudelrühma hiirte ujumisaeg oli oluliselt lühem kui kontrollrühmal, samas kui manustamisrühma ujumisaeg kestis kauem ja suure annusega rühm sarnanes kontrollrühmaga (tabel 1).

Tabel 1: mõjuCistanchevaba hauavigastusega hiiremudeli ujumisvastupidavuse testil

2.2 Mõju sooja hoidmise võimele

Mudelrühma hiired külmuvad kiiresti madalatel temperatuuridel ja aeg on lühem kui kontrollrühmal, samas kui kaheannuseliste rühmade külmumisaegCistancheei ole mitte ainult pikem kui mudelrühm, vaid ka pikem kui kontrollrühm, mis näitab, etCistancheSellel ei ole mitte ainult vabade radikaalide kahjustuste vastane toime, vaid sellel on ka ilmsed mõjud. Suurendage külma eest sooja hoidmise võimet (tabel 2).

Tabel 2: mõjuCistanchevõime kohta Senhan hiirtel mudel tasuta hea vigastus

2.3 Mõju võimele taluda hüpoksiat atmosfäärirõhul

Pärast manustamistCistanche, jäid hiired normaalse rõhu ja hüpoksia korral ellu.Cistanchemõju vabaliigiliste vigastuste hiiremudeli Senhani võimele oli oluliselt pikem kui mudelrühmal ja ka suurem kui kontrollrühmal, mis näitab, etCistanchevõib suurendada hiirte tolerantsust hüpoksia suhtes. Jõud (tabel 3)

Tabel 3:Cistanche's vabade radikaalide kahjustuse hiiremudel

2.4 Mõju MAO-B elujõulisusele

Pärast O sissehingamist oli mudelrühma ajukoe MAO-B aktiivsus oluliselt kõrgem kui vastasrühmal ja MAO-B aktiivsuse suurenemine manustamisrühmas oli oluliselt pärsitud.

Tabel 4: mõjuCistanche1SB tüüpi monoamiinoksiidviinapuu (MAO~B) aktiivsuse kohta vaba hauakahjustusega hiiremudelis

2. 5 Mõju SOD elujõulisusele

Seerumi kemoluminestsentsi inhibeerimise määr mudelrühmas oli oluliselt madalam kui teistes rühmades ja SOD aktiivsus vähenes oluliselt. Ravimirühma SOD aktiivsus suurenes oluliselt ja suurte annustega rühm oli kõrgem kui kontrollrühmal (vt allpool tabelit 5)

Tabel 5: Mudelseerumsuperoksiiddismutaasi (SOD) aktiivsus on kõige valjem2.6 Mõju lipiidperoksiidi (ZLPO) sisaldusele

2.6 Lipiidperoksiidi (LFO) sisaldus mudelrühma plasmas, maksas ja ajukoes suurenes oluliselt ning LPO sisaldus vähenes oluliselt pärast manustamist. Suur annus ja doosirühm vähendasid LPO-d ajukoes kontrollrühma tasemele (tabel 6).

Tabel 6: Liha Axuni mõju plasma, maksa ja lipiidperoksiidi (LPO) tasemele vabade radikaalide kahjustuse hiiremudelis

3 Arutelu

Vananemine on eluprotsessis positiivne nähtus. Kodumaa traditsiooniline meditsiin on vananemisvastastel aastatel kogunud rikkalikke kogemusi ja ravimiallikaid. Viimastel aastatel on kodumaised teadlased keskendunud tõhusate vananemisvastaste ravimite leidmisele traditsioonilisest Hiina meditsiinist. Praegu vaadatakse üha enam keha vananemise vabade radikaalide teooriat. Kuigivabad radikaalidtekivad organismis normaalsetes tingimustes, on koerakud kaitstud tänu SOD ja muude hapnikutoksilisuse vastaste ensüümsüsteemide pidevale eemaldamisele. Oa on tugev oksüdeerija. , Võib käivitada vabade radikaalide reaktsiooni kehas. Liigne hapniku sissehingamine põhjustabvabad radikaalidorganismis, mis ületab organismi tolerantsusevastase stele süsteemi eemaldamisvõime, kahjustades nukleiinhappeid, valke, aminohappeid, süsivesikuid ja lipiidühendeid, kahjustades seeläbi rakkude moodustumist ja talitlust ning põhjustades vananemist ⑶. See katse näitab, et pärast hapniku sissehingamist7 väheneb hiirte füüsiline tugevus, suutlikkus soojas hoida ja hüpoksiataluvus, sarnaselt vanade loomade füsioloogilise funktsiooni langusega. See näitab, et noored hiired võivad pärast d stimulatsiooni saamist põhjustada vananemismudelit.Cistancheon eeltoodud näitajate muutusi oluliselt parandanud.

Superoksiidvabad radikaalideksisteerivad organismis lühikest aega ja elimineeritakse peamiselt SOD abil. Üldiselt kajastub SOD aktiivsuse mõõtmine või tase. Loomulikult vananevate hiirte ja vabade radikaalide poolt kahjustatud hiirte organismis vähenevad mitmesugused antioksüdandid, Mäda aktiivsus väheneb, vähendades seeläbi nende puhastamise võimet.vabad radikaalid, mis põhjustab lipiidperoksiidide sisalduse suurenemist. B-tüüpi monoamiini oksüdaasi (MA0-B) aktiivsus ajus suureneb koos vanusega. MAOB on keskse hüpotalamuse vananeva bioloogilise kella peamine kontroll. Kellavärk on tihedalt seotud vananemisega. ⑴. MA0-B aktiivsus hiirte ajus selles eksperimentaalses mudelirühmas on suurenenud, mis näitab biokeemilisi muutusi, mis vastavad vananevate loomade omadele.