Intravenoosse glutamiini mõju kaspaasi-12 ekspressioonile tsisplatiiniga kokkupuutuvate isaste rottide glomerulaarsete epiteelirakkude apoptoosis
Mar 17, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Tamara Aulia Fakhrinnisal,Imam Susilo,Arifa Mustika, Miyayu Soneta Sofyan
Sissejuhatus
Ainevahetushaiguste, eriti neeruhaiguse levimus Indoneesias on kõrge trend. Ravikindlustust haldava agentuuri (BPJS) 2017. aasta andmete põhjal hõlmas riik 3 657 691 kroonilise neeruhaiguse dialüüsi protseduuri registreeritud juhtumit, mille kogumaksumus oli 3,1 triljonit IDR-i. Üks neerupuudulikkuse etioloogiaid on nefronite püsiv kahjustus toksiinide poolt.
Tsisplatiin on tugev kemoteraapia ravim, mida kasutatakse laialdaselt pahaloomuliste kasvajate, sealhulgas pea ja kaela, söögitoru, põie, munandite, munasarjade, rinna- ja mitteväikerakk-kopsuvähi raviks (Fillipski et al., 2008; Reck, et al.,2010). Tsisplatiini kliiniline kasutamine on siiski piiratud elundite kõrge toksilisuse mõju tõttu, nagu nefrotoksiline, neurotoksiline, ototoksiline ja hepatotoksiline toime (Karasawa ja Steyger, 2015; Guo et al.,2018). Tsisplatiin põhjustab apoptoosi väiksemates annustes (10-100uM) ja nekrootiliste rakkude surma suuremates annustes (200-800 μM)(Hanigan ja Devarajan, 2003)Rohkem kui 70% pediaatrilistest patsientidest, kes said tsisplatiini, kogevad neerufunktsiooni häireid (Skinner et al.1998). Lisaks esineb äge neerukahjustus 20-30% kõigist manustatud patsientidest (Miller et al., 2010). Neerufunktsiooni häire algab tavaliselt mõni päev pärast tsisplatiini (50-120 mg/m²) manustamise standardannust ja seda väljendab seerumi kreatiniini ja vere karbamiidi lämmastiku (Akcay et al.2010) kasvav tase, Tsisplatiini ravi kutsub esile massiivse torukujulise laienemise ja valatud moodustumise mitmes tubule luumenis. Aeg-ajalt täheldatakse ka fokaalset torukujulist nekroosi, neerutuubulite ja Bowmani kapsli alusmembraani paksenemist ning fokaalset mononukleaarsete rakkude infiltratsiooni. Samuti esineb neerutorukujulisi kahjustusi koos epiteelirakkude vakuoliseerimise ja desquamatsiooniga. Mõned glomeruli kogevad nekroosi ja normaalsed jääkglomerulid näitavad sageli laienenud periglomerulaarseid ruume.
tsektosiid tsistanche'is avaldab neerudele head mõju
Üks tsisplatiini nefrotoksilistest mehhanismidest on apoptoos, mis on programmeeritud rakusurma rada, mida tsisplatiin aktiveerib mõnede mehhanismide kaudu. Tsisplatiin vähendab bcl-2 ekspressiooni mitokondriaalses rajas, mis väidetavalt pärsib apoptootiliste molekulide arengut (Oltvai ja Korsmeyer, 1994). Surmaretseptori radades aktiveerib tsisplatiin Fas-st sõltuvaid radu ja apoptoosi kas in vivo (Noga et al.,1998) või in vitro (Feldenberg et al., 1999). Tsisplatiin aktiveerib ka kaspaasi rajad. Kaspaasi-3 rolli kohtab esmakordselt kultiveeritud torukujuliste proksimaalsetes rakkudes, mis reageerivad tsisplatiinile, suurendades kaspaasi-3 aktiivsust annusest sõltuval viisil (Fukuoka et al,1998; Lau, 1999). Järgmised uuringud on näidanud kaspaasi-9 aktiveerimist ja vähemal määral kaspaasi-8 aktiveerimist (Kaushal et al.2001:Park et al., 2001).
IntravenoosseGlutamiin(Gln või Q) on α-aminohape, mida kasutatakse valgu biosünteesis. See on üks glutatiooni tootmise koostisosi, mis on tugev antioksüdant. Ühekordne annusintravenoosne glutamiin(0,15-0,75 g/kg)võib suurendada HSP ekspressiooni, vähendada lõpporgani vigastusi ja parandada hiirtel septilise šoki elulemust (Wischmeyer, 2002).IntravenoosseGlutamiinsamuti suurenenud veresoonte reaktsioonivõime, indutseerides HSP ekspressiooni ja pärssides põletikuliste tsütokiinide ja peroksiidi biosünteesi vabanemist LPS-i šokihiirtel (Jiang et al.. 2017).IntravenoosseGlutamiinvõib vähendada ka apoptoosi, inhibeerides oksüdatiivset stressi, nagu on täheldatud uuringute tulemuste põhjal, milles kasutati a2,4,6-trinitrobensenseenist sulfoonhappe poolt indutseeritud koliidiga hiiri (Crespoet al.2012)
Kaspaasi-12 taset glomerulaarses epiteelis ei ole uuritud, kuigi glomerulusele saadud toksiiniga kokkupuute aeg on kõrge ja epiteelirakud puutuvad kokku kõigepealt siis tubulitega. Uuring on näidanud, et Bowmani kapslitel on roll normaalse glomeruluse füsioloogilises funktsioonis. Podotsüütide vigastus stimuleerib Bowmani kapsli parietaalsete rakkude aktiveerimist, mis ulatuvad glomerulaarsesse talasse, mille tulemuseks on segmentaalne ja globaalne skleroos, tekitades rohkem maatrikseid ja hävitades glomerulus kapillaaride luumeni (Al Hussain et al., 2017).
Selle uuringu eesmärk on analüüsida nefrofprotektiivset toimet.intravenoosne glutamiinglomerulaarsetel epiteelirakkude apoptoosil, uurides kaspaasi-12 ekspressiooni, mis on endoplasmaatilise retiikulumi stressiraja apoptoosi algataja. Pre-kaspaasi-12 leidub endoplasmaatilises retiikulumis, eriti neeru proksimaalsetes tubulites. intravenoosne glutamiineeldatavasti on see alternatiivne lahendus tsisplatiini kemoteraapia meetoditest põhjustatud neerupuudulikkusele.
Materjalid ja meetodid Loomad ja ravi
Selle uuringu kiitis heaks Universitas Airlangga meditsiinikooli terviseuuringute eetikakomitee (nr 25/C/KEPKFKUA/2020). Selles uuringus saadi 30 isast valget rotti (Rattus norvegicus), vanuses 2-3 kuud kehakaaluga 150-200 grammi, veterinaarmeditsiini teaduskonna eksperimentaalsest loomade üksusest Universitas Airlangga. Igaüks neist hoiti eraldi anaplastilises kastis, vooderdatud põhjas olevate kestadega ja seejärel kaetud kootud juhtmetega. Kestad vahetati välja iga päev.
Kemikaalide
IntravenoosseGlutamiinsaadi Servalt (Saksamaa). IntravenoosseGlutamiinlahus valmistati 0,9% NaCl,annusega l g glutamiini 10 ml 0,9% NaCl. Glutamiiniannus süstitakse 100 mg/kg kehakaalu(BW) kohta ja ühekordne süst tehakse maksimaalselt 0,2 ml IV. IntravenoosseGlutamiinsüstiti intravenoosselt roti sabasse, kasutades 1 ml 27-kaliibrilist süstalt.
Tsisplatiini materjal saadi Kalbe Farmast (Indoneesia) annusega 20 mg/kg BW, manustati intraperitoneaalse süstimise teel I ml 27-gabariidilise süstla abil. Samuti kasutasime primaarseid antikehiCaspase-12 (polüklonaalne antikeha PA5-27094 Thermo Scientific) ja apoptoosi tuvastamise komplekti Situ CellPOD-s (11684817910ROCHE).
Eksperimentaalne disain
Selles uuringus jagati uuringu alguses juhuslikult 30 Wistari isast valget rotti kolme rühma. Kontrollrühm (PO) ohverdati emakakaela dislokatsiooniga pärast anesteesiat eetriga ja seejärel võeti neerud immunohistokeemia valmistamiseks.
7. päeval manustati P1 rühma tsisplatiiniga ühekordse annusega 20 mg/kg BW intraperitoneaalse süstimise teel ja seejärel täheldati seda 72 tunni jooksul. Rotid ohverdati 10. päeval emakakaela nihestusega pärast anesteesiat eetriga ja seejärel võeti neerud immunohistochemistry ettevalmistamiseks. Täitmise aeg on tingitud glomerulaarsetest epiteelirakkudest apoptoos tekib pärast tsisplatiini süstimist 10. päeval (Tsuruya jt. 2003).IntravenoosseGlutamiinannuses 100 mg/kg BW üks kord päevas intravenoosse süstimise teel 1. päevast kuni 7. päevani (Zhang et al.2009). 7. päeval manustati rotte tsisplatiiniga ühekordse annusega 20 mg/kg BWvia intraperitoneaalne süst. Seejärel jälgiti rotte 72 tunni jooksul ja seejärel ohverdati 10. päeval emakakaela dislokatsiooni kaudu pärast anesteesiat eetriga. Hiljem võeti neerud ka immunohistochemistry preparaadiks.
Histopatoloogiline ettevalmistus
Neerukude fikseeriti 10% formaliinis 15-24 h. Dehüdratsioon viidi läbi 60 minutit, kasutades alkoholi seeriat (30%,50%,70%,80%,96% ja absoluutset kontsentratsiooni), et vältida muutusi koe morfoloogias. Seejärel tehti ksülooli abil puhastamine kaks korda (igaüks 60 minutit). Seejärel tehti õrna parafiiniga sisseimbumine 60 minutit temperatuuril 48 °C °C. Hiljem blokeeriti kõva parafiin hallituses ja säilitati l-päevaks. Järgmisel päeval asetati karastatud hoidikule ja lõigati pöörleva mikrotoomi abil 4-5-um-paksusteks osadeks. Pärast seda teostati klaasi paigaldamine objektiklaasile polü-L-lüsiini kattega. Paigaldatud kude kasteti ksülooli kaks korda (igaüks 5 minutit). Pärast seda viidi rehüdratsioon läbi alkoholi seeria (absoluutne,96%, 80%, 70%, 50% ja 30% kontsentratsioon) abil 5 minutit. Seejärel loputati seda dH-s, O-s 5 minutit.
CSP immunohistokeemiline analüüs12
Slaide pesti üks kord fosfaadipuhvriga soolalahusega (PBS)(Millipore 524650) pH 7,4 juures 5 minutit kolm korda. Endogeense peroksiidi blokeerimine viidi läbi 3% H2O2 abil 20 minutit. Seejärel pesti slaidid enne blokeerimisravi uuesti sama protseduuriga. Valgu mittespetsiifiline blokeerimine toimus 5% PBS(Millipore 524650) abil, mis sisaldas0,25%TritonX-100 (Sigma-Aldrich T8787) ja seejärel korrake pesemisprotseduuri. Primaarsete antikehade inkubeerimine kaspaas-12 (polüklonaalne antikeha PA5-27094 Thermo Scientific) toimus üleöö 40 °C juures. Pärast seda pesti slaide PBS-i (Millipore 524650), pH 7,4, kolm korda 5 minuti jooksul. Inkubatsioon hiirevastase biotiiniga konjugeeritud inkubatsioon toimus 1 h toatemperatuuril, seejärel korrati pesemisprotseduuri. Inkubatsioon streptavidiini-hobuse redise peroksüdaasi (Thermo Fisher Scientific NI00) abil toimus 40 minutit ja seejärel pesti veel kord. Seejärel lisati slaidid dioomiga tilkadega bensidiinis (DAB)(Thermo Fisher Scientific 3400) ja inkubeeriti 10 minutit ning seejärel pesti sarnase protseduuriga. Counterstaining kasutas Mayeri hematoksüliini lahust (Sigma-Aldrich MHS32) 10 minutit, seejärel pesti kraaniveega, loputati dH2O-ga ja kuivatati õhu käes. Valmistatud slaide täheldati valgusmikroskoobi abil suurendusel 400× pärast paigaldatud ja klaaskattega kaetud. Positiivne molekulaarne ekspressioon primaarsete antikehadega tundub täheldamisel pruun. Arvutatud glomerulaarsed epiteelirakud asusid neerukorpuse piirkonnas, mida iseloomustas lame epiteelirakkude kiht Bowmani ruumi parietaalses osas.
Apoptoosi uurimine
Kudede halvustamine viidi läbi koe pesemisega kolm korda ksüleeniga (Supelco 108297) 5 minutit. Kude leotati kaks korda absoluutses etanoolis igaüks 5 minutit ja seejärel kanti üle 95% etanoolile ja 70% etanoolile 3 minuti jooksul. Kude pesti PBS-iga (Millipore 524650) 5 minutit.
Antigeeni omastamine toimus, andes proovile 15 minutiks proteaasi K (Sigma-Aldrich 70663). Seejärel pesti kude kaks korda HO-ga Coplini torus 2 minutit. Endogeenne peroksüdaas eemaldati tilgutades 3% H, O, PBS ja jäeti toatemperatuuril 5 minutiks. Seejärel pesti kude kaks korda PBS-iga (Millipore 524650) igaüks 2 minutit Coplini torus. Liigne vedelik kuivatati paberiga. Koele langes umbes 75 ul tasakaalustamispuhvrit ja inkubeeriti seejärel toatemperatuuril 10 minutit. Seejärel kuivatati koe ümbritsev vedelik paberiga. Ensüümide aktiivsus vähenes TdT (Sigma-Aldrich SAB5600268) kudedes 55ul/5 cm võrra. ja seejärel inkubeeriti kude 37 °C juures niiskes anumas l h jaoks. Preparaadid paigutati Koplini purki, mis sisaldas tugevat puhvrit/puhastustööd, ja inkubeeriti seejärel toatemperatuuril 10 minutit. Preparaate pesti neli korda PBS-iga (Millipore 524650)2 minutit Coplini purgis toatemperatuuril. Liigne vedelik koe ümber kuivatati paberiga. Digoksigeniinivastane (Roche 11333089001)konjugaat, mis oli varem laost eemaldatud ja toatemperatuurini soojendatud, langes koepinnale 65 ul/5 cm² ja inkubeeriti seejärel toatemperatuuril 30 minutiks. Preparaati pesti neli korda PBS-iga (Millipore 524650)Coplini purgis 2 minutit toatemperatuuril. Seejärel kuivatati koe ümber olev liigne vedelik paberiga. Värv paljastati pärast peroksüdaasi substraati (Sigma-Aldrich CPS160)tilka 75μl/5cm2 koe pinnale ja jäeti toatemperatuuril 10min. Preparaate pesti kolm korda DH-ga, O-ga ma min Coplini purkides ja seejärel inkubeeriti DH, Oin Coplini purkidega 5 minutit toatemperatuuril. Metüülroheline vastulöök (Sigma-Aldrich M8884) viidi läbi 30ndatel toatemperatuuril. Seejärel pesti preparaati kolm korda dH.O-ga 1 minuti jooksul Coplini ar. Preparaate puhastati ksüleeniga (Supelco 108297) ja liigne vedelik koe ümber kuivatati paberiga. Preparaate vaadeldi valgusmikroskoobi abil suurendusel 400× ja igas vaateväljas loendati glomerulaarse neeruepiteeli pruunid epiteelirakud.
Statistiline analüüs
Suhe oli kaspaasi-12 ekspresseerivate rakkude ja apoptootiliste rakkude kasutatav andmeskaala, mistõttu oli vaja läbi viia normaalsuse test, kasutades Shapiro-Wilki testi (α=0,05) ja homogeensuse testi, kasutades Leaveni testi (α=0,05). Kui tulemused olid normaalses jaotuses ja homogeensed, viidi läbi teine test, kasutades ühesuunalist ANOVA-d (α = 0,05). Kui tulemused olid normaalsed, kuid heterogeensed, siis viidi läbi Kruskal-Wallis (α=0,05). Kui saadud andmed on erinevad. seejärel järgnes analüüsile Mann-Whitney U test (α = 0,05). Lõpuks viidi Pearsoni korrelatsioonitest läbi, et selgitada välja kaspaasi-12 ekspresseerivate rakkude ja apoptootiliste rakkude vaheline korrelatsioon.
Tulemused
Glomerulaarsed epiteelirakkude morfoloogia
Enne kaspaasi-12 ekspresseerivate rakkude ja apoptootiliste rakkude jälgimist täheldati Bowmani kapsli neeruepiteeli morfoloogiat esmakordselt hematoksüliini-eosiini (HE) värvimisega 400× suurendusel. Vaadeldav objekt valiti juhuslikult, et esindada iga rühma histoloogilist pilti. Tsisplatiini leidus aeg-ajalt fokaalses torukujulises nekroosis, alusmembraani paksenemises neerutuubulites ja Bowmani kapslites ning fokaalsete mononukleaarsete rakkude infiltratsioonis glomeruluses. Mõned glomeruli kogevad nekroosi ja normaalsed jääkglomerulid on sageli laienenud periglomerulaarsed ruumid.
Kaspaas-12 valgu ekspressioon ja apoptootilised rakud glomerulaarsetes epiteelirakkudes
Immunohistokeemiliselt värvitud neerukoe tulemused näitasid muutusi kaspaasi-12 ekspressioonis igas rühmas. Tsisplatiini süstimise manustamisel rühmas P1 oli kaspaasi-12 keskmine ekspressioon pärast 72 h (4,1±0,86) võrreldes kontrollrühmaga (P0). Glutamiini süstimise ja tsisplatiini süstimise (P2) manustamisel esines kaspaasi-12 keskmine ekspressioon pärast 72 h (2,54± 0,72) manustamist võrreldes P1-ga (tabel 1).
Pealegi oli pi-rühma tsisplatiini süstimisel suurem rakuapoptoosi määr pärast 72 tunni möödumist (52,7±17,06) võrreldes kontrollrühmaga (P0). Glutamiini süstimise ja tsisplatiini süstimise manustamisel P2-s esines kaspaasi-12 keskmine ekspressioon pärast 72 h (31,5±6,73) ekspressiooni võrreldes PI-ga (tabel 1). Kruskal-Wallise test näitas erinevusi kaspaasi-12 ekspresseerivate glomerulaarsete epiteelirakkude arvus ja apoptootiliste rakkude arvus kolmes ravirühmas. Seejärel jõudis Mann-Whitney U test järeldusele, et kaspaasi-12 valku ekspresseerivate parietaalsete epiteelirakkude arv ja Apoptootiliste rakkude arv P1 ja P2 rühmade vahel kontrollrühmaga ning Pl ja P2 rühmade vahel esines erinevusi. Samuti esines erinevusi kaspaasi-12 valku ekspresseerivate parietaalsete epiteelirakkude arvus ja rakuapoptoosi arvus (tabel 2).
Korrelatsioon capase-12 ekspressioonirakkude ja apoptootiliste rakkude vahel
Pearsoni korrelatsioonitesti tulemused näitasid, et kaspaasi ekspresseerivate glomerulaarsete epiteelirakkude ja apoptoosi läbinud rakkude arvu vahel on märkimisväärne korrelatsioonikoefitsient 0,707, mis on tugev ja positiivne. Seega võib järeldada, et kui valgu ekspressioonirakkude arv väheneb, väheneb ka apoptootiliste rakkude arv ja vastupidi.
Tabel 1. Kaspaasi-12 ekspressiooni ja apoptootiliste rakkude kirjeldav statistika. P0: kontrollrühm. P1:tsisplatiinsüstimine 7. päeval. P2-d ravitiIntravenoosseglutamiinsüstimine 7 päeva järjest enne süstimisttsisplatiinSeitsmendal päeval. | Tabel 2. Manni–Whitney U testi tulemused |
 |  |
Arutelu
Selles uuringus viidi ravi läbi katseloomadel, kes jagati kolme rühma: kontrollrühm (PO); PI-rühm, kellele tehti intraperitoneaalne tsisplatiinisüst; ja P2 rühmale, kes sai intraperitoneaalse tsisplatiini süsti jaintravenoosne glutamiinSüsti. Ravivastust täheldati 72 tunni jooksul pärast ravi, sest apoptoos ilmnes pärast 72 h tsisplatiini süstimist (Tsuruya jt). 2003). Selles uuringus vaadeldud sait oli glomerulaarne epiteel. Seni ei ole veel uuritud tsisplatiini nefrotoksilisust glomerulaarses epiteelis. Glomerulus on proksimaalsem kui tubulid ja seetõttu arvatakse, et tsisplatiini nefrotoksilisus mõjutab seda varem kui tubulid.
Kaspaasi-12 ekspressiooni taseme erinevused olid otseselt proportsionaalsed glutamiini manustamise tasemega igas ravis. Neid tulemusi toetab uuring, milles väideti, et glutamiin võib põhjustada HSP ekspressiooni kõrget taset kõigis elundites, sealhulgas neerudes (Zhang et al., 2009). Ühekordne annusintravenoosne glutamiinvõib suurendada HSP ekspressiooni, vähendada lõpporgani vigastusi ja parandada ellujäämist septilisest šokist tervetel hiirtel (Wischmeyer, 2002). Glutamiini tsütoprotektiivsed ja antioksüdantsed omadused võivad olla üliolulised kõrge katabolismi olukorras, kus moduleeritakse NF-kB vahendatud põletikuliste radade aktiivsust ja ekspressiooni (Cruzat et al., 2014). On teatatud, et plasma glutamiini kättesaadavuse vähenemine põhjustab lümfotsüütide vohamise vähenemist, kahjustab pinna aktiveerimise valkude ekspressiooni ja tsütokiini tootmist ning indutseerib rakkudes apoptoosi (Roth. 2008). See võib olla põhjus, miks glutamiin võib selles uuringus takistada rakke apoptoosi suunas.
Nagu tulemustes mainitud, vähendas glutamiini manustamine tsisplatiiniga ravitud rakkude apoptoosi. Vastupidist on tõestanud Kadri jt (2017) uuring, kus glutamiini metabolismi pärssimine võib suurendada mõnede raviravimite, näiteks tsisplatiini tsütotoksilist potentsiaali, võimaldades seeläbi kemoteraapiaühendite annuse vähenemist toksilisuse ja kõrvaltoimete minimeerimiseks.
Rakusurma mehhanismid sõltuvad tsisplatiini manustamisannusest kas nekroosi või apoptoosi teel (Lieberthal et al,1996). In vitro katsetes põhjustavad tsisplatiini madalad kontsentratsioonid rakkude apoptoosi, samas kui nekroos suurtes kontsentratsioonides (Megyesi et al.1998: Ramesh ja Reeves.2003). Selles uuringus piisas annusest, et epiteelirakud läbiksid apoptoosi.
Käesolevas uuringus näitas tsisplatiini süstimine P1-s 72 tunni pärast suuremat rakuapoptoosi määra kui kontroll(PO). Samuti leidsime, et glutamiini ja tsisplatiini süstimine P2-s väljendas madalamat kaspaasi-12 ekspressiooni pärast 72 h ekspressiooni võrreldes P1-ga.
Apoptoos pärast tsisplatiini ravi võib hõlmata ka ER-stressi rada. Kaspaasi algataja ER-rajal on kaspaas-12, mis paikneb ER-i tsütosoolsele näole ja aktiveeritakse ER-rõhuga (Boyce ja Yuan, 2006). Kaspaas-12 aktiveeritakse tsisplatiini töötlemisel LLC-PK1 rakkudes (Liu ja Baliga, 2005). In vitro vaatlusi on hiljuti laiendatud tsisplatiini nefrotoksilisuse hiiremudelitele, kus täheldati ER-i pingeid ja sellega seotud signalisatsiooni, nagu kaspaasi-12 lõhustamine(Peyrou et al., 2007).
Võib järeldada, et tsisplatiini manustamisest tingitud apoptoos tekib kaspaasi-12 ekspressiooni suurenemise tõttu, mis indutseerib neeruglomerulaarsetes epiteelirakkudes apoptoosi. 72 h vaatlust pärastintravenoosne glutamiinmanustamine, apoptoosi esinemissagedus neeruglomerulaarsetes epiteelirakkudes oli oluliselt pärsitud(p<0.0001)between the="" groups="" and="" was="" directly="" proportional="" to="" the="" effect="" of="" glutamine,="" which="" inhibited="" the="" expression="" of="">
Kokkuvõtteks võib öelda, et tulemuste põhjal väheneb kaspaasi-12 ja apoptootiliste rakkude ekspressioon isaste valgete rottide glomerulaarsetes epiteelirakkudes, mis puutuvad kokku tsisplatiiniga pärastintravenoosne glutamiinadministratsioon. Kaspaasi-/2 vähenenud ekspressioonintravenoosne glutamiinmanustamisele järgneb apoptoosi vähenemine glomerulaarses epiteelis. Seega eeldatakse, et neeruglomerulaarse epiteeli immunohistokeemilist uurimist võib kasutada tsisplatiini nefrotoksilise toime markerina.
Selle uuringu piirang on erinevad muutujad ei ole täheldatud. Uurija ei teinud testamenditäitja kaspaasile (kaspaasi-3) märkusi, sest uurija soovis näha, et ravi olulisus viidi läbi algataja kaspaasis. Selles uuringus ei täheldatud ka apoptoosi esinemissagedust kahel või enamal marsruudil. Sellisel juhul soovib teadlane proovida kõigepealt läbida ühe marsruudi ja ei ole vaja uurida rohkem kui ühte marsruuti, kui tulemused on märkimisväärsed. Samuti on soovitatav teha täiendavaid uuringuid selle kohta, kuidasintravenoosne glutamiinintravenoosne tsisplatiini kemoteraapiat saavatele inimestele ja ka vähiga looma ravile, et oleks võimalik täheldada glutamiini toimet vähirühmas ja mitte-vähki.
Joonis 1. Glomerulaarsete epiteelirakkude morfoloogia pärast CSP-12 antikeha. P0:kontrollrühm. P1:tsisplatiini süst 7" päeval. P2 töödeldudintravenoosne glutamiin7 päeva järjest, enne kui nakatute tsisplatiiniga 7 h päeval. Positiivne tulemus näitas pruuni tsütoplasmaga. | Joonis 2. Glomerulaarsete epiteelirakkude morfoloogia pärast apoptoosi avastamise komplekti. Ostutellimuse: kontrollgrupp. P1:tsisplatiini süstimine 7" päeval. P2 töödeldudintravenoosne glutamiinsüstida 7 päeva järjest, enne kui seda süstitakse tsisplatiiniga 7 päeva jooksul. Positiivne tulemus näitas pruuni tsütoplasmaga. |
 |  |
Viited
AkcayA, Turkmen K, Lee D, Edelstein CL(2010). Värskendus ägeda neerukahjustuse diagnoosimise ja ravi kohta. Int J Nephrol Renovasc Dis, 3,129-40
Al Hussain T, Al Mana H, Hussein M, Akhtar M (2017). Podotsüütide ja parietaalsete epiteelirakkude koostoimed tervises ja haigustes. Ady Anat Pathol, 24,24-34.
Bovce M. Yuan J(2006). Rakuline reaktsioon endoplasmaatilisele retiikulumi stressile; Elu ja surma küsimus. CellDeathDiffer, 13,363-73
Crespo I, San-Miguel B, Prause C.et al (2012). Glutamiiniravi suurendab endoplasmaatilist retiikulum stressi ja apoptoosi TNBS-i indutseeritud koliidis. PLoS One,7,50407 Cruzat VF, BittencourtA, Scomazzon SP jt (2014). Glutamiini lisamise suukaudsed vabad ja dipeptiidivormid vähendavad endotoksemiast põhjustatud oksüdatiivset stressi ja põletikuiooni. Toitumine, 30 602-11
Feldenberg LR,Thevananther S,Del Rio M, De Leon M, Devarajan P(1999). Osaline ATP ammendumine indutseerib Fas-ja kaspaasi vahendatud apoptoosi MDCK rakkudes. Am.J/ Physiol (Neerufüsiool),276.837-46.
Fillipski KK,Loos WJ, Verweij J, Sparreboom A(2008). Tsisplatiini koostoime inimese orgaanilise katioontransportööriga 2. Clin Cancer Res, 15,3875-80
Fukuoka K, Takeda M, Kobayashi M et al (1998). Erinevad interleukiin-1β-konverteerivad ensüümi perekonna proteaasid vahendavad hiire proksimaalsete torurakkude tsisplatiini ja staurosporiini poolt indutseeritud apoptoosi. Elu Sei, 62.1125-38.
Guo Y, Wang M,MouJ,etal(2018). Huaiqihuangi ekstrakti eelravi kaitseb tsisplatiinist põhjustatud nefrotoksilisuse eest. Sci Rep,8, 7333
Hanigan MH. Devarajan P(2003). Tsisplatiini nefrotoksilisus: molekulaarsed mehhanismid. Vähk Ther,1,47-61
Jing L, Wu O, Wang F(2017). Glutamiin indutseerib kuumašoki valku ja kaitseb Escherichia coli eest
Märkus:ülaltoodud ei ole täielik viiteloend
