Pikaajaline ex-vivo normotermiline neeruperfusioon: perfusaadi koostise mõju
Feb 26, 2022
Abstraktne
Doonori normotermiline masinperfusioon (NMP).neerud annab võimaluse transplantaadi paremaks säilimiseks ja objektiivseks siirdamiseelseks elundite ex vivo hindamiseks. Praegu on neerude NMP jaoks olemas palju perfusioonilahuseid. Selle uuringu eesmärk oli hinnata nelja erinevat perfusioonilahust kõrvuti ja määrata erinevate perfusioonikompositsioonide mõju mõõtmisele.neeru-perfusiooni parameetrid. Sealihaneerudja veri saadi tapamajast.Neerudläbis NMP 37 ˚C juures 7 tundi 4 erineva perfusioonilahusega (n=5 rühma kohta). 1. rühm koosnes punastest verelibledest (RBC) ja Williamsi söötmel E põhinevast perfusioonilahusest. 2. rühm koosnes punastest verelibledest, albumiinist ja tasakaalustatud elektrolüütide koostisest. Rühm 3 sisaldas RBC-sid ja söödet, mis põhines Briti kliinilisel NMP lahusel. 4. rühm sisaldas punaliblesid ja söödet, mida kasutati 24-tunnistes perfusioonikatsetes. NMP voolumustrid lahenduste 1 ja 2 jaoks olid sarnased, lahendused 3 ja 4 näitasid madalamaid, kuid stabiilsemaid voolukiirusi. Tiobarbituurhappega reaktiivseid aineid oli lahustes 1 ja 4 võrreldes teiste rühmadega oluliselt rohkem. Vigastusmarkeri N-atsetüül- -D-glükosaminidaasi tase oli lahuses 2 võrreldes lahusega 3 ja 4 oluliselt madalam. See uuring näitab, et perfusaadi koostis NMP ajal mõjutab oluliselt mõõdetud perfusiooni- ja vigastusparameetreid ning mõjutab seega tõlgendust potentsiaalsete elujõulisuse markerite kohta. Perfusaadi peamiste komponentide individuaalsete mõjude uurimiseks on vaja täiendavaid uuringuid, et määrata NMP ajal kõige optimaalsemad tingimused ja lõpuks töötada välja universaalsed elundite hindamise kriteeriumid.
Märksõnad:neerufunktsioon; neerud; neerukahjustus; neerud perfuseeritud ; neerutorukujuline
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU FUKTSIOONI
Sissejuhatus
Kogu maailmas tavaline doonorneerudsäilitusmeetod on staatiline külmhoone (SCS). Hollandis kasutatakse hüpotermilist masinperfusiooni (HMP) aga kliiniliselt kõigi surnud doonorite säilitamiseksneerud.HMP näitas transplantaadi hilinenud funktsiooni vähenemist ja paranemist 1- ja 3-aastaneeru-siiriku ellujäämine võrreldes SCS-i säilimisega [1,2]. Et minimeerida olulist lõhet doonori pakkumise ja nõudluse vahelneerud,suboptimaalne surnud doonorneerudkasutatakse üha enam. Nende ebaoptimaalse kvaliteediga doonorite suurenenud kasutamise tõttuneerud,ülimalt oluline on luua veelgi optimeeritud strateegiad tugevaks ja objektiivseks siirdamiseelseks hindamiseks ja säilitamiseks. Normotermilise masinperfusiooni (NMP) kasutamine nende surnud doonori puhulneerudüha enam kaalutakse. Prekliinilised uuringud on näidanud, et NMP võib viia parema siirdamise tulemuseni kui ainult SCS-ga [3]. Doonorlusena pärast südamesurma ja laiendatud kriteeriumide doonoriksneerudNad taluvad hüpotermilist säilitamist vähem kui standardkriteeriumide alusel doonoriprotseduuride alusel saadud elundid, võiks NMP säilitamisest kasu olla ka marginaalse kvaliteediga doonororganitele [4,5]. Praegu on ainult üks kliinilineneeru-Ühendkuningriigis viiakse läbi NMP uuring suhteliselt lühikese siirdamiseelse perfusiooniperioodiga, 1 tund [6]. Elundite adekvaatseks hindamiseks ja elustamiseks on aga mõeldav pikem NMP aeg [7]. See meetod annab võimaluse teostada siirdamiseelset elundidiagnostikat, parandada säilivust ja teha enne siirdamist ex vivo sekkumisi, et parandada siirdamisjärgsetneerufunktsioon. Tänapäeval on paljud siirdamiskeskused hakanud investeerima sellesse paljulubavasse normotermilisse ex vivo perfusioonistrateegiasse. Nende keskuste hulgas on lai valik NMP perfusioonilahuseid. Kompositsiooni suur heterogeensus võib takistada lõppeesmärki määratleda ühtsed ja kindlad NMP hindamiskriteeriumid. See heterogeensus on osaliselt tingitud praegu piiratud arusaamast sellest, milline peaks olema NMP lahuse täpne koostis. Tõenäoliselt peab normotermiline perfusioonilahus sisaldama hapnikukandjat, kolloidi ja tasakaalustatud elektrolüütide koostist [8]. Koostis sõltub ka NMP kestusest, kuna pikemad perfusiooniperioodid nõuavad optimeeritud perfusioonikompositsioone, et säilitada stabiilne peaaegu füsioloogiline keskkond kogu perfusiooni vältel. Selles uuringus hinnati nelja erinevat normotermilist perfusioonilahust, kolme tavapäraselt kasutatavat olemasolevat lahendust, milles muudatusi ei tehtud, ja ühte äsja välja töötatud lahendust. Tegime sigadel pikaajalist (7h) NMP-dneerudannetusmudel. Meie eesmärk oli analüüsida, mil määral mõjutavad erinevad perfusaadi koostised tervikuna elektrolüütide tasakaalu,neerufunktsioonja NMP ajal mõõdetud vigastusmarkerid.
materjalid ja meetodid
Neerude ja vere väljavõtmineElujõuline siganeerudkodumaistelt maatõugu sigadelt (emis; tüüp Topigs 20) ja veri saadi kohalikust tapamajast (Kroon Vlees, Groningen, Holland). Sigu uimastati bi-temporaalse elektrilöögiga ja seejärel veretustatakse vastavalt tavapärastele tapamaja protseduuridele. Koguti autoloogne veri ja vere hüübimise vältimiseks lisati hepariini (5000 rahvusvahelist ühikut ml kohta (IU), LEO1 pharma, Ballerup, Taani).Neerudsaadi kiiresti pärast sea surma surma, mille tulemuseks oli umbes 20 minutit sooja isheemiat (WI) enne külmsäilitamist. Pärast WI perioodineerudloputati ja jahutati 180 ml naatriumkloriidi (NaCl) (0,9 protsenti) (Baxter BV, Utrecht, Holland) temperatuuril 4 °C, mis tähistas külmaisheemia (CI) algust.Neerudlõigati lahti liigsest rasvkoest ja paljastati veresooned. Järgmiseksneerudolid ühendatud aNeerAssist Transport HMP seade (Organ Assist, Groningen, Holland). See HMP masin säilinudneerudkülma (0–4˚C) UW masinperfusioonilahusega (Belzer UW-MP lahus, Bridge to Life Ltd, Columbia, SC) 2–4 tundi, kasutades hapnikuga rikastatud pulseerivat HMP-d keskmise arteriaalse rõhuga 25 mmHg . Hepariniseeritud autoloogne veri eemaldati leukotsüütidest, kasutades leukotsüütide filtrit (BioR 02 pluss BS PF, Fresenius Kabi, Zeist, Holland), tsentrifuugiti ja seejärel eemaldati supernatant plasma.
PerfusioonilahusedMäärati neli katserühma (n=5 rühma kohta), kusjuures igas rühmas oli erinev NMP lahus. Enneneerudotsimisel määrati katse ajal kasutatav perfusioonilahus. Kõik neli perfusioonilahust sisaldasid sigade autoloogseid punaseid vereliblesid (RBC), kuid iga NMP söötme koostis oli erinev (tabel 1). Meie laboris on saadud sigade perfusiooniga palju kogemusineerudja näriliste maksa, kasutades Williamsi meediumi E (WME) (Life Technologies Ltd, Bleiswijk, Holland) [9–11]. See perfusaat ei sisalda vasodilataatorit ja me otsustasime seda mitte teha
esialgse lahenduse muudatused. Meie rühm töötas välja 2. rühma perfusioonilahuse, et see sisaldaks füsioloogilises kontsentratsioonis elektrolüüte ja avaldaks glomerulaarmembraanile füsioloogilist kolloidset osmootset rõhku. 3. rühma perfusaat oli kolloidivaba, kliiniliselt kasutatav Briti NMP lahus, mida praegu kasutatakse randomiseeritud kontrollitud uuringus, milles võrreldakse 1h NMP-d surnud inimese doonori SCS-iga.neerudÜhendkuningriigis [12]. 4. rühma puhul kasutati seda lahust edukalt sigade autotransplantatsiooni uuringus Taanis Aarhusis [13]. See põhineb perfusaadil, mille on välja töötanud Weissenbacher jt, kes sulatasid ära visatud inimeseneerud24 tunni jooksul [7]. Kui kontsentratsioon langes alla 4 mmol/l, lisati 1. rühma perfusaati lisaks ülalnimetatud koostisosadele glükoos. Toodetud uriin oli
tunnis asendatakse WME-ga. 2. rühmas manustati süstlaga infusioonipumpa täielikku parenteraalset toitmist (SmofKabiven) (Fresenius Kabi Nederland BV, Zeist, Holland) kiirusega 0,5 ml/käeinsuliini kohta (10{{1{ {12}}}}0 RÜ, ka Novo Nordisk A/S) kiirusega 0,005 ml/h. Iga tunni järel tsirkuleeriti uriini tootmine 2. rühmas, et säilitada stabiilne elektrolüütide tasakaal. Kolmandas rühmas segati 170 ml puhtaid punaliblesid 120 ml soolalahuse, adeniini, glükoosi ja mannitooliga (SAG-M), mille tulemuseks oli hematokrit 0,5–0,65 l/l, et jäljendada tüüpilise kliiniliselt kasutatava ühiku koostist. RBC-d (mida kasutatakse Briti kliinilises NMP perfusaadis). Nende katsete ajal kasutati kolme süstlaga infusioonipumpa, et infundeerida Flolanit (GlaxoSmithKline BV, Zeist, Holland) kiirusega 5 ml/h ja glükoosi 5% (Baxter BV, Utrecht, Holland) kiirusega 4 ml/h. h ja segu 150 ml Synthamin-17 10 protsendist (Baxter Healthcare Ltd., Norfolk, Ühendkuningriik), 6 ml naatriumvesinikkarbonaadist (NaHCO 3 ) 8,4 protsendist (B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Saksamaa) , 30 RÜ insuliini (1000 RÜ, Novo Nordisk A/S, Bagsværd, Taani) ja Cernevit (Baxter BV, Utrecht, Holland) kiirusega 20 ml/h, vastavalt praeguse Ühendkuningriigi kliinilise uuringu protokollile. Uriini tootmine asendati tunnis Ringersi laktaadiga (ka Baxter BV). Neljanda rühma NMP ajal infundeeriti süstlaga infusioonipumbaga soolalahuses lahustatud verapamiili (2,5 mg/ml, ka Sandoz BV) kiirusega 0,3 ml/h. Uriini tootmist taastati selles rühmas iga tunni järel, et säilitada stabiilne elektrolüütide tasakaal. Iga rühma proovide mahtu korrigeeriti erinevate komponentidega. 1. rühma maht asendati WME-ga, 2. rühmas perfusioonikeskkonnaga, 3. rühmas Ringeri laktaadiga ja 4. rühmas Sterofundin1-ga (ka B. Braun).
NMP seadistaminePerfusiooni seadistus oli identne meie rühma poolt varem kirjeldatuga [14]. Theneerudperfuseeriti asinusoidselt pulseerivalt, sagedusega 60 impulssi minutis, ata seatud, reguleerimata tagasisidet, rõhk 110/70 mmHg ja hapnikuga varustatud 95% hapniku/5% süsinikdioksiidiga (süsinik) kõigi katsete ajal. See suprafüsioloogiline hapnikutase on kõigi nelja olemasoleva protokolli standardprotseduur. Perfusiooni kontrolliti kohandatud elektroonilise liidese ja juhtimistarkvaraga (LabView Software, National Instruments Netherlands BV, Woerden, Holland). Normotermilise perfusiooniahela skemaatiline joonis on näidatud joonisel 1.
Uriini ja perfusaadi analüüsIga tund võeti arteriaalse perfusaadi ja uriiniproovid. Rühmades 2 ja 4, kus uriin retsirkuleeriti, võeti perfusaadi proovid enne uriini retsirkulatsiooni. Perfusaadi arteriaalse vere gaasiproove analüüsiti pärast 0, 240 ja 420 minutit NMP-d. Perfusiooni parameetrid dokumenteeriti iga poole tunni järel. Laktaatdehüdrogenaasi (LDH) ja aspartaataminotransferaasi (ASAT), naatriumi, kaaliumi, glükoosi ja kreatiniini kontsentratsioone mõõdeti standardsete kliiniliste testidega perfusaadis. Arvutati kreatiniini kliirens, kreatiniini fraktsionaalne eritumine 100 g kohta (FE kreatiniini/100 g) ja fraktsionaalne naatriumi eritumine (FENa pluss)neerufunktsioon. Võrrandid leiate S1 lisast. Mõlemad N-atsetüül- -D-glükosaminidaasi (NAG) (ka Sigma-Aldrich) markerinaneeru-oksüdatiivse stressi kvantifitseerimiseks mõõdeti perfusaadis tubulaarset düsfunktsiooni/vigastusi ja tiobarbituurhappega reaktiivseid aineid (TBARS) (lipiidide peroksüdatsioon-malondialdehüüd (MDA)) testikomplekt, Sigma-Aldrich BV, Zwijndrecht, Holland.
HistoloogiaNõela ülaosa biopsianeerukoorvõeti enne NMP algust. Iga katse lõpus koguti ülemisest ajukoorest kirurgilised koeproovid. Need biopsiad olid
Statistiline analüüsAndmete analüüs viidi läbi, kasutades GraphPad Prism versiooni 8.3.1 (GraphPad software Inc., La Jolla, CA, USA). Kõigi pidevate pikisuunas mõõdetud muutujate, nagu ASAT ja LDH, jaoks arvutati kõveraalune pindala (AUC). AUC väärtuste võrdlemiseks rühmade vahel kasutati mitme võrdlusega ühesuunalist ANOVA-d, kui andmed olid normaalselt jaotunud (Shapiro Wilki test) ja dispersioonide homogeensus (testitud Bartletti testiga). Kui andmed ei vastanud nendele eeldustele, kasutati Kruskal-Wallise testi Dunni mitme võrdluse testiga. Kahepoolseid p-väärtusi 0,05 või vähem loeti statistiliseks olulisuseks.
Tulemused
Perfusiooni parameetridTabelis 2 on andmed (keskmine, minimaalne ja maksimaalne) sooja ja külma isheemia, HMP kestuse ja kaalu kohta enne ja pärast NMP-d, samuti delta massi (kaalu erinevus t=420 versus t {{2) }}) esitatakse. Delta kaal oli 1. rühmas oluliselt suurem võrreldes 2. rühmaga (p=0,041). Kõikide katserühmade väärtuste vahel muid olulisi erinevusi ei olnud. NMP ajalneeru-arteriaalne vool suurenes reperfusiooni esimese 60 minuti jooksul rühmas 1 ja 2. 60 minuti pärast hakkasid voolukiirused tavaliselt vähenema. Rühma 3 ja 4 perfusioonid algasid madalamate vooluväärtustega, kuid näitasid ühtlasemat voolu kogu NMP jooksul. Lõppväärtused pärast 7-tunnist NMP-d olid kõigis rühmades ligikaudu 75 ml/min/100 g (joonis 2).
Uriini ja perfusaadi analüüsÜksikud andmed funktsionaalsete ja vigastuste parameetrite kohta kogu perfusiooni ajal on toodud tabelis 3.Neerufunktsioon.Rühm 3 näitas kõrgeimat uriinieritust (joonis 3). Kumulatiivne diurees 3. rühmas oli oluliselt kõrgem võrreldes 1. rühmaga (p=0.003), 2. rühmaga (p < 0,001)="" ja="" 4.="" rühmaga="" (p="0,008).">neerud2. rühmas ei tootnud uriini t=180 ja t=300, mis viis kumulatiivse uriinitoodangu madalama keskmise tasemeni t=360 ja t=420. Naatriumi ja kaaliumi tase erines rühmade vahel oluliselt (joonis 4). Tasemed t=0 juures näitavad esialgseid lähteväärtusi perfusioonil. Eriti kõrgelt näitas grupp 3
Perfusiooni ajal langes pH 3. rühmas ilma stabiliseerumiseta, samas kui teised rühmad saavutasid pärast 7-tunnist NMP-d tasakaalustatumalt, ligikaudu 7, 4 (joonis 5). Kreatiniini kliirens oli kõigis rühmades madal (joonised 6A ja 6B). Sellegipoolest oli see oluliselt kõrgem kui 3. rühmas võrreldes 2. rühmaga (p=0,039). Kreatiniini fraktsionaalne eritumine 100 g kohta (joonised 6C ja 6D) oli 3. rühmas oluliselt suurem kui 1. rühmas (p=0.026), 2. rühmas (p=0.017) ja 4. rühmas ( p=0.045). FENa pluss oli kõigis rühmades kõrge, mis näitab, et nendes isheemiliselt kahjustatud rühmades oli tubulaarne funktsioon tõsiselt kahjustatud (joonised 6E ja 6F).neerud. FENA pluss 3. rühmas oli oluliselt kõrgem võrreldes 2. rühmaga (p=0,037) ja 4. rühmaga (p=0,019). Kõik teised rühmad ei erinenud oluliselt.Neerukahjustus.ASAT tasemeid NMP ajal analüüsiti (joonised 7A ja 7B) üldise rakukahjustuse markerina. Keskmine AUC määrati iga rühma jaoks. 4. rühma tasemed olid oluliselt kõrgemad võrreldes 1. rühmaga (p=0.022) ja 2. rühmaga (p=0,011). LDH tasemeid mõõdeti ka perfusaadis üldise vigastuse markerina (joonised 7C ja 7D). Arvutati AUC, mis näitas madalaimat LDH taset rühmades 1 ja 2. Rühm 2 oli oluliselt madalam võrreldes rühmaga 4 (p=0,020). 1. rühm näitas 4. rühmaga võrreldes oluliselt madalamat taset (p=0,022). NAG tasemed olid 3. rühmas oluliselt kõrgemad võrreldes 1. rühmaga (p=0,043) ja 2. rühmaga (p=0,006) (joonised 8A ja 8B). TBARS-i, malondialdehüüdi (MDA) kontsentratsiooni, mõõdeti kõigis neljas rühmas lipiidide peroksüdatsiooni markerina (joonised 8C ja 8D). MDA tase oli 1. rühmas oluliselt kõrgem võrreldes 2. rühmaga (p=0,003) ja 3. rühmaga (p < 0,001).="" rühm="" 2="" näitas="" oluliselt="" madalamat="" mda="" taset="" võrreldes="" 4.="" rühmaga="" (p="0,006)." rühm="" 3="" näitas="" oluliselt="" madalamat="" taset="" võrreldes="" rühmaga="" 4=""><>
Histoloogia
Punktgraafikud joonisel 9 näitavadneeru-tubulite kahjustus/ATN, tubulite dilatatsioon ja glomerulaardilatatsiooni skoorid enne NMP algust (t {0}}) ja pärast 7-tunnist NMP-d (t=420). Histoloogilise nekroosi ja tubulaarse laienemise algväärtused olid rühmade vahel võrreldavad, lõpp-punktide skoorides oli ainult marginaalne erinevus. Glomerulaarne dilatatsioon t=420 juures oli 2. rühmas märkimisväärselt madalam võrreldes ülejäänud 3 rühmaga. Rühmade histoloogilised näitajad leiate S1 jooniselt. Bax ja Bcl-2 korda induktsioon, vastavalt pro- ja anti-apoptootilise geeniekspressiooni indikaatorid, mõlemad näitasid lõpp-punkti NMP tasemete nihet võrreldes tasemetega t=0 (joonis 10). Delta Baxi geeniekspressioon (erinevus t=0 ja t=420 vahel) arvutati kõigis rühmades ja oli 1. rühmas oluliselt kõrgem võrreldes 2. rühmaga (p=0.046), 3. rühmaga. (p < 0,001)="" ja="" 4.="" rühma="" (p="0,003)." bcl-2="" ekspressioon="" vähenes="" kõigis="" rühmades="" pärast="" 7-tunnist="" perfusiooni,="" ilma="" oluliste="" erinevusteta="" rühmade="">
Arutelu
Üldine huvineeru-normotermiliste ex vivo masinate perfusioonitehnikate arv kasvab, kuid kliinilised tõendid on piiratud ainult ühe käimasoleva kliinilise NMP uuringuga. NMP potentsiaali uurimiseks on läbi viidud ulatuslikud prekliinilised uuringud. Suur hulk erinevaidneeru-Normotermilised perfusaadid eksisteerivad erinevate uurimisrühmade seas. Siiski on küsimus, mil määral perfusaadi koostis mõjutabneerufunktsioonja kuidas see mõjutab potentsiaalsete elujõulisuse markerite tõlgendamist. Seetõttu hinnati selles uuringus nelja erineva normotermilise ex vivo perfusioonilahuse mõju kõrvutineerufunktsioonjaneerukahjustuspikaajalise NMP ajal sigade kasutamiselneerudannetamine pärast vereringe surma mudel.
hinnata isoleeritudneerufunktsioonenne siirdamist. Hosgood ja tema kolleegid esitasid esimesed kliinilised tõendid siirdamiseelse elujõulisuse hindamise teostatavuse kohtaneeru-NMP. Nende perfusioonilahus on praegu NMP ajal kõige laialdasemalt kasutatav ja algselt töötati välja hindamiseksneerufunktsioonenne siirdamist 1–2 tunni jooksul [16].NeerudSelle lahusega perfuseeritud patsientidel ilmneb tavaliselt kõrge uriinieritus [17]. Tõepoolest, suurimat uriini tootmist täheldati 3. rühmas, mis põhineb sellel Ühendkuningriigi kliinilisel perfusaadil, mis viis selles rühmas ringleva perfusaadi koguse enam kui täielikule uriiniga eritumisele 7-tunnise NMP kasutamise ajal. Tsirkuleeriva perfusioonivedeliku mahu pidevat kaotust tuli kompenseerida sarnaste koguste Ringeri laktaadi vahelduva lisamisega, mis oli kooskõlas selle perfusioonilahuse kliinilise protokolliga. Meie uuringus põhjustas see märkimisväärseid muutusi elektrolüütide koostises ja pH-s, kuna uriini ei tsirkuleeritud. Seda kõrget uriinieritust võib suure tõenäosusega seostada kolloidi puudumisega ainult selles perfusioonilahuses. Kõigi kolme teise rühma perfusioonilahused sisaldasid märkimisväärses koguses albumiini. Intravaskulaarses ruumis on albumiin peamine komponent, mis hoiab normaalset kolloidset osmootset rõhku [18]. Hüdrostaatilise rõhu ja kolloidse osmootse rõhu vaheline tasakaal põhjustab füsioloogilise ultrafiltratsiooni kiiruse üle glomerulaarmembraani [19]. Kaths et al. näitas, et uriini tootmine NMP ajal ei olnud korrelatsioonis siirdamisjärgse funktsiooniga. Nad oletasid, et uriini tootmist mõjutab suuresti perfusaadi koostis, eriti onkootiline rõhk ja osmolaarsus, mis on kooskõlas meie tulemustega [20].
CISTANCHE PARANDAB neeru-/NEerupuudulikkust
Peamine elektrolüütide reguleerimise eest vastutav organ onneerudkuid on tõendeid selle kohta, etneerudka ise saab kasu elektrolüütide tasakaalust. On kindlaks tehtud, et kaaliumisisalduse tasakaalustamatus ja eriti hüpokaleemia võivad põhjustada mitmesuguseid muutusineerufunktsioonsealhulgas halvenenud tubulaarne transport, vähenenud uriini kontsentreerimisvõime, muutunud naatriumi reabsorptsioon ja rakusisene atsidoos [21–23]. Et võtta arvesse oluliste perfusaadi elektrolüütide vältimatut uriinikaotust, on Weissenbacher et al. tegi ettepaneku kasutada NMP ajal uriini retsirkulatsiooni. Nad näitasid, et see hõlbustab perfusaadi mahu ja homöostaasi nõuetekohast säilitamist äravisatud inimeselneerud, isegi pärast 24-tunnist NMP kasutamist [7]. Mõõdetud albumiini kontsentratsioon perfusaadis vähenes aja jooksul perfusiooni ajal. Selle languse põhjuseks on tõenäoliselt albumiini kleepumine plastikust perfusiooniahela torudele ja ainult väikese koguse võib seostada uriini kadumisega, mida on täheldatud ka teistes NMP uuringutes [24]. Seda albumiini kadu uriinis võib seletada sooja isheemia poolt põhjustatud endoteelirakkude kahjustusega, mille tulemuseks on proteinuuria, mis on kooskõlas meie täheldatud albuminuuria tasemega NMP ajal [25].
Me ei saa täielikult selgitada rühmadevaheliste erinevuste mehhanismi, mida me täheldasimeneerudkaalutõus NMP ajal. Histoloogiline uuring ei olnud võimalike tursete tekkepiirkondade osas määrav. Täiendavad uuringud on vajalikud, et selgitada potentsiaalselt mitmefaktorilisi kaalutõusu mehhanisme seoses kasutatava perfusioonilahusega. Mõõdeti erinevaid perfusiooni parameetreid, kusneeru-voog näitas kõige silmatorkavamaid erinevusi.Neerudvooluhulk rühmades 3 ja 4 säilitas kõige stabiilsema taseme kogu 7-tunnise NMP perioodi jooksul. Nende rühmade lahuseid täiendati vasodilataatoriga, samas kui kahes esimeses rühmas mitte. Endogeensed vasodilataatorid soodustavad veresoonte silelihaste lõdvestamist ja reguleerivad seeläbi piirkondlikku verevoolu [26]. Kuna rühmadele 1 ja 2 ei lisatud vasodilataatorit, võisid vasospasmid vähendadaneeru-arteriaalne vool. Lisaks on tõendeid selle kohta, et medullaarset ja kortikaalset voolu saab reguleerida individuaalselt [27, 28]. Meie rühma esialgsed avaldamata andmed, mis põhinevad täpsetel ja kvantitatiivsetel funktsionaalsetel MRI (ASL) voolumõõtmistel NMP ajal, toetavad seda mehhanismi tugevalt. Nendes katsetesneeru-vool NMP esimese tunni jooksul on peamiselt medullaarne, mis nihkub kortikaalseks vooluks pärast rohkem kui tunnist perfusiooni. See voolu piirkondlik ümberjaotumine võib seletada 1. ja 2. rühma perfusioonide tippu, mis võib olla tingitud medullaarsest manööverdamisest esimese tunni jooksul. Vasodilataatori lisamine NMP alguses võib suurendada valdavalt kortikaalset mikroperfusiooni kohe NMP alguses, mille tulemuseks on stabiilsem vool, nagu täheldati 3. ja 4. rühmas. Seega, kui voolumuster on stabiilne ja võib-olla füsioloogilisem, valdavalt kortikaalne. NMP ajal soovitatakse perfusiooni, võib olla soovitatav lisada perfusioonilahusele vasodilataator. Teise võimalusena võib punaste vereliblede korduv pesemine enne perfusiooni vähendadaneeru-vasokonstriktsiooni, vähendades punaste vereliblede vasokonstriktiivset aktiivsust [29].
NeerufunktsioonNMP ajal oli kõigil sigadel märkimisväärselt halvenenudneerud, mis on tõenäoliselt tingitud esialgsest soojast isheemilisest kahjustusest ja füsioloogiliste humoraalsete regulatsioonimehhanismide puudumisest, nagu need, mida juhivad antidiureetiline hormoon ja aldosteroon. Kreatiniini kliirens oli madal ja kõigis rühmades täheldati kõrgeid FENa plussi väärtusi. FENa plussi järsk tõus pärast 3 tundi NMP-d rühmas 2 võis olla tingitud uriini tootmise puudumisest mitmelneerudt=240 ja t=300 juures, perfusiooni lõpusneerudhakkas uuesti uriini tootma. FENa plussi kõrgenenud väärtused on arvatavasti tubulaarse nekroosi tagajärg, nagu on kirjeldatud ka varasemates uuringutes [30, 31]. Lisaks mõjutab in vivo kreatiniini kliirensit ja FENa plussi taset suurel määral humoraalne regulatsioon. Humoraalse regulatsioonina
NMP katsete ajal puudus, ei ole meie NMP seadistuses oodata füsioloogilist kreatiniini kliirensit ja FENa plussi taset.
Vigastuse kvantifitseerimiseksneeru-rakkudes, mõõdeti ASAT ja LDH tasemeid. Kõrgeimad tasemed täheldati 3. ja 4. rühmas, mis viitab sellele, et kõige rohkem vigastusi esines nendes kahes rühmas. Kaths et al. näitas, et suurenenud ASAT tase NMP ajal korreleerub siirdamisjärgseganeerufunktsioonja seetõttu võib ASAT olla oluline elujõulisuse hindamise biomarker [20]. Erinevate perfusioonikompositsioonide mõju mõõdetud ASAT-tasemetele rõhutab NMP-protokollide ühtlustamise olulisust siirdamiskeskuste vahel, et võimaldada NMP-andmete ühtset tõlgendamist globaalsel alusel. NAG-i, muutunud torukujulise terviklikkuse ja torukujulise kahjustuse markeri [32, 33] tase oli kõrgeim 3. rühmas, mis näitab, et selles rühmas esines kõige rohkem torukujulisi vigastusi. TBARS-i tasemeid mõõdeti oksüdatiivse stressi kvantifitseerimiseks perfusiooni ajal. Kõrgeimad tasemed täheldati 1. ja 4. rühmas, mis viitab selleleneerudnendes rühmades kogesid suurimat oksüdatiivset stressi, mis võis põhjustada rakufunktsiooni häireid [34]. Bax/Bcl-2 suhte nihe pärast 7-tunnist NMP-d, võrreldes biopsiaga enne NMP-d, on tõenäoliselt pigem esialgse sooja isheemilise perioodi tulemus, kui NMP ajal esinevad potentsiaalselt kahjustavad mõjud. Sellest tulenevale reperfusioonile järgnev isheemiline vigastus kutsub esile regulatiivse apoptoosi kaskaadi, mis mängib võtmerolli kahjustatud proksimaalse tuubuli parandamise protsessis [35]. Kuigi on välja pakutud palju normotermilisi vigastuse markereid, ei ole siiani ükski neist tugevate kliiniliste uuringute käigus kinnitatud. Uuring, mis korreleerib paljutõotavaid vigastusmarkereid, mida mõõdeti NMP ajal ja pärast siirdamistneerufunktsioonon vajalik, et selgitada välja, millised potentsiaalsed biomarkerid tuleks lisada normotermiliste ex vivo elujõulisuse hindamise kriteeriumitesse.
CISTANCHE PARANDAB NEeru-/NEERUNEKTSIOONI
Meie NMP seadistust kasutati koos DCD seamudeliganeerudannetus millises tapamajasneerudolid ära kasutatud. Selle uuringu piirang seisneb selles, et tapamaja protseduur põhineb veretustamisel, millele järgneb südameseiskus, mis muudab selle veidi erinevaks tegelikust DCD mudelist, milles vereringe seiskumine tuleneb südameisheemiast ja/või südamepuudulikkusest. Siiski me täheldasime sedaneerudmeie uuring näitas isheemilist kahjustust, mis sarnanes pärast DCD-d tekkinud kahjustusega [36, 37]. Seetõttu arvame, et praegune tapamaja DCD mudel aitab vähendada laboriloomade kasutamist, säilitades samal ajal olulise töökindluse ja reprodutseeritavuse. Kuigi meie katserühmad olid suhteliselt väikesed, on meie rühmade suurused võrreldavad teiste sigade omadeganeerudmasinperfusiooniuuringud [17,38–40]. NMP perfusiooni parameetreid, mille me registreerisime 3. rühmas, mis põhines Hosgood jt kasutatud Briti kliinilisel perfusioonilahusel, ei saa täielikult võrrelda Leicesteri / Cambridge'i rühma varem teatatud tulemustega [6, 12]. Meie uuringusneerudläbisid palju pikema NMP perioodi ja neid perfuseeriti kõrgema keskmise arteriaalse rõhuga. Veelgi enam,neerudperfuseerinud Hosgood et al. siirdati pärast masinperfusiooni. Nelja perfusioonilahuse täielikuks usaldusväärseks võrdluseks peaks tulevane uuring hõlmama siirdamistneerudpärast NMP-d, kuna see võimaldab tegelikku järelkontrolli ja funktsionaalset hindamist in vivo.
Kokkuvõtteks sigade perfusioonneerudosutus teostatavaks kõigi nelja testitud lahendusega. Siiski esines olulisi erinevusi elektrolüütide tasemete vahel,neerufunktsioonparameetrid ja vigastuse markerid neljas rühmas. Need erinevused koos kasutatavate perfusioonilahuste praeguse heterogeensusega rühmade vahel takistavad standardiseeritud NMP hindamiskriteeriumide väljatöötamist. Arvame, et nii eksperimentaalses kui ka kliinilises NMP-s on oluline hoolikalt eelnevalt kindlaks määrata NMP täpne eesmärk ja soovitud kestus, kuna igaüks võib nõuda perfusaadi ja perfusiooniprotokolli vajalikke kohandusi. Oluline on rõhutada, et see uuring keskendus olemasolevate perfusaatide kui terviku mõjule mõõdetud tulemustele, selle asemel et uurida üksikute perfusioonikomponentide rolli. Iga perfusaadi koostisosa individuaalsete mõjude ja eeliste selgitamiseks NMP ajal on vaja täiendavaid uuringuid