II OSA.: Inimese primaarse neerufibroblasti roll TGF-β1-vahendatud fibroosi jäljendavates seadmetes

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

II OSA.: Inimese primaarse neerufibroblasti roll TGF-β1-vahendatud fibroosi jäljendavates seadmetes

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee jt.

Abstraktne

Neerufibrooson progresseeruv krooniline neeruhaigus, mis viib lõpuks lõppstaadiumis neerupuudulikkuseni. Vaatamata mitmetele lähenemisviisidele võitlusesneerufibroos, ei ole praegu olemasolevate ravimite hindamiseks eksperimentaalne mudel ideaalne. Töötasime välja b-jäljendavad mudelid, kasutades kolmemõõtmelisi (3D) kaaskultuurilisi seadmeid, mis on välja töötatud kolme eraldi tubule interstitiumi kihiga, nimelt epiteeli-, fibroblastiliste ja endoteelikihtidega. Tutvustasime inimese neeruproksimaalseid torukujulisi epiteelirakke (HK-2), inimese nabanööriveeni endoteelirakke ja patsiendi poolt saadud neerufibrostide mõju ning hindasimetjooksev kasvutegur-β(TGF-β)jaTGF-βinhibiitori ravi sellel teemalNeeruFibroosiMudel. 2007. aasta väljendFibroosimarker alfa-sile lihaste aktiin pealeTGF-β1ravi täiendati monokihilistes HK-2 rakkudes 3D-haiguse mudelis. Vaskulaarses sektsioonisNeeruFibroosimudelites suurenes ja vähenes laevade tihedusTGF-β-töödeldud rühm jaTGF-β-inhibiitori ravirühm vastavalt. Multiplex ELISA, kasutades supernatantseTGF-β-stimuleerivad 3D-mudelid näitasid, et põletikuvastane tsütokiin ja kasvufaktori tase, sealhulgas interleukiin-1 beeta, kasvaja nekroosifaktor-alfa, põhiline fibroblasti kasvufaktor jaTGF-β1,TGF-β2jaTGF-β3suurenes, mis jäljendas inimese neerude fibrootilisi mikrokeskkondi. See uuring võib võimaldada inimese ehitamist.NeeruFibroosi- jäljendades seadme mudelit väljaspool traditsioonilisi kultuurieksperimente.

Märksõnad: neeru fibroblast; fibroos; TGF-β1

cistanche tubolosa kasu tervisele: krooniliste neeruhaiguste ravimine

I OSA AVAMISEKS KLÕPSAKE SIIN.

3. Arutelu

TGF-β1mängib olulist rolli maatriksi kogunemisel neerufibrogeneesis ja pärsib vohamist enamikus rakkudes, sealhulgas glomerulaarsetes epiteeli- ja endoteelirakkudes, samuti torukujulistes epiteelirakkudes 【1】. Kuid TGF-ß1 indutseerib inimese neerufibrostide vohamist fibroblasti põhifaktori (FGF-2) induktsiooni teel [8].

Käesolevas uuringus lõimeFibroosi-jäljendav seade, mis kasutab kolme olulist rakukomponenti, sealhulgas inimese primaarsed neerufibrostid, neerutorukujulised epiteelirakud ja inimese endoteelirakud, ning hindas seda kuiNeeruFibroosimudel, mis põhinebTGF-β1Stimulatsiooni. LoomiseksNeeruFibroosi-on-a-chip, lõime uudse 3D-kultuuri süsteemi, mis on välja töötatud kolme erineva koeosaga, mille eesmärk on ületada neeruhaiguste modelleerimisega seotud takistused. Meie uuring näitas, etTGF-β1indutseeritud rakulised reaktsioonid, sealhulgas epiteelirakkude torukujuline epiteeli-mesenhümaalne üleminek (EMT), endoteelirakkude mikrovaskulaarne muutus ja tsütokiini muutused neeru fibroblastides. See on esimene uuring, milles tutvustatakseFibroosi-jäljendav seade, mis koosneb primaarsetest fibroblastidest, mis on saadud inimese neerudest ja stimuleeritud fibroblastidest, mis on eraldatud patsientidelt, kellel onTGF-β1, tuntud fibrootiliste reaktsioonide indutseerija, mida tavaliselt kasutatakse standardina jäljendamiseksFibroosirakukultuurides [9]. Need tulemused näitavad, etTGF-β1-töödeldud epiteelirakud muundatakse mesenhümaalse raku sarnaseks fenotüübiks. KuiTGF-β1manustatakse fibroblastidele, fibrootiliste protsesside induktsiooni kajastamiseks muudetakse erinevaid tsütokiine. On ilmne, etNeeruFibroosimudel, fibroblastid on TGF-i stimuleerimise kaudu loodud kultuurisüsteemi arengu peamine jõud.

Davis jt teatasid, et endoteelirakkude 3D-kultuur on piisav, et rakud tungiksid ja moodustaksid luumenite ja torude võrgustiku, järgides puutumatut organismi in vivo [10,11]. Mitmed rühmad on teatanud, et 3D-kultuuri mudelitel on nefrotoksilisuse tase kõrgem kui 2D-rakukultuuri mudelitel [12]. Lisaks oli nefrotoksilisuse ja põletikuga seotud geenide ekspressioonus neeru 3D-rakukultuuri mudelis oluliselt suurem kui tüüpilises2D-kultuuris[13].

Selles uuringus on inimese kultuurimeediaNeeruFibroosi-kiibil oli oluliselt kõrgem tsütokiinide tase võrreldes 2Dculture'iga. Meie rühm on näidanud, et patsiendist saadud fibroblastid võivad meie soovitatud kaudu taasluua kohalikke neerukudesid, sealhulgas endoteeli- ja epiteelirakkude kihte.Fibroosi-kiibil mudel. Järelikult näitavad need leiud, etNeeruFibroosi-kiibi mudel simuleerib täpselt inimese neeru mikrofüüsilist keskkonda. Lisaks, kuna kiibis kasvatatud fibroblastid on saadud patsientidelt, saab teisi kliiniliselt olulisi patsiendimudeleid kergesti ja selgelt ohutult saada. Seetõttu on inimeneNeeruFibroosi-on-a-chip mudeli süsteem võib võimaldada arendada personaliseeritud meditsiini epiteeli ja endoteeli funktsioonide tundlike mõõtmistega. Meie katsetes,Fibroosija angiogenees vähenesTGF-βinhibiitoriga töödeldud rühmad. TGF-β inhibiitorid on TGF-β looduslikud antagonistid, mida on näidatud erinevate neeruhaiguste mudelite abil. Tundub, et on võimalik läbi viia katseid, et kinnitada ravi efektiivsust haigusmudelites, kasutades terapeutilisi aineid, nagu see TGF-β inhibiitor. Seetõttu on see kiip andnud võimaluse töötada välja täiustatud neerufibroosi mudel, et mõõta rakkude morfoloogiat ja funktsiooni ning võib olla kasulik ravimite nefrotoksilisuse hindamisel.

TGF-βon domineeriv profibootiline tegur mitmesugustes neeruhaigustes [14] ja mängib rolli angiogeneesis [15]. TGF-β angiogeensed mõjud on väga keerulised ja võivad sõltuvalt seadistusest ja erinevatest regulatiivsetest teguritest olla kas proangiogeensed või antiangiogeensed [16]. Angiogeensetel kasvufaktoritel, nagu VEGF ja FGF-2induce angiogenees in vivo, näib olevat keskne roll angiogeneesi modulatsioonis in vivo [17-20]. Mõned tõendid näitavad, et need kaks tegurit võivad toimida sünergiliselt, et edendada endoteelirakkude morfogeneetilisi sündmusi [21,22]. Oleme esitanud tõendeid selle kohta, et VEGF mRNA ekspressioon ja FGF-2 valgu sekretsioon on TGF-β1 poolt 3D-kiipides oluliselt kõrgendatud võrreldes 2D-kultuuriga.

MeieFibroosimudelid võivad olla, et need loodi suhteliselt lühikese aja jooksul, 24 h. TGF-beeta'l on varajases alguses fibrootilised ja põletikuvastased omadusedFibroosiMitte kroonilises protsessis. TavapäraseltTGF-βon peamiselt kasutatud tsütokiinist põhjustatudFibroosiMudelid. Kuna aga in vivo keeles ei saa esindada ainult ühte tsütokiini,Fibroosiinduktsioonimudelid, milles kasutatakse mitmeid täiendavaid kandidaataineid, näiteksTGF-βja BMP7 on välja pakutud. Siiski ei piisa in vivo paljunemiseks veel kahest või kolmest tsütokiinist. Me kasutasimeTGF-βlähtepunktina; kuid me püüdsime kiibile rakendada in vivo mikrokeskkonda, tekitades mitmekesisema tsütokiini tormi. Fibroblast, peamine rakukomponentFibroosi, võeti kasutusele ja mitmekesisemate tsütokiinide sekundaarne stimulatsioon (IL-1β, TNF-α, b-FGF,TGF-β1,TGF-β2jaTGF-β3) indutseeriti fibroblastides, mida stimuleeritiTGF-β. Seega keskkond, mis sarnanebFibroosiinimkehas paljuneti.

cistanche deserticola ekstrakt: neeruhaiguste ravimine

4. Materjalid ja meetodid

4.1.Rakukultuurid

Neerufibrostid (KF-id) eraldati neerurakuliste kartsinoomi patsientide normaalse koeosa biopsiatest, mille hinnanguline glomerulaarne filtreerimiskiirus (eGFR)>60 ml/min/1,73 m2 pärast seda, kui patsiendid olid andnud uuringu eesmärgil nõusoleku teisele biopsiale. KF-e kasvatati fibroblasti kasvukeskkonnas (FGM-2, Lonza, Šveits) ja katsetes kasutati läbipääsu 3 kuni 4. Neeru fibroblastid kraabiti kultuurist 1-2 nädalat, kuni rakud moodustasid monokihi. Kultuuri saastavate epiteelirakkude kõrvaldamiseks valiti fibroblastid pärast esimest läbimist magnetiliste fibroblastivastaste helmeste abil (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA). Rakud eemaldati 0,05% trüpsiini-etüleendiaminetetraatsiaakeetilise happe (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Korea) abil, inkubeeriti fibroblastivastaste helmestega ja eraldati magnetsamba abil ning läbivool koguti. Puhastatud primaarseid fibroblaste iseloomustas fluorestsentsaktiveeritud rakkude sorteerimise analüüs (FACS), kasutades PE-konjugeeritud fibroblastivastaseid antikehi. Õrna magnetaktiveeritud rakkude sorteerimise (MACS) dissotsiaatorit kasutati õrnaks neerukoe hakkimiseks. Octo MACSTM magnetparaator MACS LS veergudega (kolbidega), mida taotleti mikroobidega märgistatud rakkude puhastamiseks, osteti Miltenyi Biotec Inc.-st (Auburn, CA, USA). Õrn MACS C torud (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) kasutati neeru hakkimine rakkude eraldamiseks. MACS Smart Strainers (70 um)saadi Miltenyi Biotec Inc.-lt (Auburn, CA, USA). Kolonnipuhvrit kasutati kolonnide ja elustatud rakugraanulite pesemiseks. Puhver valmistati lahusena, mis sisaldas 0,5 % veiste seerumi albumiini (BSA) 2 mM EDTA-ga fosfaadipuhvriga soolalahuses (PBS) (pH7.4) ja osteti Miltenyi Biotec Inc.-lt (Auburn, CA, USA). Rohelised fluorestseeruvad valke ekspresseerivad inimese nabanööri-veeni endoteelirakud (GFP-HUVEC, Lonza, Šveits) kasvatati endoteeli kasvukeskkonnas (EGM-2, Lonza, Šveits) ja kasutati rakke lõigus 3–4. Inimese proksimaalne torukujuline rakuliin (inimese neeru-2(HK-2) rakud saadi Ameerika tüübikultuuri kollektsioonist (ATCC). Rakuliini kasvatati kõrge glükoosisisaldusega Dulbecco modifitseeritud Eagle'i keskkonnas (DMEM), millele täiendati 10% loote veiste seerumit (FBS), penitsilliini (100 U/ml) ja streptomütsiini (100 ug/mll). Reaktiivid osteti Gibcost (Rockville, MD, USA). Kõik rakud eemaldati 0,05% trüpsiin-EDTA abil ja neid hoiti niisutatud inkubaatoris temperatuuril 37 °C ja 5% CO2. KF-id peatati uuesti FGM-2-s rakukontsentratsiooniga 4×10° rakud/ml. Inimese neerutorukujulised epiteelirakud (HK-2) peatati uuesti 2×10° rakkude/ml kontsentratsiooni juures kõrge glükoosisisaldusega DMEM-is. GFP-HUVEC-d taaselustati kontsentratsiooniga 2×10° rakke/ml EGM-2-s.

4.2.Reaktiivid

Maatriks koosnes fibriinigeelidest, sealhulgas kaubanduslikult kättesaadavast veiste plasma fibrinogeenist, veiste kopsu aprotiniinist ja veiste plasma trombiinist. Eespool nimetatud kolm materjali osteti Sigmast (St. Louis, MO, USA). Fibrinogeen lahustati l×PBS-is veevannis (37 °C) 30 minutit kontsentratsiooniga 10 mg/ml. Trombiin ja aprotiniin lahustati deioniseeritud vees kontsentratsiooniga 50 ühikut/ml ja 4 TIU/ml. Kolm lahust steriliseeriti filtreerides läbi 0,22 μm filtri. Rekombinantne inimeneTGF-β1saadi ettevõttelt PeproTech EC Ltd. (London, Uk). TGF-beeta retseptori kinaasi spetsiifiline inhibiitor SB431542 osteti Ettevõttelt Tocris Cookson, Inc.

4.3. Rakkude mustrid seadmes

Enne rakkude külvamist tiheda liimimise hõlbustamiseks töödeldi seadet 1 minuti jooksul plasmamasinas (Femto Science Inc., Suwon, Korea) võimsusega 70 W, 50 Hz. Plasma ravist põhjustatud pinnahüdrofiilsus ja see aitas hõlbustada geeli mustrit ja meediumi laadimist. Hüdrofiilsuse muutuste vältimiseks viidi katsed läbi 30 minuti jooksul pärast plasmaravi. Erinevat rakumustrit seadmetes saab teha väga kohandataval viisil. Oluline oli eelnevalt mustriliste erinevate rakutüüpide koostis ja kontsentratsioon. Rakuliste hüdrogeeli suspensioonide puhul valmistati vahetult enne laadimist segamiseks 37,5 μL raku suspensiooni ja eraldatud aliquot 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogeeni lahust (250 μL 10 mg/ml fibrinogeenilahusega 40 μL 4 TIU/ml aprotiniini). Vahetult enne laadimist segati 37,5 μL raku suspensiooni 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogeeniga kuni homogeniseerumiseni. Hüdrogeeli 50ul segati 1 uL trombiinipiisaga (0,5 ühikut/ml). Kohe pärast segamist süstiti trombiin GFP-HUVEC-de fibriini suspensiooniga (rakkude kontsentratsioon 2×10' rakud/ml) väliskanali välisserva (joonis 3, Geel A). Me ootasime 3 minutit, et fibrinogeeni ristsidumine oleks lõppenud. Kohe pärast segamist paigutati trombiin KF-ide fibriini suspensiooniga (rakkude kontsentratsioon 4×10° rakke/ml) reservuaari põranda mõlemale küljele kaevu kohta (joonis 3, Geel C). Sellel KF-ide fibriini vedrustusel lubati toatemperatuuril 3 minutit ristuda. Sisemise kanali süsteporti (joonis3, geel B) süstiti 10 μL inimese neeru proksimaalsete torukujuliste epiteelirakkude (HK-2) rakusuhtlus. HK-2 kinnitamiseks fibriinigeeli seinale GFP-HUVEC kanalis pöörati seade 90 kraadi ja asetati 5% CO-sse, inkubaatorisse 30 minutit 37 °C juures. HK-2 settis ja moodustas fibriinigeeli küljele rakulehe.

Pärast HK-2 kinnitamist täideti seade EGM-2-ga. Seadet inkubeeriti 3 päeva 37 °C juures 5% CO inkubaatoris. Andmekandjat muudeti 5ng/ml-ga või ilmaTGF-β1ja koos5ng/mlTGF-β1ja 10 umTGF-β1inhibiitor pärast kolmepäevast inkubeerimist (joonis 3).

mis on cistanche

4.4. Imnoootsütofluorestsents

Seadmes olevad kaaskultuurilised koed fikseeriti 4%(w/v) paraformaldehüüdi lahusega (Biosesang, Seongnam, Korea) PBS-is (Welgene, Gyeongsan, Korea) 20 minutiks, millele järgnes permeabiliseerimine 20-minutilise kastmisega 0,15% Triton X-100-s (Sigma, St.Louis, MO, USA). Seejärel töödeldi proove 3% BSA-ga (Sigma, USA) 1 tunni jooksul. Rakud inkubeeriti Abcamilt ostetud antikehadega. Peamised antikehad olid tsütoprutiin 8 ja anti-o-SMA, mis jäeti 2 päevaks toatemperatuurile (RT). Sekundaarse antikehana kasutati Alexa Fluor 647 konjugeeritud eesli küülikuvastast IgG-d (H+L). DNA märgistus viidi läbi 1:250 lahjendusega Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) 3 tunni jooksul RT-s. Pildid koguti Zeiss LSM 710 konfokaalse lasermikroskoobi abil. Keskmist fluorestsentsintensiivsust (MFI) mõõdeti ImageJ ja fluorestsentsi intensiivsusega analüsaatori abil.

4.5. Tsütokiinide multipleksanalüüs

MSD V-Plex tsütokiini ja angiogeneesi paneeli 1 inimkomplekti (Rockville, MD, USA) kasutati interleukiin-1 beeta (IL-1ß) ja põhiliste fibroblasti kasvufaktori (b-FGF) kontsentratsioonide mõõtmiseks üksikproovides vastavalt tootja juhistele. Kõiki proove hinnati IL-1β ja b-FGF valgu kogusisalduse suhtes. Kogus (pg/ml) kvantifitseeriti iga mõõtmise standardkõverast.

4.6. Multiplex Bead Immunoassay

Tsütokiini kontsentratsioone analüüsiti multiplekshelme immunoanalüüsi süsteemi abil (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, USA), mis põhineb multipleksillutisel tehnoloogial (xMAP; Luminex, Austin, TX, USA) vastavalt tootja juhistele. Andmed saadi Luminexiga ühilduva tööjaama ja selle halduritarkvara (Bio-Plexi tööjaam ja versioon 6.0 tarkvara) abil; Bio-Rad, Tokyo, Jaapan), vastavalt tootja juhistele. Human TGF-β1, TGF-β2 ja TGF-β3 on seotudFibroosiprotsessi analüüsiti samaaegselt lahjendatud proovides. IsovormidTGF-βavastati Bio-Plex 200 süsteemide ja kaubanduslikult kättesaadava Bio-Plex ProTM Humani abilTGF-βanalüüsid (Bio-Rad Laboratories, Inc); tootja esitatud teabe põhjal. Multipleksi analüüsikomplekt võib kvantitatiivselt mõõta mitut tsütokiini supernatandist, mille alumine avastamispiir on 1 pg/ml tsütokiini kohta. Iga proovi käitati ühe mõõtmisena piiratud koguse kogutud supernatandi kohta.

4.7.Reaalajas PCR

RNA ekstraheerimine viidi läbi TRIzol Reagenti (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) abil. Master Mixi ja Revert Aid First Strand cDNA sünteesikomplekti kasutati kogu RNA.qPCR pöördtranskriptsiooniks, kasutades applied biosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Konkreetsed krundid valmistas Bioneer (Daejeon, Korea) ja seda kasutati selles eksperimendis järgmiselt. Krundi järjestused on kokku võetud tabelis 1.

Kümmet PowerUp SYBR Green Master Mixi mikroliitrit, 4 μL cDNA-d ja 2 pmol igast praimerist kasutati reaalajas PCR-i jaoks lõppmahus 20 μL. Reaktsioon viidi läbi temperatuuril 95 °C 1s ja 60 °C juures 20 s 45 tsükli jooksul pärast denatureerimist 95 °C juures 20 sekundi jooksul. cDNA tasemed määrati tsükli künniste standardse kõvera abil. Kõik andmed iga cDNA kohta jäid vastavasse standardkõverasse. Saadud andmed normaliseeriti β-aktiin cDNA-ks.

4.8. Statistiline analüüs

Kvantitatiivsed andmed esitatakse vähemalt kolme sõltumatu katse keskmise ±SD või SE keskmisena. Statistilised analüüsid viidi läbi kahe sabaga õpilase t-testi abil. Me pidasime olulist erinevust ainult 95% usaldustasemel või kõrgemal (p<>

5. Järeldused

Kokkuvõtteks võib öelda, et selle uuringu protokollid võimaldasid inimese ehitamist.NeeruFibroosi-jäljendades seadmeid mudelina ja näidates erinevaid efekte, mis ei ole 2D-kultuuri eksperimentides võimalikud. Usume, et selles uuringus välja pakutud hindamisstrateegia aitab paremini mõista üksikasjalikkeFibroosimehhanismid, mis on seotud patoloogiliste muutustegaNeeruhaigus. Välja töötatud 3D-neerufibroosi-kiibil võiks kasutada potentsiaalse in vitro mudelina, mis toob meid lähemale täiustatud neeru-kiibi mudeli loomisele.

cistanche phelypaes: neeruhaiguste ravi

Viited

1. Piir, W.; Üllas, N. Kudede kasvufaktori ümberkujundamineFibroosi.N. Engl. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.; Huang, X.R.; Li,A.G.; Liu, F; Li,J.; Truong, L.D.; Wang, X.J.; Lan, H.Y.TGF-betaalse signaalimismehhanism neerupõletiku ennetamisel: Smadi roll. I. Am. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [CrossRef]

3. Liu,Y.NeeruFibroosi: Uued teadmised patogeneesist ja ravist. Neeru int.2006,69,213-217. [CrossRef] [PubMed]

4. Andes, D.; Craig, W.A. Loomade mudel farmakokineetika ja farmakodünaamika: kriitiline ülevaade. Int. J.Antimicrob.Agendid 2002, 19,261-268. [CrossRef]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip ja neer. Neer Res. Clin. Pract.2015, 34, 165-169. [CrossRef] [PubMed]

6. Jang, K.J.; Mehr, A.P; Hamilton, G.A.; McPartlin, L.A.; Chung, S.; Suh, K.Y; Ingber, D.E.Inimese neeru proksimaalne tubule on-a-chip narkootikumide transportimiseks ja nefrotoksilisuse hindamiseks. Täisarv. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Reardon, S. "Organ-on-chips" läheb peavoolu. Loodus 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, C.V.; MuLler, G.A.TGF-β1indutseerib inimese neerufibrostide vohamist fibroblastide põhifaktori (FGF-2) induktsiooni teel. Neeru int. 2001, 59, 579-592. [CrossRef] [PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M.Antifibrootiline toime pirfenidooni lihastest saadud fibroblastidel Duchenne'i lihasdüstroofiaga patsientidelt. Elu Sci. 2016, 145,127-136. [CrossRef]

10. Davis, GE.:Camarillo. C, W. Alfa-2 beeta-1 integriinist sõltuv pinotsüütiline mehhanism, mis hõlmab rakusisest vakuooli moodustumist ja koalestsentsi, reguleerib kapillaare luumenit ja toru moodustumist kolmemõõtmelises kollageenimaatriksis. Exp. Cell Res. 1996, 224, 39-51. [CrossRef]

11. Bayless, K.J.; Davis, G. Cdc42 ja Race GTPases on vajalikud kapillaaride luumenite moodustamiseks kolmemõõtmelistes rakuvälistes maatriksites. J. Cell Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, T.M.; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, D.L. Bioengineered 3D inimese neerukude, platvorm nefrotoksilisuse määramiseks. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [CrossRef]

13. Astashkina, A.I.; Mann, B.K; Prestwich, G.D.; Grainger, D.W. Ennustavate ravimite nefrotoksilisuse biomarkerite võrdlemine neeru 3-D primaarses organoidide kultuuris ja surematute rakuliinides. Biomaterjalid 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Meng, X.M.; Nikolic-Paterson, D.J.; Lan, H.Y. TGF-beeta: Master regulaatorFibroosi. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [CrossRef]

15. Pardali,E.; Goumans, M.J.; kümme Dijke, P. TGF-beeta perekonna liikmete signaalimine vaskulaarse morfogeneesi ja haiguste korral. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, S.L; Pietras, K. ALK1 kui vähi antiangiogeense ravi esilekerkiv sihtmärk. Veri 2011,117,6999-7006. [CrossRef]

17.Klagsbrun, M.;D' Amore, P.A. Angiogeneesi regulaatorid. Annu. Rev. Physiol.1991,53, 217-239. [CrossRef]

18. Folkman, J.; Shing, Y.Angiogenees. J.Biol. Chem.1992, 267,10931-10934. [CrossRef]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. Hüpoksia poolt indutseeritud vaskulaarne endoteeli kasvufaktor võib vahendada hüpoksiast põhjustatud angiogeneesi. Loodus 1992, 359, 843-848. [CrossRef]

20. Kim, K.J.; Li, B.; Winer, J.; Armanini, M; Gillett, N.; Phillips, H.S.; Ferrera, N. Vaskulaarse endoteeli kasvufaktori indutseeritud angiogeneesi pärssimine pärsib kasvaja kasvu in vivo. Loodus 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Pepper, M.S.; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Tugev sünergism vaskulaarse endoteeli kasvufaktori ja fibroblasti põhikasvufaktori vahel angiogeneesi in vitro induktsioon. Biokeemia. Biofüüsika. Res. Kommuun.1992,189,824-831. [CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, vaskulaarse endoteeli kasvufaktori J.Sünergiline toime ja põhiline fibroblasti kasvufaktor veiste kapillaaride endoteelirakkude vohamisele ja nööri moodustumisele kollageeni geelides. Lab. Investig.1993,69, 508-551. [PubMed]

I OSA AVAMISEKS KLÕPSAKE SIIN.